肉豆蔻木脂素通过PI3K/AKT信号通路诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨肉豆蔻木脂素（myrislignan, MYR）对胃癌细胞凋亡的影响及与磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)信号通路的关系。方法 采用不同浓度的MYR（即0、25、50、100和200μmol/L）作用胃癌细胞（SGC-7901）48 h和72 h,CCK8法检测细胞活性。选择MYR(50、100和200μmol/L)作用胃癌细胞（SGC-7901）48 h,同时设置正常对照（Control）组和溶剂对照（0.1%DMSO）组,采用流式细胞仪检测凋亡率,蛋白质印迹法检测PI3K、AKT、Bcl2关联X蛋白（Bcl-2 associated X protein, BAX）、半胱天冬酶（cysteine-dependent aspartate-specifc protease, Caspase）-3和Caspase-9蛋白的表达水平。特异性PI3K激活剂（20μmol/mL）作用胃癌细胞（SGC-7901）48 h（分组为：Control组、0.1%DMSO组、MY...     

PI3K／AKT信号通路在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468中的作用及三氧化二砷对其的干预作用

目的：探讨三氧化二砷通过磷脂酰肌醇‐3‐激酶（PI3K）／蛋白激酶B（AKT）信号通路对三阴性乳腺癌细胞MDA‐MB‐468凋亡的影响。方法实验分为空白对照组,三氧化二砷组（2、4、8μmol／L ）,LY294002组（25μmol／L ）,三氧化二砷（4μmol／L）联合LY294002（25μmol／L）组（联合组）;MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot分析各组PI3K／AKT通路的激活状况及其下游靶分子细胞周期蛋白 A1（Cyclin A1）,Cyclin D1,Bax ,Bcl‐2的表达。结果2、4、8μmol／L三氧化二砷,LY294002都可显著抑制细胞活力（P＜0．05）,并且在48 h抑制程度最高;与对照组比较,4μmol／L三氧化二砷及LY294002都可使细胞周期阻滞在G1期（P＜0．05）,并降低AKT磷酸化水平（P＜0．05）,进而下调Cyclin A1,Cyclin D1, Bcl‐2的表达（P＜0．05）,上调Bax的表达（P＜0．05）;三氧化二砷联合LY294002处理MDA‐MB‐468细胞较药物单独作用效果增强（P＜0．05）。结论三氧化二砷及LY294002可通过阻断PI3K／AKT信号通路来诱导三阴性乳腺癌细胞MDA‐MB‐468凋亡,二者具有协同作用。     

飞燕草素通过AKT/mTOR通路诱导HER-2+乳腺癌细胞自噬

目的：研究飞燕草素对HER-2+乳腺癌细胞MDA-MB-453自噬的诱导作用及其分子机制。方法：以不同浓 度飞燕草素处理MDA-MB-453细胞,CCK-8检测细胞增殖情况;TdT介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)和Western印迹检测细胞凋亡和与凋亡相关蛋白的表达;荧光斑点、免疫荧光和Western 印迹检测自噬的诱导情况和诱导机制。 结果：飞燕草素抑制MDA-MB-453细胞增殖,增加TUNEL阳性细胞数,下调 caspase-3 和caspase-9蛋白活性,上调裂解的caspase-3和裂解的caspase-9蛋白活性。飞燕草素增加GFP-LC3荧光斑点数、 LC3免疫荧光斑点数、LC3-II和ATG5蛋白表达。飞燕草素下调mTOR通路蛋白AKT,mTOR,eIF4E和p70s6k蛋白活 性。结论：飞燕草素诱导HER-2+乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡的同时通过抑制AKT/mTOR通路诱导细胞自噬。     

miR-21靶向PTEN调控AKT/FoxO1信号通路对胃癌细胞凋亡的机制研究

目的:探究miR-21靶向PTEN调控AKT/FoxO1信号通路对胃癌细胞凋亡的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞分为miR-NC inhibitors组(SGC-7901细胞中转染miR-NC inhibitors质粒)、miR-21 inhibitors组(SGC-7901细胞中转染miR-21 inhibitors质粒)、miR-21 inhibitors+sh-PTEN组(SGC-7901细胞中转染miR-21 inhibitors和sh-PTEN质粒);Control组(不转染任何质粒的SGC-7901细胞)。qRT-PCR检测细胞中miR-21 mRNA表达;采用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪检测细胞增殖、侵袭能力和凋亡率;蛋白质印迹检测细胞中PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、FoxO1蛋白表达;双荧光素酶报告检测miR-21和PTEN的靶向关系。结果:人正常胃黏膜上皮细胞GES-1(1.00±0.10)相比,胃癌细胞SGC-7901中miR-21(1.89±0.17)表达明显升高(P<0.05)。Control组相比,miR...     

Notch信号通路在三阴性乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是一类具有多种亚型的异质性肿瘤,目前根据2015年St.Gallen会议提出的临床病理替代分子分型,将乳腺癌分为管腔A型、管腔B型、HER-2过表达型及三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)[1].每一亚型都有其自身的发生发展规律、生物学特点及预后风险.TNBC作为一种特殊的乳腺癌分子亚型,具有临床表现多样、易早期复发及5年生存率低等特点,给临床治疗带来极大挑战.因TNBC缺乏相应的治疗靶点而不能进行内分泌治疗及靶向治疗,只能以化疗为主,但疗效欠佳,预后差.探索TNBC行之有效的治疗靶点将为指导TNBC临床治疗提供新思路.     

甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

目的 探究甘草查尔酮A（LCA）对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法 通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC50）;不同浓度LCA（0、10、20及40 μmol/L）处理H226细胞48 h,通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响,通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1,以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响,并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况;选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型,随机分为两组（对照组和LCA处理组）,腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量,从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,与空白组比较,随着LCA浓度的增加,细胞存活率明显降低,48 h的IC50为28.3 μmol/L;流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期（P<0.05）,Western blot的结果显示,LCA处理后,CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低（P<0.05）;PI3K和Akt的表达无明显变化,但是它们的磷酸化水平（p-PI3K和p-Akt的表达）显著降低（P<0.05）;裸鼠荷瘤实验表明,LCA可使肿瘤体积和质量明显减小（P<0.05）。结论 LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞,其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。     

吴茱萸碱调控PI3K/AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导凋亡

目的 研究吴茱萸碱对鼻咽癌5-8F细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法 (1)将5-8F细胞分为溶剂对照组、不同浓度吴茱萸碱组(0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^-1)、顺铂组(cisplatin,4.0μg·mL^-1);(2)将5-8F细胞设为5组：溶剂对照组、SC792.5μmol·L^-1组、SC79+吴茱萸碱2.0μmol·L^-1组、吴茱萸碱2.0μmol·L^-1组、LY294002 50μmol·L^-1组。采用实时无标记细胞功能分析仪(real time cellular analysis technology,RTCA)监测细胞增殖的情况;Annexin V-FITC/PI双荧光染色法检测细胞凋亡率,Hoechest 33342染色法观察细胞凋亡形态;Western blot法检测磷酸肌醇3-激酶蛋白(phosphatidylinositol 3-kiases,PI3K)、磷酸化蛋白质激酶蛋白B(phosphorylate...     

黄芩素通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路诱导膀胱癌细胞凋亡

目的 研究黄芩素对膀胱癌细胞的作用及机制。 方法 膀胱癌细胞T24和5637经黄芩素(处理组)或二甲基亚砜(对照组)处理后,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)以及胸腺嘧啶核苷类似物(EdU)插入实验检测细胞增殖和DNA复制速率;划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡水平;Western blotting检测PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)等蛋白的表达水平;裸鼠成瘤实验检测黄芩素对于体内膀胱癌细胞增殖能力的影响。 结果 黄芩素可以在体内和体外抑制膀胱癌细胞的增殖速率,高浓度黄芩素体外抑制率可达80%以上,体内抑制率约50%。黄芩素可以减缓DNA复制并降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,诱导细胞停滞在G₀/G₁期,发生细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义。黄芩素处理后,PI3K的表达以及AKT和mTOR的磷酸化水平降低,Bax/Bcl-2的比值升高。 结论 黄芩素通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞增殖,发生周期阻滞,诱导细胞凋亡。     

丙泊酚通过靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞生长

探讨丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法 在体外,丙泊酚10 mg/mL分别与乳腺癌MCF-7和BT474细胞系共孵育分为对照组和丙泊酚组。PI3K过表达质粒经丙泊酚处理后转染MCF-7细胞分为对照组、丙泊酚+PI3K组、PI3K组,分别检测细胞的生存、侵袭及凋亡情况。Western blot检测PI3K/AKT/ mTOR信号通路相关蛋白表达水平。在体内构建MCF-7小鼠模型,免疫组化和TUNEL实验用于检测乳腺癌细胞的生长和凋亡情况。结果 丙泊酚显著抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭能力（P＜0.05）。Western blot和细胞凋亡实验结果显示,丙泊酚通过降低Bcl-2和Bcl-w在乳腺癌细胞中的表达水平来诱导细胞凋亡（P＜0.05）。丙泊酚降低了乳腺癌细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)和mTOR蛋白表达水平（P＜0.05）。对P13K进行过表达处理后显示,PI3K过表达逆转了丙泊酚对MCF-7细胞的生长和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。体内实验表明,丙泊酚治疗明显抑制MCF-7小鼠模型中的肿瘤生长,促进了细胞凋亡（P＜0.05）。结论 丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭,促进细胞凋亡     

白花丹素通过调节线粒体相关旁路蛋白及细胞周期促进非小细胞肺癌H23细胞的凋亡

目的研究天然小分子复合物白花丹素对人类非小细胞癌H23细胞的凋亡作用及其内在机制。方法应用不同浓度梯度的白花丹素(0.5~200μmol/L)培养H23细胞24 h,水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测H23细胞增殖活力,双染流式细胞仪检测凋亡细胞及细胞周期,计算药物半数抑制浓度(IC50),CM-H2DCFDA探针检测细胞内活性氧化物(ROS),聚丙烯凝胶电泳法检测线粒体旁路相关蛋白。结果白花丹素对于H23细胞系具有极高的抑制增殖的效应,IC50为7.80μmol/L。该抑制增殖效应与G2/M细胞周期停滞,ROS和凋亡相关细胞死亡有关。白花丹素造成细胞周期G2/M的比例上升,并增加ROS的水平。在H23细胞系中,白花丹素增加细胞色素C(Cytochrome C)的表达,促凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)、半胱氨酸蛋白酶9(caspase 9)的活化,而降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论白花丹素导致H23细胞G2/M周期停滞,并通过线粒体相关旁路诱导人类非小细胞肺癌H23细胞系的凋亡。     

肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DN...     

高糖抑制PI3K/AKT通路诱导人冠状动脉内皮细胞凋亡的研究

目的探讨高糖对人冠状动脉内皮细胞凋亡及微颗粒释放的影响及机制。方法根据细胞培养基中葡萄糖浓度不同分为3组：正常对照组（5．5mmol/L）,中糖组（17．6mmo/L）,高糖组（33．3mmol/L）,另设甘露醇对照组（20．0mmol/L）。通过Hoechst 33258荧光染色观察凋亡形态学变化,应用流式细胞术检测内皮微颗粒细胞凋亡率及微颗粒,ELISA法检测人冠状动脉内皮细胞的凋亡相关蛋白Bad、Bax的表达以及PBK、p-Akt蛋白的表达。结果随着葡萄糖浓度增加,人冠状动脉内皮细胞微颗粒的释放及细胞凋亡率逐渐增加,高糖组最高（P〈0．01）;人冠状动脉内皮细胞分泌Bad、Bax逐渐增多,高糖组最高（P〈0．01）;人冠状动脉内皮细胞分泌PBK、p-Akt逐渐减少,高糖组减少最明显（P〈0．01）。与甘露醇对照组比较,正常对照组微颗粒的释放,细胞凋亡率,分泌Bad、Bax、P13K、p-Akt差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖可以促进人冠状动脉内皮细胞凋亡及微颗粒的释放．其机制可能同PDK／AKT途径相关。     

尼古丁通过PI3KAKT信号通路抑制MIA诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡

摘要：目的 探讨尼古丁通过PI3KAKT信号通路抑制碘乙酸钠（MIA）诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡。方法 实验分为正常组,模型组（4 μM MIA）,尼古丁给药组（10-8,10-7,10-6,10-5 M）,MTT法检测各组软骨细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式双染细胞术检测各组软骨细胞凋亡;分光光度法检测各组软骨细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase 3）活性;Western blot分析磷脂酰脂醇3激酶（PI3K）/AKT激活状况及下游靶分子Bax,Bcl-2的表达情况。结果 10-7,10-6 M尼古丁显著促进大鼠软骨细胞活力（P<0.05）,10-5 M尼古丁显著降低大鼠软骨细胞活力（P<0.05）,10-8 M尼古丁对大鼠软骨细胞活力无影响（P>0.05）。10-8,10-7,10-6 M尼古丁能剂量依赖性的提高MIA诱导的大鼠软骨细胞活力,并抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡及Caspase 3活性（P<0.05）;10-7,10-6 M尼古丁能提高PI3K表达及AKT磷酸化水平,并下调促Bax表达,上调Bcl-2表达（P<0.05）。 结论 一定剂量尼古丁可通过PI3K/AKT信号通路抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡。     

YM155诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬并促进其凋亡

目的:研究生存素(survivin)抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡及自噬的影响及其可能的作用机制?方法:采用CCK-8法检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时联合加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞与单用组比较细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Real-time PCR法检测不同加药组与对照组细胞的survivin?beclin 1和bcl-2的mRNA表达量;蛋白质印迹法检测survivin?bcl-2?caspase-3?PARP及自噬相关蛋白beclin 1和LC-3表达变化情况?结果:YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性?流式细胞结果显示YM155在0.5?1.0?1.5 ng/mL浓度对细胞的凋亡率分别是(11.9 ± 2.4)%?(21.7 ± 2.6)%?(30.8 ± 4.5)%,与对照组(6.4 ± 1.2)%相比具有统计学意义(P < 0.01)?当使用自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L)联合处理细胞24 h后细胞增殖率(62.5 ± 3.3)%,与单用YM155组(54.7 ± 2.7)%相比,细胞增殖活性增强(P < 0.05)?YM155可显著下调survivn的mRNA和蛋白表达,降低bcl-2和提高caspase-3?PARP的蛋白表达,同时上调beclin 1表达及增加LC-3Ⅱ/ LC-3Ⅰ的比值,促进细胞自噬的发生?结论:YM155能够有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬的发生,其诱导的自噬效应进一步促进其凋亡的发生?     

立普妥对高糖诱导的HUVEC凋亡及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的探讨立普妥对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的凋亡及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮(e NOS)信号通路的影响。方法实验分为正常组,模型组(33.3 mol/L葡萄糖),立普妥组(33.3 mol/L葡萄糖+0.1,1,10μmol/L);MTT法检测各组HUVEC活力;倒置显微镜拍照检测各组HUVEC形态;Annexin V-FITC/PI流式双染法检测各组HUVEC凋亡;Gries法检测各组HUVEC上清NO含量;Western blot分析PI3K/AKT激活状况及e NOS的表达情况。结果与正常组比较,高糖组中HUVEC皱缩,变圆变亮,细胞活力降低,细胞早期凋亡和晚期凋亡率显著提高,NO含量及e NOS、PI3K表达量及AKT磷酸化程度降低,差异均具有显著性(P0.05);与模型组比较,1,10μmol/L立普妥组中HUVEC形态恢复,细胞活力上升,PI3K表达量提高,差异均具有显著性(P0.05);0.1,1,10μmol/L立普妥组HUVEC凋亡程度下降,NO含量、e NOS表达量提高,AKT磷酸化水平上升,差异均具有显著性(P0.05)。结论立普妥可抵抗高糖诱导的HUVEC凋亡,是通过激活PI3K/AKT/e NOS信号通路实现的。     

miR-200调控NQO1信号通路诱导三阴性乳腺癌远处转移

[目的]探讨miR-200通过NQO1信号通路促进三阴性乳腺癌发生远处转移的机制.[方法]采用基因芯片扫描技术分析与miR-200表达密切相关的下游分子,并以损伤愈合实验验证miR-200在乳腺癌转移过程中的作用机制.[结果]miR-200的表达与NQO1密切相关,在过表达miR-200的细胞系下调NQO1后,乳腺癌细胞迁移能力明显受到抑制.[结论]miR-200通过NQO1信号通路促进乳腺癌远处转移.     

RNA干扰PLK1基因诱导人前列腺癌细胞PC-3的凋亡研究

目的探讨质粒表达载体介导的RNA干扰抑制PLK1基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响。方法构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒（psh—PLK1）。将该干扰质粒转染到人前列腺癌细胞PC-3中，应用RT—PCR技术分析RNA干扰后各组细胞PLK1基因mRNA表达水平的变化。采用MTT法和细胞形态学分析检测PLK1基因表达受到抑制后PC-3细胞的增殖情况的变化，通过流式细胞分析技术以及PI染色技术进行对各组细胞进行细胞凋亡检测。结果RT—PCR结果显示，转染RNA干扰表达质粒（psh-PLK1）24h和48h后，实验组PC-3细胞较对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了74．6％和91．2％；转染了psh-PLK的PC-3细胞与对照组相比生长受到明显抑制（P〈0．05），而各对照组之间差异无显著性（P〉0．05）；流式细胞仪检测发现转染了psh-PLK1的PC-3细胞较对照组细胞产生了更强的细胞凋亡（39．2％），PI荧光染色可见实验组细胞呈现出典型的细胞凋亡形态学变化。结论RNA干扰PLK1基因能够有效地抑制PC-3细胞中PLK1基因的表达，从而抑制PC-3细胞的生长与增殖，并诱导PC-3细胞产生凋亡。