牛蒡子苷元抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨牛蒡子苷元(ATG)抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响。方法通过脑内注射Ⅲ型肺炎链球菌建立脑膜炎大鼠模型,并随机分为模型组、ATG低(ATG-L)、中(ATG-M)、高(ATG-H)剂量组以及ATG-H+重组高迁移率组蛋白B1(rHMGB1)组,另取正常大鼠为对照组,10只/组。治疗结束后,对各组大鼠进行神经系统评分;分离大鼠脑组织,检测其病理变化、含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及神经元细胞凋亡,同时检测HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05);ATG-L组、ATG-M组、ATG-H组小鼠神经系统评分均较模型组显著增加(均P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TUNEL荧光染色阳性细胞数量、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65均较对照组显著下降(均P<0.05);ATG-H+rHMGB1组较ATG-H组神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05)。结论ATG可抑制肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

Toll样受体4通路参与高糖诱导的心房细胞纤维化

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抑制剂TAK242对高糖引起的小鼠心房肌细胞纤维化蛋白表达的影响。方法高糖培养小鼠心房肌细胞系,实验细胞分为4组,对照组、对照抑制组、高糖对照组和高糖抑制组。观察TLR4、白细胞介素受体相关蛋白1(IRAK1)、NF-κB和Ⅰ型胶原A1表达水平,应用TLR4抑制剂TAK242抑制TLR4活性,观察IRAK1、NF-κB及Ⅰ型胶原A1表达。结果与对照组和对照抑制组比较,高糖对照组TLR4和IRAK1表达明显升高,差异有统计学意义(P0.05);高糖抑制组IRAK1表达较高糖对照组有减低趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。高糖对照组NF-κB表达明显高于对照组和对照抑制组,且对照组NF-κB表达明显高于对照抑制组,差异有统计学意义(P0.05);高糖抑制组NF-κB表达明显低于高糖对照组(1.52±0.08 vs 1.84±0.13,P0.05)。与对照组和对照抑制组比较,高糖对照组Ⅰ型胶原A1表达明显升高;高糖抑制组Ⅰ型胶原A1表达明显低于高糖对照组(0.92±0.13 vs 1.36±0.12,P0.05)。结论 TLR4抑制剂能够下调高糖诱导的心房细胞纤维化蛋白。     

蓝萼甲素调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对克雷伯菌肺炎大鼠炎性损伤的影响北大核心CSCD

目的研究蓝萼甲素(GLA)对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF-κB)信号通路的调节作用,探讨其减轻克雷伯菌肺炎大鼠炎性损伤的作用机制。方法将SD大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(M组)、GLA低剂量组(10 mg/kg组)、GLA中剂量组(20 mg/kg组)、GLA高剂量组(40 mg/kg组)和左氧氟沙星组(10 mg/kg),每组10只。通过将克雷伯菌注入气管建立大鼠肺炎模型。造模成功第2 d开始给药,连续7 d。将小鼠处死,取左肺组织称重,计算干重/湿重;HE、TUNEL染色观察肺组织病理变化及细胞凋亡情况;ELISA检测血清中白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western blot检测肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果与NC组相比,M组小鼠肺组织出现肺泡塌陷、肺泡壁厚度增加等病理现象,W/D值、肺细胞凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-1β含量及HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均显著上升(均P<0.05);与M组相比,GLA低、中、高剂量组和左氧氟沙星组肺组织损伤减轻,W/D值、肺细胞凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白水平,IL-6、TNF-α、IL-1β含量及HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白水平均显著下降(均P<0.05)。结论GLA可减轻机体炎性损伤,改善克雷伯菌感染引发的肺炎病情,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨槲皮素对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响

目的 探究槲皮素介导Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响。方法 饲养SD大鼠，二甲基肼构建直肠癌模型，用不同浓度的槲皮素(25、50、75 mg/kg)处理7 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平，苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理学变化，qRT-PCR和Western印迹检测TLR4、NF-κB p65的表达，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况；结果 与NC组相比，Model组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达显著升高；结肠组织上皮细胞不规则，结构被破坏；TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著升高；G0/G1期细胞明显减少，S期细胞明显增多，细胞凋亡率明显减少(P<0.05);与Model组相比，槲皮素处理各组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α显著降低，组织病理结构稍微有所改善，TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达明显降低，G0/G1期细胞明显增多，S期、G2/M期细胞明显减少，细胞凋亡率明显增多(P&l...     

电针对氯苯丙氨酸致失眠大鼠Toll样受体/核因子-κB信号通路的影响

目的观察电针对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠脾脏Toll样受体(TLR)/核因子(NF)-κB信号通路关键基因mRNA表达的影响。方法取健康SPF级Wistar雄性大鼠16只,随机分成对照组、模型组、安定组和电针组,每组4只。模型组以腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,安定组给予腹腔注射安定,电针组给予电针百会、神庭穴位,连续治疗5 d后用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定大鼠脾脏TLR3、TLR4、髓样分化蛋白(My D)88、TAB2及NF-κB mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠脾脏TLR3、TLR4、My D88、TAB2及NF-κB mRNA表达水平显著增高(P0.05);与模型组比较,安定组和电针组大鼠脾脏TLR3、TLR4、My D88、TAB2及NF-κB mRNA表达水平显著下降(P0.05),但电针组与安定组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论失眠可以上调TLR/NF-κB信号通路相关基因mRNA表达,TLR/NF-κB信号通路可能参与免疫与睡眠的调节;电针可通过调节TLR/NF-κB信号转导通路调控相关免疫物质的释放而改善睡眠质量。     

柴胡颗粒对发热大鼠体温、M1/M2型巨噬细胞极化及TLR4/NF-κB蛋白的作用机制

目的 探讨柴胡颗粒对发热大鼠体温、M1/M2型巨噬细胞极化及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB蛋白的作用机制。方法 66只大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、阿司匹林组、柴胡颗粒低、中及高剂量组,每组11只。除正常组外,其余大鼠均建立内毒素炎症发热大鼠模型,建模成功后,柴胡颗粒低剂量、柴胡颗粒中剂量及柴胡颗粒高剂量大鼠分别灌胃5.40、10.80及21.60 g/kg的柴胡颗粒,阿司匹林组灌胃0.081 g/kg的阿司匹林溶液,其余大鼠灌胃等量(约2 ml)的蒸馏水。采用电子体温计在建模前、建模后第8天、给药后2、3及4 h检测体温;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、前列腺素(PG)E2及白细胞介素(IL)-1β水平,提取各组脾脏计算脾脏重量及脾脏指数;提取及分离巨噬细胞采用流失细胞检测巨噬细胞M1及M2极化情况;Western印迹检测巨噬细胞中NF-κB、TLR4及髓样分子因子(MyD88)蛋白表达。结果 模型组活动、活跃程度均降低,饮水量升高,皮毛光泽度较差,粪便稀软。柴胡颗粒低、中、高剂量组及阿司匹林组活动及活跃程度有所升高,正...     

红花黄素对脊髓损伤大鼠的保护作用

目的探究红花黄素(SY)对脊髓损伤(SCI)的保护作用及其作用机制。方法将SCI模型大鼠分为模型(Model)组、重组高迁移率组蛋白(HMG)B1处理组(HMGB1组,8μg/kg)、SY干预组(SY组,40 mg/kg)、HMGB1+SY组(8μg/kg HMGB1+40 mg/kg SY),另设假手术(Control组),各组均12只,各组连续给药28 d。行为学运动(BBB)评分法评定运动行为;获取脊髓组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理形态学变化;免疫印迹法(WB)检测脊髓组织中HMG B1、Toll样受体(TLR)4、核转录因子(NF)-κB蛋白表达;制备脊髓组织匀浆液,采用酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHP)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;Tunel染色观察脊髓组织中神经元细胞凋亡情况;Western印迹法检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Cleaved-caspase3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与Control组相比,Model组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Model组相比,HMGB1组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);SY组、HMGB1+SY组与Model组及HMGB1组比较BBB评分显著升高,SOD、GSHP、CAT水平显著升高,MDA水平显著降低,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低,脊髓组织神经细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论 SY可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,缓解SCI后氧化应激水平,减低脊髓组织神经元细胞凋亡,缓解脊髓组织、运动功能损伤。     

丁苯酞和TLR4抑制剂预处理对冠状动脉微栓塞大鼠心肌损伤的改善作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)联合Toll样受体4(TLR4)抑制剂预处理对冠状动脉微栓塞大鼠心肌损伤的改善作用及机制.方法 将32只SD大鼠按随机数字表法分为NBP+TAK-242组、NBP组、CME组、Sham组,每组8只.NBP+TAK-242组CME术前予NBP 80 mg/kg连续灌胃7 d,CME术前30 min按2 mg/kg尾静脉注射0.5 mg/mL的TLR4抑制剂TAK-242;NBP组CME术前予NBP 80 mg/kg连续灌胃7 d;其余各组同法注射4 mL/kg的生理盐水.然后,NBP+TAK-242组、NBP组、CME组左心室注入直径42μm微栓塞球混悬液0.1 mL,Sham组注射0.1 mL生理盐水.CME术后6 h,检测各组大鼠心功能指标,苏木精—伊红染色(HE)及苏木精—碱性品红苦味酸染色(HBFP)观察心肌组织病理改变;RT-PCR检测心肌组织TLR4 mRNA,Western blotting法检测心肌组织TLR4通路相关蛋白(TLR4、myD88、NF-κB)及炎性因子(IL-1β、TNF-α蛋白).结果 与Sham组相比,CME组大鼠心功能射血分数(LVEF)和短轴缩短率(FS)降低(P均<0.01),左心室收缩末期内径(LVEDs)增加(P<0.01);HE染色可见明显白细胞浸润,心肌微梗死面积增加(P<0.01);心肌TLR4 mRNA相对表达量升高(P<0.01);心肌TLR4通路相关蛋白及炎性因子相对表达量升高(P均<0.05).与CME组相比,NBP组及NBP+TAK-242组LVEF、FS升高(P均<0.01),左心室舒张末期内径(LVEDd)、LVEDs降低(P均<0.01);心肌炎性细胞浸润减少,心肌微梗死面积减少(P均<0.01);TLR4 mRNA相对表达量降低(P<0.01);心肌TLR4通路相关蛋白及炎性因子相对表达量均降低(P均<0.05).与NBP组相比,NBP+TAK-242组LVEF、FS升高(P<0.05);心肌炎性细胞浸润较少,心肌微梗死面积减少(P<0.01);心肌TLR4、MyD88、IL-1β、TNF-α蛋白相对表达量进一步降低(P均<0.05).结论 NBP和TLR4抑制剂预处理可改善冠状动脉微栓塞大鼠的心肌损伤,预处理效果优于单用NBP,其作用机制可能与抑制LR4/myD88/NF-κB信号通路及炎性因子有关.     

健脾清化中药复方对慢性萎缩性胃炎大鼠TLR4/NF-κB/COX-2信号通路的影响

[目的]探讨健脾清化中药复方对慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠TLR4/NF-κB/COX-2信号通路的影响。[方法]wistar大鼠随机分为空白组、造模组。造模组大鼠前12周利用20mmol/L去氧胆酸钠溶液灌胃(2ml/次/d)联合60%乙醇空腹灌胃(每次2ml,2次/周)及0.5g/L氨水自由饮用,建立CAG大鼠模型。确认造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组各8只;将空白组大鼠随机分为空白对照组和空白中药组各8只。中药低剂量、高剂量组、空白中药组分别按照1.5ml/kg、6ml/kg、6ml/kg的健脾清化复方原液剂量并予生理盐水补齐至4ml灌胃,空白对照组及CAG模型组给予生理盐水4ml灌胃,均1次/d,给药30d。观察各组大鼠的胃组织病理组织学变化,以及对TLR4、NF-κB、COX-2、MYD88mRNA表达量的影响。[结果]中药干预组胃黏膜萎缩情况明显好转,与模型组比较显著差异(P0.01),以中药高剂量组疗效更为显著。与空白组比较,模型组、中药高、低剂量组TLR4、NF-κB、COX-2、MYD88mRNA水平均明显增高(P0.01)。同模型组比较,中药高、低剂量组TLR4、NF-κB、COX-2、MYD88mRNA水平有下调(P0.01),特别以中药高剂量组表现明显。[结论]健脾清化中药复方对CAG大鼠胃黏膜组织病理有明显改善作用,并可有效阻断TLR4/NF-κB/COX-2信号通路的持续活化。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞的影响及作用机制

目的基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨大蒜素对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)的影响及作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、大蒜素低、中、高剂量组,每组10只,其中空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,阳性对照组给予瑞舒伐他汀[3.0 mg/(kg·d)]灌胃,大蒜素低、中、高剂量组分别给予大蒜素[10、20、40 mg/(kg·d)]灌胃,预处理14天后,模型组、阳性对照组及大蒜素低、中、高剂量组采用左心室注射42μm微栓塞球造模,空白对照组采用左心室注射等体积生理盐水。检测大鼠心功能变化; HBFP染色法检测心肌微梗死面积; TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况; ELISA法检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;电化学法检测肌钙蛋白I(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平; RT-PCR法检测大鼠心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB p65(NF-κB p65) m RNA水平;Western blot法检测大鼠心肌组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达。结果大蒜素可显著改善CME大鼠心功能,明显降低心肌微梗死面积和心肌细胞凋亡率,有效抑制炎症因子IL-1β、TNF-α和心肌损伤指标c Tn I、CK-MB表达,明显下调TLR4、MyD88和NF-κB p65 m RNA和蛋白相对表达量。结论大蒜素可抑制CME大鼠心脏功能障碍和心肌损伤,其作用机制可能与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。