肺癌表皮生长因子受体基因测序分析

目的：探讨中国人肺癌患者表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态。方法用基因测序的方法检测了416例肺癌肿瘤细胞标本EGFR基因第18、19、21外显子,并检测了其中11例EGFR第20外显子区域。23例肺癌患者血液标本作为对照。结果416例肿瘤标本中共发现118例（28.37%）EGFR基因突变,其中19外显子缺失突变占46.09%,21外显子点突变占42.19%,并发现了4例EGFR第20外显子区域突变（4/11）。23例肺癌患者血液标本均未发现突变。肺腺癌的突变率为32.52%,比鳞癌（12.96%）（P=0.004）、其他类型癌（13.89%）（P=0.021）增高,差异有统计学意义。EGFR基因突变在女性患者中（36.72%）所占比例比男性患者高（22.18%）（P=0.001）。结论女性、肺腺癌患者EGFR突变率高,提示可能在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的治疗中获益。     

高分辨率熔解曲线分析技术在检测非小细胞肺癌组织和血清EGFR基因突变中的应用

目的探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术在检测肺癌组织及血清表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变中的应用。方法收集85例非小细胞肺癌石蜡包埋组织(FFPE)标本及对应的39例血清标本,分别提取DNA,自行设计引物,优化扩增体系,利用HRM技术进行EGFR基因18～21外显子突变检测,对检测出突变阳性的标本扩增片段进行基因测序。统计39例FFPE标本与血清标本突变结果的符合率并分析EGFR基因突变与临床特征的关系。结果 85例FFPE标本中,HRM法检测出EGFR基因突变共48例,总突变率为56.47%,基因测序检测出EGFR基因突变共44例,其中181、9外显子突变类型各一种,基因型分别是G719S和2236-2250Del;20、21外显子突变类型各两种,20外显子突变基因型为插入突变insGGT和无义突变Q787Q,21外显子突变基因型为L861Q和L858R。39例血清与FFPE配对标本,EGFR基因突变阳性标本检出的符合率为92.31%(12/13),阴性标本为100%(26/26)。EGFR突变常发生于女性患者、非吸烟患者、肺腺癌患者(均为P<0.05),临床分期Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ-Ⅳ的患者EG-FR基因突变无显著性差异(P=0.159)。结论本研究表明HRM技术能准确检测NSCLC患者组织或血清EGFR基因突变,快速、经济,可有效减少污染,适宜临床推广应用。     

非小细胞肺癌171例患者EGFR基因突变分析

目的 研究171例非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状况,为肺癌的基因诊断和靶向治疗提供依据.方法 171例肺癌患者取新鲜病理组织标本,用厦门艾德核酸提取试剂提取体细胞DNA,采用扩增阻滞突变系统荧光PCR(ARMS-PCR)技术检测EGFR基因突变.结果 在95例男性肺癌患者中,共有4例患者EGFR基因同时检测到存在2个位点突变.171例NSCLC病例中,EGFR基因野生型比率为48.57%(85/175),EGFR基因突变型比率为51.43%(90/175),突变型中21L858R点突变占24.00%(42/175),19Del突变占21.71%(38/175).男女患者比较,EGFR基因野生型比率男性为57.58%(57/99),女性为36.84%(28/76),差异有统计学意义(P=0.007);EGFR基因19Del女性为28.95%(22/76),男性为16.16%(16/99),差异有统计学意义(P=0.042).EGFR基因21L858R点突变女性为28.95%(22/76),男性为20.20%(20/99),差异无统计学意义(P=0.179).结论 NSCLC患者EGFR基因突变率大约为50%左右,突变型以21L858R和19Del占大多数,突变型中女性显著多于男性.     

Super-ARMS法在检测非小细胞肺癌EGFR基因突变中的应用分析

目的本研究通过对超级突变扩增阻滞系统(Super-ARMS)法与突变扩增阻滞系统法(ARMS)检测晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的比较分析,探索Super-ARMS法的临床应用价值。方法收集111例晚期非小细胞肺癌患者外周血标本,提取血浆游离DNA后,分别采用Super-ARMS法及ARMS法进行EGFR基因突变检测,同时对53例配对的石蜡组织切片采用ARMS法进行EGFR基因突变检测。结果 111例标本中,Super-ARMS法检测EGFR基因突变率为50.5%(56/111),ARMS法检测EGFR基因突变率为46.9%(52/111);Super-ARMS法检测出T790M单突变3例,双突变5例,ARMS法则未检测出相关突变,两者比较差异有统计学意义(χ~2=8.023,P0.01);两种方法检测EGFR基因突变一致率达87.4%(97/111),一致性检验显示Kappa系数为0.748(95%CI:0.624～0.871,P0.001);通过检测53例配对组织样本的EGFR基因突变情况显示,与组织ARMS法比较,Super-ARMS法检测的敏感性、特异性和准确性分别为70.8%(17/24)、89.7%(26/29)和81.1%(43/53)。结论 Super-ARMS法与ARMS法检测EGFR基因突变结果一致性较高,Super-ARMS法检测T790M突变的敏感性明显优于ARMS法。     

EGFR基因突变与肿瘤标志物检测在肺部占位病变鉴别诊断中的价值研究

目的研究EGFR基因突变与系列肿瘤标志物在160例原发性肺癌患者及51例肺部良性占位病变患者中的表达状况,为肺部占位病变的诊断、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法 160例肺癌患者取新鲜病理组织标本,采用扩增阻滞突变系统荧光PCR(ARMS-PCR)技术检测EGER基因突变;160例肺癌患者和51例良性占位病变患者取外周静脉血用化学发光法检测系列肿瘤标志物,用χ2检验统计分析数据。结果 160例肺癌病例中,EGFR基因野生型比率为47.56%(78/164),EGFR基因突变型比率为52.44%(86/164),突变型中21L858R点突变占23.17%(38/164),19Del缺失突变占22.56%(37/164)。肺癌组中系列肿瘤标志物较良性占位组具显著高表达,P<0.01。差异有统计学意义。结论肺癌致病与EGFR基因突变、肿瘤标志物高表达有显著正相关,通过肿瘤标志物和EGFR基因突变检测,结合影像学检查,将有助于肺部占位病变诊断和鉴别诊断,并为治疗手段选择提供参考依据。     

ARMS 法在检测肺癌晚期患者肿瘤组织和血浆表皮生长因子受体基因突变中的应用

目的：应用探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应（ ARMS－PCR）检测晚期肺癌患者血清游离DNA和肿瘤组织中表皮生长因子受体（ EGFR）基因突变,探索两者间的一致性。方法同时收集53例未经治疗的肺癌Ⅲb～Ⅳ期患者的原发灶肿瘤组织和外周血,分别提取DNA,采用ARMS－PCR扩增EGFR基因的第18、19、20和21外显子突变,对结果不一致的标本用微滴式数字PCR法对外周血标本进行验证。结果血浆EGFR基因突变检测的灵敏度为51.4％（17／33）,特异度为100％;血浆EGFR基因的突变率为29.4％;16例血浆和组织结果不一致的标本,数字PCR检测的结果与血浆游离DNA检测的结果一致。结论血浆游离DNA为监测Ⅲb～Ⅳ期肺癌患者原发肿瘤中EGFR基因突变提供了新的来源, ARMS法是检测血浆游离DNA中EGFR基因突变的可靠有效方法。     

不同分析技术对不同类型标本的EGFR基因突变检测分析比较

目的:比较DHPLC法和ARMS技术检测非小细胞肺癌患者3种不同类型标本的EGFR基因突变情况。方法:收集50例非小细胞肺癌患者的新鲜肺癌组织标本、石蜡切片和血液标本。分别用DHPLC法和ARMS技术同时检测其3种不同类型标本的EGFR基因的突变情况。再用直接测序法来检验以上3种类型标本的EGFR基因突变情况。结果:DHPLC法与直接测序法结果大致相同,ARMS技术检出率明显高于DHPLC法,两组新鲜肺癌组织标本的检出率差异具有统计学意义(P<0.05),石蜡切片标本和血液标本的检出率差异不具有统计学意义(P<0.05),(P<0.05)。ARMS技术中3种类型标本的检出率相比,差异不具有统计学意义(P<0.05)。结论:ARMS技术检测新鲜肺癌组织EGFR基因突变的检出率明显高于DHPLC法和直接测序法,全血标本的DHPLC法可作为EGFR基因的初筛检测,ARMS技术可用于无法确认的EGFR突变基因检测。     

非小细胞肺癌患者血浆EGFR基因突变的检测

目的应用探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆游离DNA中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况。方法收集本院182例非小细胞肺癌晚期患者的外周血,分别提取循环DNA,采用ARMS-PCR扩增EGFR基因的第18、19、20和2l外显子突变,并将部分病例结果与同时期组织或胸水检测结果进行比较分析。结果血浆EGFR基因的突变率为28.0%,主要以19-del突变为主,构成比占56.9%;腺癌患者突变率高于鳞癌患者,差异有统计学意义(32.7%vs.6.7%,P0.05),未发现血浆EGFR基因突变率与性别、年龄、病理分期和分化程度相关;64例血浆与组织检查结果比对一致率为71.9%,16例血浆与胸水检查结果比对一致率为75.0%,血浆与组织和胸水的检测结果比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论晚期非小细胞肺癌患者血浆EGFR基因的突变率比肿瘤组织和胸水标本低,肿瘤组织仍是最佳的检测标本,实在难以获取肿瘤组织时血浆标本是有效的补充。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织及外周血EGFR基因突变研究

目的:调查非小细胞肺癌(NSCLC)患者EGFR基因突变的情况,评价EGFR突变检测对NSCLC个体化治疗的指导意义。方法:收集39例经手术治疗的NSCLC患者肿瘤组织、正常肺组织及外周静脉血标本,提取基因组DNA后,采用PCR扩增和基因测序方法检测EGFR基因外显子19、20和21基因突变情况,并用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果:EGFR在正常肺组织中都未检出基因突变;肺癌组织中EGFR基因突变率为30.8%(12/39),以杂合性突变为主(91.7%,11/12),纯合性突变少见(8.3%,仅1例),外显子19、20和21分别占突变总数的41.7%(5/12),25.0%(3/12)和33.3%(4/12);外周血中检出的EGFR的突变率为33.3%(4/12),全部为肿瘤组织中存在突变者;EGFR基因突变多见于女性、腺癌及腺鳞癌、"不吸烟"患者,与年龄、临床分期均无明显相关性(P>0.05),与吸烟高度相关(P<0.01)。结论:NSCLC患者EGFR基因突变率较高,EGFR基因突变检测对NSCLC患者个性化治疗可能有指导意义。     

浙江省非小细胞肺癌患者EGFR基因与EML4-ALK融合基因突变的检测及其临床特征

目的:检测中国人非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因和棘皮动物微管相关蛋白样-4与渐变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因的突变情况,同时分析这两种基因与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床病理特征的关系?方法:采用PCR扩增和基因测序法检测252例NSCLCs EGFR基因外显子19和21的突变情况,real-time PCR法检测EML4-ALK融合基因的突变情况,分析突变与临床特征的关系?结果:252例非小细胞肺癌组织标本EGFR的突变率为38.8%(98例),其中19外显子突变率为15.8%(40例),21外显子突变率为23.0%(58例)?EGFR突变的患者多为女性?无吸烟史和腺癌(P < 0.05),与患者年龄无关(P > 0.05)?252例非小细胞肺癌组织标本中,EML4-ALK融合基因突变率4.7%(12例)?EML4-ALK基因突变患者多为女性和年龄较小者(P < 0.05),与患者吸烟史和病理类型无关(P > 0.05)?没有检测到EGFR和EML4-ALK的突变共存情况?结论:中国人中NSCLCs的EGFR突变率较高,在使用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗前进行EGFR基因突变检测很有必要?EML4-ALK基因突变代表了NSCLC另一种分子亚型,这为临床NSCLC患者的治疗提供了一种新的选择方案?EML4-ALK融合基因突变与EGFR突变共存是罕见的现象?