猪长骨脱细胞骨细胞外基质的制备及生物力学、组织学性质的初步检测

目的寻找适合骨移植的骨组织替代物-骨脱细胞细胞外基质(ABECM).方法将猪股骨用组织工程学的方法进行适当的脱细胞处理,制成ABECM,再进行HE染色和扫描电镜、透射电镜观察,及纵向压缩的生物力学性质的检测.结果 ABECM未见细胞成分,细胞外基质基本结构未被破坏;ABECM在生物力学性质上与新鲜股骨无明显差异.结论 ABECM是一种新型的理想的骨替代物,有广泛的应用前景.     

猪长骨脱细胞骨细胞外基质的制备及生物力学,组织学性质的初步检测

目的 寻找适合骨移植的骨组织替代物－骨脱细胞细胞外基质（ＡＢＥＣＭ）。方法 将猪股骨用组织工程学的方法进行适当的脱细胞处理,制成ＡＢＥＣＭ,再进行ＨＥ染色和扫描电镜、透射电镜观察,及纵向压缩的生物力学性质的检测。结果 ＡＢＥＣＭ未见细胞成分,细胞外基质基本结构未被破坏;ＡＢＥＣＭ在生物力学性质上与新鲜股骨无明显差异。结论 ＡＢＥＣＭ是一种新型的理想的骨替代物,有广泛的应用前景。     

人脱细胞骨复合骨髓基质细胞成骨活性的实验研究

目的 研究人脱细胞骨(HAB)复合经诱导的骨髓基质细胞的实验效果,观察细胞的黏附和生长情况,并对其成骨活性进行检测。方法 用15％的过氧化氢和乙醚去除人髂骨块内的结缔组织和细胞成分,消毒后制备人脱细胞骨。取材活体或新鲜尸体的骨髓行骨髓基质细胞培养,细胞纯化后加入β-甘油酸钠,地塞米松和抗坏血酸等向成骨方向诱导,并进行对照培养。通过碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)检测来确定骨髓基质细胞的增殖和分化情况,将诱导的骨髓基质细胞浓缩后复合到制备好的脱细胞骨块内进行复合培养。8d后通过光镜和电镜等形态学观察以及生化指标检测来确定细胞的成骨活性。结果 人髂骨块内细胞清除干净,骨基质保存良好;诱导后的骨髓基质细胞ALP和OCN水平明显高于对照组(P<0.05);复合后的人脱细胞骨培养液中ALP和OCN检测呈阳性;骨髓基质细胞在HAB支架内附着紧密,生长良好。结论 人脱细胞骨复合经诱导的骨髓基质细胞在体外具有有效的成骨功能,是一种较为理想的骨组织工程材料。     

生物酶连续消化法对犬颈总动脉脱细胞基质材料生物力学的影响研究

目的：探讨利用生物酶连续消化法制备犬颈总动脉脱细胞血管基质时对材料生物力学的影响。方法：利用胰酶和核酸酶连续消化法制备犬颈总动脉脱细胞血管基质材料,通过组织学、扫描电镜观察和DNA含量的检测,判断细胞的脱除情况;检测脱细胞材料的拉伸强度、爆裂强度及顺应性,判断脱细胞过程对材料生物力学性质的影响。结果：组织学染色及扫描电镜的结果表明血管细胞成分被完全去除,血管细胞外基质成分保留完整;与新鲜犬颈总动脉相比,脱细胞材料的拉伸强度和爆裂强度没有明显的改变,而材料的顺应性有所降低。结论：生物酶连续消化法制备的犬颈总动脉脱细胞基质材料保持了与新鲜血管大部分生物力学性质,但材料的顺应性有所降低。     

激光微孔脱细胞真皮基质生物力学测试

目的：研究激光微孔脱细胞基质的生物力学性质变化,制作合适规格的脱细胞基质。方法：对不同间距的脱细胞真皮基质进行应力-应变和应力-松弛实验等检测,确定最佳孔径的脱细胞真皮基质。结果：确定350μm间距的脱细胞真皮基质有良好的生物力学性能。结论：超脉冲CO2激光可以对脱细胞真皮基质进行精细的微加工,脱细胞真皮基质适用于构建组织工程支架。     

骨脱细胞后的有机成分分析

目的 探讨脱细胞骨细胞外基质(AECM)的制备，并对其进行有机成分分析。方法 采用低渗和除垢剂脱细胞方法制备AECM。使用HE、Mallory-Heidenhain氏快速一步法染色和阿利新蓝染色观察形态学改变；免疫组织化学检测纤维连接蛋白(FN)和层连接蛋白(LN)。结果 HE、Mallory—Heidenhain氏快速一步法染色后镜下可见AECM胶原纤维排列规则，骨陷窝空虚；阿利新蓝染色可见AECM骨陷窝周边染色呈不同程度蓝绿色，免疫组织化学染色可见FN和LN的抗体染色阳性部位在细胞外基质(ECM)。结论 低渗和除垢剂二步法脱细胞是AECM制备的有效方法。脱细胞过程中去除了细胞成分，保留了天然的胶原纤维分布及ECM主要支架成分蛋白多糖、FN和LN。     

骨库骨的生物力学特性比较研究

目的 对比研究冷冻骨、冻干骨、脱钙骨和脱蛋白骨等骨库骨的生物力学特性。方法 截取兔股骨中段1cm为试件,制备成上述各种骨库骨,进行压缩实验。结果 抗压强度和最大应变值由大到小的顺序为：鹇骨,冷冻骨、冻干骨,脱蛋白骨,脱钙骨。结论 应进一步提高骨库骨中脱蛋白骨的力学强度。     

骨库骨的生物力学特性比较研究

目的　对比研究冷冻骨、冻干骨、脱钙骨和脱蛋白骨等骨库骨的生物力学特性。方法　截取兔股骨中段 1cm为试件 ,制备成上述各种骨库骨 ,进行压缩实验。结果　抗压强度和最大应变值由大到小的顺序为 :新鲜骨 ,冷冻骨 ,冻干骨 ,脱蛋白骨 ,脱钙骨。结论　应进一步提高骨库骨中脱蛋白骨的力学强度     

组织工程化肌腱研究进展

对组织工程化肌腱领域中目前研究的主要成果进行综述，着重阐述了肌腱细胞外基质替代物、肌腱细胞生物学性质及肌腱细胞与细胞外基质材料复合研究中的主要问题。认为，研制适于肌腱细胞生长、粘附和发挥功能的细胞外基质材料；建立生长、增殖可调控的肌腱细胞系；在模拟体内力学条件下，进行肌腱细胞三维培养，将是研究具有特定修复功能的组织工程化肌腱的重要问题。     

细胞衍生的细胞外基质支架在骨科组织工程的研究进展

[目的]对细胞衍生的细胞外基质支架在骨科组织工程中的应用及制备细胞衍生的细胞外基质支架的方法进行综述。[方法]查阅近年国内外相关文献,总结细胞衍生的细胞外基质支架在骨科组织工程中的研究进展,对细胞衍生的细胞外基质脱细胞方法进行归纳和分类。[结果]近年来细胞衍生的细胞外基质支架在来源细胞、培养条件和脱细胞方法等方面有了一些进展,但仍然没有统一的标准。[结论]目前来看,细胞衍生的细胞外基质在骨科组织工程中有很大的应用价值,是很有希望的研究方向。     

组织工程骨软骨复合体修复犬膝关节负重区骨软骨缺损的实验研究

目的 观察以骨软骨支架复合骨髓基质干细胞(bone-fflarrow mesenchymal stem cells,BMSCs)修复犬膝关节负重区骨软骨缺损的疗效.方法 利用软骨细胞外基质作为软骨支架部分,以脱细胞骨作为骨支架部分,采用相分离技术制备骨软骨双相支架,将成软骨诱导的BMSCs种植到双相支架上构建组织工程骨软骨复合体,并以此复合体修复犬膝关节股骨髁负重区骨软骨缺损,分为细胞-双相支架组(实验组)和单纯支架组(对照组).分别在术后3和6个月时取材,根据大体、组织学、Micro-CT等检测结果进行半定量或定量评估.结果 大体及组织学评价表明:同一时间点实验组的修复效果优于对照组,且实验组在术后6个月时的修复效果优于其术后3个月时,两项差异均有统计学意义;而对照组小同时间点修复效果的差异无统计学意义.Micro-CT检测结果表明实验组与对照组软骨下骨均得到重建,两者的差异尤统计学意义.结论 骨软骨双相支架复合成软骨诱导的BMSCs能成功修复犬膝关节负重区的骨软骨缺损,其修复效果明显优于单纯支架植入组.     

表面脱钙骨基质明胶修复大块骨缺损的实验与临床研究

目的 探讨表面脱钙骨基质明胶修复大块骨缺损的疗效及相关问题。方法 将32只成年家兔随机分成A、B两组，双侧桡骨制成1cm骨缺损，分别植入表面脱钙骨基质明胶(SDBMG)、全脱钙骨基质明胶(VDBMG)及SDBMG、自体骨，术后定期进行X线、组织学检查(A组)及生物力学测定(B组)；临床采用人SDBMG治疗大块骨缺损31例，术后定期进行X线检查。结果 SDBMG呈由表及里的“渐进”诱导成骨过程；SDBMG的骨修复作用与自体骨相近，SDBMG侧抗压强度与自体骨侧的差异无显著性意义；临床随访示除1例因适应症选择不当而失败外，其它30例均治愈。结论 SDBMG具有良好的成骨作用和可靠的力学性能，可作为自体骨理想的替代材料修复大块骨缺损，但对活动期感染性骨缺损宜慎用。     

异种脱蛋白BMP复合骨修复骨缺损实验研究

异种骨移植常由于强烈的免疫排斥反应失败。本文报告将小牛骨经脱蛋白处理（即脱去主要的抗原物质），后再复合进去骨形成蛋白（ｂｏｖｉｎｅＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，简称ｂ－ＢＭＰ）使其成为既无抗原性，又利于骨形成的异种脱蛋白ＢＭＰ复合骨。将其植入新西兰白兔尺骨缺损（２ｃｍ），观察愈合结果。免疫学、放射学和组织学检查表明，植入异种脱蛋白ＢＭＰ复合骨，各组实验动物术后无任何免疫反应。４周均显示植入骨与骨床界线模糊，８周植入骨内可见大量成片新生骨细胞及新生血管长入。实验结果表明经处理后的大块异种骨移植，不但无任何免疫排斥反应，且可达到预期修复骨缺损的目的。     

矿化蚕丝基骨材料修复兔桡骨节段性骨缺损

[目的]探讨仿生制备矿化蚕丝基骨材料在修复兔节段性骨缺损中的作用.[方法]骨缺损模型的设计为：在兔双侧桡骨上各做一个大约1.5 cm的骨缺损,在一侧植入矿化蚕丝基骨材料,另一侧作为对照,未植入任何材料.观察时间阶段为术后4、8、12周.[结果]在术后4、8、12周,分别行大体观察、放射线,组织学切片观察骨缺损的愈合情况.术后12周植入矿化蚕丝基骨材料的一侧兔桡骨缺损完全愈合.对照组缺损处未见骨愈合.[结论]矿化蚕丝基骨材料是比较理想的骨缺损的替代材料.     

切除卵巢对骨基质明胶修复大鼠颅骨缺损成骨效能的影响

目的　探讨实验性骨质疏松状态对骨基质明胶修复骨缺损成骨效能的影响。方法　将 6 8只雌性SD大鼠随机分为去卵巢组和对照组。 90d后两组各抽取 10只测定骨密度以确定骨质疏松模型的建立。其余 4 8只大鼠制备直径 8mm颅骨极量骨缺损并同期植入骨基质明胶颗粒。植入术后 2 1和 5 6d两组每次分别处死 12只大鼠 ,通过不脱钙组织磨片、四环素荧光示踪及骨组织计量学动态参数测定、扫描电镜和X射线显微分析技术观察骨缺损区修复情况。结果　骨密度测定指标显示 ,去卵巢 90d后骨质疏松状态建立。骨基质明胶植入术后 2 1d ,均有新骨在两实验组骨缺损内形成 ,去卵巢组新骨形成较少 ,四环素标记成骨区域较稀疏。植入术后 5 6d ,对照组骨缺损基本修复 ,去卵巢组骨缺损部分区域为纤维结缔组织充填。植入术后 2 1d、5 6d荧光双标间距和平均矿化沉积速率均较对照组低 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1)。骨缺损区新生骨痂的钙磷比值定量分析 ,去卵巢组均低于对照组 ,差异有统计学意义 (2 1d :0 4 892± 0 0 342、0 5 4 75± 0 0 2 0 4 ,P <0 0 1;5 6d :1 0 95 0± 0 0 4 37、1 195 5± 0 0 4 6 3,P <0 0 1)。结论　实验性骨质疏松降低了骨基质明胶的成骨效能。雌激素可能在生物骨替代材料参与的骨重建中发挥重要     

海绵状、泥灰状脱钙骨基质修复骨缺损

目的探讨海绵状脱钙骨基质(DBM)和泥灰状DBM修复骨缺损的能力。方法将兔四肢长骨骨干脱脂、脱钙后制成长度为500～1000 μm的纤维状及直径为200～400μm的颗粒状DBM,并与2%明胶混合分别制成海绵状DBM和泥灰状DBM。在9只兔双侧桡骨中段做一长10mm的骨膜骨缺损,分别植入海绵状DBM和泥灰状DBM及空白对照,每组各6个缺损,术后观察6周,于4、6周时拍摄X线片,并对实验动物的大体标本、骨密度、生物力学、新生骨矿化率及病理组织学改变进行观察。结果术后4、6周X线片显示两实验组骨缺损均修复,骨髓腔完整;空白对照组无一例修复骨缺损。骨密度测量显示海绵状DBM组新生骨骨密度与正常桡骨间差异无显著性(P >0.05),但泥灰状DBM组的新生骨骨密度与正常桡骨间差异有显著性(P< 0.05)。术后6周生物力学测定显示海绵状DBM组新生骨极限压缩强度值与正常桡骨差异无显著性(P >0.05),泥灰状DBM组低于正常桡骨且差异有显著性(P< 0.05)。两实验组新生骨矿化率差异无显著性(P >0.05)。组织学观察显示两实验组中DBM绝大部分被吸收,形成板状骨骨小梁及完整的骨髓腔,塑形完整, 新生骨内可见骨单位及局部尚未完全骨化的新生骨。结论海绵状DBM和泥灰状DBM均具有诱导成骨活性和骨传导能力,使用方便,新生骨塑形完整,生物力学强度高,矿化     

聚乳酸作为骨形态发生蛋白载体修复骨缺损的实验研究

目的 探讨聚乳酸（ｐｏｌｙｌｄａｃ ａｃｉｄ,ＰＬＡ）作为骨形态发生蛋白（ｂｏｎ ｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ,ＢＭＰ）载体的可行性及观察其诱导成骨能力。方法 手术造成日本大耳白兔左尺骨中上段１２ｍｍ骨缺损实验模型。随机分为实验。对照及空白组,实验组植入以ＰＬＡ为载体的ＢＭＰ１０ｍｇ、对照组植入以牛松质骨基质为载体的ＢＭＰ１０ｍｇ、空白组不做任何处理,术后摄Ｘ线片观察各组不同时相骨缺损修复情况,并于术后第４、８、１２周观察各组缺损内组织学变化。图像分析骨小梁的生成量。结果 实验修复情况优于对照组,无论是骨连接发生时间还是骨成熟时间,实验组均较对照组提前２周左右,同期骨生成量也明显多于对照组,而空白组缺损内主要形成纤维组织。结论 ＰＬＡ可以作为ＢＭＰ的载体修复骨缺损,它比异种松质骨基质载体的成骨效     

硫酸钙人工骨填充良性骨肿瘤刮除后骨缺损愈合情况的临床研究

目的分析硫酸钙人工骨填充良性骨肿瘤刮除后骨缺损的愈合情况,探讨人工骨在骨肿瘤切除重建中的作用。方法自2005年12月至2008年3月,应用Osteo Set硫酸钙人工骨移植治疗72例原发良性骨肿瘤,其中随访资料完整的47例。根据术后随访期X线片所见评估人工骨降解、吸收和骨愈合生长情况,评估38例含脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）和9例未含DBM硫酸钙人工骨的愈合情况,研究植骨量对愈合情况的影响,同时采用肌肉骨骼肿瘤协会（Musculoskeletal Tumor Society,MSTS）功能评分评价关节功能。结果 47例患者获3～55个月随访,平均随访时间16.3个月。均有人工骨颗粒与宿主骨间隙变模糊以及颗粒间变模糊,平均用时3.1（1～6）个月;42例完全吸收,用时4.2（1～12）个月;27例重新塑形,用时7.3（3～17）个月。人工骨愈合良好39例（83.0%）,未出现不愈合病例。含DBM硫酸钙与不含DBM硫酸钙人工骨植入患者的愈合率分别为89.5%和77.8%。植骨量≤5mL组愈合率95.6%,用时6.8（3～12）个月;植骨量〉5mL组愈合率79.2%,用时5.5（3～17）个月。对两组愈合率、愈合时间进行比较,差异无统计学意义（Z=-0.100,P=0.920;Z=-0.650,P=0.516）。MSTS功能评分平均28.8分。术后2例出现伤口不愈合。结论对于良性骨肿瘤切除后骨缺损的重建,硫酸钙人工骨愈合效果满意,是一种安全、有效的移植材料。     

新型硫酸钙和脱钙骨基质混合物的临床应用

目的 评价新型硫酸钙和脱钙骨基质混合物作为骨移植替代物的临床应用效果. 方法 2005年2月至2008年2月采用新型人工骨移植治疗51例患者,按照植入物不同分为两组:人工骨与自体骨混合组21例,即植人硫酸钙和脱钙骨基质混合物加自体骨;单纯人工骨组30例,只植入硫酸钙和脱钙骨基质混合物.术后定期复查,观察人工骨吸收和新骨生长情况. 结果 51例切口一期愈合,无局部红肿、渗出.3例患者失访,48例随访6～36个月,平均16个月.单纯人工骨组术后4周可见人工骨部分吸收,颗粒形态模糊,术后8～12周(平均9.6周)完伞吸收,可见新生骨质,术后8～16周(平均11周)骨性愈合.人工骨与自体骨混和组术后8～12周(平均11.5周)人工骨颗粒完全吸收,骨折不愈合患者术后14～24周(平均19周)获骨性愈合,其余患者术后9～20周(平均13周)获骨性愈合. 结论 新型人工骨能够发挥增加移植物容量、促进骨生成的作用,无局部不良反应,是一种安全有效的骨移植替代物.     

重组胶原矿化骨负载骨形态发生蛋白2活性多肽复合材料的制备及其异位成骨研究

目的 构建重组胶原矿化骨/BMP2活性多肽新型仿生骨修复材料,并评价其异位成骨能力.方法 将48只成年SD大鼠随机分为4组,在A、B、C组的大鼠背部肌肉内分别植入含3、2、1 nag BMP2活性多肽的重组胶原矿化骨;在D组的大鼠背部肌肉内植入单纯重组胶原矿化骨,于4、8和12周时间点将大鼠处死,经CT三维重建、组织学观察及钙含龟测定检测植入材料的成骨情况.结果 A、B.C组,在各时间点的CT三维重建、组织学观察及钙含量检测结果均表明其异位成骨能力优于D组,差异有统计学意义(P<0.01),其中A、B两组的异位成骨能力优于C组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 BMP2活性多肽町以显著增强重组胶原矿化骨的骨诱导活性,这种骨诱导性存在一定的剂量效应关系.