肿节风总黄酮调节MAPK/JNK 信号通路促进巨核细胞分化成熟

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/c-Jun N-末端激酶(JNK)信号通路探讨肿节风总黄酮对体外巨核细胞分化成熟障碍模型的影响及作用机制。方法 利用终浓度为5 ng·mL^-1的佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)和体积分数为1%的抗血小板血清(APS)联合作用于Dami细胞,构建体外巨核细胞分化成熟障碍模型。将细胞分为空白对照组、PMA诱导组(5 ng·mL^-1)、APS模型组(5 ng·mL^-1PMA+1%APS)以及肿节风总黄酮高、中、低剂量组(15.6、7.8、3.9μg·mL^-1肿节风总黄酮+5 ng·mL^-1PMA+1%APS)。分别于培养48、72、96 h后,采用化学发光法检测细胞增殖活力。培养96 h后,采用流式细胞术检测各组Dami细胞的巨核细胞表面标志物CD41a、CD42b和CD61表达情况;采用Western Blot法检测Dami细胞MAPK/JNK信号通路关键蛋白p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun的表达情况。结果 (...     

肿节风总黄酮促进巨核细胞增殖的效应动力学研究

目的 探讨肿节风总黄酮对体外培养巨核细胞增殖的影响及其效应动力学。方法 肿节风总黄酮（0.39 g·kg-1）单次灌胃给予正常SD大鼠,给药后不同时间点采血制备含药血浆。采用兔抗大鼠血小板相关抗体建立大鼠骨髓巨核细胞增殖障碍模型,并将不同时间点的含药血浆作用于该模型,以巨核细胞数、细胞上清液中血小板生成素（TPO）、转化生长因子-β1（TGF-β1）含量为效应指标,绘制时间-效应动力学曲线,计算相关动力学参数。结果 肿节风总黄酮含药血浆可以显著提升巨核细胞数,肿节风总黄酮对巨核细胞数、上清液中TPO及TGF-β1的效应半衰期分别为：495.52,665.13和537.46 min,达峰时间分别为：60,90和40 min,平均驻留时间分别为：224.60,242.37和231.10 min,其中巨核细胞数与TPO含量的效应曲线之间有较好的相关性,时间上稍有滞后现象。结论 肿节风总黄酮含药血浆可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖,可能与培养体系中TPO的浓度密切相关。     

肿节风总黄酮对巨核系细胞体外扩增的作用研究

目的: 探讨肿节风总黄酮(ZJF-HT)对小鼠骨髓巨核系细胞扩增的影响。 方法: 采用液体培养和半固体集落培养,观察ZJF-HT及其含药血清对成熟巨核细胞及巨核系祖细胞集落扩增的作用。 结果: 与模型组相比,ZJF-HT≥125 μg·mL^-1能使成熟巨核细胞数和巨核系祖细胞集落数增多(P<0.05);ZJF-HT含药血清在0.39%~6.25%体积浓度范围能增加成熟巨核细胞数,在0.20%~6.25%范围内能显著增加巨核系祖细胞集落数(P<0.01)。 结论: ZJF-HT及其含药血清均能促进巨核系细胞的体外扩增。     

UHPLC-Q-TOF/MS技术分析葛根醇提液中化学成分

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)法对葛根醇提液中各成分进行分析和鉴定。方法色谱分离采用Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(3.0 mm×100 mm,2.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min~(-1);采用双电喷雾离子源(Dual ESI),在正负离子模式下采集数据;一级质谱提供精确的分子量信息,误差限制在5×10-6以内,得到该分子量最为精确的元素组成;二级质谱提供化合物的裂解碎片信息,将该化合物的特征碎片离子与相关数据库和相关文献中报道的相关化合物信息进行比对,推测其可能的化学结构。结果在葛根醇提液中发现71个成分,主要为异黄酮类成分,另包含有机酸和甾醇类等成分,其中8个化合物尚未有相关文献报道,结构需进一步确认。结论该研究丰富了葛根中成分化学结构信息,为葛根药效物质研究奠定了基础。     

UHPLC-Q-TOF/MS分析黑顺片的化学成分

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对黑顺片中各成分进行分析和鉴定。方法:Poroshell 120 EC-C1 8柱(3.0mm×100mm,2.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,Dual ESI源,正离子模式下采集数据。结果:初步鉴定出黑顺片中70种化学成分,包括双酯型生物碱4种,单酯型生物碱22种,醇胺型生物碱23种,脂型生物碱4种,其他类型17种。结论:较全面地解析了黑顺片的化学成分,丰富了对黑顺片中化学物质的认识,为黑顺片药效物质研究奠定基础。     

肿节风总黄酮促进白血病K562细胞凋亡的效应及机制研究

目的:研究肿节风总黄酮促进人白血病K562细胞凋亡的效应及分子机制。方法:用系列浓度的肿节风总黄酮干预K562细胞24、48、72 h后,化学发光法检测细胞活力计算IC_(50),并依此将细胞分为空白对照组、肿节风总黄酮25、50、100μg/mL剂量组进行实验。AO-EB染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:肿节风总黄酮能够明显降低K562细胞存活率,且呈时间和剂量依赖关系,24、48、72 h的IC_(50)分别为(64.90±5.16)μg/mL、(50.60±4.00)μg/mL、(34.90±2.46)μg/mL。与空白对照组相比,50、100μg/mL的肿节风总黄酮明显促进K562细胞凋亡。Western blot实验显示,与空白对照组相比,肿节风总黄酮100μg/mL剂量组Caspase-3蛋白表达显著下调;肿节风总黄酮50和100μg/mL剂量组Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达显著下调;Bcl-2/Bax比值明显减小,Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显增大。结论:肿节风总黄酮能有效促进K562细胞凋亡,其机制可能与其下调Bcl-2、Caspase-3蛋白,上调Cleaved Caspase-3蛋白的表达有关。     

肿节风总黄酮及迷迭香酸、落新妇苷对大鼠骨髓巨核细胞增殖的影响

目的:探讨肿节风总黄酮部位及其成分迷迭香酸、落新妇苷对大鼠骨髓巨核细胞增殖及血小板生成素(TPO)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:采用兔抗大鼠血小板相关抗体(稀释倍数为128倍)建立大鼠骨髓巨核细胞增殖障碍模型,研究肿节风总黄酮部位500、250、125、62.5μg/ml,迷迭香酸500、250、125、62.5μg/ml及落新妇苷500、250、125、62.5μg/ml对大鼠骨髓巨核细胞增殖及培养上清液中TPO及TGF-β1含量的影响。结果:(1)肿节风总黄酮部位500、250、125μg/ml,迷迭香酸250、125μg/ml及落新妇苷500、250μg/ml均可显著促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖;(2)肿节风总黄酮部位500、250、125、62.5μg/ml,迷迭香酸500、250μg/ml及落新妇苷500、250、62.5μg/ml均可显著降低培养体系中TPO的含量;肿节风总黄酮部位250、125、62.5μg/ml及落新妇苷500、125μg/ml均可显著增加培养体系中TGF-β1的含量,迷迭香酸对培养体系中TGF-β1的含量无明显影响。结论:肿节风总黄酮部位、迷迭香酸及落新妇苷均可以促进大鼠骨髓巨核细胞的增殖,迷迭香酸及落新妇苷是肿节风总黄酮部位促骨髓巨核细胞增殖的物质基础。     

UHPLC-Q-TOF/MS分析美洲凌霄花与秋鼠曲草的化学成分

目的:分析美洲凌霄花和秋鼠曲草的化学成分。方法:采用UHPLC-Q-TOF/MS法,0.1%的甲酸:0.1%甲酸的乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min~(-1);进样量1μL;扫描波长为190~400 nm。结果:从美洲凌霄花甲醇提取物中鉴定出20个化合物,从秋鼠曲草乙醇提取物中鉴定出19个化合物。结论:美洲凌霄花主要含有三萜及皂苷类成分,秋鼠曲草主要含有黄酮类成分,UHPLC-Q-TOF/MS用于分析植物的化学成分,方法简便,快速。     

青钱柳醇提物中化学成分的UHPLC-Q-TOF/MS分析

目的 应用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法（UHPLC-Q-TOF/MS）对青钱柳醇提物进行快速定性分析。方法 色谱条件为Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm,2.7 μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱（0~26 min,2%~18%B;26~60 min,18%~72%B;60~70 min,72%~100%B;70~71 min,100%~2%B;71~72 min,2%B）,流速0.4 mL·min^-1,进样量3 μL;质谱条件为电喷雾离子源（ESI）,检测范围m/z 50~1 100,正、负离子模式采集。通过安捷伦MassHunter工作站对所采集的数据进行处理,根据各化合物的保留时间、质谱信息,并结合现有文献及质谱数据库信息对化合物进行鉴定和裂解规律解析。结果 在正、负离子模式下,分别鉴定了52、55个化学成分,其中,正离子模式鉴定黄酮类14个、三萜类3个、有机酸类15个及其他类20个,负离子模式下则鉴定黄酮类18个、三萜类9个、有机酸类18个及其他类10个;汇总正、负离子模式并去除共有化合物,最终推测鉴定化合物87个,包括黄酮类22个、有机酸类27个、三萜类11个及其他类27个。结论 UHPLC-Q-TOF/MS技术可快速解析青钱柳的化学成分,1-酮糖和18β-甘草次酸等与青钱柳降糖活性相关的成分首次在该药材中被鉴定,可为阐明青钱柳药效物质基础提供实验依据。     

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的核桃楸皮成分分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术对核桃楸皮进行分析,确定其主要化学组分。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正负离子模式下采集数据,通过Peakview 2.0/masterview1.0及Markerview1.2.1软件进行目标及非目标筛查化合物,依据精确质量数和同位素峰度比确定化合物分子式,通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定化合物结构式。结果鉴定或推断了核桃楸皮中44种主要化学成分,其中包括13个萘醌类化合物,3个二芳基庚烷类化合物,15个黄酮类化合物及13个其他类化合物。结论该方法快速、准确,为核桃楸皮的化学成分鉴定提供一种新的策略,主要化学成分的确定为质量评价指标选择及药理活性研究奠定了基础。     

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS的川乌生物碱成分分析

目的 建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS)技术对川乌中生物碱类化学成分进行快速鉴定的方法。方法 采用ACQUITY UHPLC BEH C₁₈柱(2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)色谱柱,以0.1%氨水(A)-乙腈(B)为流动相;洗脱程序为0~3 min,0~15% B;3~10 min,15%~40% B;10~16 min,40%~70% B;16~20 min,70%~90%进行梯度洗脱,柱温35 ℃,流速为0.3 mL·min^-1,进样量2 μL,正离子模式扫描。结果 最终从川乌中鉴定了141种生物碱类成分。其中单酯型生物碱37种,双酯型生物碱21种,三酯型生物碱2种,醇胺型生物碱80种及其他类生物碱1种。结论 该研究所建立的定性分析方法可系统快速地识别川乌中生物碱类化学成分,并为川乌的作用机制研究和产业开发提供一定的参考依据。     

基于UPLC-Triple TOF MS/MS和网络药理学技术分析打箭菊总黄酮部位保肝活性成分及其潜在靶点研究

目的:研究打箭菊总黄酮部位的主要化学成分,以其总黄酮中的化学成分结合网络药理学方法预测其保肝作用的潜在靶点。方法:采用80%乙醇加热回流提取打箭菊药材,提取液过AB-8大孔树脂柱,以30%乙醇洗脱获得总黄酮部位,利用UPLC-Triple TOF MS/MS技术对打箭菊总黄酮部位进行检测,通过对照品、分子量和质谱裂解规律对打箭菊化学成分进行鉴定。通过Pubchem数据库、Swiss Target Prediction数据库和Cytoscape分析软件构建打箭菊总黄酮化学成分-靶点作用网络图。结果:从打箭菊总黄酮部位中鉴定18个主要的化学成分,其中12个化学成分通过串联质谱进行了结构推测,6个化学成分通过对照品得到确证。通过网络药理学研究预测出打箭菊保肝作用的5个潜在靶点。结论:UPLC-Triple TOF MS/MS技术可用于打箭菊总黄酮部位的化学成分鉴定,通过网络药理学研究可预测打箭菊保肝作用的潜在靶点,为深入阐释打箭菊保肝作用机制提供参考依据。     

地黄炮制前后化学成分的UHPLC-Q-TOF/MS比较研究

目的比较地黄生品、酒品、蒸制品各项质控指标及化学成分的差异。方法按照中国药典2010版标准,测定地黄不同炮制品的水分、总灰分、醇溶性浸出物,并建立HPLC方法比较地黄不同炮制品主要化学成分的差异,考察方法的线性、精密度、稳定性、重复性及加样回收率,同时使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)鉴定地黄不同炮制品的主要差异化学成分。结果地黄酒品和蒸品的水分分别为6.06%和10.02%,总灰分分别为6.70%和6.47%,酸不溶性灰分分别为2.63%和2.39%,水溶性浸出物分别为72.62%和77.81%,测定结果均符合中国药典2010版的要求。运用高分辨质谱鉴定了8个主要差异化学成分,即连翘酯苷E、洋地黄叶苷B、焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、异麦角甾苷、连翘酯苷、焦地黄苯乙醇苷D和地黄苷。结论地黄经炮制后梓醇含量显著上升,而其他主要化学成分的含量显著降低,这可能是不同炮制品临床功效存在差异的主要原因。     

基于HPLC/DAD/MS的降压复方决明提取物入血成分研究

目的:研究复方决明提取物(由决明子、野菊花、夏枯草组成)的入血成分,为其药效物质基础研究提供参考。方法:选取雄性SD大鼠为实验对象,以40 g(生药)/kg剂量灌胃给予复方决明提取物及单味药材。给药血浆首先采用直接蛋白沉淀法考察复方决明提取物入血成分及存在形式;后对其进行盐酸水解,并在280 nm和360 nm下分析吸收入血的主要苷元,进行来源归属和定性研究。结果:直接沉淀法制备的给药血浆与空白血浆比,新增成分主要为葡萄糖醛酸结合产物。酸解后,在280 nm波长下有11个入血成分,此类成分多来源于决明子,其中3号峰为橙黄决明素,7为黄决明素,10为大黄素,11号为大黄酚。360 nm下新增4个峰,主要来源于野菊花,其中12号峰为木犀草素,13为芹菜素,15为合金欢素。结论:本研究主要对复方决明提取物的入血成分进行了初探,并对其来源进行归属。此研究的开展有利于阐明复方决明提取物的药效物质基础,为其临床用药及后续进一步开发提供参考。     

基于UPLC-Q-TOF/MS分析北青龙衣成分

目的 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术,对不同产地78批次北青龙衣进行分析,确定其主要的活性组分。方法 采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,通过Markerview1.2.1软件提取78个样本中1 000个离子,按离子在所有样本中均出现,且相对强度基本大于e4的原则选取共有离子。通过Peakview 2.0/masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定共有离子分子式,通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定共有离子结构式。结果 鉴定或推断了北青龙衣中31种主要化学成分,其中包括11种萘醌类、3种二芳基庚烷、3种黄酮、8种三萜类及6个其他类化合物。结论 该方法检测快速、准确,为北青龙衣的化学成分鉴定提供一种新的策略,主要化学成分的确定为北青龙衣质量评价指标选择及药效物质深入研究奠定基础。     

基于UPLC/Q-TOF MS/MS的稳心颗粒主要成分分析及鉴定

[目的]采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS/MS)技术,对稳心颗粒中的化学成分进行初步分析。[方法]采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-水(含体积比0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,电喷雾电离源,正/负离子双模式检测,通过UPLC/Q-TOF MS/MS所得到的化合物分子量以及MS/MS碰撞解离碎片,结合文献报道,对稳心颗粒的主要化学成分进行分析鉴定。[结果]结合文献报道和一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据,对其中68个化合物进行了初步鉴定,结果显示,稳心颗粒成分以糖类、皂苷类、黄酮类为主,其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1丰度较高。[结论] UPLC/Q-TOF MS/MS技术是鉴定中药复方成分的有效手段,本研究首次利用该技术对稳心颗粒的主要成分进行定性分析,为阐明该复方药效物质基础、探讨其作用机制及其质量控制提供了有效的科学依据。     

基于UPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术检测龟甲胶中新阿胶成分

目的：检测龟甲胶中新阿胶特征肽成分。方法：采用胰蛋白酶进行酶解,利用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱法（UPLC-ESI-QTOF-MS/MS）对龟甲胶样品进行测定,选定新阿胶特征肽离子m/z 925.4作为检测离子。结果：龟甲胶特征成分含量偏低的样品（但不含有牛皮元和驴皮元特征肽成分）中检测出新阿胶特征肽离子m/z 925.4信号,其MS/MS裂解规律与文献报道一致,而龟甲胶标准品中未检测出该特征肽信号。结论：该方法专属性强、灵敏度高,可检测出龟甲胶中是否掺杂新阿胶成分,可用于龟甲胶的质量控制。     

霉茶总黄酮提取物中黄酮类成分的UHPLC-Q-TOF-MS分析

目的:应用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS)对霉茶总黄酮提取物中黄酮类成分进行定性分析。方法:采用Agilent Zorbax Extend C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL/min;采用电喷雾离子源在负离子模式下采集数据。结果:根据质荷比信息,结合对照品比对和文献数据以及数据库匹配,从霉茶总黄酮提取物中鉴定出27种黄酮类化学成分。结论:应用UHPLC-Q-TOF-MS技术能够高效快速地鉴定霉茶总黄酮提取物中的黄酮类化学成分,为进一步研究霉茶总黄酮提取物的质量控制方法以及药效物质基础提供了科学依据。     

UHPLC-Q-TOF/MS鉴定大鼠体内隐绿原酸的代谢产物

目的 定性分析隐绿原酸在大鼠血浆、尿液和粪便中的代谢产物.方法 大鼠给予隐绿原酸后,采集血液、尿液和粪便并进行样品处理,采用UHPLC-Q-TOF/MS法检测各生物样品中的代谢产物.结果 通过相应的色谱保留行为、精确相对分子质量、特征碎片离子、质谱裂解规律、文献报道以及对照品比对,最终分析鉴定了 47个代谢产物.其主要...     

基于UPLC/Q-TOF-MS/MS技术快速分析淫羊藿总黄酮胶囊中的化学成分

应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC/Q-TOF-MS/MS),对淫羊藿总黄酮胶囊的化学成分进行分析和鉴定,采用Agilent SB-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流速0.3 m L·min-1,柱温30℃,进样量2μL。质谱采用电喷雾(ESI)离子源,正负离子模式下采集数据,根据精确相对分子质量,二级质谱裂解碎片和色谱峰保留时间等信息结合对照品的碎片裂解规律和文献数据进行结构鉴定。结果共鉴定或推测出46个化合物,包括黄酮苷类、酚酸类以及生物碱类化合物。该结果为淫羊藿总黄酮胶囊的质量控制、后期临床应用提供了技术支持,并为进一步阐明其药效物质基础提供参考。