不同单位保存的艾氏腹水癌细胞(EAC)的某些生物学特性比较研究

目的比较研究不同单位保种的EAC瘤株生物学特性的差异.方法选择研究了北京市肿瘤研究所、山东省医学科学院药物研究所及武汉大学保种中心保存EAC细胞的大小,细胞株体外培养时对血清的依赖性,接种小鼠皮下建立肿瘤动物模型肿块生长曲线,建立的动物模型对环磷酰胺CTX治疗的敏感性等指标.结果发现三个单位保存的EAC细胞形态及大小基本一致;北京EAC体外培养容易生长,7.5%NCS即可生长良好,山东及武汉EAC体外培养生长力较弱;皮下接种BALB/c小鼠后,北京EAC最易生长肿瘤,武汉EAC次之,山东EAC最差;建立的动物模型对CTX治疗的敏感性,依次为北京EAC,武汉EAC,山东EAC,用CTX治疗的抑瘤率相应为82.9%,71.9%,50%.结果可见三个不同单位保种的EAC瘤细胞生物学特性确已存在显著差异.     

小鼠神经细胞蛋白质的SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳及免疫印记鉴定方法的建立

目的建立一套组合的磷蛋白分析法检测小鼠神经细胞中参与信号转导的蛋白激酶和信号分子。方法培养新生乳小鼠神经细胞,提取蛋白质,并进行SDS-PAGE凝胶电泳,当电泳结束后利用半干式不连续转移缓冲系统将凝腔上的蛋白质转移到PVDF支持膜上,结合免疫印迹和曝光自显影,即得到了小鼠神经细胞中磷蛋白分子（MEK2）的免疫印迹图谱。结果通过上述方法成功地获得了小鼠神经细胞磷蛋白组中磷蛋白分子（MEK2）的免疫印迹图谱。结论利用此组合方法可以检测小鼠神经细胞中参与信号转导的蛋白激酶或信号分子。实验证明本法操作简单,无放射性污染,灵敏度高、特异性强,经济适用,行之有效。     

人蛔虫、猪蛔虫和犬弓蛔虫蛋白质聚丙烯酰胺凝胶板状电泳比较

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳对人肠道蛔虫、人胆道蛔虫、猪蛔虫和犬弓蛔虫的蛋白质进行了比较。结果表明:人肠道蛔虫、人胆道蛔虫和猪蛔虫蛋白质的电泳区带没有明显区别,而犬弓蛔虫与人肠道蛔虫、人胆道蛔虫和猪蛔虫蛋白质的电泳区带却有明显区别。     

胃癌及癌前病变MG7—Ag表达的免疫组织化学研究

应用抗胃癌单克隆抗体MG_7ABC法标记正常胃粘膜、胎儿食道、胃、结肠粘膜和胃癌及癌前病变组织标本.MG_7对胃癌的特异性高,MG_7-Ag在胃癌中的阳性表达率为86.7%,强阳性表达率为53.3%,显著高于肠上皮化生及中重度异型增生.MG_7不与正常胃粘膜反应,但可与胎儿食道、胃、结肠粘膜反应.结果表明,MG_7免疫组化有助于胃粘膜良恶性病变的鉴别和胃癌的早期诊断.     

心房黏液瘤的免疫组织化学研究

心房黏液瘤在心脏原发性肿瘤中最为常见 ,约占心脏肿瘤的 1/ 3[1] 。目前对心房黏液瘤的组织发生还不清楚。本研究应用免疫组织化学的方法 ,观察了心房黏液瘤中 6种抗原标记物的表达 ,对心房黏液瘤的组织来源作了初步探讨。1　材料与方法1.1　材料　　收集 1990年～ 2 0 0 2年中南大学湘雅二医院心脏外科手术切除的心房黏液瘤标本 2 5例 ,其中男性 11例 ,女性 14例 ,年龄为 5～ 5 7岁。1.2　方法　　标本经 10 %福尔马林固定 2 4h ,常规石蜡包埋 ,连续切片厚 4 μm ,HE染色。免疫组织化学采用SP法 ,鼠抗人单克隆抗体MMP 2 ,FⅧ ,S 10 0 ,     

临床病理工作中免疫组织化学的质量控制

临床病理对疾病诊断,疾病治疗和预后判断起着举足轻重的作用,是疾病诊断的金标准。病理诊断伊始是通过显微镜观察病灶中组织和细胞的结构、形态的变化来实现,随着学科的发展,免疫组织化学染色成为了病理诊断中的重要辅助手段,至今已是病理诊断中的一项常规病理技术,尤其体现在肿瘤的诊断中。做好免疫组织化学染色的质量控制才能够保证准确的病理诊断结果。然而,影响免疫组织化学染色的因素众多,因此,本研究从免疫组织化学检测的前、中、后质量控制进行梳理总结。     

32例胃肠道间质瘤临床病理及免疫组织化学研究

目的：研究胃肠道间质瘤（GIST）的组织病理形态学和免疫组织化学的表达。方法：用CD117、CD34、SMA、Desmin、S-100、NSE蛋白抗体通过免疫组织化学采用SP法对GIST进行研究。结果：本组GIST发病年龄在25～76岁（平均55岁）,男性15例,女性17例,主要发生在胃并常常以上消化道出血为首发症状,大多数病例在手术切除后标本福尔马林固定石蜡包埋HE染色后确诊。肿瘤大小从2．5～18cm（平均为7．8cIn）。镜下GIST的细胞形态组织学表现多种多样,但其主要有两种最基本的细胞类型：梭形细胞和上皮样细胞。梭形细胞胞浆红染,核长梭形,核仁不明显,常呈栅栏或编织状排列;上皮样细胞体积较大,形态不一,胞浆较透亮,核周有空晕,核仁明显,常呈巢状排列;间质可见粘液样变、出血、炎性细胞浸润等。免疫组化染色CD117和CDM多为弥漫强阳性,阳性率分别为84．4％和68．7％,Desmin4例表达,SMAIO例表达,S-100和NSE不表达或呈灶状阳性。结论：GIST好发生在中老年,肿瘤细胞呈梭形或上皮样,排列方式可有编织状、栅栏状、弥漫片状、巢状等。免疫组织化学染色为CD117和CDM阳性、Desmin少数局灶阳性、SMA部分阳性、S-100和NSE不表达或呈灶状阳性,肿瘤细胞直径大于或等于5cm,核分裂像大于5／50HPF、有出血、坏死或侵润性生长等可作为恶性参考指标。     

生殖系统腺瘤样瘤的免疫组织化学与超微结构研究

对4例生殖系统的腺瘤样瘤进行了组织学、组织化学、免疫组织化学及超微结构的观察。结果发现肿瘤分泌酸性粘多糖;免疫组织化学发现Keratin与Vimentin共存在肿瘤细胞内;超微结构可见到细胞具有细而长的微绒毛结构。这些特点与间皮起源的肿瘤十分相似。作者认为腺瘤样瘤是发生在生殖系统的良性间皮瘤。     

11例腺瘤样瘤的免疫组织化学及超微结构研究

报告11例腺瘤样瘤,男9例,女2例.平均年龄51岁.除1例位于膀胱外,其余均在男、女生殖系统.检测瘤细胞内角蛋白,11例均呈弥漫阳性反应,Ⅷ因子均为阴性.电镜观察见瘤细胞腔面有刷状长的微绒毛,并见桥粒及张力微丝.以上观察结果有力地支持腺瘤样瘤来自间皮     

桥粒蛋白生化免疫特性研究

桥粒在含高浓度脲(0.5mol/L)的变性剂中(100℃)作用30分钟即能完全溶解.经SDS-PAGE分离获得7条高分子量(>67kd)蛋白带和一些小分子量角蛋白。这7条高分子量蛋白带是桥粒的特异组成蛋白,即桥粒蛋白Ⅰ和Ⅱ(Desmoplakin Ⅰ和Ⅱ),多肽3、4a、4b、5、6,它们的分子量分别为250kd和215kd、165kd、130kd、115kd、83kd及75kd.用制备电泳法1次可提取Desmoplakin Ⅰ 2～2.5mg,纯度达93.1％.等电聚焦电泳测定其等电点为6.8～7.2。氨基酸组成分析甘氨酸含量很高,免疫印迹表明能被Desmoplakin Ⅰ McAb识别.     

五株钩体外膜蛋白和脂多糖的SDS-PAGE、2D-PAGE图谱的比较研究

作者采用SDS-PAGE、2D-PAGE结合银染色法及免疫印迹技术对五株不同致病力钩体外膜蛋白和脂多糖作比较研兜。SDS-PAGE分析发现三株致病钩体外胰蛋白电泳图谱非常相似,与两株非致病性钩体电泳图谱无相关关系。强毒力017株外膜21.5kd区带的蛋白含量明显高于两株弱毒力钩体。2D-PAGE图谱差异更大,主要表现为pI的分布不同。用抗017株的McAb(LB_1)对五株外膜进行免疫印迹分析。该McAb主要识别三株致病性钩体共有的41kd抗原。三株致病性钩体外膜脂多糖电泳图谱与两株非致病钧体外膜脂多糖电泳图谱迥然不同。     

两个地理株周期型马来丝虫成虫蛋白和同工酶电泳比较分析

本文应用圆盘电泳对我国湖北谷城和浙江安吉两个地理株的周期型马来丝虫成虫的蛋白和七种酶进行了区带分析和比较,结果显示两个株的蛋白、GPI、PGM 和 PO 同工酶电泳型没有差异;而 MDH 的同工酶电泳型则不相同,出现了两种类型;G_6PD、EST 和 LDH 则没有区带出现。     

髓母细胞瘤中间丝蛋白及神经内分泌标志物表达的研究

采用免疫组化ＡＢＣ法对８２例髓母细胞瘤（ＭＢ）进行中间丝蛋白（ＧＦＡＰ、ＮＦ、Ｖｉｍ）和神经内分泌标志物（ＳＹＮ、ＣｇＡ）检测。结果显示ＭＢ８２例中，ＧＦＡＰ阳性７４例（９０．２４％）、ＮＦ阳性１７例（２０．７３％）、Ｖｉｍ阳性３３例（４０．２４％）、ＳＹＮ阳性６２例（７５．６１％）、ＣｇＡ阳性２２例（２６．８３％）。有８例肿瘤５种标志物均有表达，其余也有２种或２种以上标志物表达。标志物表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化及预后等因素之间无关（Ｐ皆＞０．０５）。提示髓母细胞瘤是具有不同中间丝蛋白及神经内分泌标志物表达的异质性肿瘤。这种表达可能是幼稚的原始神经外胚层组织胚胎发育过程中标志物表达的重演。     

妊娠滋养细胞肿瘤中PCNA表达的研究

目的：研究妊娠滋养细胞肿瘤(GTT)中PCNA的表达意义。方法：采用免疫组化S—P法检测了10例正常早期绒毛(NP)、10例完全性葡萄胎(CM)、20例侵袭性葡萄胎(IM)、19例绒癌(CCA)中PC—NA的表达。结果：PCNA在NP、CM、IM和CCA中表达率分别为10．40％、20．76％、53．60％、51．95％，各组间差异有统计学意义。结论：恶性GTT、中细胞增殖活性增高，PCNA的检测有助于良恶性GTT的鉴别。     

P16蛋白在胃癌组织中的阳性表达及其临床意义

目的 了解P16蛋白在胃癌组织中的阳性表达情况及其与胃癌病理特征、预后的关系.方法 应用免疫组织化学链霉菌素-生物素法(S-P法),对72例胃癌组织行P16蛋白检测,并与胃黏膜正常的20例检测结果对照.结果 P16蛋白在胃癌组织中的阳性表达率明显低于其在正常胃粘膜组织中的表达率;在低分化、未分化胃癌组织中的阳性表达率明显低于高、中分化胃癌组织(P＜0.01);在有淋巴结转移的胃癌中,P16蛋白阳性表达率为31.91%(15/47),而无淋巴结转移组P16蛋白阳性表达率为60.0%(15/25),两组间有显著性差异(P＜0.05);P16蛋白阳性表达与浸润深度无明显关系.结论 P16蛋白表达缺失与胃癌的发生、分化程度及淋巴结转移有密切关系.检测胃癌组织中P16蛋白表达状况可作为临床判断胃癌病理特征、转移潜能及其患者预后的一项重要分子指标.     

不同性别周期型马来丝虫成虫的同工酶电泳比较分析

应用圆盘电泳对我国同一流行区的周期型马来丝虫雄、雌成虫的MDH、GPI、PGM 和 PO 四种酶进行了区带分析和比较。结果显示它们的GPI、PGM 和 PO 同工酶电泳型完全相同;但它们的 MDH 同工酶电泳型不同,即雄虫比雌虫多一条同工酶带。     

不同种属转移因子的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

不同批号人转移因子(TF-h)和猪转移因子;(TF-p)在聚丙烯酰胺凝胶电泳上均出现一条深色带,其电泳位置较为接近。此外,还可看到电泳位置基本相同的二条浅染色带,提示二种TF主要组成分子所带电荷及分子量都比较接近,这些不同分子带与转移因子生物活性的关系,有待进一步研究确定。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳分析615纯系小鼠血清蛋白

目的：根据各种蛋白质在一定的泳动条件下,都有一定的相对迁移率不同的特点,分析６１５ 纯系小鼠血清中的蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶上的分布,进行了定位分析。方法：采用高ｐＨ 不连续性聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质特殊染色法。结果：６１５ 鼠血清蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶上可分离出１３ ～１５ 条区带,脂蛋白３ 条、白蛋白２ 条、糖蛋白５ 条、铜蓝蛋白１ 条、血红蛋白１ 条、结合珠蛋白３ 条。根据每种蛋白质的Ｒｍ 值定位顺序从阳极到阴极依次为１ ．糖蛋白、２．脂蛋白、３ ．白蛋白、４．脂蛋白、５ ．糖蛋白、６ ．巨球蛋白（ 根据其它资料） 、７ ．铜蓝蛋白、８ ．结合珠蛋白、９ ．Ｈｂ、１０ ．运铁蛋白（ 根据其它资料）、１１ ．脂蛋白、１２ ～１４ ．均为糖蛋白。光密度扫描６１５ 鼠血清蛋白质相对面积比分别为白蛋白为４８－４、α１ 球蛋白为６－９、α２ 球蛋白２３－８ 、β球蛋白为５－０ 、γ球蛋白为１３－８ 。结论：６１５ 鼠血清蛋白质的定位分析对于６１５ 鼠可移植性淋巴细胞型白血病鼠的蛋白质研究具有一定的实际意义,利用Ｒｍ 值来作蛋白质定位分析简单易行,关键在于掌握实验条件的恒定。     

大鼠生后不同发育阶段海马CA3区PCNA和bFGF表达的研究

目的:通过观察大鼠生后不同发育阶段海马CA3区PCNA和bFGF 的表达,探讨海马的发育规律.方法:取生后第1天、第2天、第3天、第5天、第10天、第20天、第30天大鼠脑,免疫组化染色,观察PCNA、bFGF 在海马CA3区的表达情况.结果:大鼠海马CA3区细胞增殖以生后第2天最为明显,其中多形层细胞增殖数量最多,其次是分子层,锥体层细胞增殖最少;第10天以后增殖逐渐减少,第30天时增殖基本停止.bFGF 在生后第1～2天时未见表达,第3天开始出现表达,其中以锥体层、多形层细胞阳性表达最多,第20天时表达基本稳定.结论:在大鼠生后海马发育过程中,bFGF的表达对PCNA的表达有促进作用.     

大鼠出生后不同发育阶段大脑海马CA3区PCNA和NGF表达的研究

目的:通过对大鼠出生后海马CA3区PCNA和NGF表达的研究,以期寻找出大脑海马的发育规律.方法:取生后第1天、第2天、第3天、第5天、第10天、第20天、第30天大鼠脑,10%福尔马林固定,免疫组化染色,观察PCNA、NGF在大脑海马CA3区表达的变化情况.结果:大鼠出生后海马CA3区细胞增殖以第5天最为明显,其中多形层细胞增殖数量最多,其次是分子层,锥体层细胞增殖最少,第10天以后逐渐减少,第30天时基本不再有增殖.NGF在第1～5天时未见表达,第10天开始出现表达,其中以锥体层阳性表达最多,第20天时基本稳定.结论:NGF的表达对神经细胞的生存有支持作用.