一种新的修复抗原法在免疫组化染色中的应用

在免疫组织化学染色中,我们首创了应用硫酸铝钾或硫糖铝暴露和聚集〔１〕抗原的方法,现总结如下。１９９５年１０月～１９９７年４月对８３０例不同病变的石蜡包埋组织标本,应用了２５种抗体进行免疫组化染色,结果显示：操作简便,在提高单克隆抗体和受体的阳性率和染色强度方面效果显著。特别对Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｄｅｓｍｉｎ、ｐ１６蛋白、ｐ５３蛋白、ＰＣＮＡ和ＨＰＶ阳性率及染色强度显著提高;硫糖铝在多克隆抗体染色中对减少非特异性染色效果明显。１　材料和方法１．１　材料１．１．１　８３０例我院手术切除病变标本,福尔马…     

三种免疫组化抗原热修复方法的对比分析

目前,免疫组化技术已发展成为常规病理诊断中必不可少的辅助手段,尽管它只是蛋白水平的检测方法,而且对标记结果的解读还需要深入研究,但由于方法简单、设备要求相对较低,故它仍被各级医院病理科倚重。由于病理常规制     

几种抗原修复方法研究

由于常规福尔马林固定和石蜡包理过程造成的抗原封闭与结构改变，限制了一些抗体在免疫组织化学中的应用。为了恢复组织的抗原性，提高免疫组织化学的检测阳性率，我们应用高压锅，微波炉和胰蛋白酶分别对石蜡切片进行处理。结果显示，一些抗体过去只能用于冰冻切片，经前处理后可用于石蜡切片，一些抗体的敏感性增强，经高压锅处理的免疫染色重复性较微波炉处理得好，个别抗体适用于酶消化。总之，在免疫组织化学染色过程中应根据抗原抗体的特性选用适当的前处理方法。     

抗原修复对端粒酶逆转录酶免疫组化染色效果的影响

常规石蜡切片标本 ,一般均用甲醛固定 ,而经甲醛固定的组织 ,其抗原蛋白的氨基与固定液中的醛基交联形成羧甲基而封闭了抗原决定簇 ,使其免疫组化标记的敏感性明显降低。免疫组化染色的成功与否 ,抗原决定簇的保存和暴露是其中一个重要的环节。要充分暴露抗原决定簇 ,目前常用的抗原修复法有微波、高压和酶消化等 ,它们对大多数抗体的标记是有益的 ,但是 ,有些抗体经抗原修复后不再发生反应或阳性率降低。端粒酶逆转录酶蛋白 (ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ ｓｃｒｉｐｔａｓｅ,ＴＲＴ)是决定端粒酶活性的最主要成分 ,在肿瘤…     

酶消化及微波抗原修复在免疫组化中的应用

酶消化及微波抗原修复在免疫组化中的应用龙晓霞（北京中山生物技术有限公司１００００６）免疫组织化学技术是利用抗原抗体特异性反应原理，对组织或细胞内的抗原物质进行定性和定位的组织学技术。它在基础医学研究和临床医学诊断中发挥着重要作用。在对已知抗原的检测中...     

试述免疫组化中抗原热修复的注意事项

自从抗原热修复(heat induced epitope retrieval,HIER)技术的文章于1991年发表后[1],HIER方法迅速应用于常规甲醛固定、石蜡包埋组织切片的免疫组化染色,其被誉为免疫组化染色技术的革命性突破[2].HIER有直接加热和间接加热两种途径,直接加热如高温高压、高温煮沸、微波等;间接加热如水浴等.修复液主要有柠檬酸(pH6.0)、EDTA(pH9.0)、EGTA(pH9.0)等[3].虽然HIER方法已广泛应用于各个实验室,但是在使用时却没有一个相对统一的操作规程,导致同一组织切片在不同实验室所获得的染色结果存在不同程度的差异.我们认为在应用HIER方法时需重点注意以下事项.     

两种简便易行的抗原修复操作方法

编者按：在今后的《中山园地》栏目中，中山生物技术有限公司将就免疫组化研究进展，常见疑难问题的解决方法以及抗体的针对性、适应性等开展系列讨论，衷心希望大家总结自己的工作经验，踊跃参加讨论。好的文章和有价值的建议，将在木园地内选登。同时设立一、二、三等奖，奖品为价格不同的工具书。来稿请寄：北京市东城区南池子大街缎库胡同5号，北京中山生物技术有限公司试剂部，邮编100006。目前，抗原修复已成为免疫组化技术中不可缺少的方法之一。为配合实验室的工作，根据部分国外公司的资料，兹将1抗体可用于抗原修复的抗体及操作方…     

免疫组化染色中某些抗体最佳修复方式探讨

目的 以存梢蜡块,选择最佳抗原修复液,而进行抗原修复,使抗原决定簇暴露,达到最理想染色结果 .方法 用柠檬酸缓冲液(pH 6.0)、EDTA缓冲液(pH 9.0),及高压加热法,胰蛋白酶消化对CD68、lysozyme,α-AT和S-100不同的抗体进行修复.消化,观杏抗原决定簇暴露.结果 3种抗原修复法的免疫组化切片,胰蛋白酶修复法阳性率显著高于高压加热法与微波加热法且染色背景清晰,高压加热法与微波加热法非特异性着色较深,阳性率低.结论 对不同的抗体选用不同的修复方法 可以达到最佳效果.     

免疫组化染色中某些抗体最佳修复方式探讨

目的以存档蜡块,选择最佳抗原修复液,而进行抗原修复,使抗原决定簇暴露,达到最理想染色结果。方法用柠檬酸缓冲液（pH6．0）、EDTA缓冲液（pH9．0）,及高胝加热法,胰蛋白酶消化对CD68、lysozyme、α—AT和S-100不同的抗体进行修复。消化,规合抗原决定簇暴露。,结果3种抗原修复法的免疫组化切片,胰蛋白酶修复法阳性率显著高于高胝加热法与微波加热法且染色背景清晰,高压加热法与微波加热法非特异性着色较深,阳性率低。结论对不同的抗体选用不同的修复方法可以达到最佳效果.     

Her-2检测中抗原修复时间优化探讨

Her-2在乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肺腺癌、肾细胞癌中过表达,现已是临床上对乳腺癌和胃癌治疗和预后判断的重要指标之一。因此,准确检测癌组织中Her-2的表达对肿瘤患者的个体化治疗和预后评估至关重要。目前普遍采用免疫组化(IHC)法检测Her-2的表达,其检测过程多为手工方式,无统一的操作流程,往往导致阳性检测结果不一。本文以乳腺癌组织为研究对象,比较不同修复时间对Her-2表达的影     

大鼠骨组织脱钙和染色方法的改进

选择适当的脱钙液是制备优质脱钙骨组织常规切片的关键。常用的脱钙剂有硝酸、盐酸、硫酸等无机酸和蚁酸、醋酸、甲酸等有机酸。在大鼠等小动物骨代谢疾病实验病理学研究时，使用这些试剂对大鼠等骨组织脱钙，常因脱钙过度严重影响染色效果，而脱钙不充分又会影响骨组织切片的完整性。为此，我们试用改进的骨组织脱钙和染色方法制备大鼠骨组织切片，获得了良好效果，现介绍如下。     

抗原修复后内源性生物素对免疫组化染色影响的消除

免疫组织化学是应用免疫学原理，利用特异抗体与组织切片中的抗原相结合，附以可见的标记物，在组织原位使抗原抗体结合物显现出来。免疫组织化学技术因其结果定位明显，操作简单，实验室条件及设备技术要求不高，已被广泛应用于临床病理诊断及各种科研工作。但由于组织在福尔马林中固定，经常导致抗原决定簇被封闭，阻碍了抗原与抗体的结合。因此，抗原修复技术在免疫组化操作过程中成为一个极其重要的环节。我们针对不同的抗原，采用不同的修复方法，取得较为理想的效果。     

不同抗原修复方法对cyclin B1在肿瘤中表达的比较

cyclin B1是参与细胞周期G2／M转换的重要调节因子，在部分恶性肿瘤中呈过表达且与预后有关。在免疫组化染色中，cyclin B1定位于细胞核，但在实验过程中，如果按试剂说明采用高温修复方法，cyclinB1多定位于细胞质，核表达率较低，影响其在肿瘤中表达的阳性率。本实验采用不同抗原修复方法比较cyclin B1在膀胱癌和乳腺癌的表达情况，以探讨最佳抗原修复方法。     

不同的抗原修复方法对肺癌组织TTF-1、P53、SPB等6种抗体表达的影响

目的探讨不同的修复方法配搭不同修复液对肺癌组织TTF-1、P53、SPB等6种抗体表达的阳性数量及强度是否存在影响。方法10例肺癌患者标本,分别用微波、高压配搭柠檬酸缓冲液(pH6.0)、EDTA缓冲液(pH8.0、pH9.0)处理,分别滴加一抗,采用二步法,进行免疫组化标记,分别由两位病理医师进行独立看片,并进行结果比较。结果不同的修复方法配搭不同修复液对这些抗体表达的阳性数量及强度存在影响。结论微波配搭柠檬酸缓冲液对易表达抗体的染色效果佳;高压配搭EDTA缓冲液(pH8.0)对显示细胞核染色效果佳,高压配搭檬酸缓冲液(pH6.0)对显示难表达抗体的细胞浆、细胞膜染色效果佳。     

抗原修复条件的变化对Ki-67免疫组化染色的影响

组织在固定过程中,由于甲醛、加热、有机溶剂的处理,使抗原发生交联、变性等,致使在免疫组化染色过程中无法与抗体结合。但这一变化是可逆的,可通过抗原修复重新暴露抗原决定簇,增加抗原抗体结合的机会,从而提高免疫组化染色效果[1,2]。本工作从影响蛋白构象的温度、pH、表面     

防止免疫组化染色组织脱片的处理方法

在免疫组化染色过程中,切片需要长时间在液体中浸泡,并要经受高温、高压、抗原修复的考验,因此脱片现象经常发生,尤其在组织处理不佳时更加明显,为了解决这一难题,我科做了大量的探索工作,最终找到了一种简便可行的方法,能有效防止脱片现象的发生.     

抗原修复液的种类、温度及作用时间对抗原修复的影响

抗原修复是免疫组化染色中的常用手段 ,但使用哪种修复液却有不同看法〔1～ 4〕。为此本实验对抗原修复液中的离子种类、离子浓度、ｐＨ值、温度及作用时间分别做了实验 ,旨在探讨这些因素对抗原修复的影响。1　材料与方法1 1　材料　选择每种已知抗体阳性的标本 5例 ,抗体ＥＲ、ＰＲ、Ｂａｘ、ｃｙｃｌｉｎＤ1、Ｋｉ 6 7、ｃ ｍｙｃ及ＳＰ试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司 ,修复液所用试剂为秦皇岛化学试剂厂及石家庄化工厂生产 ,均为分析纯。ＭＰＩＡＳ 5 0 0多媒体彩色病理图文分析仪由同济医科大学清平影像工程公司提供。用ＰＨＳ …     

使用微波加热抗原修复法在温度与时间上的改进

抗原修复是免疫组化染色过程中不可缺少的重要环节。使用微波加热修复抗原的方法 ,由于它安全、省时、方便等优点 ,近年来受到病理同行的普遍欢迎和应用。但是在修复过程中 ,因为其温度不能准确测定 ,往往不能达到满意的修复结果。温度过高造成脱片 ,温度低则使细胞核暴露不完全 ,同样影响染色结果。因此说 ,足够的抗原修复是影响免疫组化染色结果的重要因素。为了使微波加热在修复抗原的过程中做到切片不脱落 ,我们在温度与时间控制上进行了调整。目前我科使用的微波炉是日本松下产调控家用微波炉 ,功率 90 0 W,可调火力分五档 :即高、中…