JMJD2B和HPIP在宫颈癌中的表达及其与临床预后的关系

目的研究组蛋白去甲基化酶JMJD2B和造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(HPIP)在宫颈癌中的表达及其与预后的关系。 方法收集97例宫颈癌患者临床资料,检测宫颈癌组织及癌旁组织JMJD2B、HPIP表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。对生存影响因素进行Cox回归分析,Kaplan-Meier分析生存情况,ROC曲线分析JMJD2B、HPIP对预后的预测效能。 结果JMJD2B、HPIP在宫颈癌组织中阳性表达率高于癌旁组织(P＜0.05)。JMJD2B、HPIP表达与肿瘤直径、肿瘤分化程度、淋巴结转移及浸润程度有关(P＜0.05)。多因素分析显示,肿瘤直径、肿瘤分化程度、淋巴结转移、浸润程度、JMJD2B表达、HPIP表达为影响预后的独立因素(P＜0.05)。JMJD2B、HPIP阳性表达者3年生存率和中位生存期低于阴性表达者(P＜0.05)。ROC曲线分析显示,JMJD2B、HPIP联合预测宫颈癌预后灵敏度和AUC均高于单独检测(P＜0.05)。 结论JMJD2B、HPIP在宫颈癌组织中表达上调,与肿瘤直径、肿瘤分化程度、淋巴结转移及浸润程度有关,可作为宫颈癌预后的预测指标。     

JMJD2B对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响

目的 探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B(Jumonji domain-containing protein 2B)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响.方法 采用免疫组化和细胞免疫荧光的方法检测JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌组织和A431细胞中的表达,转染JMJD2B siRNA至A431细胞株,分别采用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell法检测细胞增殖、克隆、周期分布、凋亡、迁移及侵袭情况.结果 JMJD2B在肿瘤组织中的表达高于正常皮肤.与未转染组和转染对照组比较,JMJD2B siRNA转染组增殖、克隆、迁移及侵袭能力显著受抑,肿瘤细胞发生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加(P＜0.05).结论 JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌中呈高表达,JMJD2B siRNA能促进A431细胞的凋亡,同时也抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆、迁移以及侵袭的能力.     

FBXO22表达对HPV阳性宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的探索FBXO22表达对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞生物学行为的影响。 方法qRT-PCR和Western blotting检测FBXO22在正常宫颈细胞H8细胞和宫颈癌细胞系中的差异表达。实验组构建敲除和过表达FBXO22的Hela、CaSki细胞,对照组转入空载体。qRT-PCR和Western blotting检测转染后FBXO22表达；MTT、细胞克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验检测FBXO22表达对细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭能力的影响。 结果与H8细胞比较,FBXO22在HPV阳性宫颈癌细胞中呈现过表达(P＜0.05)。与对照组比较,Hela、CaSki细胞FBXO22 mRNA和蛋白、细胞增殖活性、细胞克隆形成率过表达组增加,敲低组减少(P＜0.05)；G2/M期细胞百分率、划痕宽度、穿膜细胞数过表达组减少,敲低组增加(P＜0.05)。 结论FBXO22在HPV阳性宫颈癌细胞中过表达,FBXO22表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移,沉默FBXO22可能为宫颈癌治疗提供潜在靶点。     

术前髂内动脉栓塞灌注化疗对早期宫颈癌组织HIF-1α、JMJD2B及病灶血流灌注的影响

目的探讨术前髂内动脉栓塞灌注化疗对早期宫颈癌(CC)组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、含Jumonji结构域蛋白2B(JMJD2B)及病灶血流灌注的影响。 方法选取92例CC患者,按照治疗方法分为对照组(全身静脉化疗)和观察组(髂内动脉栓塞灌注化疗)。比较两组化疗前、后CC组织HIF-1α、JMJD2B表达水平和表达阳性率、病灶血流灌注情况、疗效及根治性子宫切除术后5年复发情况。 结果与化疗前比较,化疗后两组HIF-1α、JMJD2B mRNA表达、上升时间、峰值强度、HIF-1α和JMJD2B蛋白表达阳性率均降低,达峰时间、平均通过时间升高,且观察组较对照组更为显著(P＜0.05)。观察组总有效率高于对照组(P＜0.05)。观察组术后5年无进展生存期长于对照组(P＜0.05)。 结论术前髂内动脉栓塞灌注化疗可有效降低CC患者病灶血流灌注,下调HIF-1α、JMJD2B表达,有利于提升疗效和改善预后。     

玉竹提取物B对Hela细胞凋亡的影响

目的 观察中药玉竹提取物B(EB—PAOA)是否能引起人宫颈癌Hela细胞的凋亡。方法 将体外培养的人宫颈癌Hela细胞与不同浓度的EB—PAOA共育，通过倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察，确认凋亡细胞；通过流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期的分布。结果 经过EB—PAOA处理后，在倒置显微镜和透射电镜下可观察到EB—PAOA引起的典型的凋亡形态学变化；流式细胞仪测定显示经EB—PAOA处理后的Hela细胞凋亡率呈时间-剂量依赖性，G0／G1期细胞减少，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 EB—PAOA能够诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡，EB—PAOA抑制Hela细胞生长的机制之一是诱导该细胞凋亡。     

沉默JMJD2B通过诱导DNA损伤抑制人胃癌细胞的恶性表型

目的:探讨人胃癌细胞中含Jumonji结构域的蛋白2 B(JMJD2 B)与DNA损伤反应之间的关系,及其在肿瘤恶性表型中的作用.方法:应用JMJD2 B siRNA特异性抑制人胃癌细胞MGC803和SGC7901中JM-JD2B的表达,采用Western blotting检测经处理后DNA损伤特异性标志物磷酸化H2A...     

JMJD2B通过ERK-MAPK途径影响人结直肠癌细胞的恶性表型

目的:探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B影响人结直肠癌细胞恶性表型所介导的信号通路?方法:以RNA干扰技术靶向沉默人结直肠癌细胞HCT116和SW480中JMJD2B的表达,采用蛋白质印迹法检测人结直肠癌细胞ERK-MAPK信号通路的变化,并分别采用CCK-8?流式细胞分析检测细胞增殖和细胞周期分布?凋亡情况?结果:转染JMJD2B siRNA能特异性抑制JMJD2B的表达并导致ERK2表达下调,其磷酸化水平也降低,肿瘤细胞发生G2/M或G0/G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,增殖显著受抑(P<0.05)?结论:抑制JMJD2B可通过阻断ERK-MAPK信号转导而抑制人结直肠癌细胞的恶性表型?     

siRNA干扰MeCP2基因对宫颈癌Hela细胞的生物学影响

目的研究甲基化Cp G结合蛋白2(Me CP2)对宫颈癌Hela细胞的生物学影响以及其分子机制。方法应用si RNA干扰Me CP2表达;MTT比色法分析Me CP2对宫颈癌Hela细胞增殖活力的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blotting观察Me CP2 si RNA对Cyclin D1、P-ERK1/2和P-p38表达的影响。结果 Me CP2 si RNA组与阴性对照组相比,Me CP2在m RNA和蛋白水平的表达均显著下调;Me CP2 si RNA抑制宫颈癌Hela细胞增殖;S和G2/M期细胞数量显著减少,G1/G0期细胞数量显著增加;Me CP2 si RNA组早期凋亡和晚期凋亡显著增加;Cyclin D1和P-ERK1/2表达显著下调;P-p38表达显著上调,均P<0.01。结论 Me CP2通过调控P-ERK1/2和Cyclin D1的表达促进宫颈癌Hela细胞增殖,经过抑制p38 MAPK信号通路抑制了细胞凋亡。     

宫颈癌细胞EGFR过表达对肿瘤细胞生物学行为的影响及机制研究

目的 探索表皮生长因子受体(epidermal growth Factor receptor,EGFR)过表达对宫颈癌细胞生长,侵袭及凋亡等生物学行为的影响,并探讨其潜在机制.方法 构建EGFR过表达、EGFR空载质粒和空白对照组的宫颈癌SiHa细胞,应用MTT检测、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测EGFR...     

玉竹提取物B对Hela细胞的抑制作用

目的 观察玉竹提取物B(EB-PAOA)对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作用。方法 体外培养宫颈癌Hela细胞，将其与不同浓度的EB-PAOA共育，观察细胞变化并绘制EB-PAOA对Hela细胞的生长曲线；用MTT比色分析法测定EB-PAOA对Hela细胞的抑制率。结果 EB-PAOA抑制了Hela细胞的增殖，旦呈时间-剂量依赖性。结论 EB-PAOA对体外培养的Hela细胞具有明显的抑制作用。     

人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。     

人宫颈癌组织和Hela细胞株中SP细胞水平和生物学特性的比较研究

目的：比较宫颈癌组织和Hela细胞株中多种恶性肿瘤的侧群（SP）细胞的含量和生物学特性。方法采用Altra流式细胞仪分选出宫颈癌组织原代培养6代细胞和Hela细胞株中SP细胞,检测两种细胞的表面标记和细胞周期增殖状况。结果宫颈癌组织和Hela细胞株中SP细胞水平分别为（1．62±0．48）％和（2．70±0．59）％,Hela细胞株中SP的水平明显高于宫颈癌组织,差异有统计学意义（P＜0．05）。宫颈癌组织和Hela细胞株SP细胞的生物学标记（ABCG2、CD133、CD43、P63、Ki‐67、MDR）表达率分别为：ABCG2（78．59±5．42）％vs．（80．17±3．60）％,CD133（51．55±6．29）％vs．（52．87±4．96）％,CD43（69．73±5．70）％vs．（70．68±5．44）％,P63（47．56±6．92）％vs．（48．06±5．28）％,Ki‐67（14．69±1．69）％vs．（15．33±1．38）％,MDR（58．36±11．12）％vs．（58．24±5．32）％,表达差异均无统计学意义（P＞0．05）。各细胞周期时相分布分别为：G0/G1期（94．70±1．76）％vs．（95．10±1．59）％,S期（3．25±0．99）％vs．（2．92±0．84）％,G2/M期（2．05±1．10）％vs．（1．98±0．95）％,凋亡率（4．06±0．64）％vs．（3．92±0．59）％,坏死率（1．00±0．38）％vs．（1．12±0．31）％,表达差异均无统计学意义（P＞0．05）。宫颈癌组织和Hela细胞株两组SP细胞在生物学标记和细胞周期增殖状况的表达差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论宫颈癌组织和Hela细胞株中都存在SP细胞且含量不同,他们均具有肿瘤干细胞的生物学特性。     

garcinol对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的研究

目的研究多聚异戊二烯基苯甲酮（garcinol）对宫颈癌Hela细胞株放射敏感性的影响。方法不同浓度garcinol作用于人宫颈癌Hela细胞12、24、48h,CCK-8法检测garcinol对Hela细胞增殖活性的影响,并计算出24h时的20％和50％的药物抑制浓度（IC20和IC50）值;克隆形成实验检测20Ixmol／Lgarcinol对Hela细胞放射敏感性的影响;反转录PCR法和Westernblot法检测Hela细胞内环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）在mRNA水平和蛋白表达水平的变化。结果garcinol抑制宫颈癌Hela细胞的生长,并且有明显的时间-剂量依赖性;通过单击多靶模型计算放射生物学参数,经20μmol／Lgarcinol处理24h的Hela细胞,与单纯照射组相比,放射敏感性增加（t=6．69,P〈0．05）,放射增敏比（SER）为1．26;经20μmol／Lgarcinol处理24h的Hela细胞,COX-2的蛋白表达水平下降（P〈0．05）,而COX-2mRNA水平无明显变化（P〉0．05）。结论garcinol可以增加宫颈癌Hela细胞的放射敏感性,这可能与其降低Hela细胞中COX-2的蛋白表达水平有关。     

JMJD2B在人卵巢癌中的定位表达

目的：研究JMJD2B在人卵巢癌细胞株SKOV3中的定位和表达.方法：人卵巢癌细胞株SKOV3进行核浆分离,蛋白免疫印迹法检测细胞核和细胞浆中JMJD2B表达,PARP为细胞核标志物,β-tubulin为细胞浆标志物.激光共聚焦扫描显微镜检测内源JMJD2B在SKOV3细胞中的定位.结果：核浆分离的蛋白免疫印迹和激光共聚焦扫描纤维镜证实JM-JD2B主要定位于细胞核内,细胞浆仅有少量表达.结论：JMJD2B主要定位于卵巢癌细胞株SKOV3核内,可能是参与肿瘤细胞基因转录调控和蛋白表达的重要蛋白之一.     

半乳糖凝集素－3对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨半乳糖凝集素－3（ Gal－3）对上皮性卵巢癌细胞OVCAR3生物学行为的影响。方法使用小干扰RNA（ siRNA）和质粒转染方法,分别下调和过表达Gal－3后,采用CCK－8试剂盒检测细胞的增殖,细胞划痕实验和Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,蛋白质印迹法检测c－myc、细胞周期蛋白D1（ cyclin D1）、基质金属蛋白酶－7（MMP－7）的蛋白表达水平。结果在上皮性卵巢癌OVCAR3细胞中过表达Gal－3后, c－myc、cyclin D1和MMP－7表达增加,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强（P＜0．05）;下调Gal－3表达后,c－myc、cyclin D1和MMP－7表达下降,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降（ P＜0．001）。结论 Gal－3能促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭,针对Gal－3的靶向治疗有望成为治疗上皮性卵巢癌的新靶点。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

沉默 Piwil2表达对子宫颈癌细胞增殖和衰老的影响

目的：采用 shRNA 沉默 Piwil2基因的表达,探讨其对宫颈癌细胞株增殖和衰老特性的影响。方法通过脂质体 Lipofectamine2000转染技术和嘌呤霉素筛选,建立稳转Sh-piwil2宫颈癌细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和 Western blot 法验证沉默效果。采用细胞增殖实验、集落形成实验、细胞周期和细胞衰老等实验观察沉默 Piwil2表达对宫颈癌细胞生物学特性的影响。结果建立稳定转染 Sh-piwil2宫颈癌细胞株,与对照组相比,沉默Piwil2表达后细胞的增殖和集落形成能力均显著降低(P <0．05);细胞 G0/ G1期比例增加、S 期比例明显下降( P <0．05),同时沉默 Piwil2后细胞衰老数量明显增多( P <0．05)。结论沉默 Piwil2基因可发挥抗宫颈癌作用,推测Piwil2基因可作为宫颈癌临床治疗的一个潜在靶点。