我国茯苓国际贸易研究与问题探析

茯苓是我国大宗常用药材之一,供销国内外药材市场。2011—2016年,我国茯苓的国际贸易主要以出口为主,伴有少量进口。在此期间,我国茯苓的年出口总量总体下降,年出口总额略有增长,年出口单价上涨;年均出口金额为3 545.40万美元,年均出口量为9 279.73 t,年均出口单价为4.14美元/kg。出口茯苓来源于内地29个省市自治区,并通过21个口岸流向全球44个国家（地区）;亚洲各国（地区）的出口市场数额占茯苓国际出口市场份额的98%以上,中国香港是最大的茯苓出口市场,广东省是最大的茯苓输出省份,深圳海关是最大的茯苓输出口岸。进口茯苓则主要来自朝鲜,大部分通过长春海关、吉林省进入内地市场。未来我国需要加大茯苓深加工产品的研发力度,拓宽高端客户群体需求空间,拉动高端市场增幅,加快标准化的进程,以提高茯苓出口的动能、品质和利润,进一步提升茯苓产业的国际竞争力。     

茯苓药材和饮片质量标准研究

完善茯苓药材和饮片的质量标准,为《中国药典》2020年版茯苓药材和饮片质量标准的修订提出建议。采用薄层色谱法,建立了以茯苓酸、去氢土莫酸对照品及茯苓对照药材同时对照的薄层鉴别方法;参照2015年版《中国药典》四部通则,对茯苓药材及饮片的水分、总灰分、农药残留、重金属及有害元素、真菌毒素、二氧化硫残留和醇溶性浸出物进行测定;采用高效液相色谱法,以茯苓酸和去氢茯苓酸为指标,建立了茯苓三萜的含量测定方法;采用分光光度法,以无水葡萄糖为指标,建立了茯苓多糖的含量测定方法。基于不同批次药材和饮片的测定结果,建立了茯苓药材和饮片的质量标准。该质量标准相比2015年版《中国药典》,新增了茯苓的【含量测定】项,修订了其【薄层鉴别】和【检查】项,方法简便、专属性强、重复性好,可有效用于茯苓药材和饮片的质量控制。     

茯苓菌种质量标准及检验规程

目的规范茯苓菌种分离、培育方法,制定茯苓菌种质量标准及检验规程。方法在传统产区选择2～3代,体重2．5kg以上的优质鲜菌种作为种苓,进行（母种、原种、栽培种）的分离与培养。结果制定了茯苓菌种质量标准及检验规程。结论标准及规程的建立保证了茯苓菌种的质量。     

桂枝茯苓胶囊质量标准提升对制剂主要药效影响的研究

比较生产质控过程优化及质量标准提高后,桂枝茯苓胶囊在抗痛经、盆腔炎和子宫肌瘤3个方面的主要药效作用以及均一性的差异。选取2011年12个批次桂枝茯苓胶囊(质量标准提升前制剂)、2012—2014年每年12个批次桂枝茯苓胶囊(质量标准提升后制剂),利用缩宫素致大鼠痛经模型、混合菌液致大鼠慢性盆腔炎模型、雌孕激素负荷致大鼠子宫肌瘤模型,研究质量标准提升前后多批次的桂枝茯苓胶囊抗痛经、盆腔炎和子宫肌瘤的药效作用。2011—2014各批次桂枝茯苓胶囊,在痛经的主要药效模型上的研究表明各批次均可不同程度减少痛经大鼠的扭体次数,延长扭体潜伏期,降低子宫组织中ET-1及PGF2α的含量,与模型组比较,均具有显著性差异;慢性盆腔炎模型主要药效显示,各批次均可不同程度降低盆腔炎大鼠子宫TNF-α、促进IL-2分泌;子宫肌瘤模型主要药效显示,各批次均可不同程度降低子宫肌瘤大鼠的子宫质量,抑制子宫平滑肌过度增殖,降低血清中E2和P水平。2012—2014年各批次桂枝茯苓胶囊在治疗痛经、盆腔炎、子宫肌瘤方面的药效学指标(减少痛经模型大鼠的扭体次数,延长扭体潜伏期,降低子宫组织中ET-1及PGF2α的含量;降低盆腔炎大鼠子宫TNF-α、促进IL-2分泌;降低子宫肌瘤大鼠血清中E2和P水平)优于2011年桂枝茯苓胶囊,且具有显著性差异。2011年个批次桂枝茯苓胶囊的药效学指标存在显著性的组间差异,2012—2014年桂枝茯苓胶囊的药效学指标组间比较无显著差异。该研究表明,生产质控过程优化及提高质量标准后,桂枝茯苓胶囊抗痛经、抗盆腔炎、抗子宫肌瘤的药效显著性增强,且产品均一性显著提升。     

桂枝茯苓微丸的质量标准研究

目的:建立桂枝茯苓微丸的质量标准。方法:采用薄层色谱法对丹皮、赤芍、茯苓进行了定性鉴别,采用高效液相色谱法测定了微丸中芍药苷的含量,采用Lichrospher C18柱(5μm,200mm×4.6mm);检测波长230nm;流动相:乙腈-水-磷酸(15:85:0.1);流速:1.0mL/min;柱温:室温。结果:此法线性范围1.506~2.550μg,Y=64.3537924X 145.99898,r=0.9996;芍药苷的平均回收率为97.04%,RSD为2.03%。结论:该方法稳定、可靠,可作为该制剂的质量控制方法。     

全国20个主要产地茯苓质量分析比较研究

目的建立茯苓多糖和茯苓酸的含量测定方法,分析比较全国20个主要产地茯苓中茯苓多糖和茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的质量品质提供依据。方法采用分光光度法测定茯苓多糖的含量,碱提,苯酚-浓硫酸显色,葡萄糖为对照品,检测波长490nm。采用RP-HPLC法测定茯苓酸的含量,Kromasil100-5C18色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸(80:20),流速1.0mL/min,检测波长242nm。结果葡萄糖在40～200μg/mL范围内线性良好,r=0.9999,平均回收率为99.72%,RSD=0.99%;茯苓酸在0.48～2.40μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.9997,平均回收率100.26%,RSD=1.26%。不同产地茯苓药材中茯苓多糖和茯苓酸的含量有较大差异,说明药材质量并不一致。结论该方法简便快速、准确可靠,为评价不同产地茯苓药材的质量提供了一种可靠的分析方法。     

茯苓止痒丸的质量标准研究

目的：探讨茯苓止痒丸的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法（TLC）定性鉴别茯苓止痒丸中的苍术、黄柏及甘草,用高效液相色谱法（HPLC）测定茯苓止痒丸中的盐酸小檗碱含量。结果：苍术、黄柏、甘草具有鉴别特征,阴性无干扰;盐酸小檗碱在0.4152~2.076mg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,平均加样回收率为99.37%,RSD=0.36%。结论：薄层色谱法及高效液相色谱法简便准确,重现性好,可作为茯苓止痒丸的质量控制标准。     

防己茯苓汤煎膏剂质量标准的建立

目的:建立防己茯苓汤煎膏剂的质量标准。方法:对制剂中的黄芪、防己和甘草采用TLC法进行定性鉴别,对其主要成分粉防己碱和防己诺林碱采用HPLC法进行含量测定。结果:防己茯苓汤煎膏剂中防己、黄芪和甘草的薄层色谱鉴别斑点清晰,重现性好,阴性对照无干扰;含量测定粉防己碱在20.72～103.50μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.999 1、加样回收率为99.12%,RSD=1.15%(n=6);防己诺林碱在12.24～61.20μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.999 2,加样回收率为100.88%,RSD=1.68(n=6)。结论:建立的定性、定量方法简便易行、准确可靠、稳定可控,为防己茯苓汤煎膏剂的质量控制标准提供实验依据。     

茯苓药材质量标准研究

目的：完善茯苓药材的质量标准。方法：采用薄层色谱和指纹图谱法鉴别茯苓药材中的三萜化合物,高效液相色谱法测定乙酰茯苓酸和去氢乙酰茯苓酸的含量。结果：乙酰茯苓酸在1.52～7.60μg/ml范围内呈良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率为96.90%,RSD为1.09%;去氢乙酰茯苓酸的线性范围0.35～1.75μg/ml,r=0.9991,平均回收率97.86%,RSD为1.52%。结论：本方法专属性强,能准确地进行定性和定量检测,可用于茯苓药材的质量控制。     

茯苓与茯苓皮中茯苓酸含量比较研究

目的 建立茯苓酸HPLC含量测定方法,比较茯苓与茯苓皮之间含量差异.方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS注(250 mm×4.6 mm,5 μm).流动相:乙腈-0.5%磷酸水(70:30):流速为0.8mL·min-1检测波长:242 nm;柱温:30℃.结果 茯苓酸在0.362～9.050μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999,平均回收率99.54%,RSD=1.01%.结论 该方法 稳定,可靠,简便,适于茯苓与茯苓皮药材质量评价.     

基于文献计量学分析2011—2022年茯苓研究进展与趋势

了解近10年茯苓科学研究的现状,以中国期刊全文数据库和Web of Science为文献来源,检索了2011—2022年茯苓研究的相关文献,分别对其发表年份、被引来源、第一作者机构、区域分布及研究主题等进行统计学分析;并利用文献计量工具VOSviewer研究文献关键词共现网络特性。结果表明,近10年茯苓研究相关论文年发表量波动较大,研究机构集中在国内,与茯苓产地分布关系密切。对茯苓的研究主题广泛,其中药理是发文量最多的一个主题,且已形成较稳定的研究机构和团队。但茯苓的菌种资源退化,栽培技术和精深加工产品开发等仍限制我国茯苓产业的发展,应加强茯苓有性育种、构效关系和健康产品功效研究,促进茯苓产业的可持续发展。     

茯苓原生质体制备与再生条件初探

目的研究茯苓原生质体制备及其再生条件。方法采用不同菌龄、酶液浓度、酶解时间、稳渗剂对茯苓原生质体产率及再生条件进行研究。结果不同菌龄、酶液浓度、酶解时间、稳渗剂对茯苓原生质体产率及再生产生不同影响。结论Z10-2原生质体制备时菌丝最适菌龄为72 h,酶液浓度为3%,稳渗剂以0.5 m o l/L的甘露醇为佳。Z10-3原生质体制备时菌丝最适菌龄为56 h,酶液浓度为3%,稳渗剂以0.6 m o l/L的甘露醇为佳。Z10-2和Z10-3原生质体均以甘露醇作稳渗剂再生率较高,其最佳浓度为0.6 m o l/L。在该条件下Z10-2原生质体再生率为7.5×1-0 3,Z10-3为1.3×10-2。     

茯苓细胞色素P450还原酶基因的克隆与生物信息学分析

目的从茯苓Poria cocos中克隆出细胞色素P450还原酶(CPR)基因,并对其进行生物信息学分析。方法利用茯苓转录组注释信息,通过RACE扩增得到茯苓CPR基因(Pc CPR)全长,并PCR得到对应基因组DNA序列。通过生物信息学方法,对该基因编码蛋白的特征进行分析,I-TASSER模拟出蛋白三级结构,MEGA构建蛋白系统进化树。结果获得含有完整开放阅读框(ORF)的c DNA全长2 514 bp(Gen Bank号为KP768251),Pc CPR的基因组DNA 5 292bp(Gen Bank号为KP896487),含4个外显子、3个内含子。基因编码732个氨基酸的蛋白,相对分子质量81 147,等电点(p I)为5.39,为不稳定性亲水蛋白,非分泌蛋白,且不具有信号识别功能。蛋白定位于内质网上,第7~22位氨基酸为跨膜区;具有2个黄素结合的保守结构域,FAD、NADP的结合位点各自在蛋白三级结构空间上相邻近。同源性分析显示,Pc CPR与担子菌CPR的相似性明显高于子囊菌CPR。结论成功从茯苓中克隆得到Pc CPR基因,为进一步研究Pc CPR及相关代谢提供基础。     

茯苓药材的历史沿革与变迁

道地药材以"货真质优效佳"为重要标志,是中医药的精髓,道地药材的研究关系到中医药现代化、国际化的进程与发展。茯苓的应用历史悠久,古人对其的认识随时间的迁移有一定的不同,茯苓产地也随着朝代变更而有变迁。作为一种应用历史悠久的药食两用中药,茯苓的开发利用前景广阔。从本草学角度出发,对茯苓的来源、原植物认识、道地产区、药用、性味、采收加工及质量评价的历史沿革与变迁等进行本草考证与探讨,为茯苓药材的进一步开发利用提供理论依据。     

茯苓细胞色素P450基因PcCYP的克隆与序列分析

目的 筛选与茯苓Poriacocos生长发育相关的细胞色素P450基因序列,进一步丰富对茯苓生长发育理解。方法通过分子克隆到1个茯苓细胞色素P450基因Pc CYP,并利用在线工具分析其序列,预测蛋白的理化性质、结构域等分子特征;利用MEGA5.0分别对氨基酸进行多序列比对和进化关系分析,并采用q RT-PCR方法检测不同发酵培养时间6、8、10d的相对表达量。结果 从茯苓中克隆到的Pc CYP存在可变性剪切,2个选择性剪切体PcCYP1和Pc CYP2CDS区长度分别为1590、1542bp,分别编码529、513个氨基酸。氨基酸序列分析发现其均具有保守的P450结构域,且具有信号肽和多个磷酸化修饰位点,属于分泌型的不稳定亲水蛋白。氨基酸序列多重比对及系统发育树结果显示PcCYP与担子菌Coprinopsis cinerea的CYP502距离最近,推测PcCYP和CYP502具有相似功能,即参与调控茯苓子实体的发育。定量PCR结果显示,选择性剪接变体Pc CYP1的表达量较Pc CYP2低,因此PcCYP2是Pc CYP基因的主要剪接体。结论 Pc CYP与茯苓子实体的生长发育密切相...     

基于药材四性茯苓培养方式沿革的探讨与展望

茯苓为药食两用的传统中药材,其药用历史悠久,应用广泛,是中药方剂配伍的要药及中成药的重要原料。为满足市场需求,茯苓培养方式不断发生变革,从野生采收、人工栽培逐步发展至代料栽培和液体发酵,但不同的培养方式下,茯苓产量、药材品质、推广应用等的差异尚无明确的分析比较。笔者提出药材四性,即临床疗效“三性”（安全性、有效性、质量可控性）和经济性,用于综合评价药材种植、药材品质和临床药效的观点。因此,基于药材四性的视角对茯苓培养方式的沿革进行综述,探讨不同培养方式茯苓的品质差异及其推广应用,为茯苓生产和资源开发提供参考。     

茯苓化学成分和药理作用研究进展及质量标志物的预测分析

茯苓Poriacocos是我国传统的药食同源中药材,具有利水渗湿、健脾、宁心等功效,在药品、食品及保健品中均有广泛应用。随着对茯苓的深入研究,其三萜类和多糖等主要化学成分、药理作用及应用开发研究备受关注。对茯苓的化学成分、药理作用进行系统综述,根据质量标志物的概念,从亲缘学及化学成分特有性、传统药效、传统药性、化学成分可测性、不同加工方法的影响等几个方面对茯苓质量标志物进行预测分析,为茯苓质量评价研究和产品开发提供科学依据。     

茯苓免疫调节蛋白-1抗体的制备及分析

目的 制备重组茯苓免疫调节蛋白-1(WCFIP1)及其抗体。方法 合成WCFIP1基因、构建表达载体并转化大肠杆菌,表达并纯化重组蛋白,免疫小鼠、制备抗血清、纯化抗体并验证。结果 纯化得到重组WCFIP1蛋白并制备特异性抗体。结论 实现了重组WCFIP1蛋白的表达,纯化并制备了特异性较好的抗体。     

茯苓传统汤剂与配方颗粒汤剂化学成分的对比研究

目的 以茯苓为研究对象,进行其饮片传统汤剂与配方颗粒汤剂化学成分上的对比研究,为茯苓配方颗粒的临床合理应用提供依据.方法 选择15批不同产地或批次的茯苓饮片及5个厂家各3批配方颗粒,基于HPLC法建立二者汤剂指纹图谱,从三萜类化学成分种类、三萜类指标性成分含量、所有峰峰面积总和3个方面进行评价,并使用主成分分析(PCA...     

茯苓基因组中MYB转录因子基因家族鉴定及表达分析

目的 从全基因组水平挖掘茯苓Poria cocos MYB转录因子基因家族成员,并分析其在菌丝、菌核等部位及茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MeJA）诱导后菌丝中的表达模式,以期发现与茯苓发育及次生代谢物生物合成调控相关的MYB转录因子。方法 基于茯苓基因组数据,通过序列比对及保守结构域分析挖掘MYB转录因子基因,利用ExPASy在线工具预测分析MYB蛋白质理化性质,利用MEGA7.0软件构建茯苓MYB蛋白进化树,利用MEME在线工具分析保守基序,利用Plant CARE进行启动子区顺式作用元件分析,通过MeJA诱导菌丝并采用qRT-PCR方法检测基因相对表达量。结果 在茯苓基因组中共鉴定到10个含有特征性保守结构域的MYB转录因子,其中4个属于1R类型,4个属于2R类型,2个属于4R类型。进化树及保守基序显示,相同进化枝的MYB蛋白所含基序类型相似。启动子区预测分析发现了多类激素及逆境响应顺式作用元件。基因表达谱分析显示有2个基因（PcMYB7和PcMYB8）在菌丝中的表达量高于菌核中的表达量,而PcMYB9则是在菌核中表达量相对较高。MeJA诱导后,有3个基因（PcM...