依托咪酯对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

目的 探讨依托咪酯对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响。方法 将人CHON-001软骨细胞分为空白组(常规培养基培养)、模型组(用10 ng·mL^-1 IL-1β培养)、高剂量实验组(用5μmol·L^-1依托咪酯+10 ng·mL^-1 IL-1β培养)、抑制药组[用5μmol·L^-1无翅型MMTV整合位点家族成员3a(Wnt3a)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制药IWR-1-endo+10 ng·mL^-1 IL-1β培养]、抑制药+高剂量实验组(用10 ng·mL^-1 IL-1β+5μmol·L^-1依托咪酯+5μmol·L^-1 IWR-1-endo培养)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的增殖情况,用膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)染色法检测细胞凋亡情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中促炎因子的含量;用蛋白质印迹法测定基质金属蛋白酶(...     

镇静药物对于TURP患者外周血细胞因子表达水平的影响

目的探讨术中应用不同镇静药物对患者外周血Th1/Th2细胞因子表达水平的影响。方法选取择期行经尿道前列腺切除术(TURP)的男性患者66例,随机分为3组。对照组:术中输注生理盐水;咪达唑仑组:术中输注咪达唑仑镇静;右美托咪定组:术中输注右美托咪定镇静。术中应用BIS监测镇静深度,BIS<80认为患者处于镇静状态。采集麻醉后和术后24 h动脉血,应用酶联免疫试验试剂盒检测血浆IFN-γ、IL-4水平,以IFN-γ和IL-4水平计算Th1/Th2。结果术后24 h,对照组IL-4表达增加,咪达唑仑组IFN-γ表达增加(P<0.05),三组Th1/Th2比率与基础值比较差异有统计学意义,咪达唑仑组Th1/Th2比率升高(P<0.05)。结论椎管内麻醉下行TURP手术的男性患者术中给予咪达唑仑镇静,可提高术后24 h的外周血Th1/Th2比率。     

HPLC法测定大鼠血浆中咪达唑仑的含量及其在药物相互作用研究中的应用

目的:建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中咪达唑仑含量,并应用于佐米曲坦对大鼠肝细胞中 CYP3A 的诱导作用的研究。方法:采用色谱柱为 Diamonsil~(TM)(钻石)C_(18)(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01 mol·L~(-1)磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.0)(58:42),流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长为220 nm。咪达唑仑(10 mg·kg~(-1))作为经典 CYP3A 探针底物对3组不同诱导后的大鼠(佐米曲坦样品组、地塞米松阳性对照组或空白对照组)静注给药,测定咪达唑仑的清除率等参数来研究CYP3A 活性的变化。结果:咪达唑仑在0.3～375 μmol·L~(-1)浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9997,n=5),检测限为0.0018 μmol·L~(-1),平均回收率为97.9%。经佐米曲坦诱导的雄性大鼠组中咪达唑仑 AUC_(0-t)和 T_(1/2)与雄性空白大鼠组中咪达唑仑 AUC_(0-t)和 T_(1/2)比,显著降低,清除率增加,与地塞米松组中咪达唑仑的动力学参数相近;而经佐米曲坦诱导的雌性大鼠的动力学参数与空白雌性组比没有明显的变化。结论:本文建立的大鼠血浆中咪达唑仑测定方法稳定、准确、简便,能使咪达唑仑作为探针药物很好地运用于佐米曲坦对大鼠肝中 CYP3A 诱导作用研究中。另外佐米曲坦对大鼠肝中 CYP3A 具有性别差异的诱导作用。     

咪达唑仑透皮贴剂在大鼠体内的药代动力学

目的建立反相高效液相色谱法测定大鼠血浆咪达唑仑的浓度,并研究咪达唑仑透皮贴剂在大鼠体内的药代动力学。方法采用经皮给药方式,在小鼠腹部给予咪达唑仑透皮贴剂后,于不同时间点取血,样品经处理后采用反相高效液相色谱法测定咪达唑仑的血药浓度,采用色谱柱为Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈—水(内含0.1%三乙胺)(52∶48,V/V),流速为1 mL·min-1,柱温为25℃,进样量为20μL。结果咪达唑仑检测的线性范围为0.10～10.0μg·mL-1,最低检测限是0.01μg·mL-1。日内、日间精确度,稳定性RSD均小于10%;方法回收率均大于80%,准确度RE均在-10%～20%之间。咪达唑仑贴剂在大鼠体内的主要药代学参数Cmax、Tmax、T1/2α、T1/2β、AUC和CL分别为(1.69±0.084)μg·mL-1、6 h、(2.39±0.042)h、(8.05±0.11)h、(17.69±0.34)μg.h.mL-1和(2.54±0.048)L.h-1。结论反相高效液相色谱法用于测定咪达唑仑浓度操作简单、测定结果可靠。所制咪达唑仑透皮贴剂有一定的控释作用。     

苍术素调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1信号通路对白细胞介素 -1β诱导软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨苍术素(ATR)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1(AMPK/SIRT1)信号通路对白细胞介素 1β(IL-1β)诱导的乳鼠软骨细胞自噬与凋亡的影响。方法 2022年 1―8月从乳鼠中分离软骨细胞并鉴定;使用不同浓度苍术素(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)预处理软骨细胞,再使用 IL-1β诱导软骨细胞培养 24 h,噻唑蓝( MTT)法检测增殖活性,筛选最佳药物浓度;将软骨细胞分为对照组、 IL-1β组( 10 μg/L IL-1β)、苍术素组( 10 μg/L IL-1β+20μmol/L苍术素)、苍术素 +AMPK抑制剂组(苍术素 +compound C组, 10 μg/L IL-1β+20 μmol/L苍术素 +50 μmol/L compound C);流式细胞术与 TUNEL法检测软骨细胞凋亡,单丹磺酰尸胺( MDC)染色观察自噬小体;蛋白质印迹法检测自噬及 AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达。结果与对照组比较, IL-1β组软骨细胞增殖活性、自噬水平、微管相关蛋白轻链 3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)［( 0.47±0.08)比( 1.23±0.14)］、 Beclin-1［( 0.67±0.09)比( 1.45±0.19)］、自噬相关基因 -5(Atg5)［( 0.35±0.06)比( 1.14±0.13)］、磷酸化 AMPK(p-AMPK)［(0.37±0.05)比( 0.91±0.05)］、SIRT1［(0.51±0.06)比( 1.31±0.14)］磷酸化 Unc-51样自噬激活蛋白酶(p-ULK1)蛋白表达［(0.25±0.04)比(0.85±0.11)］降低,细胞凋亡率［(28.46±3.55)%比( 2.54±0.82)%］升高( P<0.05);与 IL-1β组比较,苍术素组细胞增殖活性、自噬水平、 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Atg5、p-AMPK、SIRT1、p-ULK1蛋白表达升高,细胞凋亡率降低( P<0.05); compound C可逆转苍术素对 IL-1β诱导的软骨细胞自噬激活作用。结论苍术素通过激活 AMPK/SIRT1信号通路促进 IL-1β诱导的大鼠软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡。     

咪达唑仑舒张大鼠离体胸主动脉环的机制研究

目的观察咪达唑仑对大鼠离体胸主动脉环张力的影响,并探讨其作用机制。方法采用离体血管张力试验方法,观察咪达唑仑在3×10-6,1×10-5,3×10-5,1×10-4mol/L浓度时,对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol/L)诱发大鼠离体胸主动脉环收缩的影响。观察内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol/L)、一氧化氮供体L-精氨酸(L-Arg,1×10-5mol/L)、特异性钙非依赖可诱导型(iNOS)抑制剂N-3-氨甲基-苄基-乙酰氨(1400W,1×10-5mol/L)对咪达唑仑作用的影响,以及咪达唑仑对血管环外钙依赖性收缩和内钙依赖性收缩的影响。结果以上浓度的咪达唑仑对NE预收缩的大鼠离体胸主动脉环有舒张作用。用L-NAME、L-NAME合用L-Arg预处理的血管环对咪达唑仑的舒张反应与未经处理时比较,差异有统计学意义(P<0.05),L-Arg和1400W对咪达唑仑的舒血管作用没有影响(P>0.05)。1×10-4mol/L的咪达唑仑可明显抑制血管环外钙依赖性收缩和内钙依赖性收缩(P<0.05)。结论咪达唑仑对大鼠胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用,其舒张反应可能与内皮产生的一氧化氮有关,通过抑制外钙内流和内钙释放发挥舒张作用。     

西红花酸对白细胞介素1β诱导人膝关节原代软骨细胞炎症因子表达的影响

目的研究西红花酸对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的人膝关节原代软骨细胞分解代谢及炎症应答的影响。方法西红花酸0.5,1,5,10和20μmol·L-1处理人膝关节原代软骨细胞12 h,MTT检测细胞存活率。西红花酸0.5,1,5,10和20μmol·L-1处理人膝关节原代软骨细胞12 h后,再加IL-1β10μg·L-1处理24 h;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)、MMP-13及Ⅱ型胶原(CollⅡ)mRNA水平;ELISA检测MMP-3、MMP-13、前列腺素E2(PGE2)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;试剂盒检测一氧化氮(NO)含量;Western印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)P85、磷酸化PI3K P85(p-PI3K P85)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、P65 NF-κB和p-P65 NF-κB蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,西红花酸对人膝关节原代软骨细胞存活率无影响。qRT-PCR和ELISA检测结果显示,与IL-1β处理组相比,西红花酸处理可抑制IL-1β诱导的MMP-3和MMP-13 mRNA和...     

原花青素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨原花青素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 分别用原花青素0、10、20、40、60、100μmol/L干预软骨细胞48 h,采用CCK-8法检测原花青索对软骨细胞活性的影响.将软骨细胞分为IL-1β处理组(A组)、IL-1β+原花青素处理组(B组)和空白对照组(C组),采用RT-PCR和Western blot法分别检测软骨细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达,Hoechst/碘化丙啶染色检测软骨细胞凋亡,并观察乳酸脱氢酶(LDH)释放情况.结果 原花青素浓度为40μmol/L时,软骨细胞活性达峰值(P＜0.01).与C组相比,A组软骨细胞LDH释放量、细胞凋亡以及Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均增加(P＜0.01),PI3K、Akt和Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01);而B组加入原花青素处理后能逆转上述各指标的变化过程(P＜0.05或P＜0.01).结论 原花青素可以抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡;其保护机制可能与激活PI3K/Akt通路、上调Bcl-2以及下调Bax和Caspase-3的表达有关.     

六神丸对CYP活性的诱导作用研究

目的:研究六神丸对CYP活性的诱导作用。方法:体外传代培养人肝癌Hep G2细胞。以3、1、0.5μg/ml(以丸质量计,下同)六神丸培养细胞48 h后,采用实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4 m RNA的表达;采用Western blot法测定细胞CYP3A4、CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9蛋白的表达,采用高效液相质谱法测定咪达唑仑代谢产物1-羟基咪达唑仑的含量,以咪达唑仑生成速率代表CYP3A4活性。上述试验均设阴性对照(0.3%二甲基亚砜)组、阳性对照(30μmol/L利福平、100μmol/L地塞米松)组。将18只Wistar大鼠随机均分为空白对照[等容羧甲基纤维素钠(CMC-Na)]组、六神丸(1.613 mg/kg)组、地塞米松(50 mg/kg)组,连续6 d ig给药后测定大鼠肝微粒1-羟基咪达唑仑生成速率以判定CYP3A1、CYP3A2活性;采用RT-PCR法测定CYP3A m RNA的表达。结果:3、1、0.5μg/ml六神丸培养细胞48 h后,与阴性对照比较,Hep G2细胞中CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4 m RNA表达增强,CYP3A4蛋白表达增强,CYP3A4活性增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,大鼠肝微粒体CYP3A1、CYP3A2活性增强,CYP3A1、CYP3A2 m RNA表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:六神丸对CYP具有一定的诱导作用,其机制可能与增强CYP m RNA的表达作用有关。     

咪达唑仑口服溶液比右美托咪定喷鼻更有效缓解儿童术前焦虑

目的：比较咪达唑仑口服溶液与右美托咪定喷鼻对儿童术前焦虑的影响。方法：选取2022年6～12月在我院拟行择期手术患儿90例，采用随机数字表法分为咪达唑仑口服溶液组、右美托咪定喷鼻组和生理盐水滴鼻组，麻醉前30 min，咪达唑仑口服溶液组0.5 mg/kg咪达唑仑口服溶液口服，右美托咪定喷鼻组2μg/kg右美托咪定喷鼻，生理盐水滴鼻组2 m L生理盐水滴鼻。记录3组患儿药物接受度。记录3组患儿给药前(T₁)、与父母分开时(T₂)、麻醉诱导时(T₃)、术后24 h(T₄)改良耶鲁术前焦虑量表(modified Yale preoperative anxiety scale-short form,m-YPAS-SF)评分。记录3组患儿麻醉诱导时的麻醉诱导期合作度量表(induction compliance checklist,ICC)评分。记录3组患儿苏醒时间和PACU停留时间。结果：与右美托咪定喷鼻组和生理盐水滴鼻组比较，咪达唑仑口服溶液组药物接受度评分较低(P<0.05),T₂     

咪达唑仑对大鼠颈上交感神经节细胞乙酰胆碱受体通道的影响

目的:研究咪达唑仑(Midazolam)对SD大鼠颈上交感神经节细胞乙酰胆碱受体(AChR)通道的影响,以探讨其循环抑制机制。方法:酶消化法急性分离SD大鼠(7~10 d)颈上交感神经节细胞,全细胞膜片钳技术记录咪达唑仑对AChR通道电流的影响。结果:在钳制电压(Vh)-60 mV条件下,氯化乙酰胆碱可激发一快速激活且快速衰减的内向电流即AChR通道电流,其半数有效剂量(EC50)为39.65μmol/L;临床相关浓度的咪达唑仑(0.3μmol/L)使200μmol/L氯化乙酰胆碱激发的AChR通道电流峰值降低23.41%(P<0.05,n=6),而通道的脱敏感衰减速率却由45.59%±14.21%增加至57.93%±13.74%(P<0.01,n=6)。随浓度增加,咪达唑仑抑制AChR通道电流和加速AChR通道脱敏感的作用也逐渐增强。咪达唑仑抑制AChR通道电流,但并不改变AChR通道的反转电位,且在膜电位-20 mV至-70 mV之间,其抑制作用为电压非依赖性。结论:临床相关浓度的咪达唑仑对交感神经节全细胞AChR通道电流有明显的抑制作用,呈浓度依赖性和电压非依赖性;其抑制作用主要与加快AChR通道的脱敏感衰减速率有关。     

咪达唑仑和地佐辛分别联合瑞芬太尼在肝癌射频消融术中的应用

目的 探究咪达唑仑和地佐辛分别联合瑞芬太尼在肝癌射频消融术(radio frequency ablation, RFA)中的应用效果。方法 选择2020年12月—2022年12月于河南省人民医院接受RFA治疗的肝癌患者60例,随机分组为咪达唑仑组和地佐辛组,每组30例。咪达唑仑组予0.05～0.10 mg/kg咪达唑仑静注,地佐辛组予0.8 mg/kg地佐辛静注,两组用药后5 min均予瑞芬太尼0.2μg/kg静注,RFA开始时泵注0.05μg/(kg·min)瑞芬太尼至术毕。监测并比较两组在麻醉诱导前至苏醒即刻内5个时刻的心率、平均动脉压、血氧饱和度变化情况;评估并比较两组苏醒即刻和1、2、3 h的疼痛情况[视觉模拟评分法(VAS)];检测并比较两组RFA术前及术后1天的白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)血清浓度水平;统计并比较两组麻醉相关不良反应。结果 两组患者麻醉诱导前至苏醒即刻内5个时刻的心率、平均动脉压、血氧饱和度水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);地佐辛组术后1、2、3 h的VAS评分均低于咪达唑仑组,差异有统计学意义(P<0.05)...     

脉搏波记录在镇静催眠药临床试验中应用的可行性研究

目的探索脉搏波记录在镇静催眠药临床试验药效学和安全性评价中应用的可行性。方法研究对象为首都医科大学附属北京友谊医院研究型病房于2022年4月11日至6月11日公开招募的男性健康受试者。基于药代动力学参数分析装置, 计算单用药和联合用药后咪达唑仑的药代动力学参数。记录试验期间不良事件发生情况。健康受试者在未用药、单用咪达唑仑、咪达唑仑联用伊曲康唑3种状态下, 分别佩戴脉搏波记录手表24 h, 记录受试者心率和体动数据, 对睡眠时间、睡眠深度和多梦易醒等药效学评价指标和精神状态、昼夜节律和生命活力等安全性评价指标进行比较。结果共纳入男性健康受试者12名, 年龄(34±6)岁。单用咪达唑仑时受试者中位Tmax为0.5 h, Cmax为(19.10±5.35)μg/L, AUC0-t为(45.41±13.88)min·μg/L, AUC0-∞为(46.99±14.74)min·μg/L。联用伊曲康唑后, 咪达唑仑的中位Tmax仍为0.5 h;Cmax为(61.05±19.0)μg/L, AUC0-t为(394.36±60.26)min·μg/L, AUC0-∞为(553.10±178.87)m...     

咪达唑仑对人肺脏液体清除的作用机制研究

目的探讨咪达唑仑对人肺上皮细胞短路电流的影响,并探讨可能的机制。方法应用尤斯灌流室装置测定H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利可抑制的电流算得阿米洛利敏感性电流,以用药前H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100%对照。用100μmol/L咪达唑仑处理H441细胞,在0,15,30,60min 4个时间点提取蛋白用于蛋白印迹法,研究咪达唑仑对细胞外调节蛋白酶(ERK)1/2蛋白磷酸化的影响。结果咪达唑仑能够剂量依赖性抑制H441单层细胞的短路电流,此电流可被阿米洛利抑制;蛋白印迹法结果显示咪达唑仑能够促进ERK1/2蛋白磷酸化。结论咪达唑仑通过抑制人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而降低肺泡上皮离子转运,其机制可能与其促进ERK1/2蛋白磷酸化有关。临床上对伴有肺水肿的患者应用咪达唑仑时应考虑其可能对肺泡上皮液体清除的影响。     

单点采血反映口服CYP3A探针咪达唑仑的代谢清除率

目的:研究中国男性健康受试者口服咪达唑仑后其1＇-羟化代谢的药代动力学规律,并寻找适合的单个采血点血浆中1＇-羟化咪达唑仑/咪达唑仑的浓度比值来反映咪达唑仑的血浆清除率。方法:10名受试者禁食8小时后清晨空腹口服7.5mg咪达唑仑,利用非房室模型计算药代动力学参数。结果:咪达唑仑药代动力学参数C_(max)为(191±17)nmol/L,t_(max)为(1.01±0.14)h,t_(1/2)为(3.2±0.4)h,AUC_(0→∞)为(681±43)nmol·h·L~(-1),Cl_(oral)为(0.54±0.04)L/(h·kg),K_e为(0.2415±0.0021)h~(-1),K_α为(0.82±0.18)h~(-1)。1小时血浆中咪达唑仑与其代谢产物1＇-羟化咪达唑仑的比值与其清除率的相关性统计学上具有显著意义(r=0.7,P<0.05,n=10)。结论:可用口服咪达唑仑后1小时单个采血点的代谢产物1＇-羟化咪达唑仑与咪达唑仑浓度的比值来反映其血浆清除率,应用于CYP3A活性测定的人群试验。     

LC-MS/MS法同时测定人血浆中咪达唑仑和 1-羟基咪达唑仑的浓度

目的:建立同时测定人血浆样本中咪达唑仑和1-羟基咪达唑仑浓度的LC-MS/MS方法.方法:以d4-咪达唑仑为内标,血浆样本加入含内标的乙腈处理后进样分析.色谱柱为Kinetex C18(2.1mm×50 mm,2.6μm),流动相为乙腈-1 mmol· L-1甲酸铵溶液(含0.1％甲酸),梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,进样量为3.0 μL.质谱条件采用电喷雾正离子源,扫描方式为多重反应监测,用于定量分析的检测离子分别为m/z 325.9→291.0(咪达唑仑)、m/z 342.0→324.1(1-羟基咪达唑仑)、m/z 329.9→295.0(d4-咪达唑仑).结果:咪达唑仑和1-羟基咪达唑仑分别在0.300～200 ng· mL-1和0.150～100 ng·mL-1线性关系良好,定量下限分别为0.300 ng· mL-1和0.150ng·mL-1,批内和批间精密度均小于15％,准确度在-4.7％～9.9％,基质效应为95.5％～101.4％,提取回收率为100.6％～102.4％.血浆样本室温放置12h、3次冻融循环及-40℃冰冻12个月稳定性良好,待测溶液进样器放置24h稳定.结论:本研究建立的分析方法灵敏、准确,样本前处理简便、快捷,可用于人血浆样本中咪达唑仑和1-羟基咪达唑仑浓度的测定.     

咪达唑仑对大鼠单一心室肌细胞ATP敏感性钾电流的作用

目的研究咪达唑仑对大鼠单一心室肌细胞ATP敏感性钾电流(IKATP)的作用。方法急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,利用膜片钳制技术全细胞记录法,设保持电位为-40mV,指令电位为-100～+40mV,步阶脉冲20mV,波宽200ms,刺激间隔6s的方波钳制方案进行刺激。结果咪达唑仑能够开放心室肌细胞ATP敏感性钾(KATP)通道,在一定范围内具有剂量依赖性关系。指令电位在-60mV时,咪达唑仑(0.3～10μmol/L)可使KATP通道开放率分别增加至给药前的(119±5)%,(121±4)%和(121±6)%(P<0.01,n=9)。更高浓度(50～100μmol/L)咪达唑仑使KATP通道开放率略有下降,其他指令电位下的IKATP改变也符合此趋势。结论咪达唑仑对大鼠单一心室肌细胞KATP通道具有开放作用,这可能是其发挥心脏保护的机制之一。     

油酰乙醇胺对脂多糖诱导的THP-1细胞炎症因子表达的影响

目的探讨油酰乙醇胺(OEA)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人急性白血病单核细胞(THP-1)中前炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响,并初步探讨OEA作为过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激动剂参与对炎症调节的作用机制。方法体外培养的THP-1细胞,分别加入不同浓度的OEA(10,20,40μmol/L)或非诺贝特(100μmol/L)共同孵育1 h后,用1μg/mL LPS分别诱导6或24 h。采用RT-PCR、实时定量PCR和酶联免疫吸附检测测定细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达的变化,并使用实时定量PCR及Western blot方法检测PPAR-α及Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白的表达。结果相对于正常THP-1细胞,LPS诱导后细胞中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达明显增加。OEA对TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达有抑制作用,并呈现出一定的剂量依赖性。且OEA在激活PPAR-α表达的同时能够抑制TLR4的表达。结论 OEA对LPS诱导的炎症反应有抑制作用,其机制可能与激活PPAR-α,下调TLR4的表达有关。     

咪达唑仑临床药动学参数的研究

目的:研究咪达唑仑的临床药动学参数。方法:选择14例咪达唑仑复合瑞芬太尼、异氟醚全身麻醉手术患者,以恒速20μg·kg-1.min-1静脉泵注咪达唑仑20min,于给药前,给药后1、3、5、7、10、15、20min,停药后5、15、30、45min及1、2、4、6、12、18、24h分别抽取桡动脉血3mL,应用高效液相色谱法检测血浆中咪达唑仑的浓度,DAS2.1.1软件计算药动学参数。结果:咪达唑仑给药后药-时曲线可用开放性三房室模型描述,其中权重系数为1,t1/2α=9.5842min,t1/2β=85.3677min,t1/2γ=339.7365min,中央室分布容积(V1)=0.1821L.kg-1,CL=119.4344mL.h-1.kg-1,K10=0.0458min-1,K12=0.0863min-1,K21=0.0175min-1,K13=0.0133min-1,K31=0.0024min-1。结论:t1/2α、t1/2β、t1/2γ、CL与国外文献报道一致,但V1偏小,用药易于达到平衡,而清除速率较快,可能更符合中国人的药动学特征。     

微透析与LC-MS~n联用测定脑组织中咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑及其脑内药代特征的研究

目的建立灵敏、快速、准确的LC-MSn方法测定咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑及其在大鼠脑内的药代动力学过程。方法 SD大鼠股静脉注射CYP3A探针药物咪达唑仑(剂量5 mg·kg-1)。采用微透析技术,在2μl·min-1流速下收集脑微透析液样品2.4 h,收集时间间隔为8 min。以LC-MSn法在线检测微透析样品。选用Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相为2 mmol·L-1乙酸铵水溶液和乙腈,梯度方式洗脱。采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测模式(MRM),咪达唑仑m/z:326.1/291.1;1'-羟基咪达唑仑m/z:342.1/324.1;内标地西泮m/z:285.1/154.0。结果咪达唑仑和1'-羟基咪达唑仑的线性范围分别为0.78¹00和0.195100和0.195¹2.5μg·L-1,最低定量下限0.2μg·L-1,批内、批间RSD均<7%,RE值在-1.3412.5μg·L-1,最低定量下限0.2μg·L-1,批内、批间RSD均<7%,RE值在-1.34^-8%范围内。结论此检测方法快速、灵敏,可用于脑微透析液中咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑的含量测定,结合微透析技术有助于深入进行脑代谢的相关研究。