五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠肺组织初始CD4~+T细胞转录因子表达的影响

目的:探讨五虎汤对病毒诱发幼年SD哮喘大鼠肺组织初始CD4+T细胞转录因子mRNA及蛋白表达的影响。方法:采用RSV诱导,OVA致敏加激发制备大鼠哮喘模型。造模成功后,随机分成五虎汤高、中、低(4.752g/kg、2.376g/kg、1.188g/kg)剂量组,阳性对照组(地塞米松片,2.4mg/kg),哮喘模型组和空白对照组6组。治疗14d后,取肺组织,分别采用RT-PCR及免疫印迹法检测肺组织初始CD4+T细胞转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况。结果:模型组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白较正常对照组表达降低(P0.05),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白较正常对照组表达升高(P0.05);与模型组比较,五虎汤干预后,高剂量组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01);中剂量组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达升高(P0.05)、GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。结论:五虎汤通过抑制转录因子GATA-3、RORγt表达、促进转录因子T-bet、Foxp3表达,进一步调控Thl/Th2、Th17/Treg细胞平衡和免疫功能进而抑制哮喘气道炎症形成。     

基于TGR5及肠黏膜屏障功能探讨“疏肝健脾”疗法对肝损伤大鼠的影响及作用机制

目的:探讨"疏肝、健脾、疏肝健脾、先疏肝再疏肝健脾、先健脾再疏肝健脾"不同治疗方法对肝郁叠加肝损伤大鼠的影响及其作用机制。方法:制造6周肝郁叠加肝损伤大鼠模型,采用束缚叠加四氯化碳(CCl4)皮下注射法造模(5.89 g·kg^-1,1次/3 d),同时灌胃给药。48只清洁级雄性SD大鼠用随机数字表法分为8组:正常组,模型组,双环醇组(0.2 g·kg^-1),四逆散组(4.32 g·kg^-1),六君子汤组(9.26 g·kg^-1),柴芍六君子汤甲组(柴甲组;疏肝健脾,13.57 g·kg^-1),柴芍六君子汤乙组(柴乙组;先疏肝,再疏肝健脾,13.57 g·kg^-1),柴芍六君子汤丙组(柴丙组;先健脾,再疏肝健脾,13.57 g·kg^-1),每组6只。光镜、电镜下观察各组大鼠肝、结肠组织切片;全自动生化分析仪检测血清肝功能生化指标;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏、结肠组织G蛋白偶联受体5(TGR5),肠黏膜闭锁连接蛋白-1(ZO-1),闭合蛋白(Occludin),紧密连接蛋白-1(Claudin-1)mRNA相对表达量;免疫组化法检测结肠增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清碱性磷酸酶(ALP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),直接胆红素(DBIL)水平显著升高(P<0.01),肝脏组织TGR5 mRNA表达显著降低,结肠组织TGR5 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),结肠ZO-1,Occludin,Claudin-1 mRNA及PCNA表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,双环醇、柴丙组血清ALP,ALT,AST,TBIL,DBIL水平明显降低(P<0.05,P<0.01),六君子汤组、柴甲、柴乙、柴丙组肝脏组织TGR5 mRNA肝脏表达显著升高,结肠组织TGR5 mRNA的表达显著降低(P<0.01),双环醇组、柴甲、柴乙、柴丙组结肠ZO-1,Claudin-1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),双环醇组、四逆散组、柴丙组PCNA表达显著升高(P<0.01);与柴丙组比较,双环醇组、四逆散组肝脏TGR5,结肠ZO-1 mRNA表达显著降低且结肠TGR5mRNA表达显著升高(P<0.01),六君子汤组、柴乙组结肠PCNA表达明显降低(P<0.05)。结论:肝损伤状态下进行先健脾治疗能减轻肝损伤,"健脾"治疗能提高肠黏膜紧密连接蛋白含量,进而改善胃肠道功能,这与TGR5激活进而改善肠黏膜屏障功能,促进肠干细胞更新并驱动损伤后的再生有关。     

清肠温中方通过miR-675-5p/VDR信号通路调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的机制研究

目的研究清肠温中方调控DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的作用机制。方法 24只SPF级雄性SD大鼠,按体质量依照随机数字表将其随机分为空白组、模型组、清肠温中方组。空白组自由饮用去离子水,同时予去离子水灌胃;模型组和清肠温中方组自由饮用4.5%DSS溶液制备UC模型,同时模型组给予去离子水,清肠温中方组予清肠温中方灌胃。7 d后麻醉大鼠后取血及结肠组织,应用Real time-PCR法检测结肠miR-675-5p、VDR m RNA、RORγt mRNA、Foxp3 m RNA的表达,ELISA法检测血清IL-10、IL-17的表达,免疫组织化学法检测ZO-1、Occludin的蛋白表达及分布。结果与空白组比较,DSS诱导的UC大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA及血清IL-17的表达较空白组明显升高(P 0.05或P 0.01),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较空白组明显降低(P 0.05或P 0.01);清肠温中方干预后,大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA、血清IL-17的表达较模型组明显降低(P 0.05),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较模型组明显升高(P 0.05或P 0.01)。结论清肠温中方可能通过降低mi R-675-5p的表达,靶向调控VDR信号通路,从而调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡、修复肠黏膜屏障损伤,达到治疗UC的目的。     

化瘀软肝胶囊对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的作用

目的 探讨化瘀软肝胶囊对肝纤维化大鼠的作用以及对肝组织Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将60只大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(50只),造模组以CCl₄复合因素造模6周后，随机分为模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg)和化瘀软肝胶囊低、中、高剂量组(0.27、0.54、1.08 g/kg),各组以相应的药物或生理盐水灌胃6周，每天2次。HE和Masson染色观察大鼠肝组织病理改变，生化法和化学发光法分别检测大鼠血清肝功能(ALT、AST、TG、TBIL)和肝纤维化指标(HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C),RT-qPCR和Western blot法检测大鼠肝组织Wnt1、Wnt3a、Wnt10、GSK-3β、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达，免疫荧光法检测大鼠肝组织β-catenin和α-SMA蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组肝组织病理损伤，血清ALT、AST、TG、TBIL、HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平升高(P<0.01),肝组织Wnt1、Wnt3a、Wnt10、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达...     

穴位埋线对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接的影响

目的:观察穴位埋线对"虚、瘀"状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜上皮紧密连接的影响,并探讨其作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为对照组(12只)和造模组(48只),采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃制备大鼠"虚、瘀"状态,然后用5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS,100 mg/kg)加0.25 mL 50%乙醇灌肠诱导大鼠UC模型。选取造模成功的30只大鼠随机分为模型组、药物组和埋线组,每组10只。埋线组取双侧"足三里""天枢""膈俞""脾俞""肾俞""大肠俞"穴进行埋线治疗,每14天1次,共3次;药物组采用柳氮磺吡啶肠溶片灌胃治疗,每日1次;对照组、模型组和埋线组同时予等量0.9%氯化钠溶液,均干预42 d。观察各组大鼠的一般情况及体质量变化,采用肉眼及HE染色观察大鼠结肠组织外观及形态学变化,ELISA法检测各组大鼠血清中钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的含量,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织肠黏膜上皮紧密连接蛋白occludin、claudin1、claudin2、ZO-1 mRNA水平,Western blot法检测各组大鼠结肠组织肠黏膜上皮紧密连接蛋白occludin、claudin1、claudin2、ZO-1及CaM KⅡ、MLCK的蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量下降(P0.01),结肠组织明显肿胀,出血,大量炎性细胞浸润,结肠组织学损伤指数评分升高(P0.01),血清CaM KⅡ和MLCK含量升高(P0.01),结肠组织occludin、claudin1和ZO-1 mRNA和蛋白水平降低(P0.01),claudin2 mRNA和蛋白水平升高(P0.01),CaMKⅡ和MLCK蛋白水平升高(P0.01)。与模型组比较,药物组和埋线组大鼠体质量增加(P0.01),结肠病变明显减轻,组织学损伤指数评分降低(P0.01),血清CaMKⅡ和MLCK含量降低(P0.01),结肠组织内occludin、claudin1和ZO-1 mRNA和蛋白水平增高(P0.01,P0.05),claudin2 mRNA和蛋白水平降低(P0.01),CaMKⅡ和MLCK蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。埋线组和药物组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:穴位埋线能修复肠黏膜上皮紧密连接,降低肠黏膜上皮通透性,其机制可能与降低CaMKⅡ、MLCK等蛋白激酶的表达有关。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响

目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接——咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制。方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只。采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn’s Disease,CD)大鼠模型。温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡啶溶液灌胃,每日2次,共14次。治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型。将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响。结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡啶治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05)。结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接occludinc、laudin-1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的。     

补肾平喘膏方对支气管哮喘大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的观察支气管哮喘(哮喘)大鼠肺组织中维甲酸受体相关孤儿受体(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的变化情况以及补肾平喘膏方对其的影响,以探讨补肾平喘膏方防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、膏方预防组、膏方治疗组和膏方防治(预防+治疗)组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠以卵蛋白(OVA)致敏并诱发哮喘模型。采用地塞米松或膏方治疗(正常组与模型组除外)后,RT-PCR法检测肺组织中RORγt和Foxp3的mRNA表达情况。结果模型组肺组织Foxp3 mRNA表达低于正常组(P0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织Foxp3 mRNA表达升高(P0.05),与正常组表达相似(P0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P0.05)。模型组肺组织RORγt mRNA表达高于正常组(P0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织RORγt mRNA明显降低(P0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论补肾平喘膏方可以通过调节哮喘大鼠RORγt/Foxp3平衡,改善Th17/Treg的失衡状态,从而防治哮喘。     

电针对高血压前期大鼠血压及血管RORγt、Foxp3表达的影响

目的:观察电针对高血压前期大鼠血压及血管RORγt及Foxp3表达的影响。方法:24只4周龄的雄性自发性高血压大鼠(SHRs)分为模型组、阻断剂组及电针组,每组8只,8只相同周龄雄性大鼠WKY(Wistar-kyoto)为正常组。电针组予电针“人迎”“太冲”穴(2/15 Hz,1 mA,15 min,1次/日);阻断剂组予腹腔注入AG490,5μg/g,1次/日;正常组及模型组仅予抓取与固定;干预2周。采用无创鼠尾血压仪测压,采用RT-PCR、Western blot检测大鼠胸主动脉RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达的变化。结果:4~6周龄SHRs大鼠的血压明显高于同周龄WKY大鼠(P<0.05);阻断剂组在治疗1周时收缩压及舒张压值均低于模型组(P<0.05);而电针组在治疗2周时收缩压低于模型组(P<0.05)。与正常组相比,模型组中的RORγt mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05),Foxp3 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型组比,阻断剂组和电针组RORγt mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05)、Foxp3 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:电针人迎、太冲穴有延缓高血压前期大鼠血压升高的作用,其机制可能与调节血管RORγt及Foxp3的表达有关。     

从Neu3/IAP通路研究竹节参总皂苷对衰老大鼠结肠炎症的改善作用

目的从Neu3/IAP通路探讨竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)对衰老大鼠结肠炎症的改善作用及其可能的机制。方法 SD雄性大鼠分为四组,青年组(6月龄)、自然衰老组(24月龄)以及竹节参总皂苷低、高剂量组。SPJ低、高剂量组大鼠从18月龄分别给予含10、30 mg/kg的SPJ饲料至24月龄。测量结肠组织长度,生化试剂盒检测大鼠结肠组织中MPO水平,免疫组化检测炎症相关蛋白NLRP3、TNF-α的表达,以及结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5的表达,酶组织化学染色法检测大鼠十二指肠IAP活性,RT-PCR检测结肠组织中IAP、Neu3 mRNA表达。结果与自然衰老组比较,SPJ低、高剂量能显著降低大鼠结肠长度(P0.05),增强MPO活力(P0.05或P0.01),降低炎症相关蛋白NLRP3、TNF-α(P0.01),增加紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5的表达(P0.01或P0.05),增强十二指肠IAP活性以及结肠组织中IAP、Neu3 mRNA表达(P0.01或P0.05)。结论 SPJ可能通过Neu3/IAP通路减轻肠道炎症反应。     

肾气丸对DMN大鼠肝纤维化干预作用研究

目的:以二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维化模型为载体,以肾气丸为研究对象,探讨肾气丸对DMN大鼠肝纤维化的干预作用。方法:每周前3 d连续ip DMN(10 mg·kg-1)4周制备大鼠肝纤维化模型。造模2周末DMN处理组大鼠随机分为肾气丸组和模型组(各10只)。第3周的第1 d起,在继续造模的同时,肾气丸组给予成人70 kg体重的10倍量ig(1.029 g·kg-1),给药2周。4周末处死全部大鼠,留取肝组织样本和血清,观察大鼠肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)及肝组织病理变化,实时定量PCR法观察肝组织肝细胞生长因子(HGF)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化。结果:DMN造模4周,引起大鼠肝功能紊乱,与正常组比较,4周模型组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性及总胆汁酸(TBA)含量显著升高(P<0.01),血清白蛋白(ALB)含量显著下降(P<0.01)。肝组织羟脯氨酸含量显著升高,为正常组的4.58倍(P<0.01),HGF mRNA表达显著下降(P<0.01),α-SMA mRNA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,肾气丸组大鼠血清ALB含量显著升高,血清ALT,AST活性及TBA含量显著降低。肾气丸显著降低肝组织羟脯氨酸含量(P<0.05),同时显著降低α-SMA mRNA表达(P<0.01),升高HGF mRNA水平(P<0.05)。结论:肾气丸对DMN肝纤维化有较好的疗效,为肝病从肾论治提供了实验依据。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

肠炎清口服液改善小鼠溃疡性结肠炎肠道黏膜通透性的作用机制

目的: 建立三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型,研究肠炎清口服液对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响及其可能的作用机制. 方法: 用TNBS对雄性BALB/c小鼠进行造模,将造模后的实验动物随机分成正常组,模型组,柳氮磺吡啶肠溶片组(SASP,0.5 g·kg^-1),肠炎清口服液低、中、高剂量组(0.176,0.352,0.528 g·kg^-1);采用ELISA法检测各组BALB/c小鼠血浆二胺氧化酶(DAO)活性;通过RT-qPCR及Western blot检测方法,观察各组小鼠结肠部位紧密连接相关蛋白水闸蛋白1(claudin-1)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的基因表达与蛋白表达. 结果: 肠炎清口服液各剂量组的小鼠血浆中DAO的活性显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);ZO-1,occludin,claudin-1 mRNA在肠炎清口服液高、中、低剂量组小鼠体内表达水平均高于模型组小鼠,且差异具有显著性(P<0.05),且随着给药剂量的增大,claudin-1,ZO-1,occludin mRNA表达水平表现出一定的量效关系;Western blot结果显示,ZO-1及occludin蛋白在肠炎清口服液高、中、低剂量组的表达水平均高于模型组小鼠,且表达差异显著(P<0.05). 结论: 肠炎清口服液在小鼠溃疡性结肠炎中的作用机制与肠道黏膜通透性有密切关系;肠炎清口服液可能是通过调节紧密连接蛋白ZO-1,occludin,claudin-1的表达,从而改善小鼠肠道黏膜通透性.     

柔肝固肠方改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性的机制研究

目的:从肠道紧密连接及黏附连接角度探讨柔肝固肠方改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性的作用机制。方法:Lieber-De Carli酒精液体饲料饲养6周诱导大鼠慢性酒精性肝损伤模型。30只SD雄性大鼠,随机分无酒精液体饲料对照组(对照组,n=10)和酒精液体饲料造模组(n=20),造模第4周将造模组大鼠随机分模型组(n=10),柔肝固肠方组(n=10),并开始灌胃给柔肝固肠方或蒸馏水直至6周末,取材前3.5 h各组以10 mg/kg的内毒素(LPS)灌胃。取材后检测:1)血清AST、ALT活性变化;2)通过门脉血浆内毒素含量测定判断小肠通透性变化;3)小肠组织电镜超微结构观察;4)小肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白与mRNA表达变化;5)小肠黏附连接蛋白β-Catenin和E-Cadherin蛋白表达。结果:1)柔肝固肠方可显著降低模型大鼠显著升高的AST水平(P<0.05);2)柔肝固肠方可降低模型大鼠显著升高的小肠通透性,柔肝固肠方组血浆内毒素含量显著低于模型组;3)电镜结果显示柔肝固肠方可显著改善Lieber-De Carli酒精饲料喂养大鼠小肠黏膜表面微绒毛局灶性减少、变短、稀疏,排列不规则,同微绒毛相连的细胞终末网变性模糊等病理改变;4)柔肝固肠方可显著升高酒精饲料喂养肝损伤大鼠小肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白与mRNA表达及黏附连接蛋白β-Catenin和E-Cadherin蛋白表达。结论:柔肝固肠方通过改善肠上皮紧密连接及黏附连接改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性改变。     

清热解毒化浊片对肠源性内毒素血症肝损伤大鼠肝组织TNF-α及小肠ZO-1蛋白的影响

目的:观察清热解毒化浊片对肠源性内毒素血症肝损伤大鼠炎性因子TNF-α及小肠紧密连接蛋白-1(zonula occluden-1,ZO-1)(中文名称)的影响。方法:以高脂饲料和52%Vol.白酒喂养建立肠源性内毒素血症肝损伤模型,造模成功后,随机分为治疗1组、治疗2组和模型组,模型组用白酒及蒸馏水灌胃、治疗1组用白酒及清热解毒化浊片悬浊液灌胃、治疗2组用蒸馏水及清热解毒化浊片悬浊液灌胃。经治疗1个月后检测肝功能(ALT、AST、ALP、GGT)及血浆内毒素水平,观察肝组织及小肠组织病理学改变,免疫组化法检测肝组织TNF-α及小肠组织ZO-1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组血浆内毒素水平明显升高(P0.01),ALT、AST、GGT水平均明显升高(P0.01),ALP水平升高(P0.05),肝组织TNF-α明显升高(P0.01),小肠组织ZO-1表达降低(P0.05);与模型组比较,治疗2组内毒素水平明显降低(P0.01),治疗1组及2组ALT、AST、GGT水平均明显降低(P0.01),ALP水平降低(P0.05),肝组织TNF-α表达降低(P0.05),小肠组织ZO-1表达升高(P0.05)。光镜下观察,治疗1组及2组大鼠肝组织及小肠组织炎性浸润情况明显改善。结论:清热解毒化浊片可以通过上调肠组织ZO-1蛋白的表达,维持肠黏膜屏障功能,减少内毒素吸收,降低促炎因子TNF-α的释放,从而在一定程度上终止内毒素血症与肝损伤的恶性循环。     

法尼醇X受体在胆汁淤积幼龄大鼠模型中的表达及利胆合剂的干预作用

目的研究法尼醇X受体(FXR)在胆汁淤积幼龄大鼠模型中表达及利胆合剂干预作用。方法将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、利胆合剂高、低剂量组。正常和模型组羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余UDCA或利胆合剂灌胃。第5天(正常组除外)给予α-异硫氰酸奈酯(ANIT),ANIT 48h处死。检测血清TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT、ALP,实时荧光定量PCR检测肝组织FXR及小异源二聚体伴侣(SHP)、UDP葡糖醛酸基转移酶家族2多肽B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA;Western blot检测肝组织FXR及SHP、UGT2B4、BSEP蛋白。结果模型组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平较正常组增高(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与利胆合剂低剂量组比,高剂量组AST、TBA、GGT水平降低(P0.01)。模型组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量较正常组降低(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及高剂量组蛋白表达量升高(P0.01),低剂量组FXR、BSEP蛋白表达量升高(P0.05);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量升高(P0.01,P0.05);与利胆合剂低剂量组相比,高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、 BSEP mRNA表达量升高(P0.01,P0.05), SHP、UGT2B4蛋白表达量升高(P0.01)。结论利胆合剂可缓解ANIT诱导的胆汁淤积大鼠,且在一定范围内,剂量越高,效果越明显,其疗效优于UDCA,其机制可能与促进FXR及下游的SHP、UGT2B4、BSEP分子表达有关。     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-Ⅱ表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27 g·kg~(-1)),秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1))。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5 mL·kg~(-1))联合灌胃30%乙醇(10 mL·kg~(-1))制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10 mL·kg~(-1)),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及Western Blot法检测大鼠肝组织Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(P 0.05,P 0.01),ALB含量显著降低(P 0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1和LC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(P 0.01)。与模型组比较,FRF中、高剂量组的γ-GGT显著下降(P 0.05,P 0.01),FRF各剂量组的大鼠血清ALT、AST、TBIL明显降低(P 0.05,P 0.01),ALB升高(P 0.05,P 0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1、LC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(P 0.01)。结论FRF能干预纤维组织增生,改善肝功能,其抗肝纤维化机制可能与下调Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。     

复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中RORγt、Foxp3表达的影响

目的研究复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中RORγt、Foxp3表达的影响。方法复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备溃疡性结肠炎大鼠模型,大鼠随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪组(5%)及复方芩柏颗粒剂高、中、低剂量组(6%、12%、24%),灌肠给药3周。然后,评估大鼠饮食量、体质量、结肠组织损伤程度,ELISA法测定血清中TGF-β1、IL-17水平,HE染色观察病理变化,Western blot、RT-PCR法检测结肠组织中RORγt、Foxp3蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,复方芩柏颗粒剂组大鼠饮食量、体质量、TGF-β1及IL-17水平、结肠组织损伤程度显著改善(P0.05,P0.01),同时可调节RORγt/Foxp3失衡,并呈一定量效关系。结论复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用可能是通过调控RORγt/Foxp3失衡,从而下调IL-17表达来实现。     

五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠脾组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA表达的影响

目的:研究五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠脾细胞悬液T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 m RNA表达的影响。方法:采用RSV诱导OVA致敏大鼠哮喘模型。造模成功后,随机分成五虎汤高、中、低[4.752 g/(kg·d)、2.376 g/(kg·d)、1.188 g/(kg·d)]剂量组、地塞米松组[地塞米松片,2.4 mg/(kg·d))]、模型组。干预14 d后,取脾组织,采用RT-PCR法检测脾细胞悬液中T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 m RNA表达情况。结果:模型组脾组织T-bet、Foxp3m RNA表达低于空白组(P0.05),而GATA-3、RORγt m RNA表达高于空白对照组(P0.05)。五虎汤高、中剂量组脾组织GATA-3、RORγt m RNA表达均明显低于模型组(P0.01或P0.05),而T-bet、Foxp3 m RNA表达均明显高于模型组(P0.01或P0.05)。结论:五虎汤能调控病毒诱发幼年哮喘大鼠脾组织转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 m RNA的表达,调控Thl、Th2、Thl7、Treg细胞,重建免疫平衡,抑制哮喘气道炎症形成。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响

目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接--咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制.方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只.采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn's Disease,CD)大鼠模型.温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡嘧溶液灌胃,每日2次,共14次.治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型.将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响.结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡嘧治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05).结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接.ccludin,claudin 1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的.     

清肠化湿方对TNBS诱导大鼠UC模型紧密连接蛋白的影响

目的:观察三硝基苯磺酸(TNBS)法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型结肠黏膜occludin、claudin-1蛋白的变化特点及清肠化湿方对occludin、claudin-1蛋白表达的影响。方法:采用TNBS诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,并随机分为正常对照组、模型对照组、清肠化湿方组、SASP组,治疗10天后处死大鼠取新鲜结肠标本,观察黏膜大体形态及组织学改变,并采用Western blot法检测occludin、claudin-1蛋白表达水平。结果:模型对照组occludin、claudin-1蛋白表达均明显低于正常对照组,清肠化湿方组occludin、claudin-1的表达高于模型对照组,同时,清肠化湿方组大鼠结肠形态及组织学损伤评分均有降低。结论:清肠化湿方对UC模型大鼠具有治疗作用,增强occludin、claudin-1的表达,恢复正常的肠粘膜屏障功能可能是其作用机制之一。