环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)通过调控miR⁃181d⁃5p/miR⁃199a⁃5p促进口腔鳞状细胞癌进展

目的：探讨环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞生物学功能中的作用及机制。方法：收集 30 例 OSCC 患者的临床组织,采用实时定量 PCR 检测 circ- FAT1、miR-181d-5p及miR-199a-5p在OSCC组织和细胞中的表达。通过StarBase和双荧光素酶报告基因实验验证 miR-181d- 5p/miR-199a-5p与circFAT1的靶向关系。利用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测 circFAT1-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴对于 OSCC细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和周期的影响。采用免疫印迹法结合LY294002处理检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：在OSCC中circFAT1表达升高,miR-181d-5p、miR-199a-5p表达下降(P ＜ 0.001)。circFAT1可以同时靶向miR- 181d-5p和miR-199a-5p(P ＜ 0.01)。沉默circFAT1、过表达miR-181d及miR-199a-5p抑制了OSCC细胞活力、迁移、侵袭和周期进展、诱导凋亡,同时抑制PI3K/Akt/mTOR 通路的激活;过表达circFAT1、抑制miR-181d-5p及miR-199a-5p则发挥相反作用 (P ＜ 0.05)。miR-181d-5p、miR-199a-5p可部分逆转circFAT1对OSCC细胞生物学功能的影响(P＜0.05)。LY294002预处理逆转了过表达circFAT1对PI3K/Akt/mTOR通路和细胞活力的影响(P ＜ 0.05)。结论：circFAT1通过调控miR-181d-5p和miR-199a-5p 促进OSCC细胞恶性进展。     

肺结核患者外周血miR-23a-3p的表达及其对患者诊断及预后评估的价值分析

目的:探究miR-23a-3p在肺结核(PTB)患者中的表达及其对PTB患者的诊断和预后的价值。方法:将2020年6月至2021年6月本院传染病科收治的98例PTB患者设为PTB组,同期另选取92例健康志愿者作为健康组。采用qRT-PCR法检测受试者外周血miR-23a-3p、核转录因子SP1(SP1)和干扰素调节因子1(IRF1)的表达;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-23a-3p对PTB的诊断价值和预后价值;采用Pearson相关系数分析PTB患者外周血miR-23a-3p与SP1、IPF1之间的相关性;对PTB患者完成6个月随访,采用Kaplan-Meier法分析miR-23a-3p与PTB患者预后关系;Cox回归分析影响PTB患者预后的危险因素。结果:与健康组相比,PTB组患者miR-23a-3p水平显著降低,SP1和IPF1表达显著升高(P<0.05);ROC曲线显示,外周血miR-23a-3p诊断PTB的曲线下面积(AUC)为0.861(95%CI:0.809～0.913),灵敏度和特异度分别为85.70%和70.70%;Pearson相关系数分析显示,P...     

MicroRNA⁃21/PARP⁃1作为生物标志物在AR和CARAS中的诊断价值分析

目的：评估外周血microRNA（miR）-21、血浆聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly（ADP-ribose）polymerase-1,PARP-1] 在过敏性鼻炎（allergic rhinitis,AR）和过敏性鼻炎-哮喘综合征（combined allergic rhinitis and asthma syndrome,CARAS）中的诊断价值。方法：收集44例CARAS患者、31例AR患者和42例健康对照的外周血,采用RT-qPCR法检测外周血中miR-21的表达水平,采用ELISA法检测血浆中PARP-1蛋白水平。应用Pearson进行相关性分析。受试者工作特征（receiver operating characteris- tic,ROC）曲线判断miR-21和PARP-1的诊断灵敏度与特异度。结果：CARAS 组患者外周血miR-21的表达较健康对照组升高。AR组患者血浆 PARP-1的水平较CARAS组和健康对照组升高。Pearson相关性分析结果显示,外周血miR-21的表达水平在AR患者中与嗜酸性粒细胞计数相关,在CARAS患者中与鼻呼出气一氧化氮（fractional nasal nitric oxide,FnNO）水平相关;血浆 PARP-1在AR患者中与1秒钟用力呼气量占预计值百分比（forced expiratory volume in one second percent predicted,FEV₁%_pred）相关,在CARAS患者中与FEV₁%_pred及1秒钟用力呼气量（forced expiratory volume in one second,FEV₁）/用力肺活量（forced vital capacity,FVC）（FEV₁/FVC）相关。ROC曲线分析显示,外周血miR-21 作为 CARAS 的诊断标志物时,灵敏度为 51.35%,特异度为 80.95%。血浆 PARP-1 作为 AR 的诊断标志物时,灵敏度为 90.32%,特异度为 54.76%。血浆PARP-1作为AR进展为 CARAS的诊断标志物时,灵敏度为 45.45%,特异度为 90.32%。结论：AR和CARAS患者外周血miR-21、PARP-1存在差异表达,外周血miR-21可作为CARAS的诊断标志物,PARP-1可作为AR的诊断标志物及AR进展为CARAS的生物标志物。这对寻求AR和CARAS的诊治靶点有十分重要的价值。     

miR-199a在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变中的表达及意义

目的探讨miR-199a在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变(CIN)中的表达情况及与宫颈癌各种临床病理特征的关系。方法采用茎环Realtime RT-PCR方法检测48例宫颈癌、12例CIN及正常宫颈组织中miR-199a-3p和miR-199a-5p的表达,分析miR-199a-3p和miR-199a-5p表达与宫颈癌常见的临床病理特征的关系。结果用茎环Realtime RT-PCR方法检测miR-199a-3p和miR-199a-5p表达的敏感性和特异性良好;miR-199a-3p和miR-199a-5p在宫颈癌及CIN组织中的表达低于非肿瘤组织,差异性显著(P<0.05),miR-199a-5p/miR-199a-3p表达比值未见明显差异(P=0.219)。其中miR-199a-5p的表达与宫颈癌的组织分化程度存在一定相关性。小细胞型(Ⅲ级)宫颈癌的miR-199a-5p表达低于其他组织分化类型的标本(P=0.054))。miR-199a-3p和miR-199a-5p的表达与年龄、肿块大小、大体类型、病理类型及FIGO分期未见显著相关性(P>0.05)。结论 miR-199a-3p和miR-199a-5p在宫颈癌及CIN组织中的表达显著低于正常宫颈组织。miR-199a-5p的表达与肿瘤的分化程度存在一定相关性。miR-199a在宫颈癌组织中的异常表达,可能在宫颈癌的发生和发展过程中发挥重要作用,有望成为宫颈癌新的治疗靶点。     

血清microRNA-33a-5p在结直肠癌患者中的表达及生存预后的关系研究

目的 检测结直肠癌(CRC)患者血清中microRNA-33a-5p(miR-33a-5p)的相对表达水平,探讨其辅助诊断价值及与生存预后的关系。方法 收集CRC 134例、结直肠息肉69例及同期匹配的健康对照69例血清标本,检测所有标本miR-33a-5p的相对含量及CRC患者术后miR-33a-5p的相对含量。分析CRC血清miR-33a-5p的相对表达水平在不同年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置和临床TNM分期的差异以及与CEA及CA199的相关性。利用二元Logistic回归和ROC曲线评估各项指标的诊断效能,评价其对CRC的辅助诊断价值。Kaplan-Meier及Cox回归分析其在预后中的临床价值。结果 CRC组miR-33a-5p的相对含量低于结直肠息肉组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001);CRC组患者手术前后相比较,差异有统计学意义(P<0.001)。CRC组患者miR-33a-5p的相对含量在肿瘤大小及临床TNM分期,差异有统计学意义(P<0.001)。CRC患者血清中miR-33a-5p的相对含量与CEA及CA199之间无相关性(P>0.05)。CRC组与健康对照组比较,曲线下面积(AUC)为0.805,三者联合AUC达0.831,敏感度达97.8%。miR-33a-5p低表达组的总生存时间明显低于miR-33a-5p高表达组(P<0.05)。单因素分析临床TNM分期及miR-33a-5p表达水平与患者预后相关(P<0.05),Cox回归多因素分析发现临床TNM分期和miR-33a-5p低表达是患者预后的独立危险因素。结论 miR-33a-5p在CRC患者血清中低表达,与临床TNM分期有关,其表达水平与CRC的进展与预后有关;miR-33a-5p联合CEA和CA199可提高诊断敏感度,其有望成为筛查CRC的生物学指标。     

基于miR-15a-5p/P53信号通路探讨EMT与肺癌细胞阿霉素耐药的关系

目的 探讨miR-15a-5p在肺癌细胞对阿霉素(DOX)耐药中的作用,并阐明其与DOX耐药之间的功能和机制联系。方法 分别采用si-miR-15a-5p、miR-15a-5p模拟物转染A549、A549/DOX抗性细胞(A549/D)。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blots检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白及P53蛋白表达,qRT-PCR检测miR-15a-5p表达。通过生物信息学预测与双荧光素酶报告子分析miR-15a-5p潜在靶基因。采用A549/D细胞构建裸鼠移植瘤模型,分析miR-15a-5p过表达促进DOX的体内抗肿瘤作用。结果 MTT分析结果显示,miR-15a-5p的敲低提高了A549细胞的细胞活力(IC50值:8.86±0.32μmol/L),miR-15a-5p的过表达降低了A549/D细胞的细胞活力(IC50值:1.92±0.11μmol/L)。并且在A549细胞中阻断miR-15a-5p减少凋亡(P <0.001),在A549/D细胞中增加miR-15a-5p表达促进凋亡(P <0.001)。Western b...     

外周血中miRNAs表达水平对精神分裂症的诊断价值

目的:探讨外周血中miRNAs的表达水平对精神分裂症的诊断价值.方法:选取40例精神分裂症患者作为观察组,40例健康体检者作为对照组.实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定精神分裂症患者外周血液中miRNAs表达情况.通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNAs的诊断效能.采用可视化和集成发现数据库(DAVID)工具对miRNAs靶基因进行基因功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:两组受试对象外周血miR-30d-5p、miR-181b-3p、miR-652-5p、miR-193a-3p、miR-181b-5p、miR-346、miR-572、miR-7-5p、miR-564、miR-548d-3p和miR-30a-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p表达水平高于对照组(P<0.05);miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p的ROC曲线下面积(AUC)值分别为0.763,0.659和0.725,三者联合检测的AUC值为0.802.miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p靶基因与突触结构和神经功能密切相关,三者共同靶基因SATB2和PER2在精神分裂症患者中异常表达(P<0.05).结论:miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p在精神分裂症中异常表达,三者及其靶基因结合有望作为精神分裂症诊断规范和治疗监测的生物标记物.     

黄芪甲苷上调miR-199a-5p表达抑制氧糖剥夺/再灌注诱导的神经干细胞凋亡

[目的] 探讨黄芪甲苷是否通过上调miR-199a-5p抑制氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的神经干细胞凋亡。 [方法] 分离14 d胎龄SD大鼠的大脑皮层神经干细胞并鉴定,随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂组(拮抗剂组)和黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂对照组(拮抗剂对照组)。除正常对照组外,其余组神经干细胞先行氧糖剥夺8 h,再灌注72 h,拮抗剂组和拮抗剂对照组分别采用脂质体2000转染miR-199a-5p拮抗剂和拮抗剂对照。采用2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfonic acid benzene)-2H-tetrazole monosodium salt,CCK-8]法检测神经干细胞活性,异硫氰酸荧光素标记磷脂结合蛋白/碘化丙啶(Annexin-fluorescein isothiocyanate isomer/propidium iodide,AnnexinⅤ-FITC/PI)双染法检测神经干细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测miR-199a-5p表达,免疫印迹法检测切割型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达。[结果] 分离培养的神经干细胞纯度为98.41%,黄芪甲苷能够提高OGD/R损伤的神经干细胞存活率,其中50 μmol·L-1黄芪甲苷效果最佳(P＜0.01);与模型对照组比较,50 μmol·L-1黄芪甲苷能抑制OGD/R损伤的神经干细胞凋亡(P＜0.01),上调miR-199a-5p表达(P＜0.01),下调cleaved caspase-3蛋白表达(P＜0.01),而miR-199a-5p拮抗剂能显著逆转上述效应(P＜0.01)。 [结论] 黄芪甲苷能够促进OGD/R损伤的神经干细胞存活,抑制其凋亡,作用机制可能与其上调miR-199a-5p表达,抑制cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

miR-199a-3p调控c-kit/ERK通路在电针关元穴治疗神经源性尿潴留大鼠的作用机制

目的：探讨miR-199a-3p调控c-kit/细胞外信号调节激酶（ERK）通路在电针关元穴治疗神经源性尿潴留中的作用机制。方法: 采用改良脊髓横断法建立神经源性尿潴留大鼠模型60只，通过随机数表法平均分为5组：模型组、电针组、miR-199a-3p antagomir（抑制剂）组、miR-199a-3p antagomir阴性对照组、电针+miR-199a-3p antagomir组，另选取SD大鼠12只，设为假手术组，使用药物分组干预处理后，检测大鼠尿动力学，比较各组膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力；肌条实验检测大鼠逼尿肌兴奋性，比较各组肌条自发性收缩频率；HE染色检测各组大鼠膀胱组织病理形态改变；试剂盒测定各组大鼠血清炎性细胞因子环氧化酶（COX-2）、白细胞介素（IL-18）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平；实时荧光定量（qRT-PCR）实验检测各组大鼠膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测各组大鼠膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白表达水平。结果：与假手术组相比，模型组大鼠膀胱组织呈现严重病理损伤改变，膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力、血清COX-2、IL-18及iNOS水平显著升高（P＜0.05），肌条自发性收缩频率、膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白p-ERK/ERK、c-kit表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组、电针+miR-199a-3p antagomir组分别相比，电针组大鼠膀胱组织病理损伤均减轻，膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力、血清COX-2、IL-18及iNOS水平均降低（P＜0.05），肌条自发性收缩频率、膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白p-ERK/ERK、c-kit表达水平均升高（P＜0.05）；miR-199a-3p antagomir组大鼠膀胱组织病理损伤均加重，膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力、血清COX-2、IL-18及iNOS水平均升高（P＜0.05），肌条自发性收缩频率、膀胱组织miR-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白p-ERK/ERK、c-kit表达水平均降低（P＜0.05）。与模型组相比，miR-199a-3p antagomir阴性对照组大鼠各指标水平无显著差异（P＞0.05）。结论：电针关元穴可通过上调miR-199a-3p表达而抑制c-kit/ERK通路激活，减轻神经源性尿潴留大鼠膀胱组织炎症损伤，增强逼尿肌兴奋性，修复其膀胱功能，改善大鼠尿潴留症状。     

MicroRNA-122-5p与MicroRNA-199a-5p在EMS患者血清的表达及临床意义

目的 探讨microRNA-122-5p（miR-122-5p）与microRNA-199a-5p（miR-199a-5p）在子宫内膜异位症（EMS）患者血清的表达及临床意义。方法 前瞻性设计,随机选取2016年1月—2017年12月华北石油管理局总医院诊治的EMS患者90例（EMS组）及同期不孕症检查的患者70例（对照组）为研究对象。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）检测两组人群血清的miR-122-5p和miR-199a-5p的表达及白细胞介素-6（IL-6）的表达,并分析其与临床特征的相关性。构建受试者操作特征（ROC）曲线。结果 EMS组患者的血清及腹腔液中IL-6、miR-122-5p、miR-199a-5p的表达与对照组比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,EMS组均增高。miR-122-5p的表达与IL-6水平（r?=0.578,P?<0.05）、miR-199a-5p表达（r?=0.721,P?<0.05）呈正相关。miR-199a-5p的表达与IL-6水平（r?=0.562,P?<0.05）呈正相关。miR-122-5p和miR-199a-5p检测EMS的敏感性分别为94.7%和92.1%,特异性分别为90.5%和88.6%。结论 血清miR-122-5p和miR-199a-5p在EMS患者中的表达增加,miR-122-5p与miR-199a-5p有成为诊断子宫内膜异位症的生物标志物的潜力。     

循环miR-4731-3p在肺癌患者血浆中的表达及临床意义

目的 探讨microRNA-4731-3p(miR-4731-3p)在肺癌血浆中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测40例肺癌患者和40例健康人(作为对照)血浆miR-4731-3p的表达水平,分析其与临床病理参数和预后的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC),评价血浆miR-4731-3p表达水平对原发性肺癌的诊断价值。结果肺癌血浆中miR-4731-3p的表达水平(0.11±0.05)显著高于健康人(0.05±0.03)(P＜0.001);miR-4731-3p表达水平与癌胚抗原(CEA)正相关(P＜0.05),与患者性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤大小、临床分期、远处转移均无明显相关性(P＞0.05)。血浆miR-4731-3p在ROC曲线下面积(AUC)为0.835(95% CI =0.750~0.921)。当miR-4731-3p临界值取0.048时,对肺癌诊断的灵敏度为0.950,特异度为0.575。Kaplan-Meier分析显示肺癌血浆中miR-4731-3p低表达者生存时间明显高于高表达组(P＜0.05)。结论血浆miR-4731-3p在肺癌血浆中表达上调,可作为肺癌诊断及预后判断的潜在分子标志物。`     

miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症中的表达

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症（ITP）中的表达变化。方法：采用RT-qPCR检测25例ITP患儿和15例正常对照PBMCs中3种miRNAs相对表达量,Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血小板计数及未成熟血小板分数（IPF%）;分析miRNAs与血小板计数的相关性,ROC曲线分析检验效能。结果：ITP患儿组PBMCs中的miR-144-5p和miR-668-3p较对照组表达均上调,miR-134-5p表达下调（均P＜0.05）。miR-144-5p和miR-668-3p在急性ITP患儿组中表达量要高于慢性ITP患儿组（均P＜0.05）,且miR-144-5P（r=-0.802,P＜0.001）和miR-668-3p（r=-0.753,P＜0.001）的相对表达量与外周血小板计数呈负相关。相较于单个指标,miR-144-5p联合IPF%诊断急性ITP的AUC为0.960,灵敏度和特异度分别为93.3%和100%;而miR-134-5p联合IPF%诊断慢性ITP的AUC为0.967,灵敏度和特异度分别为90.0%和93.3%。结论：miR-144-5p和miR-668-3p在ITP患儿PBMCs中表达显著上调,miR-134-5p表达下调,这些改变可能在疾病的发生与发展中发挥了重要作用。     

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

膀胱癌组织miR-20a-5p、NR4A3表达及其与患者临床病理特征、预后的关系

目的 分析膀胱癌(BC)组织miR-20a-5p、核受体亚家族4成员3(NR4A3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法 选取2016年12月—2019年1月曲靖市第一人民医院泌尿外科行手术治疗BC患者30例,收集其膀胱癌组织及相应的癌旁组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BC癌组织中miR-20a-5p、NR4A3的表达水平,并分析miR-20a-5p、NR4A3表达与BC临床病理特征的关系;Kaplan-Meier曲线分析miR-20a-5p、NR4A3与BC患者预后的关系;Cox风险比例回归模型评估BC患者预后的影响因素。结果 与癌旁组织比较,BC癌组织中miR-20a-5p表达上升(t/P=7.013/<0.001),NR4A3表达下降(t/P=9.658/<0.001)。TargetScan网站显示,miR-20a-5p与NR4A3存在靶向关系,且Pearson相关性分析显示,BC癌组织中miR-20a-5p与NR4A3表达呈负相关(r/P=-0.599/<0.001)。病理Ⅲ级、TNMⅢ～Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者miR-20a-5p高于...     

急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义

目的：检测急性髓系白血病（AML）患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法：选取AML患者51例（AML组）和34名同期健康体检志愿者（对照组）作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征（ROC）曲线,计算ROC曲线下面积（AUC）,确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果：在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30～100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低（P<0.01）;ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最...     

miR-513a-3p在结肠癌中高表达并诱导细胞生长和迁移的机制研究

目的 观察miR-513a-3p在结肠癌组织与癌旁正常组织的表达差异,探讨miR-513a-3p诱导结肠癌(CRC)细胞生长和迁移的机制.方法 收集CRC患者30例作为研究对象,原位杂交和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测CRC组织与癌旁组织miR-513a-3p的表达水平.取人CRC细胞株HT-29和SW480培养后,转染miR-513a-3p类似物作为促进表达组,设置阴性对照组,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法实验两组细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭情况,细胞划痕实验检验细胞迁移能力,Western blot法检测NF-κB和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平.结果 原位杂交检测结果显示,CRC组织miR-513a-3p阳性表达高于癌旁组织.qRT-PCR检测结果显示,CRC组织和癌旁组织miR-513a-3p 相对表达量分别为(0.37±0.09)和(1.01±0.16),差异有统计学意义(P＜0.01).与阴性对照组比较,促进表达组细胞活力在3、4 d中均升高(P＜0.01),促进表达组的HT-29和SW480细胞侵袭细胞比例升高(P＜0.01),促进表达组HT-29和SW480的细胞迁移能力增强.Western blot结果显示,与阴性对照组比较,促进表达组的HT-29细胞和SW480细胞 p-p65、p-IκBα、Wnt3a、Wnt5a 和 β-catenin 蛋白相对表达量均升高(P＜0.01).结论 CRC组织miR-513a-3p表达异常升高,过表达的miR-513a-3p促进CRC细胞生长、迁移和侵袭作用,其作用机制可能与NF-κB通路和Wnt/β-catenin通路激活有关.     

MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨microRNA-199a-3p (miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响?方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照?转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析?结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡?     

miRNA分子在肺结核患者单核细胞中的表达及意义

目的分析肺结核患者(TB)外周血单核细胞中miR-34a-5p和miR-708-5p的表达水平,并探讨其临床诊断价值。方法选取TB患者和健康对照(HD)各25例,应用Taq Man q PCR技术测定两组人群外周血单核细胞中miR-34a-5p和miR-708-5p表达水平,以U6 sn RNA作为内参。应用ROC曲线评价miR-34a-5p和miR-708-5p诊断TB的临床意义。结果 miR-34a-5p在TB患者中的表达水平为(10.08±0.68),显著高于HD的(7.67±0.36),差异有统计学意义(P<0.01);miR-708-5p在TB患者中的表达水平显著高于HD的(13.52±0.98 Vs 7.71±0.57),差异有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线分析表明在肺结核诊断中,miR-34a-5p的敏感性、特异性分别为72%、76%;miR-708-5p的敏感性、特异性为76%、76%。结论 miR-34a-5p和miR-708-5p分子在TB患者外周血单核细胞中异常表达,对TB辅助诊断具有一定参考价值。     

Screening host cell miRNA regulating HBV proliferation and HBsAg expression

目的 筛选调节乙型肝炎病毒( HBV)增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)产生的宿主细胞的miRNA.方法 用328种miRNA的反义链转染HepG2 2.2.15细胞,72 h收获上清,MTS检测细胞的增殖活性,ELISA检测表面抗原和e抗原的表达水平,实时定量PCR检测其中HBV DNA的拷贝数.构建筛选到的miRNA的过表达载体,转染HepG22.2.15细胞,也分别用MTS、ELISA和实时定量PCR进行检测.结果 miR-199a-3pASO、miR-210ASO和miR-185ASO促进了HBsAg产生和HBV增殖(P ＜0.05);miR-199a-3p、miR-210、miR-185的过表达,分别抑制了HBsAg的产生和HBV的增殖(P＜0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的ASO转染组与对照组相比,分别降低了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P＜0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的过表达载体转染组与对照组相比,分别增加了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P＜0.05).结论 在没有对细胞的增殖活性产生影响的情况下,miR-199a-3p、miR-210和miR-185抑制了HBV表面抗原的产生和HBV的增殖,miRNA作为病毒与宿主细胞相互作用中的调节因子,在HBV的生命活动周期中具有重要作用.     

miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1促进人牙髓干细胞成骨分化

目的 探讨miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1(YAP1)基因对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法 体外分离培养hDPSCs细胞,将miR-27a-3p模拟物(miR-27a-3p mimics,过表达组)、miR-27a-3p抑制剂(miR-27a-3p inhibitor,敲低组)、miR-NC(对照组)分别转染至hDP-SCs细胞中,检测miR-27a-3p表达水平的改变对YAP1表达的影响.采用TargetScan数据库检索miR-27a-3p的靶基因.应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和YAP1的靶向关系.将miR-27a-3p mimics、miR-NC转染到hDPSCs特定时间后收集细胞,应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、Western blot等检测经典的成骨标志物骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成骨转录因子-2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、YAP1 mRNA和蛋白表达水平.应用MTT比色法验证miR-27a-3p和YAP1对细胞增殖活性的影响.结果 过表达组hDPSCs细胞中miR-27a-3p的表达水平较对照组显著上调(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平下调(P＜0.05).而敲低组miR-27a-3p的表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05).生物信息学分析表明,miR-27a-3p作用于YAP1的3'UTR区,双荧光素酶报告基因实验验证了YAP1是miR-27a-3p的靶基因.qRT-PCR、Western blot检测显示,与对照组相比,miR-27a-3p过表达时hDPSCs中BMP-2、RUNX2、OPN mRNA和蛋白的表达水平上调(P＜0.05).MTT检测显示,miR-27a-3p过表达可明显上调hDPSCs增殖率(P＜0.05),而YAP1过表达则会降低hDPSCs的增殖率(P＜0.05).结论 miR-27a-3p可能通过靶向调控YAP1促进hDPSCs成骨分化.