土法制备干燥培养基

结合战备及农村基层检验室的需要,我们试用两种简易方法制备干燥培养基: 一、琼脂吸收法(适用于制备固体培养基),先将琼脂切成细片,置80℃烘箱中干燥2小时后研成粉末。取1:2牛肉浸液3,000毫升,蛋白胨30克,氯化钠15克,琼脂粉末45克。按常法制备普通肉汤培养基,调整至PH7.6,滤纸滤清后,先用直火浓缩至原体积五分之     

初筛实验室抗-HIV临界值质控血清的制备及应用

目的掌握抗-HIV弱阳性外部对照质控血清(临界值质控血清)的制备方法。方法用抗-HIV抗体阴性的血清倍比稀释试剂盒中的抗-HIV阳性对照血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各稀释度血清,计算s/A值。依据所需外部对照质控血清的抗-HIV强弱来确定某一稀释度为配制稀释度,按配制稀释度的年需求量来配制抗-HIV弱阳性外部对照质控血清。结果采用倍比稀释法可获得均匀、无菌、稳定的抗-HIV弱阳性外部对照质控血清。结论倍比稀释法是制备抗-HIV弱阳性外部对照质控血清质控物经济方便、快捷、可靠的方法。     

微波灭菌法在固体琼脂培养基快速制备中的应用

目的 探讨微波灭菌法在固体琼脂培养基快速制备中的应用.方法 利用普通家用微波炉对含枯草杆菌黑色变种菌液的固体琼脂培养基进行不同条件灭菌处理后制备平板,37 ℃条件下连续7 d,观察有无细菌生长以检测灭菌效果.以经微波及高压蒸汽灭菌后的培养基制备平板,接种大肠埃希菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌,37 ℃培养24 h后观察菌落特征,并进行细菌染色检查,检测经微波灭菌的培养基是否影响待检细菌的生长及形态特征.结果 固体琼脂培养基熔化时间及达到灭菌效果所需时间随微波火力的增加而缩短,随培养基量的增加而延长.微波灭菌不影响培养基对待检细菌的培养效果.结论 用微波炉对固体琼脂培养基进行灭菌,可以缩短灭菌时间,且不影响培养基对待检测菌的培养效果,是可用于制备少量固体琼脂培养基的快速、节能的方法.     

胶体金免疫层析试验的室内质量控制探讨

目的通过对胶体金粪便隐血试验(FOB)室内质量控制的研究,探讨胶体金免疫层析试验(GICA)的室内质量控制。方法用递减稀释血红蛋白的方法找到胶体金粪便隐血测试条的弱阳性检测浓度(或称检测下限、临界浓度),然后配制出上限质控液、下限质控液、阴性质控液,再用这些质控液在临床工作中开展胶体金粪便隐血试验的室内质量控制。结果胶体金粪便隐血试验的室内质量控制开展2年,有效地监控了胶体金试条的质量变化和检验过程中各种因素对检验结果的影响。结论通过自配多浓度的质控液,可以比较有效地开展胶体金免疫层析试验的室内质量控制工作。     

肝浸液培养基用于阴道滴虫、念珠菌培养效果观察

近年滴虫性阴道炎和念珠菌性阴道炎临床症状不典型病例增多 ,涂片镜检漏检率较高 ,而增殖培养能有效提高检出率。为此我们对 94例阴道炎反复发作患者的阴道分泌物标本进行了肝浸液培养基及沙堡琼脂培养基的平行检测。一、材料和方法1.肝浸液培养基[1] 的配制　 15 %的澄清肝浸液 10 0ml,蛋白胨 2 g ,盐酸半胱氨酸 0 .2 g ,麦芽糖 1g ,氯化钠0 .5 g ,溶解后调pH值至 5 .6～ 5 .8,定量分装试管 ,高压灭菌。临用前加入无菌灭活牛血清 (2 0 % ) ,同时加入青霉素 (10 0 0IU/ml)、链霉素 (0 .5mg/ml)。2 .沙堡琼脂培养基的配制　葡萄糖 4 0 g ,…     

鉴别产气单胞菌属(Aeromonas)的选择性 A-2培养基

近年来有不少关于从各种疾病和外界环境中分离到产气单胞菌属的报导。作者曾研究了有关的液体和固体培养基。 A-1培养基(增菌培养基)的成份是,水100毫升,硫酸镁0.02克,NaNH_4HPO_4 0.15克,KH_2PO_40.1克,可溶性淀粉0.2克,0.01%结晶紫水溶液2毫升。高压灭菌15分钟。 A-2培养基(固体鉴别培养基)的成份是以A-1培养基为基础,加入2%琼脂,5%明胶。淀粉含量增加到1%,不加NaNH_4HPO_4。为了观察细菌的还原性能,可加入10%氯化三苯基四唑(TTC)水溶液0.2毫升。用10%KOH调pH至7.4。为排除由明胶引起的培养基表面的粗糙性,可薄薄地浇注一层琼脂(用蒸馏水配)。     

细菌鞭毛染色的效果和影响因素

目的探讨在细菌鞭毛染色过程中,各种因素对染色效果的影响。方法将受试菌种在不同琼脂浓度的培养基中培养一定的时间后,移至无菌蒸馏水中孵育,然后进行鞭毛染色。结果细菌鞭毛在液体或半固体培养基中能较好地体现动力;培养8～12h为鞭毛形态观察最佳时间;镜检显示以6×108/mL的菌悬液,在无菌蒸馏水中舒展10min,染色5min的效果最好。结论在细菌鞭毛染色过程中,培养基的琼脂浓度、菌种的培养时间、细菌在无菌蒸馏水中舒展时间、染色液的配制、染色时间等因素都会影响染色效果。     

胶体金免疫层析试验的室内质量控制探讨

目的通过对胶体金粪便隐血试验(FOB)室内质量控制的研究,探讨胶体金免疫层析试验(GICA)的室内质量控制。方法用递减稀释血红蛋白的方法找到胶体金粪便隐血测试条的弱阳性检测浓度(或称下限质控液),然后配制出上限质控液、下限质控液、阴性质控液,再用这些质控液在临床工作中开展胶体金粪便隐血试验的室内质量控制。结果 FOB的室内质量控制开展两年,有效地监控了胶体金试条的质量变化和检验过程中各种因素对检验结果的影响。结论通过自配多浓度的质控液,可以比较有效地开展胶体金免疫层析试验的室内质量控制工作。     

用MK3酶标仪绘制ALT标准曲线

笔者将MK3酶标仪曲线定量功能,运用到改良赖氏法检测献血者ALT绘制标准曲线工作中,现介绍如下。1材料与方法1.1材料雷勃MK3酶标仪,96孔平底微孔板,赖氏法试剂盒(下面以北化康泰试剂盒为例)。1.2标准管的配制按试剂盒说明书在试管中作出标准曲线管(表1)。将各管置于37℃水浴箱内温育5min,加入2.4-二硝基苯肼100μl,置于37℃水浴箱内温育20min,加NaOH0.4mmol/L2ml室温放置10min后,在酶标仪520nm处比色,以蒸馏水调零,测各管吸光度。将蒸馏水、标准管的液体用微量加样器加200μl到平底微孔板孔中,A1孔中加蒸馏水,“1”管加入A2中,“2”号…     

应用即刻性进行抗-HCV检测的室内质控

目前国内检测抗 -HCV的 ELISA法大多参照生化的质控方法 ,即选择弱阳性标本为质控物 ,以 x质控图法控制日常工作的精密度 ,判断实验的有效性。但由于 ELISA检测试剂有效期短 (一般为 6个月 ) ,用同一批号试剂盒连续常规检测 2 0次难度大 ,有一定的局限性。笔者结合 x质控图和“即刻性”质控的优点 ,建立了抗 -HCV的即刻性 x质控图方法 ,现介绍如下。材料与方法1　试剂与质控物　试剂为厦门新创公司生产 ,批号 2 0 0 2 0 45 80 5。 2 Ncu/ml低值质控物购自上海市血液中心 ,批号2 0 0 1 0 81 5。阴性质控物则取 A值在 0 .0 2～ …     

ELISA定性检测HBsAg的室内质控探讨

目前国内检测HBsAg的ELISA大多参照生化的质控方法,即选弱阳性标本为质控物,以X图法控制日常工作的精密度,判断实验的有效性。我们改用临界值法进行室内质控,简便易行,现特予介绍。一、室内质控物　高值质控物为10μg/ml,低值质控物为1ng/ml,阴性质控物则取A值在0.04～0.08间的样本20份以上混匀后分装。二、室内质控方法　实验除用试剂盒内的质控品外,同时也检测高值、低值和阴性三种质控物,并将质控结果算出S/CO值点入质控图中(S/CO值:S为样本A值,CO为临界(CutOff)值,即阴性对照A值×2.1。如阴性对照小于0.05时,以0.05计)。参…     

自制抗-HIV临界值质控血清的室内质控及评价

目的 自制抗-HIV临界值质控血清并对其进行评价.方法 收集临床多份健康者血清充分混匀、灭活、离心取上清,并将试剂盒多批号阳性对照倍比稀释,以S/Co约为2.5的稀释梯度配制临界值质控血清,按1年使用量配制,无菌分装,-20℃冷冻保存.每次使用前与临床标本及阴、阳性对照一同严格按试剂盒说明书进行操作.结果 自制质控血清其均匀性测定:x-=2.47,s=0.23,CV=9.27％;批内精密度测定:x-=2.51,s=0.31,CV=12.36％;连续测定一年,其x-在2.39～2.72之间变动,CV在11.63～13.94％之间.结论 自制抗-HIV质控物制备方便,质量可靠,其均一性、稳定性符合要求,可满足临床检测室内质控需要.     

应用即刻性-x进行抗-HCV检测的室内质控

目前国内检测抗-HCV的ELISA法大多参照生化的质控方法,即选择弱阳性标本为质控物,以质控图法控制日常工作的精密度,判断实验的有效性.但由于ELISA检测试剂有效期短(一般为6个月),用同一批号试剂盒连续常规检测20次难度大,有一定的局限性.笔者结合质控图和"即刻性"质控的优点,建立了抗-HCV的即刻性质控图方法,现介绍如下.     

嗜血杆菌2种分离培养基的比较

嗜血杆菌是一种只侵犯人类的革兰阴性杆菌,存在于上呼吸道中,是引起急性呼吸道传染病的主要病原菌之一,也可侵入血液继发多种感染性疾病,如脑膜炎、肺炎、骨髓炎等。嗜血杆菌的分离对临床上早期诊断和治疗极为重要,由于该菌生长时需要X或/和V因子,不易检出,因此选择一种配制方法简单且适合该菌生长的培养基来提高分离率显得尤为关键,我们使用万古巧克力培养基,明显提高了嗜血杆菌的分离率。一、材料和方法1 .培养基　巧克力培养基:用胰酶—大豆琼脂(法国生物梅里埃公司产品)作基础,按用量加入蒸馏水,1 1 5°C1 5min高压灭菌后,冷却至80°C…     

抗-HIV临界值质控血清的制备及应用

在实际工作中,笔者发现ELISA抗-HIV的检测会被许多因素所影响,导致检测结果出现较大偏差,为克服系统误差(包括试剂盒质量问题,仪器设备的误差如水浴箱和冰箱温度波动过大,酶标仪读数的准确性,配制溶液的水质量的好坏等)和随机误差(偶然误差,即由于操作人员操作不当所造成,如试剂和样品的误加、漏加),在日常的抗-HIV检测中有必要建立起较为完善的质量监控体系,设立阴性和阳性对照且通过阴、阳性对照的优化计算得出一个临界值(cut off),以衡量每一受试对象的光密度值是否超过了cut off值,因此,在实验中加入一个质控物即临界值质控血清,对实验质量进行动态控制.目前定值临界值质控血清需自制,笔者采用阳性对照血清自制临界值血清,在实践中取得了满意的效果.     

培养和检测幽门螺旋菌尿素酶活性的新培养基

目前鉴定幽门螺旋菌(HP)的方法虽多,但均不理想。本文研究了一种新的平板培养基,不含血液,可直接培养该菌并检测其尿素酶活性。该培养基系非选择培养基(NSM),由哥伦比亚琼脂39g、氯化血红素10mg、IsoVitalex20ml、尿素20mg、酚红1.2mg、琼脂4g,蒸馏水980ml 组     

造血细胞体外集落生成技术的临床应用

随着培养技术的发展,现已能使小鼠各种造血细胞亚群(Subpopulation)在半固体培养基中长成集落。目前,某些方法已用于培养人的造血细胞。可以预测,这些技术将被作为对造血紊乱病人血液学诊断与检测的常规技术。培养技术基本培养技术是将双倍浓度的组织培养基(如Dulbecco改良的Eagle培养基)和等量的双倍浓度的琼脂水溶液混合,使培养基中的最后琼脂浓度为0.3%。加入待培养的分散的骨髓或血细胞悬液,吸取1毫升上述     

3种方法分离培养粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的比较

小肠结肠炎耶尔森菌[简称耶(氏)菌]是近年来受到国内外重视的一种人兽共患的肠道感染病原菌,常见于不同年龄的婴幼儿腹泻和肠炎患者的粪便标本中,但不易从常规的肠道选择性培养基中直接分离。为此我们作了一些尝试。一、材料和方法1.材料　(1)标本:浙江省儿童医院门诊和住院腹泻及肠炎患者粪便标本182份;(2 )增菌液:磷酸盐缓冲液(PBS)和磷酸盐胆盐阿拉伯糖蛋白胨增菌液(PAE)按文献[1]配制;(3)DYS[1] 和NYE[2 ] 耶(氏)菌培养基、SS培养基、克(氏)三糖铁琼脂、MIU半固体琼脂(自制) ,其他必需生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司;…     

分离粪便沙门氏菌菌种的五种培养基比较

检测粪便标本中沙门氏菌菌种，对采用的不同培养基进行了对比研究。材料与方法HE琼脂（HE）。沙门氏菌属一志贺氏菌属琼脂（SS）和亚硫酸饿琼脂（BS）根据厂方说明配制使用，SM－ID培养基（SM）为制备完毕的商品平板，新生霉素一亮续一甘露醇一乳精琼脂（NBGL）由实验室自行配制（包括胰蛋白酶、大豆、琼脂40.0g，拘檬酸铁法1．5g，硫代硫酸钠5．0g，乳精10．0g，甘油10ml，亮绿7mg，新生霉素10mg。蒸馏水100ml）。以C8-酯酶试验和氧化酶试验进行沙门氏菌筛检。将1000价连续粪便标本接种子上述五种培养基上培养，和以亚硒酸盐由汤增…     

一种细菌动力鉴定用TTC半固体培养基

目前，细菌动力鉴定多采用压滴法、悬滴法、半固体动力试验。细菌学检验中用得最多的又是半固体动力试验，由于半固体动力试验培养基在判定结果时有困难，因此，我们在动力试验培养基中加入TYTC（2，3，5一氧化三苯基四氮唑），制备成TTC半固体动力培养基，有助于检查动力，减少误差。现介绍如下：1材料和方法1．1试剂1．1．11％2，3，5一氯化王苯基四氛喷水溶液：称取l·00gTTC，溶解于100ml蒸馏水中，用微孔滤膜（膜孔径0．45Pm）滤过除菌，备用。1．1、2＊＊C半固体动力培养基；成份：胰蛋白陈IOg，氯化钠5g，琼脂5g，蒸馏水1000ml…