结核病患者外周血单核细胞miR-146a表达

目的研究miR-146a在结核病患者外周血单个核细胞中的表达水平和临床意义。方法采用Trizonl一步法从结核病患者、结核病潜伏感染者和健康对照外周血单个核细胞提取总RNA,荧光定量PCR测定miR-146a的表达。同时使用荧光定量PCR测定样本中肿瘤坏死因子受体相关因子6、白细胞介素受体相关激酶1和肿瘤坏死因子的表达。结果肺结核患者外周血单核细胞miR-146a表达较结核潜伏感染和健康对照者显著下降,而潜伏感染者miR-146a表达水平(4.49±0.61)与对照组(4.57±0.25)没有差异。同时,miR-146a下游靶基因TRAF6、IRAK-1以及TNF-α表达在活动性肺结核患者中较结核潜伏感染和健康对照者增加。结论与健康对照和潜伏感染者相比,miR-146a在结核病患者外周血单个核细胞中表达显著下降,推测miR-146a有可能成为鉴别活动性结核和结核潜伏感染新的标记物。     

miR-200a在TGF-β诱导口腔黏膜修复中的功能研究

目的探索miR-200a在TGF-β诱导口腔黏膜修复过程中表达水平的变化和功能。方法分离培养原代人牙龈成纤维细胞(Human Gingival Fibroblast,HGF),加入不同浓度TGF-β,实时荧光定量PCR检测miR-200表达水平的变化。通过转染miR-200a模拟物增加miR-200a表达水平,利用Transwell实验检测细胞迁移能力,利用CCK-8实验检测细胞增殖活性,利用蛋白质免疫印迹实验检测细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平。结果 TGF-β处理会引起HGF细胞miR-200a表达水平下降,且随着TGF-β作用浓度增加,miR-200a表达下降比例增加;与对照组相比,转染miR-200a模拟物的实验组miR-200a表达水平上升,细胞增殖活性下降,迁移到Transwell下层小室的细胞数目降低,Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达水平下降。结论 miR-200a在TGF-β诱导口腔黏膜修复过程中可以抑制HGF的增殖活性、迁移能力和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达,进而影响口腔黏膜的修复和重建。     

miR-146a在原发性肝癌组织中表达及对细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-146a在原发性肝癌组织中表达,以及上调原发性肝癌HepG2细胞中miR-146a表达水平对细胞增殖和侵袭的影响。方法:2015年3月至2018年3月,行肝癌手术治疗的原发性肝癌患者89例,利用实时荧光定量PCR技术检测原发性肝癌和癌旁组织中miR-146a表达,培养HepG2细胞并分为miR-146a模拟物组、阴性对照组和空白组,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞中miR-146a表达,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:原发性肝癌组织中miR-146a相对表达量为0.36±0.09,癌旁组织中则为1.04±0.11,差异有统计学意义(t=43.947,P=0.000);miR-146a表达量在中高分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、发生淋巴结转移及有门静脉癌栓的原发性肝癌组织中降低(P 0.05);miR-146a模拟物组细胞中miR-146a相对表达量高于阴性对照组和空白组(P 0.05);miR-146a模拟物组24、48、72和96h时细胞吸光度A值低于阴性对照组和空白组(P 0.05);miR-146a模拟物组迁移细胞数和侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组(P 0.05)。结论:miR-146a在原发性肝癌组织中呈低表达,且与肿瘤发生及恶性化进展有关,特异性提高HepG2细胞中miR-146a表达水平可降低细胞增殖能力,抑制细胞迁移和侵袭能力     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨microRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:miR-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;miR-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

TGF-β1通过miR-21d-5p调控BMP7表达诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移

目的:探讨转化生长因子-β₁(TGF-β₁)可能通过微小RNA-21d-5p(miR-21d-5p)对骨形态发生蛋白7(BMP7)的调控,从而对肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的影响及可能机制。方法:观察TGF-β₁处理的肾小管上皮细胞HK-2并检测miR-21d-5p的表达,在HK-2细胞中分组转染miR-21d-5p或anti-miR-21d-5p,再使用TGF-β₁处理,观察过度表达或抑制表达miR-21d-5p对TGF-β₁诱导肾小管上皮细胞的细胞活性及迁移的影响。分析TGF-β₁、miR-21d-5p与BMP7的靶向关系。共转染miR-21d-5p和pcDNA3.1-BMP7,或anti-miR-21d-5p和si-BMP7,使用TGF-β₁处理,评估TGF-β₁、miR-21d-5p与BMP7的在肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的相互关系。结果:TGF-β₁处理HK-2细胞后,miR-2...     

miR-34a通过调控TGF-β/Smad4信号通路激活自噬而降低结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性

目的探讨miR-34a调节结肠癌细胞对奥沙利铂(OXA)的耐药作用及其机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测结肠癌组织和细胞系中miR-34a的表达水平;采用基因软件预测、分析及检测结肠癌细胞中miR-34a的下游靶基因;采用细胞计数试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞的生存率;采用流式细胞仪以及Western blot方法检测结肠癌细胞的凋亡和自噬情况。结果接受OXA化疗的结肠癌患者的血清中miR-34a的表达水平明显降低,转化生长因子-β(TGF-β)mRNA和Smad4 mRNA的表达水平均明显增高。OXA引起miR-34a的表达下调,亲代结肠癌细胞和对OXA耐药的结肠癌细胞中TGF-β和Smad4的表达均上调。自噬的激活增强了结肠癌细胞对OXA的耐药性。在结肠癌组织中,Smad4 mRNA和miR-34a的表达水平间具有负相关性,过表达miR-34a通过靶向抑制Smad4的表达来抑制自噬的激活并降低耐药性。结论 miR-34a抑制TGF-β/Smad4信号通路的激活,抑制自噬降低结肠癌细胞对OXA的耐药性。     

糖尿病肾病患者血清miR-192的表达及其对转化生长因子β信号通路的影响

目的 检测糖尿病肾病(DN)患者血清中microRNA( miR)-192的表达,并探讨其在DN的作用机制.方法 应用实时荧光定量PCR检测肾活检确诊的DN组、糖尿病无肾损害组和健康人群血清中miR-192的表达,以U6小RNA为内参,计算其相对表达量.同时检测肾组织miR-210表达.探讨miR-192作为DN特异性血清学指标的可能性.用生物信息分析方法分析可受miR- 192调节的靶基因,并在体外过表达或下调miR - 192表达以进一步研究.用不同浓度转化生长因子β1( TGF-β1)刺激肾小球系膜细胞,检测细胞和培养上清中miR - 192 含量.结果 DN患者血清miR- 192表达量显著低于健康对照(0.41±0.09比1.00±0.00,P＜0.01).各组间miR-210表达差异无统计学意义.TGF-β信号通路下游基因抗锌指E盒结合蛋白1(ZEB-1)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)可被miR- 192调节.不同浓度TGF-β1刺激均导致系膜细胞及培养上清miR-192含量显著下降.结论 血清中miR-192可能通过调节TGF-β通路参与DN的发病.miR-192具有的特异性可能会成为DN潜在的诊断标志物.     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

miRNA与TSP-1mRNA在肾小管上皮细胞中的表达水平研究

目的糖尿病肾病是一种进展性的肾脏疾病,也是导致终末期肾病的主要病因。目前的研究表明,miRNA在糖尿病肾病的发生及进展过程中起重要的作用。本实验通过研究miR-18a、miR-19a、miR-194及TSP-1在高糖与TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞中的表达情况,进一步探索miRNA在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法用半定量RT-PCR监测人肾小管上皮细胞在低糖组(终浓度5 mmol/L)、高糖组(终浓度30 mmol/L)及高糖组+TGF-β1组不同时期TSP1mRNA、miR-18a、miR-19a及miR-194的表达水平。结果TSP1mRNA的表达水平随血糖浓度的升高及培养时间的延长逐渐升高,而miR-194成逐渐下降的趋势,但miR-18a和miR-19a的表达水平并未随血糖浓度改变有明显变化。通过TGF-β1处理的体外培养的肾小管上皮细胞48h,研究结果显示,与未经TGF-β1处理的高糖组相比,TGF-β1+高糖组能进一步升高肾小管上皮细胞TSP1mRNA的表达水平,使肾小管上皮细胞miR-194的表达进一步下降,并具有统计学差异。结论通过研究结果显示,TGF-β1对TSP1的表达水平起正性调节作用,对miR-194的表达水平呈负性调节作用,而针对TSP1是否为miR-194靶向调节基因,还需后续试验进一步验证。     

miRNA-146a在小鼠小胶质细胞炎症反应中的作用

目的评价microRNA(miR)-146a在小鼠小胶质细胞炎症反应中的作用。方法小鼠小胶质细胞BV2进行培养,选取对数生长期的细胞,采用随机数字表法分为5组(n=48):对照组(C组)、LPS组、LPS+miR-146a模拟物组(LPS-M组)、LPS+miR146-a抑制物组(LPS-I组)和LPS+阴性对照组(LPS-NC组)。LPS-M组、LPS-I组和LPS-NC组分别将miR-146-a模拟物RNA、miR-146a抑制物RNA和模拟物/抑制物的错义RNA转染至细胞。转染成功后,LPS组、LPS-M组、LPS-I组和LPS-NC组细胞分别加入终浓度为1 μg/ml的LPS,C组加入等容量培养基,孵育6 h。采用qRT-PCR法检测细胞miR-146a、白介素受体相关激酶1(IRAK1) mRNA和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6) mRNA的表达,采用Western blot法检测细胞IRAK1和TRAF6的表达。收集细胞上清液,采用ELISA法检测TNF-α、 IL-1β和IL-6的浓度。结果与C组比较,LPS组细胞miR-146a表达、IRAK1和TRAF6及其m...     

基于RhoA/ROCK通路研究miR-146a过表达对类风湿关节炎大鼠关节损伤的修复作用

目的：探究miR-146a过表达在基于RhoA/ROCK通路对类风湿关节炎大鼠关节损伤的修复作用。方法：选取40只SD健康雄性大鼠。10只纳入正常组,其余30只建立类风湿关节炎大鼠模型,并分为模型组、沉默miR-146a组、过表达miR-146a组（每组10只）。正常组、模型组使用生理盐水干预,沉默miR-146a组建立沉默miR-146a模型,过表达miR-146a组建立过表达miR-146a模型。分别在研究3周、6周、9周、12周对各组大鼠进行关节炎指数（AI）评分。蛋白质印迹法检测RhoA、ROCK1、ROCK2及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、克隆叉头蛋白O3a(FoxO3a)蛋白表达情况。使用酶联免疫法检测白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-17(IL-17)、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平。结果：沉默miR-146a组大鼠AI评分高于模型组;过表达miR-146a组大鼠AI评分低于模型组、沉默miR-146a组,但高于正常组（P<0.05）。模型组、沉默miR-146a组大鼠RhoA、ROCK1及ROCK2表达水平均低于正常组,且沉默miR-146a组高于模型...     

miR-193b对胃癌细胞浸润和转移的影响

目的:探讨miR-193b转染对胃癌细胞浸润、转移的影响及其作用机制。 方法:应用microRNA芯片检测TGF-β1处理胃癌细胞BGC823前后miRNA的差异表达谱;应用划痕实验,transwell 迁移浸润及裸鼠成瘤等实验分别检测瞬时转染miR-193b抑制剂前后胃癌细胞株生物学行为的变化。 结果:TGF-β1处理胃癌细胞BGC823前后miRNA的表达谱存在6个差异表达,包括3个（miR-27a, miR-29b-1和 miR-194）表达上调,3个（miR-193b, miR-574-3p和miR-130b）表达下调。转染miR-193b 抑制剂后,胃癌细胞株BGC823迁移、浸润和转移的能力明显增强。 结论:TGF-β1可能通过下调miR-193b的表达负向调控胃癌细胞的迁移、浸润和转移。     

miR-301a在结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的:分析结肠直肠癌组织miR-301a的表达及其与结肠直肠癌病人临床病理特征的关系。探讨下调miR-301a表达对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力以及PTEN蛋白表达的影响。方法:应用实时定量PCR方法检测48对结肠直肠癌组织和癌旁组织以及5种结肠癌细胞株中miR-301a的表达。应用瞬时转染方法将miR-301a抑制剂转入结肠癌细胞株HCT116后,用细胞增殖实验(CCK-8法)、transwell侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭力;采用transwell迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;并用Western印迹技术检测下调miR-301a后其靶蛋白PTEN表达的变化。结果:PCR结果显示,miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较其对应的癌旁组织和无淋巴结转移的癌组织为高(P<0.05);5种结肠癌细胞中均有不同程度表达;transwell侵袭、迁移实验显示,miR-301a抑制剂转染后HCT116细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05);增殖实验显示,下调miR-301a对结肠癌细胞抑制作用明显(P<0.05)。划痕实验表明,miR-301a抑制剂转染组细胞迁移能力明显受到抑制。Western印迹法显示,miR-301a抑制剂转染组细胞PTEN蛋白表达增加。结论:miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较高;下调miR-301a的表达抑制HCT116细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且PTEN蛋白表达增加。miR-301a对结肠癌细胞生物学功能的影响可能是通过PTEN信号通路实现的。     

肿瘤相关成纤维细胞通过转化生长因子β调节胃癌细胞转移能力的研究

目的 :通过研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)促进胃癌细胞侵袭迁移的能力,探讨胃癌转移机制。方法:从胃癌组织分离CAF。通过transwell小室模型和Western印迹法检测CAF与胃癌细胞共培养对胃癌细胞侵袭迁移能力、上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响。使用ELISA和定量PCR分别检测CAF转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分泌水平和TGFB mRNA表达水平。进一步通过Western印迹法检测共培养后胃癌细胞中TGF-β信号通路标志物Smad2和磷酸化Smad2的表达水平。使用TGF-β拮抗剂阻断TGF-β信号通路,检测CAF对胃癌细胞EMT及侵袭迁移能力影响。结果:CAF促进MKN28侵袭迁移和发生EMT。CAF的TGF-β1分泌量较高于NF。与CAF共培养后,TGF-β信号通路活化。TGF-β拮抗剂抑制CAF诱导胃癌细胞发生EMT和CAF促胃癌细胞侵袭迁移的能力。结论:CAF通过分泌TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT,从而促进了胃癌细胞侵袭能力,可能是胃癌转移的重要机制。     

miR-146a在胰腺癌组织中的表达及临床意义

[摘要] 目的 分析20例胰腺癌及胰腺良性病变组织中miR-146a的表达差异,评价miR-146a在胰腺癌中表达的临床意义及其价值。方法 收集笔者医院14例胰腺癌患者手术标本的癌组织,6例胰腺良性病变组织作为对照。采用Agilent 人microRNA寡核苷酸基因芯片(V12.0)在基因组范围内检测20例组织标本的miR-146a表达,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。结果 胰腺癌组织中miR-146a的表达显著高于胰腺良性病变组织,差异有统计学意义(P =0.003), miR-146a在胰腺癌组织中的表达与患者年龄、性别、吸烟、临床分期、局部淋巴结转移,远处转移、CA199浓度、肿瘤分化程度、肿瘤分期,神经束膜侵犯、脉管侵犯均无相关性(P >0.05)。结论 miR-146a在胰腺癌的发生、发展过程可能发挥重要作用并可能成为胰腺癌新的肿瘤标记物或预后因子。     

miRNA-146调控TLR4/NF-κB通路促进滋养层细胞增殖和迁移

目的 探讨miRNA-146是否通过调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移，以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考。方法 (1)细胞研究：将转染后的胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo分成miRNA-146抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146模拟物组、模拟物对照组，检测各组HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平。(2)动物研究：建立Dicer酶敲除的uRSA小鼠模型，将正常妊娠小鼠作为对照组，通过qRT-PCR检测胎盘组织的miRNA-146 mRNA表达情况，采用免疫组织化学法检测胎盘组织的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达情况。结果 (1)细胞研究：与模拟物对照组比较，miRNA-146模拟物组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<...     

长链非编码RNA NEAT1调控miR-486/FOXO1轴参与椎间盘髓核细胞退变的机制研究

【摘要】 目的：明确长链非编码RNA核富集转录本1（lncRNA NEAT1）、miR-486、FOXO1之间的相互关系,探讨三者在椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）组织中的表达及相关性,阐明NEAT1通过调控miR-486/FOXO1轴参与IDD进展的具体机制。方法：利用双荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation,RIP）试验等明确NEAT1、miR-486与叉头框蛋白O1（forkhead box protein O1,FOXO1）的生物学关系;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）、免疫印迹（Western blot）检测15例对照和30例IDD髓核组织中NEAT1、miR-486与FOXO1的表达,统计其与Pfirrmann分级的关系;采用白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）诱导法构建髓核细胞退变模型,NEAT1小干扰RNA（NEAT1 small interfering RNA,si-NEAT1）和过表达质粒转染髓核细胞构建细胞沉默或过表达模型;细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）和流式细胞术检测髓核细胞增殖和凋亡;RT-qPCR检测细胞NEAT1与miR-486表达;Western blot检测FOXO1及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）中聚集蛋白聚糖（aggrecan）、二型胶原（collagen Ⅱ）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase, MMP-13）和含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样基质金属蛋白酶4（a disintegrin-like and metalloproteinase with thrombospondin type l motifs 4,ADAMTS4）的表达。结果：NEAT1可通过碱基互补配对方式海绵吸附miR-486;miR-486靶向FOXO1的3′-非编码区（3′-UTR）抑制FOXO1蛋白表达。在IDD髓核组织中,NEAT1与FOXO1表达上调,与Pfirrmann分级呈显著正相关（P<0.001）;而miR-486表达下调,与Pfirrmann分级呈显著负相关（P<0.001）。分子细胞学实验证实,IL-1β诱导髓核细胞退变后,NEAT1的过表达进一步促进了髓核细胞凋亡（P<0.01）,加重了Aggrecan和Collagen Ⅱ的表达抑制（P<0.01）,增强了MMP-13和ADAMTS4的表达（P<0.01）;相比之下,NEAT1的沉默则逆转了髓核细胞凋亡（P<0.01）,有效恢复了Aggrecan和Collagen Ⅱ表达（P<0.01）,同时显著降低了MMP-13和ADAMTS4的表达（P<0.01）。结论：NEAT1调控miR-486/FOXO1分子轴并促进髓核细胞凋亡和ECM降解进而参与IDD病理机制过程。     

miR-21在TGF-β1引起的肝卵圆细胞上皮间质转化中的作用

[摘 要] 目的 探讨microRNA-21（miR-21）在TGF-β1引起的肝卵圆细胞（hepatic oval cell,HOC）上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法 体外培养大鼠肝卵圆细胞,用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,Western blotting检测EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vi-mentin）表达情况;用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 5 d后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况;分别用miR-21增强和抑制慢病毒转染HOC构建稳定的细胞株,PCR检测miR-21的表达情况;接着用TGF-β1刺激miR-21抑制慢病毒转染的HOC 5 d,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;用miR-21增强慢病毒转染HOC后,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果 TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,E-cadherin逐渐减低,N-cadherin和Vimentin逐渐升高。TGF-β1刺激HOC 5 d后miR-21的表达增强了4.32倍。分别用增强和抑制慢病毒转染HOC后,miR-21的表达增强了3.82倍和抑制了0.22倍。下调miR-21表达后,TGF-β1致HOC的EMT作用减弱。miR-21过表达后,HOC发生了EMT。结论 抑制miR-21的表达可以减少TGF-β1引起的HOC的EMT作用,从而减轻肝纤维化。     

增生性瘢痕中差异性miRNA的筛选及作用初探

目的筛选出增生性瘢痕中异常表达的miRNA,检测miR-637对增生性瘢痕的调节作用。方法通过Real time PCR的方法验证芯片分析得到的差异性miRNAs在30例增生性瘢痕患者组织中的表达情况;报告基因实验检测miR-637对SMAD3的作用。通过MTT和Transwell方法检测miR-637对HACAT细胞增殖和迁移的作用。通过Western Blot检测miR-637对细胞中SMAD3、Cyclin D1和MMP2的影响。结果 Real time PCR证实,增生性瘢痕中miR-637、miR-487、miR-154、miR-582、miR-194等表达显著下调;miR-21、miR-503、miR-550等表达上调。报告基因实验检测显示,miR-637与SMAD3具有结合位点;MTT和Transwell实验检测显示,miR-637可以抑制HACAT细胞的增殖和迁移。Western blot实验证明,miR-637可以抑制SMAD3、Cyclin D1和MMP2的表达。结论 miR-637在增生性瘢痕中呈低表达,可能成为预防和治疗增生性瘢痕的潜在靶点。     

转化生长因子-β1诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞转化的研究

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的可能性.方法 密度梯度法分离培养兔BMSCs,取BMSCs(P3).实验组:含TGF-β1的诱导培养基,对照组:不含TGF-β1诱导培养基,体外培养两周.阿尔新蓝法(Alcian blue)检测培养基内葡糖胺聚糖(GAG)含量.培养第14天,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测髓核样细胞Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)及聚集蛋白多糖(Aggrecan) mRNA基因表达.免疫组织化学法测定CollagenⅡ的含量变化.结果 GAG检测结果显示,第7、10、13天实验组GAG含量均显著高于对照组(P＜0.01).实验组CollagenⅡ免疫组织化学染色阳性,表达量较对照组高.Real-time PCR结果证实:实验组CollagenⅡ和Aggrecan mRNA表达水平较对照组显著增高(P＜0.01).结论 TGF-β1能明显增加BMSCs向髓核样细胞分化的诱导生物活性,促进BMSCs向髓核样细胞定向分化.