补中益气汤通过干预miR-155调控Th17细胞改善自身免疫甲状腺炎小鼠免疫失常

目的:基于microRNA-155(miR-155)调控Th17细胞探讨补中益气汤改善自身免疫甲状腺炎(AIT)小鼠免疫失常机制。方法:将雌性8周龄NOD.H-2~(h4)小鼠90只,随机分为正常组(NG)、模型组(MG)、西药组(硒酵母片,SeG)、补中益气汤高剂量组(BG-1,19.00 g·kg~(-1)·d~(-1))、补中益气汤中剂量组(BG-2,9.56 g·kg~(-1)·d~(-1))、补中益气汤低剂量组(BG-3,4.78 g·kg~(-1)·d~(-1))共6组。正常组饲以蒸馏水,其余各组饲以含0.05%碘化钠水,8周后自发形成AIT动物模型,再给实验药物8周后麻醉处死小鼠。光镜下观察甲状腺细胞形态; RT-PCR法检测小鼠甲状腺miR-155、白细胞介素-17(IL-17)mRNA表达; Western Blot法测定小鼠甲状腺细胞因子信号抑制因子(SOCS1)、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达;流式细胞仪分析小鼠甲状腺Th17细胞比例。结果:与NG组比较,MG组甲状腺淋巴细胞浸润明显,Th17细胞比例升高(P0.01),甲状腺miR-155、IL-17mRNA表达显著上调(P0.01),甲状腺p-STAT3、p-JAK蛋白升高(P0.01), SOCS1蛋白下降(P0.01);与MG组比较,各给药组甲状腺炎均有不同程度改善;同时Th17细胞比例下降(P0.01)、miR-155及IL-17mRNA表达均显著下调(P0.01)、p-STAT3及p-JAK2蛋白水平降低(P0.01)、SOCS1蛋白水平升高(P0.01),其中SeG组与BG-2组无统计学差异。结论:补中益气汤有效改善AIT免疫失常状态,其机制之一可能与抑制miR-155/SOCS1/STAT3信号通路减少炎症因子释放有关。     

基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制

目的:探讨抗纤益心方干预自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制,及其与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞平衡的关系。方法:将60只SPF级BALB/c健康8周龄雄性小鼠按1∶5的比例随机分为正常组和造模组,在第0,7,28天于造模组小鼠腹股沟、腋下、背部多处皮下注射猪心肌肌球蛋白乳化液0.2 m L(含猪心肌肌球蛋白0.1 mg)以制备心肌免疫损伤小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组,抗纤益心方组(KYP),缬沙坦组(Valsartan),抗纤益心方组给予抗纤益心方20.4 g·kg^-1·d^-1灌胃,缬沙坦组给予缬沙坦12 mg·kg^-1·d^-1灌胃,正常组和模型组给予同计算量的生理盐水灌胃,连续灌胃4周后取材,苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色检测心肌组织中病理损伤情况,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中B型钠尿肽(BNP),抗心肌抗体,白细胞介素-17(IL-17)和白细胞介素-10(IL-10)的表达,流式细胞术检测脾脏Th17,Treg细胞的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠脾脏转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt),叉头框蛋白P3(Fox P3)m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠心肌病理损伤增加,血清BNP,抗心肌抗体,IL-17升高,IL-10降低(P<0.05),脾脏Th17细胞表达水平升高,Treg细胞的表达水平降低(P<0.05),心肌组织Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax/Bcl-2值升高,脾脏RORγt m RNA表达升高,Fox P3 m RNA表达降低,RORγt/Fox P3升高(P<0.05);与模型组比较,抗纤益心方组及缬沙坦组心肌病理损伤减轻,血清BNP,抗心肌抗体,IL-17降低,IL-10升高(P<0.05),脾脏Th17细胞表达水平降低,Treg细胞的表达水平升高(P<0.05),心肌组织Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Bax/Bcl-2降低,脾脏RORγt m RNA表达降低,Fox P3 m RNA表达升高,RORγt/Fox P3值降低(P<0.05)。结论:抗纤益心方可能通过调节Th17/Treg细胞平衡改善心肌免疫损伤。     

补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎模型小鼠海马微血管结构及Th17/Treg轴相关细胞因子水平的影响

目的 研究补中益气汤(Buzhong Yiqi Decoction, BZYQD)对实验性自身免疫性甲状腺炎(Experimental autoimmune thyroiditis, EAT)模型小鼠海马微血管超微结构及Th17/Treg轴相关细胞因子水平的影响,探讨其改善自身免疫性甲状腺炎(autoimmune thyroiditis, AIT)相关轻度认知损伤的机制。方法 50只雌性NOD.H-2^h4小鼠随机分为对照组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组(2.73,8.19,24.57 g·kg^-1)。除对照组外,其余小鼠采用弗氏佐剂混合免疫注射法建立EAT小鼠模型。造模成功后,中药各剂量组分别按体质量灌服相应药物,对照组及模型组每日灌服与中药等体积双蒸水,每日灌服1次,每灌胃6d,休息1d,连续8周。通过Mirros水迷宫实验评价小鼠空间学习记忆能力。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清TgAb水平。苏木素-伊红(HE)染色法观察甲状腺病理变化。透射电镜观察小鼠海马微血管超微结构变化。免疫荧光染色检测海马组织IgG免疫复合物沉积...     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

目的：研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法：60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^-1),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^-1),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-...     

益气化痰活血方对AIT小鼠甲状腺Ets-1、IL-17基因表达的影响

目的:研究益气化痰活血方对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠甲状腺Ets-1、IL-17基因表达的影响,从分子水平说明其影响AIT的部分机制。方法:60只8周龄NOD.H-2^h4小鼠,随机分为正常组(NG),模型组(MG),西药组(SeG),益气化痰活血方高、中、低剂量组(YG-1、YG-2、YG-3),每组10只,正常组饲以蒸馏水,其余各组饲以含高碘化钠水(浓度0.05%)。8周后分别以蒸馏水,阳性对照药硒酵母混悬液,益气化痰活血方高、中、低剂量的水煎液给各组小鼠灌胃。8周后取小鼠甲状腺,RT-PCR法检测E26transformation-specific-1(Ets-1)、白细胞介素-17(IL-17) mRNA表达。结果:①与模型组比较,益气化痰活血方组均能使Ets-1 mRNA的表达水平上调(P<0.01);②与模型组比较,益气化痰活血方组均能使IL-17 mRNA的表达水平下调(P<0.01)。结论:益气化痰活血方能上调Ets-1基因表达水平,进而使IL-17炎症水平下降,这可能是其改善AIT小鼠免疫失常的机制之一。     

槐杞黄颗粒通过调控AMPK/ACC通路影响IgA血管炎肾炎小鼠Th17细胞的分化

目的：观察槐杞黄颗粒对免疫球蛋白(Ig)A血管炎肾炎(IgAVN)小鼠的干预作用并探讨该方药的疗效机制。方法：SPF级昆明种雄性小鼠50只,随机分为正常组、IgAVN模型组、地塞米松组(2.5 mg·kg^-1·d^-1)、槐杞黄低、高剂量组(4、8 g·kg^-1·d^-1)。采用口服麦胶蛋白结合尾静脉注射印度墨水法建立小鼠模型。判断造模成功后依据分组灌胃给药4周麻醉处死小鼠。检测各组小鼠24 h尿蛋白定量、尿β₂-微球蛋白、血清总蛋白、白蛋白、IgA等;流式测定脾脏单细胞悬液辅助性T细胞17(Th17)比例;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Th17细胞腺苷酸激活蛋白激酶α(AMPKα)、磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶α(p-AMPKα)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶1(p-ACC1)蛋白表达;观察脾脏与肾脏病理变化。结果：与正常组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白定量、尿β₂-微球蛋白、总胆固醇(P<0.05)、血清白细胞介...     

基于Notch/Treg/Th17通路探究活血消瘿方对桥本甲状腺炎大鼠甲状腺功能和病理形态的影响

目的：探讨活血消瘿方（HXXYF）调控Notch/调节性T细胞（Treg）/辅助性T细胞17(Th17)通路对桥本甲状腺炎（HT）大鼠甲状腺功能和病理形态的影响。方法:将84只大鼠随机分为对照组（NC组）、模型组（Model组）、低剂量HXXYF组（HXXYF-L组,0.5 g/kg）、高剂量HXXYF组（HXXYF-H组,2 g/kg）、左旋甲状腺素钠组（LTSD组,0.1 mg/kg）、Jagged1(Notch激活剂)组（0.67 mg/kg Jagged1）、HXXYF-H+Jagged1组（2 g/kg+0.67 mg/kg）,每组12只。除NC组外,其他组大鼠均构建HT模型。全部造模成功后,进行给药处理,1次/d,持续4周。ELISA法检测大鼠血清中游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、白细胞介素（IL）-17、IL-10水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Treg、Th17比例;HE染色检测大鼠甲状腺组织病理变化;Western blotting检测甲状腺组织中叉头框蛋...     

白头翁汤通过调节T 淋巴细胞平衡治疗溃疡性结肠炎小鼠的机制研究

目的 探讨白头翁汤(Baitouweng Decoction)通过调节T淋巴细胞平衡治疗溃疡性结肠炎(UC)小鼠的机制。方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉秦组(500 mg·kg^-1)及白头翁汤低、中、高剂量组(5、10、15 g·kg^-1),每组10只。除正常组外,其他各组小鼠均采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,连续7 d,诱导建立UC小鼠模型;给药组小鼠造模同时按上述剂量灌胃给药(20 mL·kg^-1),正常组和模型组给予等体积蒸馏水,每日1次,连续给药10 d。实验期间记录小鼠体质量变化,观察粪便性状,检测并记录小鼠便血情况,进行疾病活动指数(DAI)评分;测量结肠长度及脾脏、胸腺湿质量,计算脾脏及胸腺指数;采用HE染色法观察结肠组织病理变化,并进行病理学评分;采用阿尔新蓝染色法观察杯状细胞黏蛋白的表达;采用流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结及脾脏中辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞17(Th17)及调节性T细胞(Treg)细胞的比例;采用ELISA法检测小鼠结肠组织中炎性...     

甘草附子汤对胶原诱导性关节炎小鼠Th17和Treg细胞的影响

目的 探讨甘草附子汤(Gancaofuzi decoction, GCFZ)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)小鼠辅助性T细胞17(T helper cell 17, Th17)和调节性T细胞(Regulatory T cell, Treg)失衡的调节作用。方法 该研究包括4组小鼠：正常对照组(Control组),模型对照组(CIA组),GCFZ 2.4 g·kg^-1组和GCFZ 4.8 g·kg^-1组。检测各组小鼠足肿胀度、关节炎指数;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)观察小鼠踝关节组织病理学变化;流式细胞仪检测脾脏Th17和Treg细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清白介素17(interleukin-17,IL-17)、白介素6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)和白介素10(interleukin-10, IL-10)水平。结果 与正常组比较,CI...