类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析

目的 应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用.方法 采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest软件分析图像,比较两种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定,并用Western blot验证部分表达差异蛋白质.结果 ①采用窄范围的pH 4～7 IPG胶条进行2-DE分析,正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点.有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞间有2倍以上的显著性量变.②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质.Western blot验证Enolaseα、Annexin Ⅰ、Cathepsin D、SOD2、Peroxiredoxin 2在RA滑膜细胞中表达显著升高.结论 正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异.这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病.     

类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的表观遗传学研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病,其基本病理改变为滑膜炎。滑膜成纤维细胞(FLS)是关节滑膜衬里层的主要构成组分,并具有侵袭性表型的表观遗传印记特征,可促进RA的关节破坏。近年来,表观遗传学对RA FLS功能的影响越来越受到广泛关注,靶向FLS的治疗也为RA提供了新的治疗方向。作者综述表观遗传学在RA FLS中的研究进展,为RA的治疗提供个体化的思路。     

人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用.方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradient, IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定.结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质.结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异.这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病.     

炎性复合体mRNA在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的研究炎性复合体(inflammasomes)在类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及对细胞自身的影响。方法 (1)用Real-time PCR检测IPAF和NALP1 mRNA在3例关节创伤(正常组)、4例骨关节炎(OA组)和6例RA(RA组)患者滑膜细胞中的表达情况;(2)分别用培养液(对照组)、脂多糖(LPS,LPS组)、LPS+苄氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-(O-甲酰)-氟甲基酮(Z-VAD-FMK,Z-VAD-FMK组)、肿瘤坏死因子(TNF,TNF组)及TNF+Z-VAD-FMK处理6例RA患者滑膜细胞24 h后,应用Real-time PCR技术检测IPAF和NALP1 mRNA表达情况。结果 (1)OA组IPAF和NALP1的mRNA表达均明显高于正常组和RA组(P<0.01),RA组IPAF和NALP1的mRNA表达均高于正常组,但差异无统计学意义。(2)TNF组IPAFmRNA较对照组表达增加达408%(P<0.05);TNF组NALP1 mRNA较对照组表达增加达119%(P<0.05),LPS组的水平是TNF组的1.18倍(P<0.05)。结论炎症因子TNF影响炎性复合体mRNA在RA-FLS中的表达。     

滑膜成纤维细胞的原代培养及生物特性

目的研究滑膜成纤维细胞的原代培养方法及生物特性。方法收集行关节腔镜术或关节置换术的患者的膝关节滑膜标本,其中类风湿关节炎、骨关节炎、关节创伤病例各6例,分别采用酶消化法、组织块法进行滑膜成纤维细胞的原代培养并进行生物特性的观察及鉴定。结果总共有6例类风湿关节炎、4例骨关节炎、4例关节创伤患者关节滑膜成功培养出成纤维样滑膜细胞,其中9例应用酶消化法,5例应用组织块法,经鉴定成纤维样滑膜细胞的纯度99%。结论本课题成功应用酶消化法和组织块法进行滑膜成纤维细胞的原代培养,所培养细胞适用于进行滑膜成纤维细胞相关的研究。     

紫草素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的观察紫草素对人滑膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨紫草素可能的免疫抗炎作用机制。方法分离并培养人膝关节滑膜成纤维细胞,各加入IL-1β、TNF-α15 ng/mL,体外模拟人类风湿关节炎滑膜细胞。以塞来昔布作阳性对照,进行紫草素(浓度为5～80μg/L)干预,分别作用24、48、72 h后终止培养。用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达情况。结果紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA的表达,对浓度无明显依赖性(P=0.089),用药时间上有显著统计学意义(P<0.0001)。塞来昔布抑制滑膜成纤维细胞COX-2mRNA水平的表达亦无明显浓度依赖性(P=0.051),而与用药时间显著相关(P<0.0001)。紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达的影响与塞来昔布相比,其抑制作用无明显差异。结论紫草素可通过抑制COX-2 mRNA基因表达,减少炎症性细胞因子的产生而发挥其对类风湿关节炎的免疫抗炎作用,为开发紫草素成为COX-2抑制剂提供一定的实验基础。     

雷公藤红素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中RANKL､OPG及炎性因子表达的影响

目的:观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)?骨保护素(OPG)?白细胞介素-6(IL-6)?肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-8(IL-8)表达的影响?方法:以白细胞介素-1β(IL-1β)刺激MH7A,不同浓度的Cel(0.1?0.5?1.0?2.0 μmol/L)干预细胞24 h后,采用real-time PCR和免疫荧光的方法检测RANKL?OPG?IL-6?TNF-α及IL-8的表达?结果:IL-1β刺激MH7A细胞系24 h后,RANKL?OPG?IL-6?TNF-α及IL-8 mRNA及RANKL免疫荧光明显增强,Cel呈剂量依赖性抑制MH7A中IL-1β诱导的RANKL?OPG?IL-6?TNF-α及IL-8 mRNA水平(P < 0.05)和MH7A中RANKL免疫荧光表达,显著上调OPG/RANKL轴比值?结论:Cel能调节滑膜成纤维细胞中OPG/RANKL轴和抑制促炎因子?趋化因子的表达,可能在阻止类风湿关节炎“炎症”和“骨侵蚀”中发挥重要作用?     

S100A4基因在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨S100A4基因在膀胱移行细胞癌(Transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)中的表达及意义.方法:通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测38例膀胱移行细胞癌组织及其相应癌旁组织中S100A4基因的表达情况,结合临床及组织病理学特点探讨S100A4基因与膀胱癌发生及发展的关系.结果:S100A4基因在膀胱移行细胞癌及正常膀胱移行上皮组织中的阳性表达率分别为60.5%(23/38)和0%(0/38).膀胱移行细胞癌组织中S100A4基因的表达率明显高于正常膀胱移行上皮组织(P<0.005).其中膀胱移行细胞癌组织中S100A4基因的表达率随肿瘤分级、分期的增高及淋巴结转移而相应增高(P<0.05).结论:S100A4基因表达与移行膀胱癌分化有关,癌组织S100A4基因有可能成为膀胱癌的一个新的肿瘤标记物;S100A4基因差异表达与移行膀胱癌侵袭和转移明显相关,移行膀胱癌组织中S100A4基因可望作为移行膀胱癌的病情发展及指导临床治疗的标记物之一.     

滑膜免疫组织化学的检测在类风湿关节炎诊断中的意义

类风湿关节炎(简称类风湿,RA)是一自身免疫疾病,最重要的病理改变是滑膜炎,但也可侵及浆膜、心、肺及眼等器官。本文采用免疫组织化学方法对RA及其它风湿性疾病的滑膜进行了检测,探讨了此项检查在RA诊断中的意义。材料与方法一、病例的选择 46例各种关节病患者滑膜标本取自北京协和医院内科及北京建筑工人医院骨科,均为住院并施行关节镜手术的病人,术后诊断为:RA21例,男7例、女14例,年龄 17～63岁。病程最短者1年,最长者18年,平均6.5年左右;血清阴性脊柱关节病4例,反应性关节炎4例;不明原因滑膜炎4     

CD28/CTLA-4在类风湿关节炎患者外周血和关节积液中的表达及意义

目的探讨T细胞辅助刺激分子CD28和CTLA-4在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)中的表达及其与疾病活动的相关性.方法采集患者外周抗凝血和关节积液,通过淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞,采用流式细胞术双标染色技术,检测CD3 CD28 和CD3 CTLA-4 在淋巴细胞上的表达,通过Spearman相关进行统计分析,评价其与疾病活动的相关性.结果①RA患者外周血单个核细胞(PBMC)CD3 CD28 的表达显著低于正常对照组和RA患者关节积液(SFMC)组(P<0.01);②RA患者PBMC上CD3 CTLA-4 的表达与正常组无差异,但显著低于SFMC组(P<0.05).③SFMC组CD3 CD28 的表达与正常组无显著性差异,但CD3 CTLA-4 的表达显著高于正常组(P<0.01)④PBMC组、SFMC组CD3 CD28 和CD3 CTLA-4 的表达与反映疾病活动性的指标RF、抗CCP抗体存在相关关系.结论 RA患者外周血和关节积液中CD28 和CTLA4的表达异常是参与RA发病和病情进展的重要机制之一.但其在病程进展中的具体作用尚不明确.     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

Fas相关死亡区样白介素1β转换酶抑制蛋白在类风湿关节炎患者滑膜组织中的表达

目的:探讨抗凋亡分子Fas相关死亡区样白介素1β转换酶抑制蛋白(FLIP)在类风湿关节炎(BA)滑膜组织中的表达,及其在RA滑膜炎性增生中的作用.方法:采用免疫组织化学方法检测FLIP在17例RA和10例骨关节炎(OA)滑膜组织中的表达,并分析其与滑膜炎症程度积分的相关性,同时采用酶显色分析方法测定滑膜组织中caspase-8活性.结果:FLIP阳性细胞百分率在KA滑膜为(30.60±18.90)%,在OA滑膜为(1.87±0.57)%(P<0.05).在RA滑膜组织FLIP阳性主要见于巨噬细胞样滑膜细胞,FLIP表达阳性率与滑膜炎症程度积分呈显著性正相关(r=0.425,P<0.05),而与RA滑膜组织中caspase-8活性呈现负相关趋势.结论:RA滑膜组织中抗凋亡分子FLIP表达增高,而且与RA滑膜炎症程度积分相关,提示FLIP可能在RA滑膜炎性增生病变中起重要作用.     

新风胶囊含药血清抑制脂多糖诱导的类风湿关节炎大鼠的滑膜成纤维细胞焦亡

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清对脂多糖（LPS）诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）焦亡的影响及其机制。方法 将20只SD大鼠利用随机数字表法分为2组：空白组和XFC组,XFC组予0.324 mg/g灌胃7 d后制备含药血清。CCK-8法检测XFC含药血清作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间。将RA-FLS分为空白组（RA-FLS）、模型组（RA-FLS+5μg/mL LPS）、MCC950组（RA-FLS+LPS+MCC950）、XFC组（RA-FLS+LPS+XFC含药血清）。CCK-8法检测细胞活性,电镜观察RAFLS焦亡形态,ELISA检测IL-1β、IL-18浓度,Western blotting和q RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA的表达。结果 XFC作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为20%和24 h。与空白组相比,模型组细胞活性显著上升（P<0.05）,电镜下可见RA-FLS内形成大量小泡,膜上形成孔隙,胞膜破裂,细胞内容物流出,IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1...     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑液中TNF-a水平分析及意义

目的:通过测定类风湿关节炎(RA)患者的外周血和关节滑液中TNF-a浓度变化,探讨其在RA发病过程,尤其是在关节滑膜组织炎症病变时的免疫病理作用。方法:于2004年8月～2006年12月间,收集了RA患者50例和36例健康人的外周血清和膝关节滑液标本,采用双抗体夹心酶免疫吸附法(ELISA)分析TNF-a浓度。对28例RA患者进行有效治疗后,再进行测定TNF-a浓度,观察其变化。结果:RA患者外周血中TNF-a水平比健康者明显升高(P<0.001),且膝关节滑液中TNF-a水平比外周血中的明显提高(P<0.001)。经过统计学分折发现TNF-a水平与外周血WBC,ESR和C反应蛋白之间无相关性。经过有效治疗后,RA患者外周血中TNF-a水平比治疗前显著下降(P<0.001)。结论:RA患者外周血和关节滑液中TNF-a水平明显升高,TNF-a可能直接参与了关节滑膜组织的炎症病变反应。     

雷公藤单体T4对IL—1刺激引起的类风湿患者关节滑膜成纤 …

目的 探讨雷公藤单体Ｔ４对经ＩＬ－１刺激的体外培养的类风湿关节炎（ＲＡ）患者的关节滑膜成纤维细胞增殖和产生ＩＬ－６的影响。方法 关节滑膜组织来自行关节置换术或滑膜切除术的类风湿患者。滑膜组织经体外消化使细胞分散后,传代培养,以培养３代后的滑膜成纤维细胞为对象,先给予ＩＬ－１刺激,再加入雷公藤Ｔ４单体。结果 Ｔ４可抑制由Ｉ－１刺激的滑膜成纤维增殖,但不影响ＩＬ－６的产生。结论 Ｔ４的上述作用可能是其     

miR-21对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

探讨miR-21对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（FLS）增殖与凋亡的影响。方法 Realtime PCR方法检测正常和RA-FLS中miR-21表达差异。RA-FLS分成Control组、miR-NC组（转染mimics control）、miR-21组（转染miR-21 mimics）、miR-21+IGF-1组（转染miR-21 mimics,PI3K/Akt信号通路特异性激活剂IGF-1处理）,CCK-8实验分析细胞增殖活性变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平变化,Western blot方法分析细胞中C-Caspase-3、Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达变化。结果 与正常-FLS比较,RA-FLS中miR-21表达水平降低（P＜0.05）。与Control组、miR-NC组比较,miR-21组RA-FLS细胞中miR-21表达水平升高,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率增加,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白水平降低（P＜0.05）。与miR-21组比较,miR-21+IGF-1组RA-FLS增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达增多,C-Caspase-3、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多（P＜0.05）。结论 上调miR-21可抑制RA-FLS增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与降低PI3K/Akt信号激活水平有关。     

双向电泳-质谱法寻找类风湿关节炎疾病相关蛋白

目的建立正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,以阐明RA的发病机制.方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者血浆总蛋白质,凝胶经银染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定.结果获得正常人及类风湿关节炎患者血浆蛋白双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为592和563,匹配率分别为89%和87%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为24,选取15个点进行质谱鉴定,成功鉴定7个蛋白质,其中6个蛋白质表达上调.结论两者间存在一些差异表达的蛋白质,为阐明RA的发病机制打下了坚实的基础.