电针对自发性高血压大鼠肾组织转化生长因子-β1及肾小管上皮间充质转化的影响

目的:观察电针对自发性高血压大鼠(SHR)肾损害纤维化及肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)与上皮间充质转化(EMT)标志蛋白表达的影响，探讨电针减缓高血压肾损害的可能机制。方法:SHR随机分为模型组、氯沙坦组及针刺组，每组8只；Wistar-Kyoto大鼠8只为正常组。氯沙坦组予氯沙坦钾溶液(30 mg·kg^-1·d^-1)灌胃，针刺组电针双侧“肾俞”“膈俞”,每次15 min,治疗均隔日1次，治疗12周。治疗前及治疗4、8、12周末测量各组大鼠尾动脉收缩压；治疗前及治疗6、12周末测量各组大鼠24 h尿蛋白定量；HE染色法观察肾组织病理形态变化，PAS染色法观察肾小球与肾小管基底膜等细胞外基质，MASSON染色法观察肾组织基底膜及胶原纤维并计算胶原容积分数；实时荧光定量PCR法测定肾组织TGF-β1 mRNA表达；免疫组织化学法测定肾组织TGF-β1及EMT标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)表达。结果:治疗前与治疗4、8、12周，模型组大鼠尾动脉收缩压显著高于正常组(P<0...     

益气养阴通络方通过lncRNA UCA1靶向调控miR-485-5p抑制糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡及炎症反应作用机制

目的:探讨益气养阴通络方通过lncRNA UCA1靶向调控miR-485-5p抑制糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应作用机制。方法:选取雄性Wistar大鼠50只,随机分为空白组、模型组和益气养阴通络方低、中、高剂量组,每组各10只;除空白组外,其余组大鼠采用高糖高脂胆固醇饮食造模。检测各组大鼠肾功能指标和炎症因子水平;采用流式细胞术检测各组大鼠细胞凋亡率;WB检测各组大鼠细胞凋亡蛋白表达;PCR检测大鼠UCA1、miR-485-5p mRNA水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测UCA1与miR-485-5p的结合位点。结果:与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组24 h尿蛋白(24 hUTP)、血清肌酐(SCr)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组大鼠细胞凋亡率较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组NLRP3、Caspase-1蛋白表达量较低,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不...     

miR-122-5p靶向调控人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化的分子机制研究

目的：研究miR- 122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导的作用分子机制。方法：运用茜素红 S、 碱性磷酸酶活性ALP染色试剂盒检测hBMSCs成骨分化的钙结节与成骨活性；使用双荧光素酶报告基因实验验证miR - 122- 5p与 BRCC3之间的靶向关系；运用 qRT-PCR分别检测Runx2、Osterix、wnt3a、β -catenin、GSK3- β 、miR- 122-5 以及BRCC3基因 的表达情况；Western 印迹检测 β-catenin蛋白的表达量。结果：过表达miR- 122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分 化诱导21天后的钙结节与干细胞成骨活性均有明显促进作用，对成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Os- terix及wnt3a、β-catenin、GSK3- β 主要基因均激活作用，过表达BRCC3对干细胞成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因 子 Runx2、Osterix 及 wnt3a、β -catenin、GSK3- β 主要基因有抑制作用；并且通过双荧光素酶报告基因与回复性实验确定miR- 122-5p与 BRCC3之间的靶向关系，差异均有统计学意义 (P<0. 05) 。结论：miR- 122-5p靶向抑制BRCC3 的表达诱导hBMSCs 细胞通过wnt/β-catenin通路进行成骨分化诱导。     

miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin轴与胃癌临床特征的关联性及益气化瘀解毒方抑制上皮间质转化的机制

目的：明确miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin与胃癌临床特征的关系,探讨益气化瘀解毒方抑制胃癌上皮间质转化（EMT）的作用机制。方法：生物信息学分析miR-27a-3p、RCBTB1在胃癌中的表达与临床意义;高通量测序检测小鼠肝转移瘤组织内mRNA表达差异;质粒转染构建沉默或过表达miR-27a-3p、RCBTB1的稳定细胞株;Transwell、划痕实验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的改变;脾脏注射MFC细胞建立小鼠胃癌肝转移模型并以益气化瘀解毒方干预,检测肝转移瘤数量,苏木精-伊红染色（HE）染色法检测胃癌细胞肝脏浸润情况;RT-PCR、Western Blot检测miR-27a-3p、RCBTB1、β-catenin、E-cadherin、Snail的表达。结果：miR-27a-3p在胃癌组织中较正常组织升高（P<0.01）,且Ⅳ期胃癌组织中miR-27a-3p表达较Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期增高（P<0.05）。与对照组比较,miR-27a-3p过表达组胃癌细胞侵袭迁移能力增强,miR-27a-3p沉默组细胞侵袭性减弱（P<0.01）。高通量测序显示,益气化瘀解...     

补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2?EMT的机制.方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2?EMT模型,Western?blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ER...     

基于IRS2/PI3K/FOXO4信号通路研究复方仙草颗粒抑制糖尿病肾病足细胞上皮-间充质转化的作用机制

目的 基于胰岛素受体底物2（insulin receptor substrate 2,IRS2）/磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/叉头框蛋白O4（forkhead box O4,FOXO4）信号通路探讨复方仙草颗粒抑制糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾足细胞上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法 采用单侧肾切除、高糖高脂饲料喂养及一次性ip链脲佐菌素制备DN模型大鼠,另设置对照组和假手术组,将造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦（15.75 mg/kg）组和复方仙草颗粒组低、中、高剂量（315.0、472.5、945.0 mg/kg）组,各给药组ig相应药物,连续6周。检测各组大鼠空腹血糖、肾脏指数（kidney index,KI）、尿微量白蛋白/肌酐比值（urinary albumin-to-creatinine ratio,UACR）、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）水平;采用苏木素-伊红（HE）染色法观察肾组织病理变化;采用透射电镜（TEM）观察肾足细胞超微结构变化;采用qRT-PCR和Western blotting检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜蛋白（nephrin）、P-钙黏蛋白（P-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Desmin、成纤维细胞特异蛋白-1（fibroblast specific protein-1,FSP-1）及IRS2/PI3K/FOXO4信号通路相关因子mRNA和蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠KI、UACR、BUN水平均显著升高（P<0.05）,肾小球肥大,肾小管广泛扩张,上皮细胞变性脱落,足突融合或丢失;肾组织nephrin、P-cadherin表达显著降低（P<0.05）,α-SMA、Desmin、FSP-1表达显著升高（P<0.05）,IRS2/PI3K/FOXO4信号通路相关因子mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05）。与模型组比较,复方仙草颗粒组大鼠KI、UACR、BUN水平显著降低（P<0.05）,肾脏病理结构和足细胞超微结构明显改善;肾组织nephrin、P-cadherin表达显著升高（P<0.05）,α-SMA、Desmin、FSP-1表达显著降低（P<0.05）,IRS2/PI3K/FOXO4信号通路相关因子mRNA和蛋白表达均显著升高（P<0.05）。结论 复方仙草颗粒能够通过调节IRS2/PI3K/FOXO4信号通路改善DN大鼠肾功能,抑制DN大鼠足细胞EMT,减轻足细胞损伤。     

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的] 研究桃叶珊瑚苷（AU）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞活力和上皮间质转化（EMT）的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法] 将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法（WesternBlot）检测基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、波形蛋白（Vimentin）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、Ras同源基因家族成员A（RhoA）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果] GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低（P<0.05）,选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高（P<0.05）,其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著（P<0.05）。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达（P<0.05）。[结论] AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。     

芪附汤调节ERK1/2信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化的作用和机制

目的:探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化(RIF)的作用和机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、芪附汤组(C组)、依那普利组(D组)。通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术(UUO)的方法而建立RIF模型。造模成功后,C,D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液;其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共干预3周。各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(Upro)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(NAG)酶。药物干预第3周末,处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾,称重,并留取相应标本,观察肾脏外观和肾小管/间质形态;检测血清环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿酸(UA);检测肾组织中上皮型黏钙蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞外调节激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。结果:芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的c AMP和c AMP/c GMP;减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶,改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积,上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,p-ERK1/2蛋白表达;但是,对Scr,BUN,UA没有影响。芪附汤改善RIF的作用优于依那普利。结论:芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄,它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子——p-ERK1/2蛋白表达,改善肾小管EMT,从而减轻RIF。     

鹿血晶通过降低肾小管上皮细胞的5-羟色胺合成及降解抑制顺铂诱导的肾损伤

目的探讨鹿血晶保护肾脏以及抑制顺铂诱导肾损伤的作用机制。方法人肾小管上皮HK-2细胞设对照组、模型组及鹿血晶(160、400、1000μg/mL)组和单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)抑制剂氯吉兰(15μmol/L)组,加入药物预处理1 h后加入顺铂(20μmol/L)刺激24 h诱导细胞损伤。雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组及鹿血晶(0.78 g/kg)组,鹿血晶组预给药7 d,然后模型组及鹿血晶组ip顺铂(25 mg/kg)诱导肾损伤,继续治疗3 d后处死动物。检测细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,以及细胞及小鼠肾组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、...     

miRNA-139-5p靶向Notch1/Jagged1调控胃癌干细胞增殖转移及益气补肾方的干预作用

目的:明确miRNA-139-5p对Notch1/Jagged1信号通路的靶向调控关系,探讨益气补肾方抗胃癌干细胞增殖转移的作用机制。方法:通过免疫磁珠分选及鉴定CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC;双荧光素酶报告基因检测miRNA-139-5p与Notch1的结合作用;qRT-PCR检测不同细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达;Western Blot检测不同细胞株中Notch1、Jagged1蛋白表达;qRT-PCR检测益气补肾方含药血清干预后,胃癌细胞株中miRNA-139-5p、Notch1与Jagged1 mRNA表达以及Notch1、Jagged1蛋白表达。结果:免疫磁珠能较好地分选出CD44+EpCAM+SGC-7901 CSC细胞株。转染克隆有Notch13’-UTR野生型载体质粒实验中,miRNA-139-5p组荧光素酶活性明显受到抑制,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌细胞中miRNA-139-5p的表达量显著减少,Notch1、Jagged1的mRNA与蛋白表达量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。益气补肾含药血清干预后,胃癌细胞中miRNA-139-5p表达水平显著升高,Notch1、Jagged1 mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:Notch1基因是miRNA-139-5p直接作用的靶基因,益气补肾方可能是通过调控miRNA-139-5p/Notch1/Jagged1信号通路而发挥抗胃癌增殖转移的作用。     

地榆皂苷I调控IGFL2-AS1/miR-138-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨地榆皂苷I对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。方法 人卵巢癌A2780细胞分别用7.5、15.0、30.0 μmol/L的地榆皂苷I处理,同时设置si-NC组、si-IGFL2-AS1组、地榆皂苷I＋pcDNA-IGFL2-AS1组、地榆皂苷I＋pcDNA组;MTT检测细胞增殖抑制率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;Transwell法检测迁移和侵袭细胞数;Western blotting法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）和N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达;双荧光素酶报告实验检测IGFL2-AS1和miR-138-5p的靶向关系。结果 不同浓度的地榆皂苷I处理A2780细胞后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱（P＜0.05）,E-cadherin和miR-138-5p表达上调（P＜0.05）,N-cadherin和IGFL2-AS1表达下调（P＜0.05）,呈剂量相关性。下调IGFL2-AS1抑制A2780增殖、迁移及侵袭（P＜0.05）。IGFL2-AS1靶向调控miR-138-5p,过表达IGFL2-AS1可减弱地榆皂苷I对A2780细胞增殖、迁移和侵袭的作用（P＜0.05）。结论 地榆皂苷I通过调控IGFL2-AS1/miR-138-5p抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移。