定量核磁共振技术在中药质量控制中的应用进展

中药质量控制是保证中药安全有效、质量稳定的基础,是中药标准化、现代化、国际化的前提,选用合适的分析方法在中药质量控制中具有重要意义。与薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等常规分析方法相比,定量核磁共振技术（qNMR）样品前处理简单、分析检测速度快、无需自身对照品,集定性鉴别和定量分析于一体,适用于中药中各类成分的检测分析,或将作为一种有力的分析技术,应用于中药质量控制。对qNMR的基本原理、定量方法和药典应用进行总结,重点介绍了qNMR在中药材、中药制剂、中药对照品及中药生产过程质量控制中的应用进展,提出了qNMR存在的若干问题并展望了其发展前景,旨在为采用qNMR控制中药质量提供参考。     

吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的制备方法

目的以吴茱萸为原料,研究吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品的制备与分析技术。方法采用溶剂法和色谱法提取、分离、纯化、制备吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品,采用核磁共振和薄层色谱方法鉴定结构,采用TLC、HPLC方法检查纯度。结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱经TLC检查与对照品一致,无杂质斑点,经HPLC检测纯度达98.5%以上。结论吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品已达到中药质量检测用化学对照品技术要求,所建立的分离、纯化方法简单,成本低、污染小、可行性强。     

新疆软紫草中咖啡酸四聚体对照品的制备

目的从新疆软紫草的丙酮水提取物中分离制备了咖啡酸四聚体对照品。方法经紫外光谱、红外光谱、核磁共振和质谱确定结构。结果其相关数据与文献一致,纯度为98.11%。结论符合中药化学对照品含量测定要求,可作为高纯度咖啡酸四聚体化学对照品的制备分离方法。     

首批普罗雌烯国家标准物质标定

目的 为满足国内普罗雌烯及相关制剂质量控制的需要,研制并标定首批普罗雌烯国家标准品。方法 采用高分辨质谱、核磁共振波谱、红外光谱以及紫外光谱对待标品进行定性及结构确认;对待标品进行了理化分析;根据不同国家药品标准方法分别对待标品进行了纯度分析,通过质量平衡法进行赋值,并通过核磁定量进行验证,并对待标品的均匀性和稳定性进行了考察。结果 待标品与普罗雌烯同质,经质量平衡法赋值含量为99.6%;均匀性考察符合要求;本品应在10～30℃保存,遮光、密封。结论 本批待标品确认为普罗雌烯,以C₂₂H₃₂O₂计,含量为99.6%,可以作为首批普罗雌烯国家标准品,可作为普罗雌烯及相关制剂鉴别和含量测定用对照品。     

蒽贝素候选化学对照品的制备及分析研究

目的研究蒽贝素候选化学对照品的制备方法及其质量标准,为含蒽贝素药材及其相关产品的质量控制提供参考。方法酸藤子用有机溶剂提取,硅胶柱色谱和反相制备型高效液相色谱进行分离纯化、重结晶得到高纯度蒽贝素,通过波谱等确证化学结构,采用高效液相色谱法测定样品色谱纯度,炽灼残渣法测定灰分,以质量平衡法计算蒽贝素的含量。结果蒽贝素候选化学对照品高效液相色谱纯度测定均值为99.13%,炽灼残渣测定均值为0.02%,以质量平衡法计算含量为99.11%。结论制备得到的高纯度蒽贝素对照品符合中药化学对照品技术要求,可作为中药材或中药复方制剂质量控制的对照品;建立的分析方法准确、可靠,可为对照品质量控制提供科学依据。     

藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素对照品的制备

目的:建立镰形棘豆中鼠李柠檬素对照品的制备方法.方法:运用硅胶柱色谱、Sephndex LH-20凝胶色谱柱等分离纯化的方法制备鼠李柠檬素,采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度,波谱法鉴定其结构.结果:制备的化合物为鼠李柠檬素,纯度＞98％.结论:该制备方法效率高,所得鼠李柠檬素对照品纯度高,符合中药化学对照品的相关技术要求,可用于大量制备中药定性、定量分析使用的对照品.     

中药化学对照品产业化发展策略

简要介绍了我国中药化学对照品在中药研究中的重要作用、化学对照品数量紧缺的现实概况,接着创造性提出中药化学对照品产业化概念,并分析了产业化的必要性.其后根据产业经济学原理提出形成化学对照品数据库,化学对照品专利共享联盟,及在港澳率先实现产业化等一系列兼顾商业的运作策略.     

中药化学对照品产业化发展策略

简要介绍了我国中药化学对照品在中药研究中的重要作用、化学对照品数量紧缺的现实概况，接着创造性提出中药化学对照品产业化概念，并分析了产业化的必要性。其后根据产业经济学原理提出形成化学对照品数据库，化学对照品专利共享联盟，及在港澳率先实现产业化等一系列兼顾商业的运作策略。     

首批甘氨酰-L-酪氨酸国家对照品的标定研究

目的 为有效控制复方氨基酸(15)双肽(2)注射液的产品质量,标定甘氨酰-L-酪氨酸的首批国家标准物质的含量,同时揭示肽类药品标准物质标定过程中的一些共性特殊问题。方法 采用紫外光谱、高分辨质谱和一维/二维核磁共振谱对其进行结构确证,利用高效液相色谱法进行有关物质的测定及稳定性考察,采用质量平衡法进行标准物质含量计算,并通过核磁共振定量法对质量平衡法的准确性进行验证。结果 确证了甘氨酰-L-酪氨酸的结构,并测定了首批甘氨酰-L-酪氨酸国家标准物质的含量为88.4%。结论 针对本品的特点,分别采用多种不同方法对本品进行定性与定量研究,确保国家对照品标定结果准确性。     

聚山梨酯80化学组分对照品的制备及其纯度测定

 目的建立聚山梨酯80的8类化学组分的对照品的制备方法,对获得的对照品进行纯度测定。方法分别合成聚氧乙烯山梨醇酐油酸酯和聚氧乙烯异山梨醇油酸酯,结合中低压制备色谱和Flash柱进行分离纯化,利用核磁共振谱、红外、拉曼、质谱等技术鉴定结构,用高效液相色谱技术测定聚山梨酯80单一化学组分对照品的纯度。结果分离鉴定了聚山梨酯80的8类化学组分,纯度均大于99.5%,满足作为对照品的要求。结论首次建立以定向合成并结合中低压色谱技术,快速、准确制备聚山梨酯80化学组分对照品的方法,并且首次公布了这8类化学组分的波谱数据。     

天然药物中生物碱类化合物人工抗原的合成及其鉴定方法

生物碱是自然界中广泛存在的一类天然含氮有机化合物,具有比较特殊而显著的药理活性。近年来免疫学分析技术常应用于天然药物生物碱的研究,而制备具有良好免疫原性的人工抗原并对其进行鉴定,是建立免疫学分析方法用于生物碱研究的前提和关键。本文主要总结了天然药物中生物碱半抗原与载体蛋白偶联的设计思路及其鉴定方法。     

近红外分析技术在中药鉴定和含量测定中的应用研究进展

近红外光谱法在中药研究和生产中的应用起步虽晚,但却发展迅猛。近年来中药质量问题一直备受争议,中药市场还相当混乱,采取一种分析技术对假、劣伪中药材的鉴定,是改善中药市场现状,保证人民用药安全的有效方法。作为一种高新分析技术,近红外光谱法在中药鉴定和含量测定中的应用更加广泛,用NIRS对中药进行定性分析和含量测定,具有高效、便捷、无损、环保,无前期预处理、无污染、无破坏性,结果准确等优势,在中药定性鉴别和定量检测中具有十分重要的科学意义和实用价值。然而近红外光谱的有效信息提取利用率低,对微弱信息识别困难,相对灵敏度低,不适合痕量分析等缺点也是未来需要完善的方向。文章中综述了近年来近红外光谱分析技术在中药材真伪、掺伪、产地、同属中药品种及中成药的鉴别方面和含量测定方面的研究进展。     

内皮素受体A 拮抗剂药效团模型的建立

目的：构建内皮素受体A（Endothelins A Receptor,ETA）的拮抗剂药效团模型,用以搜索中草药数据库,寻找中药ETA 受体拮抗剂。方法：以对鼠主动脉平滑肌细胞的内皮素受体A 有抑制作用的36 个化合物为研究对象,分别利用HipHop 定性药效团模型和HypoGen 定量药效团模型构建方法,建立ETA 受体拮抗剂药效团模型,利用数据库搜索方法对药效团模型进行优劣评判。并用所获得的最优定性和定量药效团模型对中药化学成分数据库进行筛选。结果：获得最优定性药效团模型具有以下6 个特征：1 个芳环基团、1 个负离子基团、3 个疏水基团及1 个氢键受体,其综合评判指数CAI 值为103.94。最优定量药效团模型具有以下6 个特征：1 个芳环基团、1 个负离子基团、2 个疏水基团、1个氢键受体以及1 个排除体积,其综合评判指数CAI 值为45.96,表明所构建动物模型具有一定的可靠性,且利用定量药效团模型筛选中药化学成分数据库命中16 个化学成分。结论:本文所构建的定性和定量药效团模型筛选效率较高,可分别开展活性化合物筛选和活性预测研究,有助于指导发现中药ETA 受体拮抗剂。     

气相色谱法新进展及其在中药研究中的运用△

综述气相色谱法最新研究进展及其在中药研究中的应用,重点对气相色谱法的最新研究进展以及其在中药的定性鉴别、定量分析及中药的杂质成分和毒性成分分析方面进行综述。     

Identification of major and minor constituents of Harpagophytum procumbens (Devil's claw) using HPLC-SPE-NMR and HPLC-ESIMS/APCIMS

The HPLC-SPE-NMR technique, supported by HPLC-MS measurements, was used to determine structures of major as well as some minor constituents of ethanol and petroleum ether extracts of Harpagophytum procumbens (Devil's claw) roots. This method was also shown to be applicable for rapid and precise on-line identification of secondary metabolites present in commercial herbal products of H. procumbens. A total of 15 compounds (1-14 and 17) were identified from the ethanol and petroleum ether extracts, including a novel Diels-Alder dimer 14. Optimization of the HPLC-SPE-NMR experiments included quantitative (1)H NMR measurements, determination of trapping and elution efficiency, effect of multiple trapping of analytes, use of various deuterated solvents for SPE cartridge elution, and effect of post-column dilution ratio of eluent with water. Linear accumulation of apolar and relatively polar analytes was demonstrated for at least 8-10 repeated trappings, resulting in greatly improved signal-to-noise ratios in NMR spectra and reduced acquisition times. Thus, the HPLC-SPE-NMR technique provides an efficient means of identification of multiple components of crude extracts. By allowing on-line generation of high-quality 2D NMR data without traditional purification of extract components, the HPLC-SPE-NMR methodology represents a paradigm shift in natural products research with respect to structure elucidation.     

A routine experimental protocol for qHNMR illustrated with Taxol

Quantitative 1H NMR (qHNMR) provides a value-added dimension to the standard spectroscopic data set involved in structure analysis, especially when analyzing bioactive molecules and elucidating new natural products. The qHNMR method can be integrated into any routine qualitative workflow without much additional effort by simply establishing quantitative conditions for the standard solution 1H NMR experiments. Moreover, examination of different chemical lots of taxol (paclitaxel) and a Taxus brevifolia extract as working examples led to a blueprint for a generic approach to performing a routinely practiced 13C-decoupled qHNMR experiment and for recognizing its potential and main limitations. The proposed protocol is based on a newly assembled 13C GARP broadband decoupled proton acquisition sequence that reduces spectroscopic complexity by removal of carbon satellites. The method is capable of providing qualitative and quantitative NMR data simultaneously and covers various analytes from pure compounds to complex mixtures such as metabolomes. Due to a routinely achievable dynamic range of 300:1 (0.3%) or better, qHNMR qualifies for applications ranging from reference standards to biologically active compounds to metabolome analysis. Providing a "cookbook" approach to qHNMR, acquisition conditions are described that can be adapted for contemporary NMR spectrometers of all major manufacturers.     

Dereplication, residual complexity, and rational naming: the case of the Actaea triterpenes

The genus Actaea (including Cimicifuga) has been the source of ～200 cycloartane triterpenes. While they are major bioactive constituents of complementary and alternative medicines, their structural similarity is a major dereplication problem. Moreover, their trivial names seldom indicate the actual structure. This project develops two new tools for Actaea triterpenes that enable rapid dereplication of more than 170 known triterpenes and facilitates elucidation of new compounds. A predictive computational model based on classification binary trees (CBTs) allows in silico determination of the aglycone type. This tool utilizes the Me (1)H NMR chemical shifts and has potential to be applicable to other natural products. Actaea triterpene dereplication is supported by a new systematic naming scheme. A combination of CBTs, (1)H NMR deconvolution, characteristic (1)H NMR signals, and quantitative (1)H NMR (qHNMR) led to the unambiguous identification of minor constituents in residually complex triterpene samples. Utilizing a 1.7 mm cryo-microprobe at 700 MHz, qHNMR enabled characterization of residual complexity at the 10-20 μg level in a 1-5 mg sample. The identification of five co-occurring minor constituents, belonging to four different triterpene skeleton types, in a repeatedly purified natural product emphasizes the critical need for the evaluation of residual complexity of reference materials, especially when used for biological assessment.     

基于量表学与组学建立中医证候宏微观辨证体系的可行性探讨

证候是中医学辨证论治的依据与精髓,其综合概括了机体在内外因素作用下的整体性反应状态,具有主观、定性的特点。而现代医学用以诊断疾病的检验指标具有客观、定量的特征。将主观、定性的中医证候进行量化处理,与客观、定量的现代检验指标相结合,为中医证候辨证体系的现代化发展提供了的新思路。该文以高血压前期肝阳上亢证为例,运用量表学与代谢组学数据建立证候判别模型,就中医证候宏微观辨证体系的构建进行可行性探讨,对实现中医证候诊断的客观化以及辨证论治的规范化、标准化具有重要的指导意义。     

中药整体质量控制标准体系构建的思路与方法

基于中药标准"以我为主,引领国际"的研究目标,阐述了中药质量标准体系构建的科学方法。作者所在实验室多年从事中药质量标准的研究,通过对国内外标准构建方法与思路的学习与实践,提出科学与实用为基本原则,"深入研究,浅出标准"为指导思想,符合中医理论的中药整体质量控制标准体系构建理念。中药标准体系构建主要包括基础研究与标准建立两部分工作,其中深入的基础研究是需要溯本求源,需要全面的药效物质基础及作用机制的深入探讨;同时也对如何浅出科学实用的质量标准,提出了相关建议,包括对照物质,对照图谱以及新的定量分析方法的应用等。