两种诱导免疫耐受的方法在大鼠→兔异种心脏移植模型中 …

0　引言　异种器官移植的主要障碍就是受者对异种移植物的超急性排斥 .同种移植免疫耐受的诱导成功 ,使得诱导对收稿日期 :1999-10 -2 5 ;　修回日期 :2 0 0 0 -0 3 -15作者简介 :何显力 ( 1967-) ,男 (汉族 ) ,吉林省榆树县人 .博士 ,主治医师 ,讲师 . Tel.( 0 2 9) 3 5 7773 1异种供体的永久性耐受变得十分吸引人 .我们对建立造血嵌合体及供者特异性抗原受者胸腺内注射等诱导免疫耐受的方法在大鼠→兔异种心脏移植模型中进行了尝试 .1　材料和方法1.1　材料　健康青年 Wistar大鼠 (2 0 0～ 2 5 0 g) ,健康青年新西兰兔 (1.5～ 2 .5 kg,分…     

小鼠→大鼠异位心脏移植模型的建立

目的：建立小鼠→大鼠异种心脏移植动物模型。方法：选择NIH小鼠和Wistar大鼠分别作为供体和受体。小鼠升主动脉与大鼠右颈总动脉端端吻合,小鼠肺动脉与大鼠右颈外静脉端端吻合以建立小鼠→大鼠颈部异位心脏移植模型。排斥后取移植心脏作病理学检查。结果：移植成功率87％(13/15)。移植心脏平均存活时间2.15±0.90天。病理检查发现排斥心脏中广泛血管内血栓形成,出血及炎症细胞浸润,部分心肌有局灶性梗塞和凝固性坏死。结论：本模型容易操作,易于观察,稳定可靠,是研究异种移植较理想的动物模型。     

豚鼠至大鼠异种小肠移植模型的建立

目的 建立袖套法豚鼠至大鼠异种小肠移植模型,初步观察异种小肠移植超急性排斥反应的过程。方法 行异种异位全小肠移植,移植小肠肠系膜上动脉（腹主动脉）与受体肾以下腹主动脉作端侧吻合,切除小肠肠系膜上静脉（门静脉）与受体左肾静脉行袖套吻合。结果共实施异种小肠移植４０例,成功３４例,供受体手术时间平均为１５０ｍｉｎ,血管吻合成功率达９０％。再灌流后１５～２０ｍｉｎ移植小肠发生超急性排斥反应,表现为移植小     

大鼠-兔异种异位心脏移植模型的建立

目的　研究非协调性异种心脏移植 ,建立大鼠 -兔异位心脏移植模型。　方法　以 SD大鼠为供体 ,新西兰白兔为受体 ,应用袖套技术 ,将供心主动脉与受体颈总动脉、供心肺动脉与受体颈外静脉吻合。　结果　完成实验 4 8例 ,手术成功率 10 0 %。供心缺血时间 12± 5 min,吻合时间 2～ 4 min。　结论　应用袖套技术建立大鼠 -兔异位心脏移植模型 ,克服了腹腔心脏移植的局限性 ,简化了心脏移植实验技术     

豚鼠至大鼠异种小肠移植模型的建立

目的建立袖套法豚鼠至大鼠异种小肠移植模型,初步观察异种小肠移植超急性排斥反应的过程。方法行异种异位全小肠移植,移植小肠肠系膜上动脉（腹主动脉）与受体肾以下腹主动脉作端侧吻合,切除受体左肾,移植小肠肠系膜上静脉（门静脉）与受体左肾静脉行袖套吻合。结果共实施异种小肠移植40例,成功34例,供受体手术时间平均为150min,血管吻合成功率达90％。再灌流后15～20min移植小肠发生超急性排斥反应,表现为移植小肠变黑,肠蠕动停止,失去活力。结论袖套法豚鼠至大鼠异种小肠移植模型具有操作简便、静脉吻合口并发症少的优点,是研究异种小肠移植较好的模型。     

种植受体血管内皮细胞在异种血管移植中的实验研究

To investigate the possible significance and usefulness of reseeding the endothelial cell of recipient for the prevention of hyperacute rejection (HAR) resulting from the xenograft. METHODS: Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly endothelial cells from rat abdominal aorta were separated and cultured. Secondly the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. Thirdly, the guinea pig vessels reseeded with rat endothelial cells were transplanted to rat in vivo. The thrombrosis time was observed. The condition of deposit of IgM and C3 in the recipient's transplanted vessel endothelium was examined by immuno-fluorescence staining assay. RESULTS: The thrombrosis time of the guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cells (20.3 + 4.42 h) was significantly prolonged as compared with that of the normal guinea pig vessel (0.35 + 0.284 h) and the guinea pig vessel that had been deprived of endothelium (0.165 + 0.77 h). No deposit of IgM and C3 was seen in the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group, whereas deposit of IgM and C3 was observed in the untreated normal guinea pig aorta. CONCLUSION: Donor vessels reseeded with endothelial cells from the recipient will undergo less severe rejection and this technique may be very useful in the attenuation of HAR.     

免疫细胞在小鼠→大鼠心脏移植排斥反应中的作用

目的 :探讨T细胞、巨噬细胞 (MΦ)和自然杀伤细胞 (NK)细胞在小鼠→大鼠心脏移植反应中的作用 .方法 :动物随机分 4组 :对照组、环孢素A(CsA)组、环磷酰胺 (CyP)组和CsA +CyP组 .排斥后取移植心脏作病理学检查 .用免疫组织化学法检测CD4 ,CD8,CD5 7和CD6 8在移植物中的沉积 .结果 :单用CsA (2 .6± 1.5 )d或CyP(3.2± 1.6 )d均不能显著延长异种移植物的存活时间 ,联用CsA和CyP使移植心脏存活 (4 .7± 1.4 )d (P <0 .0 5 ) .病理检查发现被排斥心脏中大量细胞浸润 ,所有被排斥心脏中均有大量NK细胞和MΦ浸润 ,但未见CD4 +和CD8+T细胞浸润 .结论 :NK和MΦ在小鼠→大鼠心脏移植反应中起重要作用 ,而与T细胞无明显相关 .     

豚鼠至大鼠异种小肠移植超急性排斥的初步观察

目的 建立袖套法豚鼠至大鼠异种小肠移植模型,初步观察异种小肠移植超急性排斥反应的过程。方法 行异种异位全小肠移植,移植小肠脾性系膜上动脉（腹主动脉）与受体肾以下腹主动脉作端侧吻合,切除受体左肾,移植小肠肠系膜上静脉（门静脉）与受体左肾静脉行袖套吻合;在手术显策镜下观察超急性排斥的大体变化。结果 共实施异种小肠移植４０例,成功３４例,供受体手术时间平均１５０ｍｉｎ,血管吻合成功率达９０％。再灌流后１     

小鼠对大鼠异种皮肤移植耐受的诱导

目的探索更为温和的适合临床应用的诱导异种移植耐受的方案。方法给小剂量照射（ 300 rad）的 C57BL/6 (B6)小鼠静脉注射抗小鼠 CD4单抗 0.5 ml后输注 Lewis大鼠骨髓细胞 ,并联合应用腹腔注射环磷酰胺诱导耐受。于耐受诱导后 30 d对受体小鼠作耐受状态的检查,包括供体特异性皮肤移植、混合淋巴细胞反应（ MLR）及迟发型超敏反应（ DTH）。并通过过继转移实验、外源 IL- 2对耐受小鼠供体特异性 MLR的影响等进一步探讨耐受形成的机制。结果 Lewis大鼠的皮肤移植物在耐受 B6小鼠中存活期特异性延长, MLR及 DTH检查证明 B6小鼠对 Lewis大鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第三者 DA大鼠及 BALB/c小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫应答。体内外过继转移实验表明 ,耐受不能被转移 ,未发现抑制细胞的存在。耐受小鼠供体特异的 MLR可以被外源 IL- 2逆转 ,说明耐受主要不是克隆排除,而与克隆不应答有关。结论应用低剂量照射、骨髓移植、环磷酰胺及抗 CD4单抗等方法法可以有效诱导出小鼠对大鼠的移植耐受。     

中华眼镜蛇蛇毒及复方丹参抑制异种移植免疫排斥的实验研究

目的：研究中华眼睛蛇蛇毒因子（CCV）及复方丹参在异种移植中的作用。方法；采用颈部套袖法建立豚鼠对大鼠心脏异种移植模型。于术前24h按0.5mg/kg ip CCV，术中以复方丹参注射液灌注供心并iv复方丹参。研究对照组，CCV组和CCV 丹参组供心存活时间，复跳时间及血清补体水平的变化。结果：CCV可明显降低血清补体水平，延长供心存活时间，复方丹参注射液可缩短供心复跳时间。二者合用可进一步延长供心存活时间。结论：在异种移植中补体起着关键的作用，CCV通过降低血清补体水平抑制超急性排斥反应（HAR）的发生，复方丹参可减少供心缺血损伤，并改善微循环，CCV和复方丹参合用对HAR有良好的抑制效果。     

小鼠和大鼠异种心脏移植模型的建立

目的为了进行抗移植排斥反应药物的筛选,建立异种心脏移植模型.方法采用小鼠心脏主动脉和肺动脉异位与大鼠肾脏动脉和肾静脉端-端吻合,共进行预实验10次,正式实验5次,成功4次.结果平均心脏成活时间(77.55±4.60)h.结论该方法简单、快速、可靠,适用于异种移植和抗排斥药物的筛选.     

一种简易异种肾移植动物模型的建立

目的　建立一种简易的豚鼠到大鼠异种肾移植模型。方法　以豚鼠及SD大鼠为供体、以SD大鼠为受体 ,采用原位肾灌注 ,易位移植 ,供、受体手术交替进行的方案 ,建立异种肾移植模型 ,观察豚鼠到大鼠异种移植肾的组织病理变化及超微结构改变。结果　经数次训练后 ,30只大鼠肾移植术均获成功 ,手术时间 (90 79±5 11)min ,植肾时间 (15 88± 0 6 4 )min ,供肾热缺血时间 (0 15± 0 0 5 )min ,供肾冷缺血时间 (18 86± 1 2 3)min。移植肾发生超急性排斥反应时表现为肾间质出血 ,毛细血管内血小板聚集、附壁 ,肾小球破坏等。结论　经改进的豚鼠到大鼠异种肾移植模型 ,具有血管吻合技术要求难度低 ,成功率高 ,可重复性强的优点。     

豚鼠至大鼠异种小肠移植超急性排斥的电镜观察

目的：在袖套法豚鼠至大鼠异种小肠移植模型的基础上，观察异种小肠移植超急性排斥反应超微结构的变化。方法：行异种异位全小肠移植，再灌流后0min、5min、排斥后分别取标本作透射电镜观察。结果：再灌流后数分钟，移植小肠血管内皮细胞间结合部分开，显露出内皮下基质，血小板聚集并黏附至血管内皮表面。结论：异种小肠移植发生的超急性排斥反应与异种心、肾移植具有相似性。     

小鼠-大鼠颈部及腹部异种心脏移植模型的建立及比较

目的:建立并比较小鼠—大鼠颈部和腹部协调性异种心脏移植模型。方法:用昆明小鼠和Whister大鼠分别做供体和受体,将小鼠的升主动脉和肺动脉和肺动脉分别与大鼠的右颈总动脉和右颈外静脉端端吻合,建立颈部异种心脏移植模型;将小鼠的升主动脉和肺动脉分别与大鼠的腹主动脉和下腔静脉端侧吻合,建立腹部异种心脏移植模型。通过取心时间、血管吻合时间及并发症对颈部和腹部模型进行比较。结果:正式实验阶段颈部和腹部模型的移植成功率分别为90％和93.3％,移植心平均存活时间分别为2.67±0.73和2.43±0.69天,并发症发生率明显低于预实验阶段。病理检查移植心呈典型的急性血管性排斥改变。结论:小鼠—大鼠颈部和腹部心脏移植模型有各自的特点,经过一定时期的训练,均可稳定的用于实验,是研究协调性异种移植的理想模型。     

E-selectin在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达

目的:观察小鼠→大鼠异种心脏移植后延迟性排斥反应(DXR)的病理特征,研究E-selectin在异种移植心脏的表达变化,探讨DXR发生机制。方法:袖套法建立小鼠→大鼠颈部异位异种心脏移植模型,将接受异种心脏移植的大鼠随机分为5组,1组(n=16)在供心停跳时取心,余4组(每组n=4)分别在移植术后3、8、16、24 h供心仍跳动时取心,另取未移植小鼠心脏作为对照组(n=4)。各组标本作HE染色、免疫组化SABC法检测E-selectin表达变化。结果:移植心脏HE染色表现为血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血、炎症细胞浸润等病理特征随移植术后时间逐渐加重,完全排斥时部分心肌凝固性坏死及溶解、广泛间质出血、血管结构崩解及血管内血栓形成、严重炎症细胞浸润。对照组心脏无E-selectin表达,移植组心脏在移植后3 h即有E-selectin表达于血管内皮细胞,且随时间推移表达逐渐增强,排斥时达到高峰。结论:血管内皮细胞激活参与DXR发生,E-selectin表达与DXR发生和发展密切相关,E-selectin表达可早期提示DXR发生。     

小鼠-大鼠异种异位心脏移植模型的建立

异种移植是移植外科的热点和发展方向 ,有望为临床移植提供充足的供体来源 ,但是异种移植后会发生严重的超级性排斥反应 ［１］,制约了其在临床的应用。本文采用Ｈｅｒｏｎ颈部套袖法加以改进建立小鼠 -大鼠异种异位心脏移植模型 ［２］,为异种移植的深入研究提供参考。１材料和方法１．１实验动物供体为昆明小鼠 ,雄性 ,体重３０～４０ｇ,受体为雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,体重２００～２５０ｇ,由天津市药物研究所提供。１．２实验器材包括德国蔡司双人双目显微镜 ,显微手术器械。血管套管为Ｖｅｎｆｌｏｎ静脉留置针导管 ,连接颈外静脉的套管…     

胸腺内注射不同剂量的异基因抗原诱导大鼠同种异体神经移植的免疫耐受反应

目的 探讨大鼠胸腺内注射不同剂量异基因抗原(MHC),诱导大鼠同种异体坐骨神经产生的特异性免疫耐受反应.方法 雄性Wistar大鼠20只为供体,选用清洁级雄性SD大鼠50只为受体,受体随机分为5组,每组10只:A:新鲜自体神经移植组;B:新鲜异体神经移植组;C、D、E组分别为低、中、高剂量异基因抗原注射异体神经移植组,剂量分别为1 5 mg、3 0 mg、6 0 mg.术后2周进行运动神经传导速度、病理学、混合淋巴细胞培养(MLC)和血清sIL-2R检查.结果 胸腺内抗原注射组动物肢体的生理功能、免疫学、组织学及透射电镜指标恢复,其中,E组动物各项指标恢复最明显,与A组指标类似.结论 胸腺内注射异基因抗原可以诱导大鼠对异体坐骨神经移植的免疫耐受,在一定范围内,免疫耐受的程度与抗原量有关.     

高纯度蛇毒因子抗非协调性大鼠异种肝脏移植超急性排斥反应的机制研究

目的　探讨高纯度眼镜蛇毒因子 (CVF)对非协调性异种大鼠肝脏移植超急性排斥反应(HAR)和存活时间的影响及其机制。方法　实验分为CVF治疗组和对照组 ,每组各 2 0对。在豚鼠到大鼠肝脏移植前 2 4h实验组大鼠静脉注射CVF(5 0 μg/kg) ,异种肝脏移植后记录受体生存时间 ,并观察移植肝的病理变化 ,免疫荧光法检测肝脏血管C3沉积情况 ,用大鼠TNF αELISA试剂盒检测异种肝脏移植术后 1h血清中细胞因子TNF α水平。结果　肝脏移植后 ,对照组均发生了HAR ,肝内小血管血栓形成 ,间质出血 ,肝窦和中央静脉可见C3沉积 ,肠系膜淤血明显。实验组均无HAR发生 ,可见延迟性异种排斥反应 (DXR)的病理特征 ,血管内皮细胞 (EC)肿胀 ,单核细胞和中性粒细胞浸润 ,肝窦和中央静脉无C3沉积 ,肠道淤血不明显 ,血清TNF α水平下调 ,受体平均存活时间显著延长 (1 8±0 6与 7 4± 2 1h ,P <0 0 1)。结论　高纯度CVF清除补体可克服非协调性异种肝脏移植的HAR ,延长受体存活时间。CVF用于豚鼠到大鼠肝脏移植这一生命支持模型可以更深入地研究非协调性异种肝脏移植的相关机制     

改良协调性金黄地鼠到大鼠的异位腹腔异种心脏移植模型的建立

目的:建立一种改良的异位腹部异种心脏移植模型,解决模型建立中的技术问题. 方法:利用袖套法和cuff套管法完成从金黄地鼠到大鼠的异种心脏移植模型. 将供心的颈总动脉与受者左肾动脉进行袖套式吻合,将供心右肺动脉与受者左肾静脉利用套管法吻合. 每日通过对受体进行左侧腹壁触诊完成对供心功能的评价. 结果:共实施105例异位腹部异种心脏移植模型,95例成功. 异种移植物生存期为移植后3～4 d,并且发生经典急性血管性排斥反应. 结论:建立了一种简便、实用、稳定的用于研究协调性异种移植免疫排斥反应发生机制的动物模型.     

HO-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的:探讨血红素氧合酶-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立NIH Wistar颈部异位心脏移植模型,分别于移植前、移植后1h、6h、12h、24h、48h和72h切取移植心脏,应用RT-PCR、Western Blot检测HO-1mRNA、HO-1蛋白表达并检测HO 1酶活性;同时比较钴原卟啉(CoPP)诱导HO-1对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响.结果:移植心脏均有HO-1表达,HO-1mRNA(t=2.5170,P＜0.05)、HO-1蛋白表达(t=2.3702,P＜0.05)及酶活性(t=2.246,P＜0.05)移植术后24～48h表达到达高峰;CoPP诱导的HO-1明显延长了移植心脏的存活时间(t=4.74442,P＜0.001).结论:HO-1表达在延迟性异种心脏移植后24～48h到达高峰;CoPP诱导的HO-1能延长延迟性异种心脏移植的存活时间.