蒺藜皂苷对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的:观察蒺藜皂苷对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡和炎症因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:(1)软骨细胞培养和转染。采用DMEM培养液培养小鼠软骨细胞(ATDC5细胞),培养后采用转染试剂分别转染pcDNA-circ＿0045714、pcDNA、si-circ＿0045714、si-NC。(2)蒺藜皂苷浓度筛选。将ATDC5细胞接种于96孔板中,一组正常培养(正常组),一组加入10 ng·mL^-1的IL-1β(IL-1β组),其他组在加入10 ng·mL^-1 IL-1β的基础上分别加入浓度为25μg·mL^-1、50μg·mL^-1、100μg·mL^-1、200μg·mL^-1、400μg·mL^-1的蒺藜皂苷。培养后计算软骨细胞存活率,并确定后续实验蒺藜皂苷的浓度。(3)软骨细胞增殖抑制率检测。将ATDC5细胞分为对照组、IL-1β组、IL-1β+蒺藜皂苷低剂量组、IL-1β+蒺藜皂苷中...     

三七总皂苷对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用

目的:探讨三七总皂苷对脂多糖(LPS)刺激所致BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用及其机制。方法:MTT比色法检测不同浓度三七总皂苷对BV2小胶质细胞活性的影响;免疫荧光法检测IL-1β、NF-κB的定位及表达;PCR法检测IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA的表达;Western blot法检测IL-1β、TNF-α、COX-2蛋白表达。结果:三七总皂苷在6.25～50μg/mL对BV2小胶质细胞生长无明显影响。与LPS模型组比较,各浓度(6.25、12.5、25、50μg/mL)三七总皂苷均能不同程度抑制IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA和IL-1β、TNF-α、COX-2蛋白表达;50μg/mL三七总皂苷能有效抑制NF-κB的核转移及IL-1β在胞浆内的表达。结论:三七总皂苷对LPS刺激所致的BV2小胶质细胞炎症反应有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路激活有关。     

三七总皂苷对氧糖剥夺损伤的小鼠星形胶质细胞谷氨酸摄取的影响

目的：探讨三七总皂苷对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响。方法：体外培养ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞，分为正常组、模型组(OGD 6 h/R 24 h)和三七总皂苷组(OGD 6 h/R 24 h+20μg·mL^-1)。免疫细胞荧光染色鉴定GFAP标记星形胶质细胞；采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力，同时检测细胞外液LDH的释放；采用生化法检测细胞Na⁺-K⁺-ATPase活性、细胞谷氨酸摄取率；Western Blot法和RT-PCR法检测细胞GLT-1、GS mRNA表达及蛋白水平变化。结果：经特异性蛋白GFAP鉴定，细胞呈阳性表达。OGD/R损伤后，星形胶质细胞活力降低，LDH释放增多(P<0.01)。细胞对谷氨酸的摄取率明显降低(P<0.01),Na⁺-K⁺-ATPase活性降低，同时GLT-1和GS mRNA表达和蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。三七总皂苷干预后，细胞活力明显增强(P<0.05),LDH...     

失笑散降低氧糖剥夺再灌注BV2细胞损伤及NLRP3的表达

目的：研究失笑散对BV2细胞氧糖剥夺再灌注（OGD/R）模型的保护作用及潜在机制。方法：将BV2细胞分为对照组,模型（OGD/R）组及失笑散组。失笑散组用不同浓度（1、10、20、50、100 μg/mL）预处理BV2细胞2 h。对照组正常培养,不给药,不进行糖氧剥夺（OGD）;模型组不给药,与失笑散组同时进行OGD,缺氧结束后再灌注24 h,收集细胞及其上清液。CCK-8法检测BV2细胞的活力;流式细胞术检测BV2细胞的凋亡;实时定量PCR和ELISA分别检测BV2细胞TNF-α、IL-6和NLRP3及相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA和蛋白表达。结果：不同浓度失笑散并不影响BV2细胞活力。与对照组比较,模型组BV2细胞凋亡显著增多（P<0.01）,而高浓度失笑散明显减少BV2细胞凋亡（P<0.05）。实时定量PCR和ELISA结果表明,与模型组比较,失笑散观察组BV2细胞TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体及相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA和蛋白表达量明显减少（P<0.05)。结论：失笑散减轻OGD/R对BV2细胞的损伤及降低炎症介质的表达,机制可能与调控NLRP3炎性小体介导的炎症信号通路有关。     

基于BV2小胶质细胞极化探索片仔癀抗炎机制

目的:从小鼠小胶质瘤细胞(BV2)极化角度探索片仔癀(PTH)的抗炎作用机制。方法:将对数生长期的BV2细胞分为空白组,M1模型组[脂多糖(LPS)100μg·L~(-1)+干扰素-γ(IFN-γ)10μg·L~(-1)],M1片仔癀组[LPS 100μg·L~(-1)+IFN-γ10μg·L~(-1)+PTH 0.4 g·kg~(-1)],M2模型组[白细胞介素-4(IL-4)20μg·L~(-1)],M2片仔癀组[IL-4 20μg·L~(-1)+PTH0.4 g·kg~(-1)],给以相应处理。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),一氧化氮(NO),白细胞介素-10(IL-10),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的含量,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中一氧化氮诱导合酶(i NOS),精氨酸-1(Arg-1)mRNA的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中i NOS,p-STAT1,p-STAT3,Arg-1,p-STAT6蛋白表达情况。结果:与空白组比较,M1模型组上清TNF-α,NO含量显著升高(P0.01),细胞i NOS mRNA,i NOS,p-STAT1,p-STAT3蛋白水平显著升高(P0.01),而与M1模型组比较,M1片仔癀组上清TNF-α及NO的含量显著下调(P0.01),细胞i NOS mRNA显著下调(P0.01),i NOS,p-STAT1,p-STAT3蛋白水平也明显下调(P0.05,P0.01)。与空白组比较,M2模型组细胞培养上清中IL-10及TGF-β_1含量显著升高(P0.01),细胞Arg-1 mRNA,Arg-1,p-STAT6蛋白水平显著升高(P0.01)。与M2模型组比较,M2片仔癀组上清中IL-10及TGF-β_1含量明显上调(P0.05,P0.01),细胞Arg-1mRNA水平,Arg-1及p-STAT6蛋白水平明显上调(P0.05,P0.01)。结论:片仔癀可以通过调节BV2的极化发挥抗炎作用。     

芹菜素对氧糖剥夺损伤小胶质细胞的抗炎作用

目的探讨芹菜素对氧糖剥夺(OGD)损伤后复氧复糖(OGD/R)小胶质细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的影响。方法将原代培养的小胶质细胞随机分为正常组、二甲基亚砜(DMSO)组及芹菜素(10、25、50μmol/L)组,其中DMSO组和芹菜素组小胶质细胞进行OGD8h,之后加入相应药物培养基,观察24h后,收集细胞上清,用双抗夹心酶联免疫吸附法检测上清中IL-1β、TNF-α含量。结果24h后DMSO组细胞上清中IL-1β、TNF-α含量增多(P0.01)。芹菜素组TNF-α、IL-1β分泌量明显低于DMSO组。芹菜素可以抑制OGD后小胶质细胞的炎症反应,且呈剂量依赖性。结论芹菜素可以通过减少OGD/R小胶质细胞中IL-1β、TNF-α的产生而发挥神经保护作用。     

参附注射液对脂多糖诱导AC16 脓毒症心肌细胞模型的抗氧化及抗炎机制研究

目的 探讨参附注射液(SFI)对脂多糖(LPS)诱导的AC16脓毒症心肌细胞模型的作用及其相关氧化因子、炎症因子表达的影响。方法 以不同浓度SFI及N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理AC16细胞,采用CCK-8法分别检测2种药物对细胞存活率的影响,筛选合适的药物浓度;采用CCK-8法检测不同浓度LPS以及不同干预时间对AC16细胞存活率的影响,筛选LPS诱导脓毒症细胞模型条件。采用NAC(5 mmol·L^-1)及不同浓度的SFI(10、20、40μL·mL^-1)干预经LPS(25μg·mL^-1LPS)诱导36 h后的AC16细胞,采用CCK-8法测定细胞存活率;采用DCFH-DA探针检测AC16细胞活性氧(ROS)水平;采用RT-qPCR法及Western Blot法检测AC16细胞中氧化因子(NOX4)、炎症因子(NLRP3、IL-18、IL-1β)基因及蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组AC16细胞的存活率显著降低(P<0.01),ROS水平显著升高(P<0.01),细胞NOX4、NLRP3、IL-18、I...     

不同频率水沟穴提插对局灶性脑缺血再灌注大鼠的影响

目的探讨不同频率提插水沟穴对局灶性脑缺血再灌注大鼠的影响。方法选取健康成年Wistar大鼠78只,随机分为正常组、假手术组、模型组、低频组、中频组和高频组,每组13只,其中模型组、低频组、中频组和高频组建立局灶性脑缺血再灌注大鼠,低频组、中频组和高频组分别给予针刺干预,观察各组大鼠神经行为学,检测脑细胞凋亡指数、血清肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)以及大脑皮质Caspase-3、PCNA表达。结果模型组、低频组、中频组和高频组大鼠行为学评分、脑细胞凋亡指数、血清TNF-α、IL-1β和IL-10、大脑皮质Caspase-3、PCNA阳性细胞比例明显高于正常组和假手术组(P<0.05),其中高频组大鼠行为学评分、脑细胞凋亡指数、血清TNF-α、IL-1β和IL-10、大脑皮质Caspase-3、PCNA阳性细胞比例分别为(4.01±0.24)分、(8.56±1.14)%、(150.06±30.15)pg·mL^-1、(16.60±2.11)pg·mL^-1、(37.74±3.20)pg·mL^-1、(39.64±9.70)%和(12.26±1.90)%,明显低于低频组、中频组和模型组(P<0.05)。结论不同频率提插水沟穴有助于局灶性脑缺血再灌注大鼠恢复,其中针刺高频组效果较好,可能与降低大脑皮质细胞Caspase-3、PCNA表达有关。     

毛蕊异黄酮通过调控TREM-1表达对重症急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

目的:探讨毛蕊异黄酮(Calycosin)对重症急性胰腺炎(SAP)腺泡细胞损伤的影响及其分子机制。方法:将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组(AR42J细胞)、SAP组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖)、SAP+Calycosin-L组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+10μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+Calycosin-M组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+50μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+Calycosin-H组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮)、SAP+si-NC组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+转染si-NC)、SAP+si-TREM-1组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+转染si-TREM-1)、SAP+Calycosin+pcDNA组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮+转染pcDNA)及SAP+Calycosin+pcDNA-TREM-1组(AR42J细胞+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L脂多糖+100μmol/L毛蕊异黄酮+转染pcDNA-TREM-1)。酶联免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、髓样细胞表达触发受体-1(TREM-1)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TREM-1 mRNA表达。结果:与Con组比较,SAP组细胞凋亡率,IL-6、TNF-α水平,Bax、cleaved-caspase3、TREM-1蛋白及TREM-1 mRNA表达增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05)。与SAP组比较,SAP+Calycosin-L组、SAP+Calycosin-M组及SAP+Calycosin-H组SAP腺泡细胞IL-6、TNF-α水平,Bcl-2、TREM-1蛋白及TREM-1 mRNA表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加,均呈浓度依赖性(P<0.05)。与SAP+si-NC组比较,SAP+si-TREM-1组SAP腺泡细胞TREM-1、Bcl-2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05)。与SAP+Calycosin+pcDNA组比较,SAP+Calycosin+pcDNA-TREM-1组腺泡细胞TREM-1、Bcl-2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达减少(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮可通过调控TREM-1表达减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,保护SAP腺泡细胞免受损伤。     

胀果甘草多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究胀果甘草多糖GiP-B1对RAW 264.7巨噬细胞免疫功能的影响。方法:用浓度为25~400μg·mL~(-1)的GiP-B1与RAW 264.7巨噬细胞共同培养,MTT法检测其细胞增殖率,中性红试验检测其吞噬功能,ELISA法检测其分泌TNF-α、IL-1β的功能,Griess法检测其释放NO和iNOS的能力,RT-q PCR法检测其iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达。结果:给药24 h后,与空白对照组相比,200~400μg·mL~(-1)组的GiPB1可促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,差异极显著(P0.01);50~100μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著促进RAW 264.7巨噬细胞的吞噬作用(P0.05)。作用RAW 264.7巨噬细胞48 h后,100μg·mL~(-1)和400μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著提高巨噬细胞的IL-1β分泌量(P0.05),100~200μg·mL~(-1)组的GiP-B1则可显著提高巨噬细胞分泌TNF-α的能力(P0.05);不同浓度的GiP-B1干预RAW 264.7巨噬细胞后培养48 h,GiP-B1浓度增至100~400μg·mL~(-1)时,NO生成量显著高于阴性对照组(P0.05),且与GiP-B1浓度存在剂量效应关系;NOS生成量也高于阴性对照组,但仅200μg·mL~(-1)组有显著性差异(P0.05)。给药24 h后,100μg·mL~(-1)和400μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著增加iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量(P0.05)。结论:一定质量浓度的GiP-B1能增强RAW264.7巨噬细胞增殖率和吞噬能力,促TNF-α、IL-1β、NO及NOS释放,上调iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA水平,从而增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能。