比较羊水细胞原位培养法和胰酶消化法在产前诊断染色体检查中的应用价值

目的 比较载玻片-原位培养法(以下简称原位法)和胰酶消化法在羊水细胞染色体检查中的应用价值。方法 选取2020年7—12月来该院进行产前诊断的1 105例孕妇的羊水标本,分别采用原位法和胰酶消化法进行培养、收获及制片,成功制片后用GSL-120扫描、捕获核型,对两种方法的羊水细胞培养成功率、培养时间、分裂相、核型结果等进行比较分析。结果 1 105例羊水标本同时采用原位法、胰酶消化法两种方法进行培养,这两种方法的培养成功率的差异无统计学意义(χ²=0.33,P>0.05)。原位法和胰酶消化法羊水需求量分别为5、10 mL,培养基用量分别为7、8 mL。与胰酶消化法相比,原位法羊水细胞培养时间短,分裂相及优质分裂相数目多,差异均有统计学意义(Z=-31.83,P<0.001;Z=-2.937,P=0.003;Z=-2.943,P=0.003)。两种方法的羊水染色体核型分析均检出972例正常核型、128例异常核型,其中染色体数目异常真嵌合7例,染色体核型结果符合率为100%。结论 与胰酶消化法相比,原位法具有培养时间短、培养基用量少、羊水需求量少、操作步骤...     

不同方法对羊水细胞培养成功率的影响

目的比较不同方法对羊水细胞培养成功率的影响。方法选择2019年1-10月于永州市妇幼保健院进行胎儿染色体核型检查的404例孕妇作为研究对象,采集所有孕妇的羊水细胞,分别采用原代培养法以及传代培养法进行羊水细胞培养,收获后进行低渗处理,制作吉姆萨染色玻片阅片核对。比较两种羊水细胞培养方法的成功率和失败率,对羊水标本玻片中的染色体分裂相进行计数。结果采用传代培养法的羊水细胞培养成功率明显高于原代培养法〔100.00%(404/404)比96.04%(388/404)〕,失败率明显低于原代培养法〔0(0/404)比3.96%(16/404)〕,且羊水染色体分裂相出现数(个:92.85±1.15比50.94±1.20)、可计数(个:53.78±1.22比30.30±1.25)、可分析数(个:27.34±1.06比14.55±1.05)均明显高于原代培养法,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论采用传代培养法的羊水细胞培养成功率更高,且能够获取足够的羊水染色体核型,值得在临床检验工作中推广使用。     

1798例羊水细胞培养染色体分析结果的质量分析

目的探讨羊水细胞培养胎儿染色体核型分析结果的质量情况。方法普通培养瓶法对1 798例羊水细胞进行细胞培养胎儿染色体核型分析,并对其结果做质量分析。结果 1 798例羊水标本中,培养成功1 744例,成功率为97%,培养成功的1 744例制作为羊水细胞胎儿染色体标本片,并对其进行胎儿染色体核型分析,其分析的成功率为99.3%。结论该实验室羊水细胞培养胎儿染色体分析结果的质量符合行业标准。     

产前诊断中羊水细胞培养方法的研究

目的:探讨产前诊断中羊水细胞培养方法及不同羊水量对培养结果的影响。方法:155例羊水标本,以不同羊水量分为两组,分别以平皿盖玻片法和培养瓶法进行培养,比较两种培养方及不同羊水量的培养结果。结果:平皿盖玻片联合培养瓶法培养一次成功并获满意核型151例,成功率97.4%;两种培养方法比较,两组中均以平皿盖玻片法成功率高于培养瓶法;平皿盖玻片法6~8mL与15~20mL羊水的培养成功率无显著差异。结论:羊水细胞培养中,平皿盖玻片法优于培养瓶法,前者具有成功率高、收获时间早、容易区分真假嵌合型的优点,更适用于羊水量少、孕周偏大者;产前诊断中推荐以培养瓶法联合平皿盖玻片法行羊水细胞培养。     

基层实验室细胞遗传学产前诊断技术可行研讨

目的研讨基层实验室开展细胞遗传学产前诊断技术的可行性。方法普通培养瓶法对350例羊水标本进行细胞培养染色体分析。结果 350例羊水标本1次培养成功340例,1次培养成功率约97.1%。其中引产羊水标本60例,染色体核型分析未见异常;35岁或35岁以上的高龄孕妇羊水标本158例,染色体核型分析结果:1例21-三体;1例47,XXX;1例46,XY,15p+。异常核型约占1.9%。产前筛查唐氏高风险孕妇132例,核型分析结果:2例21-三体;1例46,XY,t(6;19)(q12;q134)。异常核型约占2.3%。结论基层实验室开展细胞遗传学产前诊断技术可行。     

羊水原位培养法联合染色体微阵列分析在产前诊断中的应用

摘要:目的评估 羊水原位培养法联合染色体微阵列分析(CMA)技术在产前诊断检出胎儿染色体异常中的应用价值。方法回顾性分析2018年10月至2023年2月于怀化市妇幼保健院因不同产前诊断指征而行羊水穿刺术的3133例孕妇,比较羊.水原位培养法和CMA法在胎儿染色体异常方面的检出率和差异。结果在3133例样本中,双指征组的异常检出率均较单指征组分别增加0.95%(羊水原位培养法)和2.36% ( CMA);两种技术联合检测共检出796例异常(检出率25.41%),其中羊水原位培养法检出300例(9.58%) ,CMA法检出706例(22.53%)。两者均能检出145 例非整倍体异常和31例染色体结构异常,但CMA另增加检出169例提示致病或可能致病的染色体拷贝数变异(CNV)、杂合性缺失(L0H)、杂合性不存在( A0H)/纯合区域(ROH)及单亲体二倍体异常(UPD),而羊水原位培养法增加检出11 例染色体结构异常。两者联合检出嵌合体23例(0.73%)。结论羊水原位培养法与 CMA技术互为补充,联合应用可显著提高胎儿染色体异常的检出率,可为产前遗传咨.询提供更详细准确的信息,有助于孕妇决策是否终止妊娠。     

孕中期羊水细胞染色体核型分析在产前诊断中的应用424例分析

目的：利用孕中期羊水染色体核型分析进行产前诊断。方法：对孕16～28周孕妇进行羊膜腔穿刺抽取羊水,羊水细胞培养,制备染色体并分析核型。结果：424例孕妇,羊水培养成功420例,成功率99．06％。可行染色体核型分析的420例中共发现16例染色体异常,占3．8％,其中常染色体数目异常4例,性染色体数目异常1例,平衡异位3例,其他异常8例。结论：孕中期羊水细胞培养,染色体核型分析是产前诊断胎儿染色体疾病的一种安全,有效,可靠的方法。     

核型分析联合CNV-seq技术在羊水染色体嵌合体检测中的应用

目的 探讨羊水染色体核型分析联合基因组拷贝数变异测序(CNV-seq)技术在羊水染色体嵌合体检测中的应用。方法 通过常规染色体核型分析和CNV-seq技术对该院3 920例羊水标本进行检测,将结果为嵌合体的病例进行回顾性分析。结果 (1)3 920例羊水标本中,核型分析联合CNV-seq技术共检出嵌合体21例,检出率为0.53%。其中,核型分析检出嵌合体共19例,检出率为0.48%,CNV-seq技术检出嵌合体共12例,检出率为0.33%。(2)血清学筛查高风险标本检出嵌合体10例,无创产前检测结果异常标本检出嵌合体6例,高龄标本检出嵌合体3例,超声结果异常标本检出嵌合体2例。(3)两种检测方法联合检出的嵌合体中,性染色体数目或结构异常占比最高,其次为常染色体数目异常。结论 羊水染色体核型分析联合CNV-seq技术检测可提高羊水染色体嵌合体的检出率。     

51例稽留流产胎儿绒毛染色体分析

目的 探讨稽留流产与染色体异常的关系,探索绒毛染色体制备方法,为产前诊断奠定基础.方法 对51例因胚胎停止发育而行人工流产的绒毛(其中行辅助生殖术后17 例),分别采用直接法或长期培养法制备染色体,常规制片,G显带,进行染色体核型分析.结果 直接法制备的21例标本成功14例;长期增养法制备的30例标本全部获得成功.检出...     

荧光原位杂交技术在羊水间期细胞产前诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断中的应用价值。方法采集1 189名孕18~24周孕妇的羊水标本,用染色体GLP13/21探针和CSP18/X/Y探针对未培养的羊水细胞进行FISH检测,并与羊水细胞染色体核型结果比较。结果 1 189例羊水标本1 175例培养成功,检出41例染色体异常,35例染色体多态性。1 189例羊水标本FISH杂交均成功,检出29例异常标本,另有6例结果不能判定。29例FISH结果异常中除1例因羊水培养失败无染色体核型对比外,其余与染色体核型结果一致。6例结果不能判定中5例因母血污染影响X、Y信号判断。结论产前FISH检测法在诊断5种染色体数目异常中有较高的应用价值,但存在检测假阳性和范围局限性,不建议作为单独检测方法用于染色体异常的产前诊断。     

外阴阴道念珠菌快速培养液的临床研究

目的探讨快速诊断阴道念珠菌感染的方法。方法研制一种新的外阴阴道念珠菌快速培养液,并与普通细菌培养法对照,观察两种方法检测外阴阴道念珠菌快速培养液的准确度、精密度和培养时间。结果快速培养液和普通细菌培养液结果比较,其准确度一致(P>0.05),精密度相等(0.0%),培养时间缩短为2.0～2.5 h。结论快速培养法操作简单,准确度高,精密度好,检测时间短,使用快速培养液培养外阴阴道念珠菌能为临床明确早期诊断,及时开展治疗提供有力的实验室支持,值得推广应用。     

镜检法和核酸杂交法检测念珠菌性阴道炎的差异及评价

目的：分析念珠菌性阴道炎菌种的构成及2种念珠菌检测方法（镜检法、核酸杂交法）的差异。方法选取2012年1～4月北京天坛医院90例念珠菌培养阳性的阴道分泌物标本,分析以镜检法和核酸杂交法检测的结果。结果白色念珠菌是念珠菌性阴道炎的主要致病菌（77．8％）,其他所有念珠菌中克柔念珠菌的比例最高（12．2％）;镜检法对白色念珠菌检测的灵敏度为69．2％,对其他念珠菌的检测灵敏度为0或很低,核酸杂交法对白色念珠菌的检测灵敏度为95．4％,对其他所有念珠菌的检测灵敏度为100．0％,对少量白色念珠菌的检出率为40．0％。结论白色念珠菌是念珠菌性阴道炎的主要致病菌,2种检测方法各有利弊,需根据实际情况选择合适的方法。     

Detection of Bacillus cereus as a causative agent of emetic food poisoning by an unconventional culture procedure

Bacillus cereus is known to cause two types of food poisoning: emetic and diarrhoeal. Both diseases are usually self-limiting; however, severe cases have been reported, presenting with acute liver failure and encephalopathy, including rarely fatal cases of vomiting. Clinical laboratories do not routinely test for B. cereus in patients with gastrointestinal disease. Therefore, B. cereus causing food poisoning goes undetected. We report a successful isolation of emetic B. cereus from a patient with food poisoning who presented with severe vomiting, fulminant hepatic failure, and acute encephalopathy, by a non-conventional method. Initially, stool specimens from the patients were routinely cultured to identify the causative organisms of food poisoning. No foodborne pathogens were detected in this study. In contrast, additional clinical and epidemiological information strongly suggested food poisoning by emetic B. cereus. Consequently, we allowed Drigalski agar medium smeared with patient stool specimens to stand at room temperature (approximately 25 °C) for 9 days. After 9 days, mixed bacteria grown on the medium were inoculated onto mannitol egg yolk polymyxin (MYP) agar plates, a selective medium for B. cereus. Typical colonies of B. cereus developed on MYP agar plates. The isolated B. cereus had a cereulide-producing genetic locus (ces) gene encoding the emetic toxin cereulide. The method used in this case study was unique. This method is easy to apply after obtaining an additional clinical and epidemiological information, and this method will improve the diagnostic rate of severe B. cereus food poisoning. This will contribute to the advancement of therapeutics in the future.     

快速培养法与实时荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体的对照研究

目的探讨快速培养法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的异同。方法对2011年1～12月住院的218例疑似肺炎支原体肺炎患儿采集咽拭子,同时用快速培养法和实时FQ-PCR法检测MP。结果快速培养法与实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05);实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异度明显高于快速培养法,假阳性率明显低于快速培养法,差异有统计学意义(P<0.05)。二者联合检测的灵敏度、阴性预测值及诊断符合率分别为93.8%、90.7%和90.8%,均高于快速培养法和实时FQ-PCR法(P<0.05);假阴性率为6.2%,明显低于快速培养法和实时FQ-PCR法(P<0.05);联合检测的特异度为86.7%,明显高于快速培养法(P<0.05)。结论两种方法的敏感度差别不大,而实时FQ-PCR法的特异性优于快速培养法。应用这两种不同方法学原理的检测方法组合检测,取长补短,在提高肺炎支原体感染检出率的同时,还可以互相佐证,减少实验误差,提高检测的准确性。     

使用计分法对干燥培养基质量的评价

以计分法对干燥培养基及其原料质量进行评价。经检测，用不同工厂产蛋白胨配制的普通营养琼脂与ＳＳ琼脂，总分值相近，但鼠伤寒沙门氏菌与痢疾杆菌的生长分值却有明显差别。     

血培养瓶法在无菌体液病原菌培养中的应用

目的：探讨血培养瓶法在无菌体液病原菌培养中的应用。方法收集2013年3～9月四川省人民医院共321份无菌体液标本,通过双瓶血培养瓶法和直接接种法培养分离病原菌,通过与传统的直接接种法比较对其进行评价。结果321份标本中,通过血培养瓶法108份标本培养出细菌,阳性率为33．6％;直接接种法55份标本培养出细菌,阳性率为17．1％,差异有统计学意义（ P＜0．01）。血培养增菌后80％细菌在24～48 h内检出,而直接接种法90％细菌在24 h检出,检出时间直接接种法更具优势。两种方法检出细菌前3位均为屎肠球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,而凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌等在血培养法中检出率明显高于直接法。血培养瓶法的敏感性为89．7％,阴性符合率为95．3％,直接接种法分别为43．2％和76．3％,而阳性符合率直接法略高于血培养瓶法。导致培养结果假阴性的细菌主要为凝固酶阴性葡萄球菌、棒状杆菌和微球菌。结论血培养法的敏感性明显高于直接接种法,可提高病原菌检出率,与直接接种法同时培养可缩短检出时间并防止漏检,特别是对链球菌群、厌氧菌和真菌的检出具有显著优势,但需注意严格无菌操作,减少污染环节。     

SWOT分析法在医院监护室护理安全文化构建中的应用

目的探索SWOT分析法在医院监护室护理安全文化构建中的应用,以进一步提高临床护理人员对安全文化的认知、态度及行为。方法 2015年4月至2016年3月,便利抽样法选取上海市某三级甲等综合性医院监护室222名护士为研究对象。采用"医院护理人员病人安全文化调查"问卷对其进行患者安全文化调查。针对调查现状,运用SWOT分析法进行分析并采取相应对策进行干预;干预后采用相同问卷再次进行调查,比较干预前后护理人员对护理安全文化的认知。结果与进行SWOT分析干预前相比,医院监护室不同年龄、学历、职称、护龄和不同监护室护理人员在团队氛围、对工作的满意、单位安全的氛围和对管理的感受这4个维度上较实施前均有所改善,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 SWOT分析法用于构建医院监护室护理安全文化,可提高护理人员对安全文化的认知、态度及行为。     

Care and caring culture as experienced by nurses working in different care environments: A phenomenological-hermeneutic study

Aim

The aim is to understand and develop the concept of care and caring culture and to do so based on the empirical/phenomenological standpoint of nurses’ lived experiences of working in different environments.

Background

Culture, care and caring are significant concepts mentioned and used in connection with nursing practice. In the nursing literature, the ‘caring culture’ as a concept is mostly taken for granted, and it is up to the reader to determine what caring culture means.

Method

A phenomenological-hermeneutic method was used to uncover the meaning of lived experiences though interpretation of interviews transcribed as text. Seventeen nurses working on different wards were interviewed in 2006. A follow-up focus-group discussion was conducted with seven of the nurses 1 year later for validation of the findings.

Findings

Thematic analyses revealed five themes: you have to adapt to the existing care culture; seeing the invisible; being yourself; the strong personalities; the patients must adapt themselves to the circumstances. Adaptation to unwritten routines entails adaptation to the culture and the common value system. On wards described as “homelike”, nurses may act in a way that reflects their own values.

Discussion

The care and caring culture can be understood from the perspective of what it means to care and from the perspective of how care provision is accomplished. To attain a caring culture founded on certain values, for example caritas, love and charity, we must first understand how the organization and personnel understand caring.     

人骨髓间充质干细胞分离鉴定方法的改进

本研究的目的是建立一种基于临床移植需要的分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells,MSC）的方法,为配合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础.采用Percoll分离液（1.073/gml）从新鲜成人骨髓穿刺液中分离MSC,应用贴壁筛选法传代培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系（地塞米松0.1 μmol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、抗坏血酸磷酸盐50μmol/L）及脂肪诱导体系（地塞米松1μmol/L、牛胰岛素5 mg/L、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤0.5 mmol/L、消炎痛60μmol/L）分别诱导MSC定向分化,通过细胞形态观察及免疫化学染色进行鉴定.结果表明：从成人骨髓液中分离培养出MSC,稳定表达CD73、CD105、CD166,不表达CD34、CD45.定向诱导的成骨细胞表达碱性磷酸酶活性,脂肪细胞内出现明显的脂滴.结论：采用密度梯度离心联合贴壁筛选法并通过流式细胞术检测及定向诱导分化,能够从成人骨髓液中分离出MSC,并完成细胞表型及多向分化潜能的初步鉴定.本操作方案具有一定的临床应用价值.     

全骨髓贴壁法培养人骨髓间充质干细胞的改良研究

本研究旨在利用红细胞自然沉降性原理，以传统的全骨髓贴壁法为基础，探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法。采用6孔板培养细胞，将骨髓标本用MSC完全培养液培养48h，吸取上层无红细胞的上清层，置于新的培养孔以分离获取MSC。用倒置显微镜观察细胞形态及贴壁情况，记录细胞首次贴壁时间、首次传代时间。并以传统全骨髓贴壁法为对照；应用流式细胞术检测细胞周期、细胞表面标记；用油红0及碱性磷酸酶试剂盒分别对MSC成脂、成骨能力进行鉴定；应用计数板计数法描绘第1代，第3代，第5代MSC增殖曲线。结果表明，用改良法培养的MSC高表达CD90、CD105、CD13、CD44，低表达CD14、CD45、CD34；细胞周期中G0／G1期88．76％，G2／M期3．04％，S期8．2％，符合干细胞周期特征；增殖曲线呈典型”S”型；油红O与碱性磷酸酶染色均为阳性。同时与传统方法相比，改良方法的细胞贴壁率显著高于传统方法（P=0．0004），首次贴壁时间短（P〈0．0001）、首次传代时间短（P=0．001）。结论：骨髓标本培养48h后的上清层中含大量贴壁活性的悬浮MSC，改良方法是一种比传统贴壁法更具有便捷、高效等优点的培养方法。