羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究

目的 观察黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法 SD大鼠随机分为5组：对照组、模型组、泼尼松龙阳性对照（3.34 mg/kg）组、黄芩总黄酮高剂量和低剂量（50、25 mg/kg）组。大鼠气管内注射博莱霉素制备肺纤维化模型后,各给药组ig给予相应药物,每天给药1次。28 d后处死动物,观察大鼠血清中总抗氧化能力（T-AOC）、还原性谷胱甘肽（GSH）、髓过氧化物酶（MPO）的水平;取固定部位肺组织分别行HE、Masson染色,进行病理组织学检查; RT-PCR法检测黄芩总黄酮对大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad7、α-SMA、胶原I的mRNA表达水平。结果 与模型组相比,黄芩总黄酮给药组大鼠血清中T-AOC、GSH水平均升高,MPO水平显著降低;肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻（P＜0.05、0.01）;TGF-β1、Smad2、α-SMA、胶原I基因表达显著降低,Smad7表达显著升高（P＜0.05、0.01）。结论 黄芩总黄酮对博莱霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与抗氧化损伤、抑制炎症细胞的浸润活化及调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）中转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1）与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。2）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。3）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）,糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。4）与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

绞股蓝总皂苷对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的：观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠设为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、秋水仙碱组,除正常组外采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。造模第7周开始予相应的药物干预,每日给药剂量为股蓝总皂苷200 mg/kg、秋水仙碱0.1 mg/kg,共3周。观察大鼠一般情况变化,肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,肝组织病理及胶原沉积;检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,肝组织TGF-β1/Smad信号通路指标TGF-β1、TGF-β1受体1（TβR-Ⅰ）、TGF-β1受体2（TβR-Ⅱ）、Smad2/p-Smad2、Smad3/p-Smad3蛋白表达。结果：模型组大鼠一般状态较差,肝组织Hyp含量较正常组显著增高,肝小叶被破坏,肝细胞脂肪变性伴炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织增生;大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著升高,而Smad3蛋白表达与正常组比较无差异。绞股蓝总皂苷组及秋水仙碱组大鼠肝组织Hyp含量显著降低,肝组织病理改善;绞股蓝总皂苷组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及Smad3蛋白表达无显著变化;秋水仙碱组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2及Smad3蛋白表达无显著变化。结论：绞股蓝总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有显著的干预作用,其作用机制可能与抑制HSC活化、TGF-β1分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3表达有关。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响。[方法]采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组。术后14d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结论]益气活血法可通过下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对TGF-β1、HO-1干预作用的研究

[目的]探讨糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对转化生长因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血红素氯合酶-1（HO-1）干预作用。[方法]制备小鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为：空白对照组、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、空白血清组（30 mmol/L葡萄糖+10%空白血清）、糖肾方低剂量血清组（30 mmol/L葡萄糖+10%低剂量含药血清）、糖肾方高剂量血清组（30 mmol/L葡萄糖+10%高剂量含药血清）。使用4-甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖的影响。运用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测肾小管上皮细胞中TGF-β1、HO-1和α-SMA蛋白的表达。[结果]高糖诱导下,肾小管上皮细胞呈成纤维细胞样的长梭形,细胞核呈梭形改变。MTT检测：与空白组比较,高糖组光度值明显增高（P<0.05）;与高糖组比较,高低剂量含药血清组在培养24 h后吸光度值均有下降,吸光度差异有统计学意义（P<0.05）,且高剂量组光度值下降强于低剂量组（P<0.05）。Western blotting及RT-PCR测定实验结果显示：与空白对照组细胞对比,高糖组中TGF-β1、α-SMA含量增加;经过含药血清干预后,高糖诱导的HK-2细胞TGF-β1、α-SMA含量降低,差别有统计学意义（P<0.05）;糖肾方高、低剂量组血清比较,在降低TGF-β1方面,高剂量组效果较好（P<0.05）,在降低α-SMA方面没有统计学差异（P>0.05）。HO-1在高糖诱导后含量稍升高,与空白对照组对比,差异有统计学意义（P<0.05）;在经过糖肾方含药血清干预后,含量升高,与高糖组对比,差异有统计学意义（P<0.05）,糖肾方高低剂量组血清比较,升高HO-1含量方面没有统计学差异（P>0.05）。[结论]糖肾方通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和干预TGF-β1、α-SMA、HO-1相关分子的表达,可以抑制细胞外基质成分沉积,减少氧化应激反应,减轻细胞损伤,逆转上皮-间质转分化,从而抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

大蒜素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨大蒜素对高糖诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响。方法 复苏并传代培养HK-2细胞,分为正常糖对照组（NG,5.5mmol/L）、高糖组（HG,25mmol/L）、高糖+不同剂量的大蒜素干预组（HG+2.5、5、10、20μg/ml Allicn）、高糖+JAK2抑制剂AG490组（HG+10μmol/L AG490）。倒置显微镜下观察高糖对细胞形态的影响,细胞免疫荧光检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）的表达变化,荧光定量PCR检测 TGF-β1 mRNA的表达变化,Western blot法检测TGF-β1、p-STAT3、STAT3蛋白的表达变化。结果 与正常对照组相比,高糖刺激后的HK-2细胞的形态发生明显的长梭形改变,上皮细胞标志物E-cadherin表达明显减少,而间充质细胞标志物ɑ-SMA及collagen Ⅰ的表达明显升高（P<0.01）;TGF-β1及p-STAT3的表达明显增高（P<0.05）;而加入大蒜素或JAK2抑制剂AG490后,均能不同程度抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,而且大蒜素可明显抑制TGF-β1及p-STAT3的表达,以20μg/ml尤为显著（P<0.05）。结论 大蒜素可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路活化,从而抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化。     

桃红四物汤调控NF-κB/TGF-β1/Smad通路抑制宫腔粘连的机制

目的 研究桃红四物汤治疗宫腔粘连（IUA）的作用机制。方法 选取50只SPF级雌性SD大鼠为研究对象,通过机械和感染双重损伤建立IUA大鼠模型,随机分为IUA模型组、桃红四物汤高（18 g/kg）、中（9 g/kg）、低剂量（4.5 g/kg）组,每组各10只,同时选取10只大鼠作为正常组。连续灌胃24 d后收集各组大鼠子宫组织,分别采用RT-qPCR、ELISA和Western blot检测子宫组织中α-SMA、Col Ⅰ、FN、TNF-α、IL-6和IL-18 mRNA及蛋白表达水平,以及NF-κB、p-NF-κB、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad、Smad3、p-Smad7及Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,IUA模型组子宫组织中α-SMA、Col Ⅰ、FN、TNF-α、IL-6、IL-18、p-NF-κB、NF-κB、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3水平明显上调,p-Smad7、Smad7水平明显下调（P＜0.05）;与IUA模型组比较,桃红四物汤组可显著降低α-SMA、Col Ⅰ、FN、TNF-α、IL-6、IL-18、p-NF-κB、NF-κB、TGF-β1、p-Smad2、Smad2及p-Smad3、Smad3的表达,上调p-Smad7、Smad7的表达（P＜0.05）,且中、高剂量组效果更显著（P＜0.05）。结论 桃红四物汤可通过抑制NF-κB/TGF-β1/Smad信号通路的活化,进而抑制IUA大鼠子宫组织纤维化及炎症反应。     

二黄益肾汤调控TGF-β1/Smad信号通路治疗慢性肾功能衰竭研究

[目的] 观察二黄益肾汤对5/6肾切除大鼠肾组织血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA及蛋白表达的影响。[方法] 健康SPF级雄性SD大鼠,采用5/6肾切除方式建立慢性肾功能衰竭模型。造模成功后,随机分为模型组、尿毒清组和二黄益肾汤组,各给药组分别给予相应药物进行灌胃治疗,时间为12周。实验结束后,检测BUN、Scr含量,苏木精-伊红（HE）染色分析病理改变。采用实时定量-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）方法检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7 mRNA及蛋白表达量。[结果] 5/6肾切除方法可以成功建立慢性肾功能衰竭动物模型。与模型组比较,二黄益肾汤组与尿毒清组能够降低Scr、BUN含量,差异具有统计学意义（P<0.01）。二黄益肾汤组和尿毒清组肾间质内有少量炎性细胞浸润及纤维组织增生,纤维化面积缩小,能够改善肾功能衰竭肾纤维化病变程度。基因和蛋白表达量分析结果显示,与模型组比较,二黄益肾汤组和尿毒清组TGF-β1、Smad3、Smad4表达呈降低趋势,差异有统计学意义（P<0.05）,Smad7的表达呈升高趋势,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 二黄益肾汤能够改善慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化程度,抑制TGF-β1、Smad3、Smad4的基因和蛋白表达量,促进Smad7的表达量增多,可能通过调控TGF-β1/Smad信号通路而发挥相关治疗作用。     

莱菔硫烷抑制转化生长因子β1诱导的大鼠心肌纤维化的机制

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的大鼠心肌纤维化的影响及其机制。方法：用TGF-β1处理大鼠心肌成纤维细胞构建心肌纤维化模型；用SFN (5、10、20μg/ml)处理TGF-β1诱导的成纤维细胞；采用CCK8、Transwell法检测细胞的活性、迁移，采用Western blot法检测细胞中基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、ColⅢ、TGF-β1、p-Smad3、p-Smad2、Smad2/3的蛋白表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞上清液中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。结果：与对照组比较，TGF-β1组细胞增殖和迁移能力均显著升高（P<0.05），并且MMP-9、α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达均显著升高（P<0.05）,p-Smad3、p-Smad2的蛋白表达显著降低（P<0.05）,ROS...     

芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

[目的] 观察芪丹利心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。[方法] 通过结扎大鼠左冠状动脉（冠脉）前降支的方法诱导形成慢性心力衰竭模型,经过芪丹利心丸药物[1.1、2.2、4.4 g/（kg·d）]4周干预后,利用超声心动仪和左心室压力-容积环检测评价心功能。采用Masson染色观察各组心脏病理学变化,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组胶原蛋白（Collagen I和Ⅲ）的mRNA水平,采用蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）检测各组转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、Smad7的蛋白表达水平。[结果] 模型组心功能显著下降[左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、左室内压上升或下降最大速率（±dp/dt max）,P<0.05],心室重构明显[室间隔厚度（IVST）、左室收缩末期内径（LVESD）,P<0.05];与模型组比较,芪丹利心丸能够明显改善慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构进程,其中芪丹利心丸中剂量组和芪丹利心丸高剂量组效果较为明显（P<0.05）,并且抑制胶原蛋白CollagenI和Ⅲ的mRNA表达（P<0.05）,减少心肌纤维细胞形成,下调心肌纤维化相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白表达（P<0.05）,提高抗纤维化蛋白Smad7水平（P<0.05）。[结论] 益气活血利水方芪丹利心丸能改善心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心功能,延缓心室重构和心肌纤维化水平,其机制可能与调控TGF-β1/Smads的信号通路有关。     

穿透素3对转化生长因子β1诱导的眼眶成纤维细胞纤维化的影响

目的 探索穿透素3（PTX3）对TGF-β诱导的眼眶成纤维细胞（OF）纤维化的作用。方法 以体外培养的甲状腺相关眼病（TAO）患者来源及健康来源OF为研究对象,在培养液中加入人重组PTX3（rhPTX3）蛋白（1 μg/mL）及重组TGF-β1（10 ng/mL）进行刺激,刺激完成后选择特异性抗体标记细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,通过免疫荧光显微镜观察OF的纤维化程度变化。给予细胞相同的刺激,刺激后通过qRT-PCR检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白α1（ColIα1）、IL-6 mRNA表达量的变化。结果 TGF-β1可诱导两组OF中α-SMA蛋白表达量增加,细胞呈现纤维化改变,而rhPTX3对该效应未见明显抑制作用。TAO患者来源OF的纤维化效应较健康来源OF无明显差异。TGF-β1可诱导OF纤维化相关蛋白（α-SMA、ColIα1、IL-6）mRNA表达上调。rhPTX3对OF中α-SMA mRNA的表达无明显诱导作用,但共刺激时可增强TGF-β1对α-SMA mRNA的上调效应。rhPTX3可上调ColIα1和IL-6 mRNA的表达,共刺激时可增强TGF-β1对IL-6 mRNA的诱导上调,但对ColIα1 mRNA的上调未见明显影响。结论 rhPTX3对TGF-β1诱导的OF纤维化过程具有潜在的促进作用,说明PTX3可能参与了TAO患者后期视物重影的发病过程,并发挥了正向作用。     

金三莪对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7及CTGF表达的影响

[目的]观察中药金三莪抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。[方法]将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组,于造模第1周及第4周开始用金三莪治疗。免疫组化技术检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位,肝组织电镜检查,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量。[结果]经中药金三莪治疗后肝纤维化大鼠肝组织内TGF-β1、Smad3及CTGF表达降低,而Smad7的表达增加,TGF-β1、Smad3及CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆,Smad7则主要在肝细胞浆表达。电镜检查中药治疗组大鼠肝细胞结构趋于正常,纤维组织变薄。模型组血清HA含量明显高于正常组(P<0.01),中药治疗1、2组血清HA含量明显低于模型组(P<0.05)。[结论]中药金三莪能有效地减轻四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度,其机制可能是抑制肝内TGF-β1、Smad3及CTGF并促进Smad7表达。     

CSD肽对肺成纤维细胞细胞外基质及Smad信号表达的影响

目的研究CSD肽（CSD-p）对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激下人胚肺成纤维细胞的细胞外基质及Smad信号表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞,分为4组：对照组（无TGF-β1处理）、TGF-β1处理组、CSD-p处理组、TGF-β1及CSD-p联合处理组。RT-PCR测定各组窖蛋白1mRNA的表达;Western blot检测各组窖蛋白1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原Ⅰ、p-Smad2、p-Smad3及Smad7蛋白的表达。结果 TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞后,窖蛋白1的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低（mRNA：0.404±0.027比1.540±0.262;蛋白：0.278±0.054比1.279±0.085;P〈0.01）。经TGF-β1刺激,人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ（1.127±0.078比0.234±0.048）、α-SMA（1.028±0.058比0.295±0.024）,p-Smad2（1.162±0.049比0.277±0.014）、p-Smad3（1.135±0.057比0.261±0.046）蛋白表达增加（P〈0.01）;Smad7表达较对照组明显降低（0.379±0.004比1.249±0.046,P〈0.001）。与TGF-β1处理组比较,CSD肽明显抑制TGF-β1诱导的胶原Ⅰ（0.384±0.040）、α-SMA（0.471±0.071）、p-Smad2（0.618±0.096）、p-Smad3（0.461±0.057）蛋白表达;上调Smad7的蛋白表达（0.924±0.065比0.379±0.004）。结论 CSD肽下调TGF-β1刺激下人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ及α-SMA蛋白的表达,可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路激活,提示使用CSD肽增加窖蛋白1功能可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

BrdU标记法探讨糖尿病大鼠H2S与细胞外基质积聚的关系

目的 探讨硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）与糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾细胞外基质过度积聚的关系。方法 21只SD大鼠随机分成正常对照组（对照组）、糖尿病肾病组（DN组）、硫化氢干预组（DN+H₂S组）。链脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病大鼠模型,DN+H₂S组给予NaHS治疗8周,其他组给予同等剂量的0.9%生理盐水治疗。观察3组大鼠肾脏病理改变、BrdU阳性细胞和α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）分布差异。结果 与对照组比较,DN组大鼠尿蛋白量、相对肾重均明显增多,病理呈典型的DN改变,BrdU阳性细胞比值、肾小球α-SMA表达和分布显著增多（P<0.01）;应用NaHS治疗后,大鼠肾脏DN改变明显减轻（P<0.01）,BrdU阳性细胞比值、肾小球α-SMA表达和分布与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 H₂S可以抑制DN大鼠肌性成纤维细胞增殖,减少α-SMA表达和分布,减缓DN大鼠的肾小球细胞外基质积聚。     

脂氧素A4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE⁃12的保护作用

目的：探讨脂氧素A4（LipoxinA4, LXA4）对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护作用及机制。方法：体外传代培养MLE-12细胞,随机分为：空气组、高氧组、高氧+LXA4组、高氧+转化生长因了（TGF）-β1中和抗体组、高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组。倒置相差显微镜下观察各组MLE-12形态学变化;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测Ⅰ型胶原（collagenⅠ）、肌腱蛋白C（tenascin-C）、TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平。Western blot检测TGF-β1/Smads信号（TGF-βR1、Smad2、Smad3、Smad4、p-Smad2 和p-Smad3）蛋白表达。结果：①细胞形态：高氧组MLE-12明显失去原有正常细胞形态,细胞变圆,核固缩;药物干预组正常细胞数增多,大部分细胞形态与正常细胞形态基本相似;②细胞外基质（extracellular matrix,ECM）mRNA表达：LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的collagenⅠ和tenascin-C mRNA的表达量升高（P < 0.05）,其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组作用最为显著（P < 0.05）;③TGF-β1/Smads信号mRNA和蛋白含量：LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平以及下调TGF-β1/Smads信号相关蛋白的表达量（P < 0.05）,其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组细胞的表达量下调最为显著（P < 0.05）。结论：LXA4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护可能与调控TGF-β1/Smads信号以及collagenⅠ和tenascin-C的表达有关。     

丹蛭降糖胶囊调控β-catenin蛋白在高磷诱导的糖尿病大鼠下肢血管内皮细胞钙化中的作用

[目的] 探讨丹蛭降糖胶囊调控β-链蛋白（β-catenin蛋白）在高磷诱导的糖尿病大鼠下肢血管内皮细胞钙化中的作用。[方法] 分离糖尿病大鼠和健康大鼠下肢股动脉内皮细胞进行体外培养,分为空白组、高磷组、丹蛭组、氯化锂（LiCL）组;调整稳转内皮细胞（EC细胞）状态,除空白组外,其余各组加入高磷培养基（含有10 mmol/L β-甘油磷酸盐、50 mg/mL维生素C和1×10^-7 mol/L胰岛素）诱导细胞钙化,同时丹蛭组和LiCL组给予10%含药血清（丹蛭降糖胶囊）干预,48 h后LiCL组给予20 mmol/L LiCl继续干预48 h。采用DNA断裂的原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、β-catenin、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、骨形态发生蛋白2（BMP2）、卷曲同源物1（FZD1）mRNA表达水平;激光共聚焦显微镜观察细胞β-catenin蛋白定位。[结果] 与空白组比较,高磷组细胞凋亡数、钙离子含量、α-SMA、β-catenin、ALP、OPN、BMP2及FZD1表达量增多,细胞增殖数量减少（P＜0.01）;激光共聚焦显微镜观察结果表明β-catenin多表达于细胞核内。与高磷组比较,丹蛭组细胞凋亡数、钙离子含量、α-SMA、β-catenin、ALP、OPN、BMP2及FZD1表达量减少,细胞增殖数量增多（P＜0.01）,激光共聚焦显微镜下观察显示细胞核内β-catenin表达量减少。与丹蛭组比较,LiCL组细胞凋亡数、钙离子含量、α-SMA、β-catenin、ALP、OPN、BMP2及FZD1表达增加,细胞增殖数量减少（P＜0.01）,激光共聚焦显微镜下观察显示细胞核内β-catenin表达量增加。[结论] 丹蛭降糖胶囊可以减轻糖尿病大鼠下肢内皮细胞钙化,机制是通过下调β-catenin在细胞核内的表达,减少β-catenin蛋白合成,抑制下游细胞表型基因的转录,达到防治内皮细胞血管钙化的目的。     

二苯乙烯苷对TGF-β1诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制

探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷,TSG)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并研究其相关机制。用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立TGF-β1诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测CFB增殖情况;乳酸脱氢酶(LDH)法检测药物对细胞毒性作用;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞仪测定细胞周期;Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COL Ⅲ)、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、p-ERK、ERK、p-P38、P38、p-JNK、JNK的蛋白表达。结果表明,终浓度为0.1~100 μmol/L的TSG无明显细胞毒性作用;在一定浓度范围内,TSG可明显抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,抑制细胞由G₀/G₁期向S期的转变,抑制TGF-β1诱导的CFB核内PCNA的蛋白表达,降低α-SMA、COLⅠ和COL Ⅲ的过度表达,并抑制TGF-β1诱导的Smad3、ERK和P38的磷酸化。因此推测一定浓度的TSG能抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,其机制可能与干预Smad3、ERK和P38信号通路有关。     

Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制

目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。