lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白...     

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环调控胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环对SGC-7901细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析胃癌组织、癌旁正常组织、SGC-7901细胞、GES-1细胞中LncRNA CASC15、miR-153-3p和Nrf2的表达量...     

乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的 探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法 选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果 BC组...     

circFOXK2靶向miR-409-3p调控肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达。体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系。转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞。细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析。蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P<0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P<0.05)。circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p。敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05),N-cadherin水平降低(P<0.05),而E-...     

miR-185-5p靶向AKR1C1抑制肺癌细胞的迁移和侵袭

目的 观察miR-185-5p对肺癌细胞迁移、侵袭的影响,分析酮还原酶1家族成员C1(AKR1C1)在miR-185-5p调控肺癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法 RT-qPCR检测miR-185-5p在组织样本(人肺癌及对应癌旁组织)、细胞系(人肺上皮细胞系BEAS-2B和肺癌细胞系A549、H460)中的表达。按照处理方式不同将A549细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-185-5p组(转染miR-185-5p)、miR-185-5p+pcDNA组(共转染miR-185-5p和pcDNA)、miR-185-5p+pcDNA-AKR1C1组(共转染miR-185-5p和pcDNA-AKR1C1);Transwell和划痕实验检测各组A549细胞迁移和侵袭;在线预测网站Starbase预测miR-185-5p的下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验检测A549细胞荧光素酶活性;蛋白免疫印迹实验检测各组A549细胞中AKR1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-185-5p的表达显著降低(P<0.001);与BEA...     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

lncRNA717对胃癌细胞生物学行为的影响及调控机制研究

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）717对胃癌细胞增殖、转移等生物学行为的影响及其调控机制。方法 收集2021年1至12月宁波大学附属第一医院手术切除或活检的31例胃癌组织及配对癌旁组织，以及胃癌细胞系AGS、HGC-27和人正常胃黏膜细胞系GES-1。采用qRT-PCR法检测lncRNA717在胃癌组织及癌旁组织、各细胞系中的表达水平。采用细胞增殖和毒性检测（CCK-8）法、Transwell法和划痕试验分别评估lncRNA717对细胞增殖、侵袭和迁移中的影响。采用荧光素酶报告基因测定、qRT-PCR法和Westernblot法检测各组标本和细胞中lncRNA717、miR-762和干扰素调节因子（IRF）7表达水平。结果与癌旁组织相比，lncRNA717在胃癌组织中显著下调，与正常细胞相比，lncRNA717在胃癌细胞中显著下调。过表达lncRNA717抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。lncRNA717可以吸附miR-762，上调miR-762能抑制IRF7的表达，促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而过表达lncRNA717后逆转了miR-762对细胞的增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论ln-cRNA717可抑制胃癌细胞的增殖和转移，这可能与调控miR-762/IRF7有关。提示lncRNA717可作为胃癌的潜在生物标志物和治疗靶点。     

大蒜素通过miR-486-5p/KDM5B轴增加非小细胞肺癌A549细胞放疗敏感性

目的：探讨大蒜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞放射敏感性影响及其作用机制。方法：大蒜素联合X射线处理A549 细胞,采用MTT法检测A549 细胞增殖活力;Transwell实验检测A549 细胞侵袭能力;克隆形成实验检测A549细胞对放射的敏感性;彗星实验评估A549细胞DNA损伤情况;Western blot检测γ-H2AX、Snail、Vimentin蛋白和组蛋白去甲基化转移酶（KDM5B）的表达量。qRT-PCR检测miR-486-5p的表达量。双荧光素酶报告基因验证miR-486-5p与KDM5B的靶向关系。结果：不同浓度（20、40、60 μg/mL）大蒜素干预可显著抑制A549细胞增殖活力（P ＜0.05）和侵袭能力（P ＜0.05）,并上调miR-486-5p在A549细胞中的表达量（P ＜0.05）。40 μg/mL大蒜素可明显上调X射线对A549细胞增殖和侵袭能力的抑制作用（均P ＜0.05）,且加速了A549细胞DNA损伤。机制上,大蒜素通过上调miR-486-5p增强A549细胞对X射线的敏感性,但敲低miR-486-5p可显著下调大蒜素对A549细胞放射增敏作用。此外,miR-486-5p靶向负调控KDM5B的表达。结论：大蒜素可通过抑制A549细胞增殖、侵袭并诱导细胞DNA损伤,进而增强A549细胞对X射线的敏感性,其作用机制是通过上调miR-486-5p靶向抑制KDM5B来实现的。     

溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p、肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的探讨溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p及肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法将肺癌A549细胞分为对照组、溪黄草(20、40、80 mg/L)组、si-circ_0091579组、si-NC组、pcDNA-circ_0091579组、pcDNA组、溪黄草+pcDNA-circ_0091579组。CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术检测A549细胞抑制率、克隆形成数以及凋亡率。qRT-PCR检测circ_0091579和miR-515-5p表达。双荧光素酶报告实验验证circ_0091579和miR-515-5p相互作用。 结果溪黄草显著降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调及circ_0091579下调,且呈质量浓度依赖性。下调circ_0091579可降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调。上调circ_0091579可逆转溪黄草对A549细胞的增殖抑制和凋亡促进功能。circ_0091579和miR-515-5p直接特异性结合。 结论溪黄草可抑制肺癌细胞A549增殖,诱导其凋亡,其机制与下调circ_0091579/miR-515-5p途径有关。     

下调LncRNA DLX6-AS1通过miR-144调控FBXW7表达影响食管癌Eca-109细胞的增殖、侵袭和EMT进程

目的:评估长非编码RNA远端少同源盒6反义1(lncRNA DLX6-AS1)在食管癌发生发展中的作用及其潜在的机制。方法:采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1和miR-144、FBXW7在食管癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达。分别敲低lncRNA DLX6-AS1和miR-144、FBXW7在Eca-109细胞中的表达后,采用CCK-8法检测细胞生长活性,细胞克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测E-cadherin、Vimentin和GAPDH的表达。采用miRanda、TargetScan和双荧光素酶报告基因检测验证lncRNA DLX6-AS1和miR-144、miR-144和FBXW7之间的靶向关系。结果:食管癌组织中lncRNA DLX6-AS1和FBXW7表达显著高于癌旁正常组织,miR-144表达与癌旁组织对比明显下调。lncRNA DLX6-AS1、FBXW7表达下降后,Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT能力也明显下调;LncRNA DLX6-AS1与miR-144、miR-144与FBXW7呈靶...     

干扰LncRNA LRRC75A-AS1抑制肺癌细胞发生发展研究

目的:探讨LncRNA LRRC75A-AS1/miR-22-3p对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其可能作用机制.方法:采用qRT-PCR法检测肺癌组织与癌旁组织中LRRC75A-AS1、miR-22-3p的表达水平;体外培养人肺癌细胞A549,si-NC、si-LRRC75A-AS1、si-LRRC75A-AS1与...     

干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响

目的探究在非小细胞肺癌中,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）尿路上皮癌抗原1（urothelial carcinoma associated 1,UCA1）敲降miR-185-5p对 β-Catenin通路的影响。方法选取非小细胞肺癌A549细胞为研究材料,设置A549空白对照组、sh-scramble阴性对照组、sh-UCA1干扰组、miR-185 inhibitor组和sh-UCA1+ inhibitor组。Western blot验证体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR鉴定体系中lncRNA UCA1和miR-185-5p的表达;生物信息学软件和荧光素酶实验检测lncRNA UCA1和miR-185-5p之间结合性。BrdU染色鉴定细胞增殖,免疫荧光染色检测细胞中LC3+细胞含量。结果在A549细胞中,lncRNA UCA1干扰后,UCA1表达量显著下降并促进miR-185-5p表达,有效抑制肺癌细胞增殖和自噬,促进凋亡发生（P<0.01）;经生物信息学和双荧光素酶报告系统验证lncRNA UCA1和miR-185-5p有较强结合性;并进一步验证lncRNA UCA1可以有效抑制β-Catenin/TCF-4及Beclin 1和LC3 Ⅱ表达,降低miR-185-5p对肺癌细胞增殖和自噬效果,减少细胞内LC3含量（P<0.01）。结论lncRNA UCA1干扰后,可以有效降低UCA1对miR-185-5p的抑制效果,进而解除β-Catenin/TCF-4、Beclin 1和LC3 Ⅱ受到的抑制作用,从而减少肺癌细胞自噬发生和减缓增殖。     

基因干扰miR-105抑制非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭

目的 探究基因干扰miR-105对非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭的影响.方法 RT-PCR检测33例肺癌患者肺组织及癌旁组织中miR-105表达水平.转染miR-105 inhibitor至A549细胞,将细胞随机分为3组(Control、inhibitor-NC、miR-105 inhibitor组)...     

下调miR-141-3 p对晚期NSCLC细胞侵袭转移和化疗敏感性影响及其机制

目的 研究miR-141-3p介导Yes相关蛋白1(YAP1)基因表达对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭转移和化疗敏感性的影响及其作用机制.方法 收集50例晚期NSCLC及癌旁组织标本,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-141-3p和YAP1表达量.选择NSCLC细胞株,设计miR-1...     

LncRNA CASC7通过调控miR-19b-3p/SMG1轴抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌易感性候选基因7(CASC7)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肝癌组织、对应癌旁组织和肝癌细胞系Huh7、HepG2和MHCC97H及正常肝细胞系THLE-2中CASC7、微小RNA-19b-3p(miR-19b-...     

LncRNA DANCR通过miR-33a-5p/C-MYC调控前列腺癌增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的 观察长链非编码RNA DANCR(lncRNA DANCR)通过miR-33a-5p调控前列腺癌PC3细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制.方法 RT-PCR法检测36例前列腺癌组织及相应的癌旁组织临床样本中lncRNA DANCR的表达水平.通过使用siRNA敲低PC3细胞中lncRNA DANCR的表达水平,MT...     

lncRNA TTN-AS1通过靶向miR-204-3p调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化

目的：探讨长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA 1（lncRNA TTN-AS1）是否可通过靶向微小RNA-204-3p（miR-204-3p）调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）。方法：采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,分别将si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、si-TTN-AS1与anti-miR-NC、si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p转染至AGS细胞;采用qRTPCR法检测AGS细胞中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;采用Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测TTN-AS1、miR-204-3p的靶向关系。结果：胃癌组织中TTN-AS1的表达水平比癌旁组织增加约2.90倍（P ＜0.05）,miR-204-3p的表达水平比癌旁组织减少约0.57倍（P ＜0.05）;转染si-TTN-AS1或转染miR-204-3p mimics可明显减少迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实TTN-AS1可靶向结合miR-204-3p;共转染si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p可明显增加迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）。结论：抑制TTN-AS1表达可通过上调miR-204-3p的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。     

lncRNA NRON靶向miR-185-5p调节乳腺癌细胞化疗耐药性的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA抑制因子活化T细胞(lncRNA NRON)对miR-185-5p的调控作用及其影响乳腺癌细胞增殖、凋亡及化疗耐药性的基因调控机制。方法 2020年8月—2021年12月于陆军军医大学大坪医院中心实验室进行实验。选取2016年7月—2020年7月于医院乳腺甲状腺外科行手术切除的乳腺癌患者26例的癌组织及癌旁组织样本,体外培养正常乳腺上皮细胞系(MCF10A)及乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-231、T47D、SKBR3、ZR7530、BT549、HCC1937、BT474)。qRT-PCR法检测lncRNA NRON、miR-185-5p基因表达;双荧光素酶试验验证lncRNA NRON与miR-185-5p的靶向关系。将MCF7乳腺癌细胞分为阴性对照(NC)组、plasmid NRON组(转染lncRNA NRON过表达载体)、plasmid NRON+mimic NC组(转染plasmid NRON+mimic NC)、plasmid NRON+miR-185-5p mimic组(转染plasmid NRON+miR-185-5p模拟物),分别给予5-氟尿...     

山奈素通过下调circ-RPL15抑制肺癌细胞A549的增殖和迁移

目的：探索山奈素是否通过circ-RPL15 影响肺癌细胞A549 的生物行为。方法：使用25、50 和75 μg/mL山奈素处理肺癌细胞A549。在细胞A549中沉默circ-RPL15,或过表达circ-RPL15并使用75 μg/mL山奈素处理。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测各组肺癌细胞A549 活力变化,平板克隆法检测细胞克隆形成,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹（Western blot）法检测裂解-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved-caspase3）蛋白的表达,使用Transwell法检测细胞迁移,并使用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测circ-RPL15、miR-489-3p表达。双荧光素酶报告实验分析circ-RPL15对miR-489-3p的靶向调控。结果：与对照组相比,不同质量浓度（25、50 和75 μg/mL）山奈素作用于肺癌细胞A549 后,细胞活力、克隆形成数、迁移数、circ-RPL15表达量降低,而凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白和miR-489-3p的表达量升高（P ＜0.05）,且均呈浓度依赖性。沉默circ-RPL15 增强肺癌细胞A549 的miR-489-3p表达量、凋亡率和Cleaved-caspase3蛋白的表达量,并减弱细胞活力、克隆形成数、迁移数（P ＜0.05）。circ-RPL15靶向调控miR-489-3p。过表达circ-RPL15逆转了山奈素作用的肺癌细胞增殖、凋亡和迁移情况（P ＜0.05）。结论：山 奈素通过下调circ-RPL15并靶向调控miR-489-3p,抑制肺癌细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡。