去细胞异种神经支架的制备和组织学观察

目的用改良的化学萃取方法,制备去细胞异种神经支架。方法切取青紫蓝兔胫神经,以Triton X-100溶液和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理,对萃取神经行组织学HE染色及Laminin和S-100蛋白免疫组织化学观察。结果去细胞异种神经支架的延展性及韧弹性良好,细胞和髓鞘被彻底清除,该神经支架保持了网管柱状组织结构,保留了雪旺细胞(SC)基底膜及其Laminin、神经内膜、神经束膜和神经外膜。结论该方法可为异种神经移植提供较为理想的支架材料。     

大鼠去细胞神经支架制备方法的改良

目的:探讨去除大鼠周围神经中的细胞和髓鞘以取得去细胞神经支架的方法.方法:取15只SD大鼠的坐骨神经30条,随机分为3组(每组10条).分别为正常神经组(A组),TritonX-200处理的化学去细胞组(B组),TritonX-200联合sulfobetaine-16(SB-16)、sulfobetaine-10(SB-10)去细胞组(C组).在光镜和电镜下观察各组神经组织的组织学结构.采用免疫组织化学SP法检测各组神经组织中S-100蛋白和层黏连蛋白(Laminin)的表达.结果:制备出的去细胞神经呈淡乳白色圆柱状外观.略透亮,其延展性较化学处理前略增加.B、C组神经经去细胞处理后,均去除了Schwann细胞、神经髓鞘和轴突,C组更好地保存了由Schwann细胞基底膜管以及外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构.结论:TritonX-200联合SB-16、SB-10改良化学方法处理可获得达到要求的去细胞神经支架.     

mGluR6对大鼠胚胎神经干细胞生物学功能的影响

目的:探讨代谢型谷氨酸受体6(mGluR6)对大鼠胚胎神经干细胞生物学功能的影响。方法:利用MTT比色法分析mGluR6过表达载体、mGluR6siRNA在不同时间对大鼠胚胎神经干细胞活力的影响,神经球测量方法分析mGluR6对大鼠神经球增殖的影响,流式细胞术分析mGluR6对大鼠NSCs细胞周期及凋亡的影响。结果:MTT结果表明,在处理24h,48h和72h后,过表达mGluR6显著增强大鼠NSCs的细胞活力,促进NSCs增殖,神经球直径显著增大;mGluR6siRNA抑制大鼠NSCs的增殖。过表达mGluR6后,与对照组相比G1/G0期和细胞比率显著下降,S期细胞比率显著上升,促进了细胞G1到S期转换;沉默mGluR6后,G1/G0期和细胞比率显著增加,S期细胞比率显著下降,抑制了大鼠NSCs细胞G1到S期转换。应用流式细胞术显示,过表达mGluR6 48h后,大鼠NSCs细胞早凋和晚凋均显著下降;沉默mGluR6显著诱导大鼠NSCs的早凋和晚凋。结论:mGluR6可促进大鼠胚胎神经干细胞的增殖,抑制NSCs凋亡。     

大鼠脂肪干细胞与不同去细胞神经支架的体外相容性比较

目的:观察大鼠脂肪干细胞与2种不同去细胞神经支架的体外相容性,为周围神经组织工程寻求合适的种子细胞载体.方法:将大鼠脂肪干细胞与传统去细胞神经支架和改良法去细胞神经支架体外复合培养,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在2种支架上的生长、黏附情况,测定细胞活性及细胞吸附率,并与空白对照组比较.结果:脂肪干细胞可在2种去细胞神经支架上生长、黏附,在改良法去细胞神经支架上的细胞吸附率优于传统去细胞神经支架.结论:脂肪干细胞与2种去细胞神经支架均有较好的体外组织相容性,改良法去细胞神经支架可作为更有效的周围神经组织工程细胞载体.     

大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架相容性研究

目的观察大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架体外相容性,为周围神经组织工程寻求合适的种子细胞载体。方法将大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架体外体外复合培养,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上的生长、黏附情况,MTT法测定细胞活性并与空白对照组比较。结果脂肪干细胞在去细胞神经支架上生长、黏附情况良好。结论两者具有很好的体外组织相容性,去细胞的神经支架可以作为有效的周围神经组织工程的细胞载体。     

去细胞神经支架联合VEGF修复周围神经缺损的实验研究

目的观察去细胞神经支架联合血管内皮生长因子（VEGF）在促进周围神经损伤修复中的作用。方法购买雄性Wistar大鼠60只,先取15只成年Wistar大鼠作为神经供体,制备去细胞神经支架,将制备好的神经支架剪取长度约为1 cm的去细胞神经基膜管。根据实验要求,将余Wistar大鼠随机分为三组,每组大鼠均15只。实验组（A组）为去细胞神经支架移植＋局部注射VEGF组;对照组Ⅰ（B组）为去细胞神经支架移植组;对照组Ⅱ（C组）为自体神经移植组。术后喂养1个月,并每日观察大鼠步态、患足溃疡恢复情况。术后1个月取移植段坐骨神经组织行HE染色、免疫组化染色观察再生神经S-100及轴突数量,髓鞘、神经纤维数等生长情况。结果术后1个月,三组大鼠的足部溃疡、步态均有不同程度的恢复,其中实验组恢复率接近于自体神经移植组,明显优于单纯去细胞神经支架移植组;A组的再生神经轴突数为（125.34±5.67）,B组再生神经轴突数为（62.32±3.71）,C组再生神经轴突数为（132.55±7.48）,A组与C组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,A组与B组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论去细胞神经支架联合VEGF在促进周围神经损伤修复过程中可能具有一定的作用。     

冻干去细胞异种神经和类许旺细胞共移植修复外周神经缺损的实验研究

目的 研究冻干化学去细胞异种神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只成年雌性DA大鼠分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:冻干化学去细胞异种神经与类许旺细胞共移植组、冻干化学去细胞异种神经移植组、化学去细胞异种神经移植组、异种神经移植组.术后4周、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后24周A组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率优于B、C、D组(P＜0.05);组织学检测发现,术后24周A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主.结论 种植类许旺细胞的冻干化学去细胞异种神经能有效的修复大鼠周围神经缺损.     

3,5-二羟基苯甘氨酸对体外氨基核苷嘌呤霉素诱导的足细胞凋亡的影响

目的 研究代谢型谷氨酸受体1(mGluR1)和mGluR5的激动剂3,5-二羟基苯甘氨酸(DHPG)在体外对由氨基核苷嘌呤霉素(PAN)诱导的足细胞凋亡的影响,探讨可能的作用途径.方法 体外培养小鼠条件永生型足细胞株5P12,根据添加干预药物的不同进行分组.采用CCK-8法、Western blotting 、EIA法、JC-1单标法流式细胞术、免疫荧光法和TUNEL染色激光共聚焦显微镜观察等方法,对足细胞的细胞活力、mGluR1/5和活化的胱冬肽酶-3(cleaved caspase-3)的表达、环磷酸腺苷(cAMP)水平、线粒体膜电位变化、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及细胞凋亡等指标进行检测.结果 DHPG诱导足细胞使cAMP生成和CREB表达增加,DHPG可防止PAN诱导的足细胞活力降低、cleaved caspase-3表达升高、线粒体膜电位下降以及晚期凋亡,而这些作用可被mGluR1和mGluR5的选择性拮抗剂(AIDA)、腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)及mGluR1和mGluR5的RNA干扰加以抑制.结论 mGluR1和mGluR5的选择性激动剂DHPG可防止体外PAN诱导的足细胞凋亡,其作用可能与mGluR/cAMP信号途径有关.     

环孢素A对异种脱细胞神经移植的影响

目的 研究脱细胞异种面神经移植中环孢素A(cyclosporin A,CSA)的作用效果.方法 48只W istar 大鼠随机选择一侧作为实验侧,解剖面神经后于颊支制造lcm的神经缺损.按神经移植的种类分为4组,A组:异种面神经移植组;B组:异种面神经移植应用CSA免疫抑制组;C组:异种脱细胞神经移植组;D组:异种脱细胞神经移植应用CSA免疫抑制组.各组实验动物分别于术后5周,12周进行电生理学测试(潜伏期、运动神经传导速度),并进行光镜、电镜观察形态学变化.结果 术后5周和12周时,C,D组动物在电生理指标及光镜、电镜指标上均优于A,B组,术后5周和12周,D组面神经颊支传导速度均高于其它各组.结论 1.0 cm缺损的异种脱细胞面神经移植动物实验中,应用CSA5mg/(hg·d)5周可以降低排斥反应,提高神经再生能力.     

微囊化卵巢细胞对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的通过观察去卵巢大鼠微囊化卵巢细胞移植后血清激素及骨代谢相关因子的变化,探讨微囊化卵巢细胞作为防治绝经后妇女骨质疏松方法的可行性。方法将12周龄SD雌性大鼠30只随机分成3组,每组10只:假手术组(SHAM组)、去卵巢组(OVX组)和微囊化卵巢细胞移植组(MOVT组)。OVX组和MOVT组大鼠切除双侧卵巢,SHAM组大鼠不切除卵巢,仅切除与卵巢大小相当的脂肪组织。卵巢切除术10天后SHAM组、OVX组大鼠腹腔注射0.9%NaC l溶液2m l,MOVT组大鼠则腹腔注射微囊化卵巢细胞2m l。术后4周尾静脉采血,分离血清测定E2、FSH、LH及骨代谢相关因子TGF-β、IL-6、IGF-1。结果卵巢切除术后,与SHAM组大鼠比较,OVX组大鼠血清E2的水平显著降低(P<0.01),FSH、LH水平则显著升高(P<0.01);微囊化卵巢细胞移植后,MOVT组大鼠血清E2水平与OVX组比较显著升高(P<0.05);FSH、LH水平均明显降低,LH更加显著(P<0.01)。卵巢切除术后,OVX组大鼠血清TGF-β、IGF-1水平显著下降,IL-6含量则明显升高,与SHAM组比较差异均非常显著(P<0.01);微囊化卵巢细胞移植后,MOVT组大鼠血清TGF-β、IGF-1水平均明显升高,与OVX组大鼠比较分别有非常显著和显著差异(P<0.01、P<0.05),血清IL-6含量降低,与OVX组大鼠比较差异非常显著(P<0.01)。结论微囊化卵巢细胞移植具有预防去卵巢大鼠骨质疏松发生的作用,微囊化卵巢细胞移植作为临床防治绝经后骨质疏松的一种手段具有良好的应用前景。     

活血生肌中药外用对大鼠失神经支配创面角蛋白19表达的影响

目的：观察活血生肌外用中药对大鼠失神经支配创面角蛋白19（k19）阳性表达的影响。方法168只SD大鼠随机分成龙血膏组、生肌膏组、失神经组和正常组,每组42只。对前三组大鼠制造背部失神经支配的深创面模型,之后各组创面分别以龙血生肌膏、生肌愈皮膏、凡士林外用治疗;正常组大鼠背部制造深创面模型,以凡士林治疗。观察不同时间点各组创面愈合率、创面组织k19阳性表达率。结果各时间点正常组两中药组创面愈合率均高于失神经组（P〈0.05,P〈0.01）。龙血膏组、生肌膏组k19阳性表达于第11天达峰值,失神经组和正常组第15天达峰值。第4、7、11、15天时龙血膏组、生肌膏组k19阳性表达率明显高于失神经组和正常组（P〈0.05,P〈0.01）,失神经组低于正常组（P〈0.05,P〈0.01）。结论活血生肌外用中药对失神经支配创面的愈合有促进作用,可能与外用中药增强了失神经支配创面的表皮干细胞增殖与分化有关。     

Exendin-4对高脂大鼠脂代谢及胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨Exendin-4对高脂喂养的肥胖人鼠胰岛β细胞功能及糖脂代谢的影响.方法 SD大鼠40只用简单随机分组法分为2组,分别给予普通饲料(NC组,10只)及高脂饲料(30只).喂养10蒯后,高脂喂养大鼠分为高脂(HF)组,0.5、2μg/kg Exendin-4治疗高脂组(HFL、HFH组),每组10只.治疗6周后,崩静脉葡萄糖耐量实验(IVGT)和胰岛索耐量实验(ITT)来评价机体的胰岛β细胞功能及机体对胰岛素的敏感性,同时检测基础血脂水平.结果 高脂诱导肥胖大鼠经Exendin-4处理后,lee's指数、空腹血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)明显降低(P＜0.01);IVGTT和ITT指标明显改善(P＜0.05),胰岛素分泌水平增高(P＜0.01),胰岛β细胞功能改善(P＜0.05),HFH组较HFL组上述指标改善更为明显.结论 Exendin-4可改善肥胖大鼠的胰岛β细胞功能和糖脂代谢,并可能呈剂量-效应关系.     

脱细胞异种神经移植体复合BMSCs修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的：对脱细胞异种神经的生物相容性进行评价,证明应用其复合BMSCs促进神经再生和功能恢复的效果。方法：采用化学萃取法制备兔的脱细胞神经,应用扫描电镜观察其超微结构;将BMSCs种植到神经支架构建神经移植体,体外培养后观察细胞形态;用构建的异种神经移植体桥接大鼠坐骨神经缺损,术后8周,检测胫前肌湿重比率,对再生神经进行组织形态学分析;并应用免疫荧光染色检测神经内NGF的表达。结果：脱细胞异种神经较完整地保留了天然立体的施万细胞基底膜管结构,完全地移除了神经内的施万细胞、轴突和髓鞘成分;在体外培养中支持种植的BMSCs黏附和生长。神经移植术后,与单纯异种脱细胞神经移植组相比,复合BMSCs的异种神经移植体移植能使胫前肌湿重比率增加、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径增加;增加再生神经内NGF的表达。结论：异种脱细胞神经移植体具备天然的立体结构,移除了施万细胞、髓鞘等抗原成分;神经支架无细胞毒性,具有良好的细胞相容性;复合BMSCs的异种神经移植体可显著地促进神经再生及功能恢复。     

头部X线照射对去胸腺雄性大鼠神经内分必功能的影响

初生48h内去胸腺的成年雄性大鼠下丘脑-垂-体-性腺及皮质系统功能发生改变。经10GyX线头部照射后2天,除了下丘脑M-Enk含量增加外,血清LH和FSH、血尿睾丸酮和皮质酮、垂体和睾丸cAMP以及下丘脑β-EP和L-Enk含量都有不同程度降低,与正常雄性大鼠头部照射后的变化不一致。这些结果提示,由于去胸腺大鼠影响了神经内分泌功能,不可能产生正常大鼠头部照射后所见到的那些变化。     

代谢型谷氨酸受体7对人胚胎神经干细胞增殖的影响

目的 研究代谢型谷氨酸受体7(mGluR7)对人胚胎神经干细胞增殖的影响。方法 利用MTT比色法分析mGluR7过表达载体、mGluR7siRNA在不同时间对体外的人胚胎NSCs细胞活力的影响, 神经球测量方法分析mGluR7对人神经球生长的影响, 流式细胞术分析mGluR7对人NSCs细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 MTT结果表明在处理24 h, 48 h和72 h后, mGluR7显著增强人NSCs的细胞活力, 增殖细胞数量显著增多, 神经球直径显著增大, mGluR7siRNA抑制人神经球的增殖。过表达mGluR7后, 与对照组相比G1/G0期和细胞比率显著下降, S期细胞比率显著上升, mGluR7过表达促进了细胞G1到S期转化, 沉默mGluR7将人NSCs细胞阻滞在G1/G0期。应用流式细胞术分析过表达mGluR7对人NSCs细胞凋亡的影响, 转染48 h后, 早凋晚凋均显著下降, 沉默mGluR7能够显著诱导人NSCs的早凋和晚凋。结论 mGluR7可促进体外培养的人胚胎皮质NSCs增殖。     

三种去神经法对清醒大鼠动脉压力感受性反射功能的影响

目的：测定急、慢性去主动脉神经（ＡＤ）、去颈动脉窦神经（ＳＤ）、同时去主动脉和窦神经（ＳＡＤ）后大鼠动脉压力感受性反射对血压控制（ＡＢＲ－ＢＰ）和心动周期控制（ＡＢＲ－ＨＰ）的影响。方法：测定ＡＢＲ－ＢＰ采用阻断动脉压力感受性反射传出通路前后，比较机体对去氧肾上腺素升压反应面积差异的方法，所得数值与改良的Ｓｍｙｔｈ方法测定的ＡＢＲ－ＨＰ值进行比较。结果：（１）大鼠ＳＡＤ后ＡＢＲ－ＨＰ为零，且代偿不明显；而ＡＢＲ－ＢＰ约为３０％，且代偿明显；（２）ＳＤ后ＡＢＲ－ＢＰ与ＡＢＲ－ＨＰ无显著差异，而ＡＤ和ＳＡＤ后ＡＢＲ－ＢＰ的作用显著大于ＡＢＲ－ＨＰ的作用。结论：（１）大鼠的ＡＢＲ－ＨＰ传入冲动全部来自于主动脉弓和颈动脉窦的压力感受器，而ＡＢＲ－ＢＰ传入冲动大部分来自于这两处的感受器；（２）主动脉神经和窦神经感受传入在ＡＢＲ－ＢＰ中的作用是相当的，并有明显的相互代偿；而在ＡＢＲ－ＨＰ中，主动脉神经的作用比窦神经重要，其代偿能力也比窦神经显著。     

去肾神经对中年自发性高血压大鼠血压的影响

目的 研究去肾神经对中年自发性高血压大鼠血压的影响.方法 30周龄自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)及正常血压大鼠(Wistar kyoto rats,WKY)各25只,按随机区组设计分为5组,根据观察时间分为1、4、9、16、32 d组(n=10),于第2天行去肾神经术.无创鼠尾血压仪(BP-98A)测量血压;10％苯酚乙醇溶液去肾神经;ELISA法测定肾组织中去甲肾上腺素(nonadrenaline,NE)含量及肾素活性;RT-PCR法和Western blot法测定大鼠腹主动脉α1、p1-肾上腺素能受体(α1、β1-受体)在mRNA和蛋白水平上的表达水平.结果 未去肾神经的中年SHR血浆及肾组织NE含量及肾素活性水平明显高于中年WKY(P ＜0.05),主动脉α1、β1-受体mRNA和蛋白的表达与同龄的WKY差异无显著性(P＞0.05);去肾神经急性期,中年SHR血压迅速下降(P＜0.05),血浆与肾组织NE含量及肾素活性降低(P＜0.05);主动脉α1-受体mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),β1-受体mRNA和蛋白表达差异无显著性(P＞0.05);慢性期,肾组织NE含量和肾素活性升高(P＜0.05),主动脉α1、β1-受体mRNA和蛋白表达均上调(P＜0.05).去肾神经对中年WKY无显著性影响(P＞0.05).结论 去肾神经对于中年SHR大鼠的降压效应是暂时的,急性期血压下降,α1-受体表达上调,β1-受体表达无变化;慢性期血压升高,α1、p1-受体表达均上调;血压的变化与NE及肾素活性的变化一致.     

微透析法研究NG2细胞功能变化对大鼠中缝核兴奋性和抑制性递质含量的影响

目的 采用中缝核内微量注射NG2抗体(NG2-Ab),研究中缝核NG2细胞功能变化对γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)递质含量的影响,探讨中缝核中5-羟色胺(5-HT)与NG2细胞的相互作用对GABA和Glu递质含量变化的影响.方法 70只大鼠随机分为正常组、对照组、NG2-Ab组、对氯基丙氨酸(PCPA)组、...