羊布鲁氏菌外膜蛋白质的组成鉴定

目的：通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法：提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中进行检索。结果：共鉴定到67个蛋白点,主要外膜蛋白为Omp25和Omp31,其他外膜蛋白如Imp、Frp、GroEL等,功能涉及物质运输、能量代谢、应激等。结论：对主要外膜蛋白Omp25和Omp31的识别与分析不仅有助于对布鲁氏菌致病机制的研究,而且为布鲁氏菌病的疫苗研制提供靶标蛋白。     

幽门螺杆菌Omp11重组蛋白的制备和应用

幽门螺杆菌（Hp）感染与人体胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病的发生密切相关，免疫接种是控制Hp感染流行最有效的措施，但由于Hp感染的免疫机制比较复杂，尚未发现一种效果理想的疫苗抗原。Hp外膜作为免疫攻击的重要靶标在人体保护性免疫反应中具有重要的作用。Omp11是Hp的一种外膜蛋白，其编码基因具有高度的保守性，有望成为疫苗抗原，但目前国内外均未检索到关于Omp11抗原活性和免疫效果的报道。因此，拟应用基因克隆方法研究Omp11重组蛋白（rOmp11）的制备、抗原活性和应用价值。     

布鲁氏菌猪种标准株外膜蛋白OMP25的原核表达

目的克隆布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因并构建基因的原核表达系统。方法用聚合酶链反应技术扩增得到布鲁氏菌基因组，得Omp25基因片段，T—A克隆后测定核苷酸序列，将目的基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，经双酶切和DNA测序测定，将构建的重组质粒转化大肠杆菌（E．coli HB101，TOP10），经IPTG诱导后，用SDS—PAGE检测重组蛋白rOrap25表达情况。结果经DNA测序显示Omp25DNA序列和插入位点正确，成功构建了重组质粒DGEX-4T-1-Omp25，经IPTG诱导，特异性表达出以包涵体形式存在48kDa的Omp25融合蛋白。结论制备、克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因片段，并在大肠杆菌中表达出Omp25融合蛋白。     

梅毒疫苗发展的需求、挑战与前景

梅毒是由苍白密螺旋体苍白亚种即梅毒螺旋体（Tp）引起的一种性传播疾病,尽管可被廉价有效的抗生素治愈,但依然在发展中国家流行和发达国家再现,严重危害公众健康。感染性梅毒给全球带来医疗负担,先天性梅毒被认为是影响全球胎儿和新生儿最重要的感染性疾病,梅毒感染还会增加感染和传播艾滋病的风险。全球梅毒的高发和防治该病的失败,使得对梅毒疫苗的需求迫在眉睫。在动物模型中用γ射线致弱的Tp长期免疫动物获得了完全保护,提示了发展梅毒疫苗的可行性及Tp外膜表面成分在诱导免疫保护中的重要性。梅毒适宜发展疫苗用于防治,但实现这一目标前需要解决好参与人员、研究以及市场问题。     

重组钩端螺旋体外膜蛋白酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的建立

目的建立以重组外膜蛋白为基础的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。方法以基因重组技术获取重组钩端螺旋体外膜蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA方阵滴定、交叉性试验、阻断试验,并对北京地区的70份犬血清使用建立的ELISA方法以及德国Virion公司的全菌体钩端螺旋体ELISA试剂盒进行相互验证。结果方阵滴定试验确立以100ng/孔为抗原包被浓度,1∶160为血清稀释度。交叉性试验具有广泛性、阻断试验标明该方法特异性强、灵敏度高。两种方法数据经χ2检验,两者检出率之间差异不显著。结论重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。     

赖型017株钩体疏水外膜蛋白及其免疫特征的研究

采用低浓度非离子型去污剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４（ＴＸ－１１４）后提和分离问号状钩端螺旋体（钩体）黄疸出血群赖型０１７株（０１７），选择性地将钩体外膜蛋白分离为ＴＸ－１１４疏水相和亲水相两个部分。疏水相外膜蛋白含５条主要蛋白区带，其分子量分别为６６ｋｄ、３９ｋｄ、３５ｋｄ、２７ｋｄ和６ｋｄ，，ａｄｋｈｗｃｙ ３９ｋｄ外膜蛋白区带可特异地分别被抗全０１７血清，抗０１７外膜血清和抗０１７保护性单克隆抗体     

梅毒螺旋体感染阳性患者C反应蛋白的变化

目的:通过检测梅毒螺旋体阳性患者血清炎症因子C反应蛋白(CRP)的含量探讨其与梅毒螺旋体感染的关系.方法:梅毒螺旋体抗体检测用酶联法定性测定,梅毒螺旋体血清学半定量试验用凝集法测定,血清C反应蛋白用特种蛋白仪测定.结果:梅毒螺旋体阳性患者治疗前与治疗后C反应蛋白浓度差异有统计学意义.结论:C反应蛋白含量与梅毒螺旋体感染的严重程度密切相关.     

赖型017株钩体疏水外膜蛋白及其免疫特征的研究

采用低浓度非离子型去污剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４（ＴＸ－１１４）抽提和分离问号状钩端螺旋体（钩体）黄疸出血群赖型０１７株（０１７），选择性地将钩体外膜蛋白分离为ＴＸ－１１４疏水相和亲水相两个部分。疏水相外膜蛋白含５条主要蛋白区带，其分子量分别为６６ｋｄ、３９ｋｄ、３５ｋｄ、２７ｋｄ和１６ｋｄ，其中仅３９ｋｄ外膜蛋白区带可特异地分别被抗全０１７血清、抗０１７外膜血清和抗０１７保护性单克隆抗体Ｅ４Ｂ７Ｇ５所识别。本研究结果表明经ＴＸ－１１４抽提分离的３９ｋｄ疏水外膜蛋白为０１７钩体稳定的免疫原，在研究钩体保护性抗原和构建基因工程疫苗中有十分重要的研究价值。     

一种快速粗提铜绿假单胞菌外膜蛋白的方法

目的：为了寻找一种快速、简单、方便的铜绿假单胞菌外膜蛋白的的取方法。方法：用三种方法提取外膜蛋白。并对其电泳图谱进行比较。结果：三种方法提取的外膜蛋白成分基本相同。结论：改进的方法是一种快速、简单、方便的铜绿假单胞菌外膜蛋白的提取方法。     

不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白的研究进展

不可分型流感嗜血杆菌(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)是一种定植在人类鼻咽部常见的条件致病菌,常引起继发性感染,如支气管炎、鼻窦炎、儿童中耳炎和成人慢性阻塞性肺疾病急性加重等。研究发现该菌细胞壁外膜上表达多种具有免疫原性和抗原性的蛋白,其对该菌在宿主体内的定植、入侵和生存必不可少,有些蛋白还与该菌的耐药性和宿主免疫的清除机制有关。因此,研究外膜蛋白有利于开发有效的疫苗和抗感染药物来预防及治疗NTHi引起的感染,下面从蛋白的结构、功能及应用等方面对几种外膜蛋白作一综述。     

巢式PCR检测梅毒螺旋体DNA方法研究

目的建立一种血清梅毒螺旋体DNA提取及PCR鉴定方法。方法基于化学热裂解法和柱式核酸提取原理进行血清梅毒螺旋体DNA提取。根据文献筛选优化引物建立巢式PCR检测体系,并对实验方法的特异性、抗干扰性、检测梯度进行评价。结果建立的实验方法特异性好、抗干扰性强,对TRUST为1：8以上的标本检测全部为阳性。结论提取梅毒螺旋体DNA及PCR鉴定有助于梅毒的快速诊断,对于血液中梅毒螺旋体增殖能力判断具有重大潜在应用价值。     

胎盘组织荧光PCR诊断早期先天梅毒的研究

目的评价胎盘组织荧光PCR(VQ—PCR)在先天梅毒早期诊断中的作用。方法对34例梅毒孕妇和30例非梅毒对照孕妇的胎盘和脐带组织进行梅毒螺旋体DNA的荧光定量PCR检测，并与常规临床及血清学综合诊断方法比较。结果34例梅毒孕妇的胎盘组织中，11例荧光PCR为阳性，阳性率为32．35％，30例非梅毒孕妇的胎盘和脐带样本荧光PCR均为阴性；以常规临床及血清学综合诊断方法为标准，则荧光PCR与常规方法结果的灵敏度为82％，特异性100％，约登指数0．82。显示在诊断先天梅毒新生儿时，FQ—PCR至少有不低于常规综合诊断方法的价值。结论与常规临床血清学综合诊断方法相比，荧光PCR均有明显的优势。     

输血前应用ELISA检测梅毒螺旋体抗体的临床研究

目的探讨输血应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测梅毒螺旋体抗体的临床价值。方法选择2007年1月～2011年1月我院住院接受输血治疗的患者5790例作为观察对象,应用ELISA试剂盒、TPPA试剂盒进行ELISA和TPPA血清梅毒螺旋体抗体检测。结果5790例入选观察对象中,应用ELISA法检测梅毒螺旋体抗体（TP—Ab）阳性50例,阳性率为0．864％;而应用TPPA法检测的梅毒螺旋体抗体阳性49例,阳性率为0．846％（49／5790）。两种检测方法差异无统计学意义（X2=0．643,P〉0．05）。≥70岁组的应用ELISA法检测的梅毒螺旋体抗体阳性率明显低于〈70岁组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论输血应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测梅毒螺旋体抗体具有较好的临床价值,与TPPA比较差异不大,值得推广和应用。     

梅毒螺旋体血清学调查结果分析

目的了解本地区梅毒感染的流行病学情况,并对TRUST、TP-ELISA和TPPA三种检测梅毒螺旋体的方法进行临床应用评价,为预防和控制梅毒蔓延提供科学依据。方法对2006年1月～2008年12月前来本院就诊的5000份患者血清标本进行TRUST、TP-ELISA或TPPA梅毒螺旋体血清学检测,并结合流行病学史及临床表现,进行梅毒流行病学调查。随机抽取上述梅毒阳性患者血清样本120份与健康体检者血清样品130份,对每份标本同时进行TRUST、TP-ELISA和TPPA检测,评价其敏感性和特异性。结果2006～2008年度梅毒阳性率分别为2.9%,4.3%和7.7%;一期梅毒分别为57.9%、71.9%和62.3%,二期梅毒分别为32.6%、23.4%和30.3%,三期梅毒分别为1.8%、1.5%和2.0%,隐性梅毒分别为7.7%、3.2%和5.4%;梅毒患者中女性多于男性,男女比例为0.68:1,年龄分布主要在青壮年,文化程度主要以低素质为主,职业分布以服务业和打工者为主。TRUST、TP-ELISA和TPPA的敏感性分别为73.6%、89.5%和63.5%,特异性分别为89.4%、96.0%和100%。结论梅毒感染呈逐年上升趋势,防治措施亟待进一步加强。3种方法中TP-ELISA法敏感性最高,TPPA特异性最高。ELISA方法存在假阳性和假阴性结果,对于ELISA阳性的标本和在灰区的标本应做TPPA进行确认。而TRUST主要在判断患者病情和疗效方面有重要价值。     

Advances in syphilis detection

Syphilis, a chronic bacterial infection caused by the spirochete Treponema pallidum subsp. pallidum, remains a public health concern worldwide. Syphilis control is largely dependent upon early identification and prompt treatment. The diagnosis of syphilis is mainly based on laboratory tests, especially serology and dark-field microscopy. In recent years, recombinant Treponema pallidum antigen-based rapid tests, polymerase chain reaction, and immunoglobulin M antibody detection have also shown certain sensitivities and specificities for syphilitic patients at different stages.     

梅毒螺旋体溶血素生物信息学分析

目的本研究旨在对梅毒螺旋体(Tp)的5种溶血素进行进一步的生物信息学分析,为后续研究溶血素家族蛋白在Tp致病过程中的致病机制提供依据。 方法通过使用NCBI、BLAST、CDD、BioEdit、ExPASy、SignalP、TMHMM、MEGA、PSORTb 3.0、ABCpred等生物信息学分析方法分析梅毒螺旋体溶血素家族蛋白的一般性质、信号肽、糖基化、磷酸化位点、亚细胞位置、二级结构、功能结构域及抗原表位。 结果预测了Tp中5个溶血素家族蛋白一般性质,Tp1037功能结构域不同于其余4种,Tp0028含有1个信号肽,Tp0027含有1个糖基化位点,Tp0027和Tp1037有多个跨膜结构域,5个溶血素家族蛋白均含有多个磷酸化位点和B细胞、T细胞表位。 结论Tp含有5个溶血素家族蛋白基因,提示Tp入侵宿主时这些基因产物极有可能通过其膜成孔毒性损伤靶细胞,从而致病。     

蛋白免疫印迹和荧光-PCR诊断早期先天梅毒研究

目的评价荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和血清IgM抗体蛋白免疫印迹实验（serum IgM western blot,IgM-WB）在新生儿先天梅毒早期诊断中的作用. 方法在知情同意的情况下,选取34例梅毒孕妇及其新生儿和40例非梅毒对照孕妇及其新生儿,分别给予荧光定量聚合酶链反应、血清IgM-WB试验和常规血清学方法（TPPA、RPR、19S-FTA-ABS）,以双盲对照的形式评价上述实验诊断方法和常规实验室检测（临床＋常规血清学方法RPR滴度的比较＋治疗）在先天梅毒早期诊断的作用. 结果 34例孕妇梅毒病例所生的新生儿中,按常规综合诊断方法3例确诊为先天梅毒,6例拟诊为先天梅毒.34例完成妊娠的梅毒孕产妇病例中,孕妇胎盘和脐带组织荧光定量聚合酶链反应11例阳性（9例常规方法诊断为先天梅毒）;新生儿血清IgM蛋白印迹试验10例阳性（9例常规方法诊断为先天梅毒）;40例作为对照的非梅毒孕妇及新生儿各项检查均为阴性. 结论胎盘组织荧光定量聚合酶链反应和血清IgM蛋白印迹试验诊断梅毒,结果显示可能高于现行的常规综合诊断方法的诊断价值,且优于常规综合诊断方法中的任何一种.     

梅毒螺旋体寡核苷酸芯片探针的设计及筛选

【目的】设计梅毒螺旋体寡核苷酸探针,筛选出适合芯片检测的高敏感性和特异性寡核苷酸探针。【方法】根据梅毒螺旋体特异基因设计寡核苷酸探针,人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。提取梅毒螺旋体的DNA,采用通用引物联合标记法进行标记,标记样品与芯片杂交,用芯片扫描仪检测杂交结果。【结果】设计出23条50 mer梅毒螺旋体寡核苷酸探针。标记样品与芯片杂交部分探针有较强的杂交信号,并筛选出符合要求的9条梅毒螺旋体寡核苷酸探针。【结论】以上方法能设计和筛选出敏感性和特异性较高的梅毒螺旋体寡核苷酸探针,可用于制备梅毒螺旋体寡核苷酸芯片。     

免疫印迹法对梅毒螺旋体抗体不确定标本的确认分析

[摘要] 目的 对梅毒抗体不确定结果的血清标本,以WB法为金标准进行确认。方法 选取用TRUST 、TP-ELISA和TPPA三种方法进行联合检测时,检出梅毒抗体不确定标本共65份为实验组,另设阳性对照标本组25份,以WB法为金标准进行确认后,对检测结果进行对比分析。结果 实验组中65份,经WB法确认后,阳性11份,阴性45份,不确定9份,以TP47和TP17有较高检出率且无TP15;阳性对照组25份,经WB法确认25份阳性,22例含全部4种特异性抗体。结论 用TRUST 、TP-ELISA和TPPA三种方法进行联合检测梅毒抗体,只出现任意一种方法抗体阳性时,其阳性预测值较低,大多数病例存在非特异性干扰可能。对于经过几种方法筛查后仍不确定的标本,可用免疫印迹法作为最后的确认。     

静脉吸毒人群HIV、HCV、HBV和梅毒螺旋体感染的血清学检测结果分析

目的:了解静脉吸毒人群HIV、HCV、HBV及梅毒螺旋体的感染现状.方法:收集362名静脉吸毒人员血液标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗HIV抗体、抗HCV抗体、HBsAg;采用TRUST试验检测梅毒螺旋体非特异性抗体.结果:362名静脉吸毒人群HIV感染率为4.14%,抗HCV抗体检出率为80.39%...