盐酸氟桂嗪对缺血神经细胞保护作用的研究

目的 探讨盐酸氟桂嗪（西比灵）对缺血损伤的神经细胞的保护作用。方法 在缺氧缺糖条件下培养神经细胞,作为体外缺血损伤模型;实验组为无糖培养剂中添加４０μｍｏｌ／Ｌ西比灵,对照组为无糖培养剂,测定缺氧损伤后细胞内钙离子浓度、细胞大小（支配面积）、以及所释放的乳酸脱氢酶的活性,分析判断西比灵的作用。结果 实验组细胞的胞内钙离子浓度显著低于对照组,细胞所支配面积大于对照组细胞,所释放的乳酸脱氢酶活性低于对照组。结论 西比灵能抵抗缺氧缺糖损伤后细胞内的钙离子浓度的升高,能有效减少缺氧缺糖对细胞所造成的损害,具有保护作用。     

黄芪总苷对缺氧/复氧诱导损伤细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的 观察黄芪总苷(AST)在缺氧/复氧所致海马神经元凋亡的影响,探讨其抗损伤的作用机制.方法 原代培养海马神经元细胞,建立缺氧/复氧损伤的海马神经元凋亡模型.采用DNA琼脂糖电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙离子浓度;Western blot 法检测ERK和磷酸化ERK蛋白的表达.结果 海马神经元细胞经缺氧/复氧后发生了明显凋亡形态学的改变,凋亡率增加,AST(20、40 mg/L)能明显降低模型大鼠海马神经元凋亡百分率和胞质钙离子浓度,且促进磷酸化ERK蛋白水平的表达.结论 黄芪总苷对脑缺血/再灌注所致损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制细胞钙超载、激活细胞ERK信号存活通路有关.     

二苯乙烯苷对氧糖剥夺星形胶质细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（TSG）对大鼠大脑皮层星形胶质细胞（AS）缺氧、缺糖损伤所致凋亡的影响,以及内质网应激相关因子Caspase-12 、Caspase-3 的表达变化,探讨TSG脑保护作用的作用机制.方法 原代培养Sprague-Dawley 大鼠大脑皮层AS,建立缺氧、缺糖损伤模型,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以透射电镜观察细胞超微结构尤其是凋亡小体的变化,研究缺氧缺糖对各组AS 的影响;以钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM 负载细胞检测细胞内游离钙离子浓度,研究氧糖剥夺（OGD）对不同组AS 的影响;以免疫细胞化学染色方法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观测内质网应激相关因子Caspase-12 和Caspase-3 各组的表达.结果 与正常对照组相比,缺氧缺糖处理后AS 内游离钙离子浓度增高,TSG 预处理可明显降低细胞内游离钙离子,调节钙稳态失衡.免疫细胞化学染色和RT-PCR 结果显示,缺氧缺糖损伤后细胞内Caspase-12 、Caspase-3 表达增加,TSG 预处理可显著抑制两者的表达.结论 TSG 可抑制OGD 诱导的AS 凋亡,其机制可能通过抑制内质网应激发挥作用.     

丹皮酚对原代培养的大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用

目的 研究丹皮酚对大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 建立原代培养的新生大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组为:对照组;模型组;丹皮酚组:建立模型,每个再灌时间点均经0.2×10-6,1×10-6,5×10-6 mol·L-13个浓度药物处理;MK-801阳性对照药组.倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,用MTT法测定神经元存活率.通过放射配基结合实验测定N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA受体)结合力,采用荧光法测定细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度及应用试剂盒测定一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 丹皮酚可显著降低大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤时细胞死亡率,减弱NMDA受体结合力,降低神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及NO含量、NOS活性的升高.结论 丹皮酚对离体培养的大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与抗氧化及减弱NMDA受体结合力有关.     

丹参酮对原代大鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察缺氧缺糖对大鼠海马神经元细胞的影响及丹参酮的保护作用。方法取体外培养12天的海马神经元细胞随机分为正常对照组、缺氧缺糖组、丹参酮20μmol／L组、丹参酮40μmol／L组、丹参酮80μmol／L组（后3组缺氧缺糖前24h，加入丹参酮预处理）。缺氧缺糖组、各浓度丹参酮组在缺氧缺糖环境中培养2、4、24及36h后，收集其各个时间点的培养液，测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果缺氧缺糖后，缺氧缺糖组各个时间点LDH渗出量明显高于正常对照组，经丹参酮预处理的神经元损伤有不同程度的减轻，各个时间点LDH渗出量明显低于对应的缺氧缺糖组。结论缺氧缺糖可引起海马神经元损伤，丹参酮对海马神经元细胞损伤具有保护作用。     

海人酸癫疒大鼠海马存在能量代谢异常和线粒体功能障碍

目的:观察海人酸(KA)颞叶癫癎大鼠海马细胞内游离钙离子浓度、线粒体膜电位及线粒体酶活性和细胞能量代谢的改变,探讨线粒体功能障碍在海马神经元凋亡中的作用.方法:海人酸颞叶癫癎大鼠模型采用一侧海马注射海人酸制备.40只SD大鼠随机分为生理盐水对照组和KA组(6 h、1、3、7天),每组8只.检测各组海马细胞内游离钙离子浓度、线粒体膜电位、线粒体呼吸链复合物Ⅱ和Ⅳ以及Na -K -ATP酶活性、三磷酸腺苷(ATP)和二磷酸腺苷(ADP)的浓度.结果:KA组大鼠海马细胞内游离钙离子浓度显著增加,线粒体膜电位、线粒体呼吸链复合物Ⅱ和Ⅳ以及Na -K -ATP酶活性、ATP浓度、ATP/ADP比值显著降低,且随时间延长,其下降尤为显著.结论:KA大鼠海马存在能量代谢异常和线粒体功能障碍.     

加味四逆散对应激性海马神经元损伤的保护作用

【目的】研究调肝方药加味四逆散对应激性海马神经元损伤的保护作用。【方法】运用大鼠海马原代无血清培养技术进行海马神经元原代培养,以高浓度皮质酮(CORT)和谷氨酸(Glu)建立应激性海马损伤的体外药理模型,制备体积分数10%加味四逆散含药血清。检测各组海马神经元存活率(四甲基偶氮唑盐法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞凋亡率(流式细胞仪法)以及细胞游离Ca2+浓度(Fura-2荧光探针法)。【结果】高浓度CORT和Glu使海马神经元细胞存活率显著下降、LDH漏出量显著增加、细胞凋亡率显著升高以及细胞内游离Ca2+浓度显著升高(P0.01)。体积分数10%加味四逆散含药血清能显著提高高浓度CORT、Glu条件下海马神经元的存活率,降低细胞凋亡率,减少LDH漏出量,并能降低神经元内游离Ca2+浓度(P0.05或P0.01)。【结论】调肝方药加味四逆散对应激性海马损伤具有明显的保护效应。     

溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨溶血卵磷脂(LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞(BRECs)凋亡及细胞内钙离子浓度的影响.方法: 原代分离培养牛视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC,分别培养6 h、12 h、24 h,通过吖啶橙染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡率,F2000荧光光度计测细胞内钙离子浓度,并计算游离钙浓度.结果:(1)60 μmol/L LPC作用牛视网膜微血管内皮细胞24 h后, 细胞凋亡率明显高于LPC浓度为20 μmol/L及40 μmol/L时;(2) LPC浓度从20 μmol/L增加到60 μmol/L过程中,细胞内游离钙离子浓度明显增加,而且细胞内游离钙离子浓度的增加与LPC的作用时间有关,作用时间越长,钙离子浓度越高.结论: LPC能增加细胞内游离钙离子浓度,促使BRECs的凋亡,而且LPC的这种作用具有时间和剂量依赖性.因此,脂代谢紊乱可能是通过诱导BRECs的凋亡而发挥作用的.     

双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用

目的 观察双苯氟嗪(Dipfluzine,Dip)对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以原代培养的海马神经元作为研究对象,用谷氨酸建立海马神经元损伤模型,通过测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(LJ)H)泄漏率和胞内游离钙浓度(Ca2+)变化,观察双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用.结果 双苯氟嗪可显著提高谷氨酸损伤海马神经元存活率,降低LDH泄漏率,对谷氨酸诱导的海马神经元细胞内ca2+升高有明显的抑制作用.结论 双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制谷氨酸诱导的细胞内钙超载有关.     

三七总皂苷对脑缺血再灌注后海马CA1区损伤的影响

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元损伤的病理改变及三七总皂苷(PNS)对其的影响。方法 采用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血模型，缺血2h，再灌注46h。大鼠随机分为假手术组、缺血再灌模型组、PNSI组和PNSⅡ组。以神经症状缺损记分、海马CA1区组织学分级、海马CA1区神经元密度等作为评价指标。结果 三七总皂苷组神经症状明显减轻或接近正常，其行为评分得分明显低；三七总皂苷组海马CA1区组织学分级降低、神经元密度增加，与模型组问有显著性差异。结论 三七总皂苷能减轻脑缺血再灌注引起的损伤性神经症状及海马CA1区神经元损伤的程度。     

帕潘立酮对地佐环平损伤脑皮层神经元的保护作用及其机制

目的 探讨帕潘立酮对地佐环平损伤大鼠脑皮层神经元的保护作用及机制。方法 取孕15d胎鼠脑皮层神经元体外培养,应用地佐环平损伤神经元,然后加入不同浓度的帕潘立酮。采用MTT技术检测脑皮层神经元的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性及激光共聚焦技术检测神经元细胞内Ca2+浓度观察神经元凋亡情况,通过神经元突起数目及长度检测神经元生长情况,应用实时定量PCR技术检测Akt1、GSK3β的表达变化。结果 与正常对照组相比,地佐环平损伤组神经元活性明显下降,LDH释放增加,细胞内游离钙离子浓度升高（P均＜0.01）,神经元突起总长度下降,神经突起数目呈现不同程度的减少（P＜0.01）,RT-PCR结果显示,Akt1及GSK3β表达下降（P＜0.01）;加入不同浓度的帕潘立酮能明显对抗地佐环平对神经元的损伤,MTT结果显示神经元活性升高（P＜0.01）,LDH活性明显降低(P＜0.001),细胞内游离Ca2+浓度显著下降（P＜0.01）,神经突起数目和长度增加（P＜0.01）,Akt1及GSK3β表达上升（P＜0.01）。结论 帕潘立酮对地佐环平损伤脑皮层神经元具有明显保护作用,可抑制细胞凋亡,并通过Akt1 GSK3β通路促进神经突起的生长。     

抑郁大鼠海马神经元损伤及其机制

目的探讨抑郁大鼠海马神经元损伤的机制.方法采用不可预测的应激建立大鼠抑郁模型,open field法观察动物的抑郁行为,组织化学观察和计数海马神经元数量,Fara-2荧光法测海马突触体内游离钙浓度.结果与对照组相比,抑郁大鼠水平运动和垂直活动次数显著减少,体重增幅和糖水消耗量显著下降,海马神经元大量丢失,同时海马突触体内游离钙浓度显著增高.结论抑郁大鼠表现的抑郁行为可能与海马神经元内钙离子浓度异常升高从而引起细胞大量丢失有关.     

胍丁胺拮抗谷氨酸所致大鼠海马神经元兴奋性神经毒性的研究

目的探讨胍丁胺对L-谷氨酸（Glu）诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法采用大鼠原代海马神经元培养的方法,用不同浓度Glu（1、10、100μmol/L）处理原代培养海马神经元1h,建立Glu诱导的原代培养大鼠海马神经元损伤模型,经乳酸脱氢酶（LDH）活性检测和显微镜下观察,确定建立大鼠海马神经元损伤模型的最佳浓度。处理组在已建立的大鼠海马神经元损伤模型中加入不同浓度（10、50、100μmol/L）胍丁胺,观察胍丁胺对Glu诱导的海马神经元损伤的作用。未经Glu处理的为正常对照组。结果上清液中的LDH活性（P〈0.01）和形态学观察均提示100μmol/L Glu为诱导原代海马神经元损伤的最佳浓度;100μmol/L胍丁胺能显著抑制模型中大鼠海马神经元LDH的释放（P〈0.01）;明显改善损伤后的神经元形态。结论胍丁胺对Glu诱导的大鼠海马神经元损伤具有保护作用。     

银杏二萜内酯葡胺注射液通过下调calpain信号通路抑制脑缺血神经细胞凋亡

研究银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection,DGMI)对缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用及其机制。采用试剂盒、Fluo-3 AM法、Western blot检测SH-SY5Y细胞氧糖剥离损伤4 h后,与药物一起复氧1 h细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量、胞浆游离钙离子浓度以及calpain、cleaved caspase-12蛋白量的变化。结果显示DGMI能极显著降低OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞LDH的漏出量,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,下调细胞内游离钙离子浓度、calpain和cleaved caspase-12蛋白量,抑制calpain凋亡信号通路保护神经细胞。DGMI对OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内Ca²⁺/calpain/caspase-12/capase-3信号通路有关。     

三七总皂苷对短暂性前脑缺血大鼠海马区神经元的修复作用实验研究

目的:探讨三七总皂苷对短暂性前脑缺血大鼠海马区神经元的修复作用。方法:选择30只SD大鼠，随机分为三七总皂苷组、模型组、假手术组，每组10只。模型组、三七总皂苷组使用四血管闭塞建立短暂性前脑缺血大鼠动物模型。假手术组手术方式同三七总皂苷组，不做卡环夹闭、电灼永久性闭塞，仅将右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉暴露，之后逐层缝合。三七总皂苷组造模后灌胃给予50 mg/kg三七总皂苷，每天2次，每次间隔12 h,模型组、假手术组灌胃给予等量的0.5%羟甲基纤维素钠。对比三组干预后7、14、28 d的海马神经细胞凋亡、新生神经元数量，对比三组大鼠的学习记忆能力，对比三组干预后7、14、28 d时测量大鼠脑梗死体积及含水量，对比三组DCX/NeuN染色阳性的细胞数量。结果:模型组干预后7、14、28 d的海马神经细胞凋亡明显较三七总皂苷组、假手术组高(均P<0.05);三七总皂苷组干预后7、14、28 d的海马神经细胞凋亡明显较假手术组高(均P<0.05);三七总皂苷组干预后7、14、28 d的海马新生神经元明显较模型组、假手术组高(均P<0.05);干预后7、14、28 d的模...     

复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其机制研究

[目的]探讨复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其作用机制。[方法]培养的细胞随机分为空白对照组、模型组、复方白花前胡液大剂量组、复方白花前胡液中剂量组,每组10孔。将培养的神经元细胞采用缺氧罐和无糖Earle＇s液进行缺氧／缺糖处理3h,再复氧复糖24h后,显微镜下观察培养的海马神经元细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分别检测乳酸脱氢酶含量及细胞游离钙的含量。[结果]1．复方白花前胡液中、高浓度实验组细胞凋亡率分别下降至（21．4±3．9）％、（23．6±2．8）％,与模型组相比差异有显著性意义（P〈0．01）。2．各复方白花前胡液纽在不同时点LDH释放率与模型组相比降低明显,差异有显著性意义（P〈0．05）。3．复方白花前胡液实验组与模型组比较缺氧／缺糖培养3h,复氧复糖24h胞内Ca^2＋浓度下降,差异有显著性意义（P〈0．05）。[结论]复方白花前胡液能使神经细胞具有抗缺氧／缺糖损伤作用。     

丹酚酸B对大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的影响

目的探讨丹酚酸B(SalB)对原代培养大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的影响。方法采用原代培养的大鼠皮层神经元,随机分为正常组、模型组和丹酚酸B组,复制缺糖缺氧4h的细胞模型,MTT法观察神经元的活性和存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP)、细胞内游离Ca2 和细胞凋亡率。结果丹酚酸B组神经元的活性(0.450±0.105)、存活率(58.20±13.56)%以及MMP荧光值(126.24±12.09)高于模型组神经元的活性(0.336±0.037)、存活率(43.40±4.73)%以及MMP荧光值(109.75±10.15),两者比较有明显差异(P(0.05);而丹酚酸B组LDH漏出率(15.84±1.47)%、细胞内Ca2 荧光强度(66.75±5.93)及凋亡率(4.82±2.48)%则低于模型组的LDH漏出率(27.39±3.75)%、细胞内Ca2 荧光强度(101.09±16.08)及凋亡率(10.83±2.13)%,两者相比亦有显著性差异(P(0.01)。结论丹酚酸B通过维持细胞内Ca2 稳态,稳定线粒体膜电位及降低细胞凋亡率,对缺糖缺氧损伤的大鼠皮层神经元起到保护作用。     

三七总皂苷对过氧化氢诱导HT22 细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究三七总皂苷（PNS）对氧化氢H2O2 损伤后海马神经元HT22 细胞的保护作用。 方法 采用CCK-8 法检测作用PNSHT22 细胞后细胞生长活性的变化,并通H2O2 刺激HT22 细胞,观察 PNS 对HT22 细胞活性的影响及形态变化。采用乳酸脱氢酶检测细胞损伤情况,流式细胞仪检测细胞的凋 亡比例。结果 PNS 在有效浓度范围内对HT22 细胞无毒性,且能增加细胞活性,减轻H2O2 对其损伤程度。 结论 PNS 能通过增强细胞内抗氧化活性,提高HT22 细胞的存活率,从而保护细胞抗氧化损伤。     

三七总皂苷对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用

目的：研究三七总皂苷（PNS）对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞,经不同浓度的PNS预处理后,建立氧糖剥夺（OGD）模型,2小时后复氧复糖,模拟再灌注模型。通过MTT比较神经元的存活情况,并测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的活性变化,以及Bcl-2蛋白表达的变化。结果：OGD作用120分钟后细胞活性明显下降,细胞内SOD活性下降,MDA含量升高。PNS 25、50mg/L能明显提高细胞的存活率,SOD活性回升,MDA含量趋向正常,Bcl-2蛋白含量增加。结论：PNS对缺氧缺糖条件下的大鼠皮层神经细胞有保护作用,其保护作用可能与其抑制神经细胞脂质过氧化反应、提高Bcl-2蛋白表达有关。     

1,6-二磷酸果糖抑制白细胞介素-1β诱导的胰岛β细胞内钙超载

目的探讨1,6-二磷酸果糖（FDP）对白细胞介素-1β（IL-1β）损伤胰岛β细胞的保护作用。方法分离3-5日龄W istar大鼠胰岛,进行胰岛细胞体外培养,在培养细胞中加入IL-1β及FDP,用紫外分光光度法测细胞内游离钙离子浓度,用火焰原子吸收光谱法测量加入FDP前后细胞的总钙量。结果在胰岛细胞中加入IL-1β后,细胞内游离钙离子浓度及细胞总钙量均升高;在IL-1β损伤后的胰岛细胞中加入FDP的钠盐共同培养后,细胞内游离钙离子浓度及细胞内总钙量均减少（P〈0.01）。结论IL-1β引起胰岛β细胞外钙离子内流入细胞内,导致胰岛β细胞内钙超载。加入FDP可抑制IL-1β引起的胰岛β细胞内钙超载,表明FDP对胰岛β细胞有一定保护作用。