自身免疫性感音神经性聋基因治疗的实验研究

目的:研究以重组复制缺陷型腺病毒为载体的Fas配体(Fas-Ligand,即FasL)基因和白细胞介素10(即IL-10)基因治疗实验性自身免疫性感音神经性聋.方法:采用同种内耳组织抗原加弗氏佐剂免疫豚鼠,造成自身免疫性感音神经性聋的动物模型28只,按配对设计将其分为4组,通过鼓阶微量注射的方式,A组注入携带FasL基因的腺病毒(Ad-FasL),B组注入携带IL-10基因的腺病毒(Ad-IL-10),C组单纯注入腺病毒(携带绿色荧光蛋白,即Ad-GFP),D组注入等量的磷酸盐缓冲液.基因导入7 d后行听觉脑干诱发电位(ABR)测试,后取颞骨制作石蜡切片并行HE染色和光镜观察,每组各取两耳行螺旋韧带和基底膜透射电镜观察.每组各取3只(6耳)行免疫荧光和酶免疫组织化学试验,以检测基因产物表达和腺病毒转染情况.结果:免疫组织化学显示携带目的基因的腺病毒可以转染血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节、蜗轴小血管周围及其耳蜗的骨壁等部位的细胞,并产生相应的蛋白产物(IL-10和FasL).ABRⅢ波阈值的均值对比结果显示,A组和B组明显低于C组和D组.内耳组织的免疫炎性反应亦明显较C组减轻.结论:重组复制缺陷型腺病毒可以携带目的基因转导入内耳,并在内耳表达基因产物,其抑制炎症反应的作用可有效地减轻自身免疫性感音神经性聋的内耳组织免疫炎性损伤和听觉功能障碍,有望成为治疗自身免疫性感音神经性聋新的方法和途径.     

免疫性内耳病模型的建立及其内耳干扰素-γ的表达

目的:建立免疫性内耳病(IMIED)模型,并检测内耳干扰素-γ(IFN-γ)表达的变化情况。方法:将20只豚鼠按配对设计方法分为实验组和对照组。实验组采用钥孔戚血蓝蛋白(KLH)在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,对照组用PBS代替KLH免疫豚鼠;观察血清中特异性KLH抗体水平、听觉功能及内耳病理形态变化,并行酶免疫组化试验观察内耳IFN-γ的表达。结果:实验组免疫前后ABRⅢ波阈值的均值差异有统计学意义(P<0.05),免疫后实验组有7只动物(12耳)出现听损,且血清中特异性KLH抗体水平较免疫前明显升高(P<0.05);对照组免疫前后ABRⅢ波阈值的均值和血清KLH抗体水平的差异均无统计学意义(P>0.05);免疫后实验组ABRⅢ波阈值的均值和血清KLH抗体水平均高于对照组(P<0.05)。实验组免疫后内耳组织中有炎症细胞浸润,部分豚鼠内耳有迷路积水。对照组豚鼠内耳组织中无明显IFN-γ表达,实验组IFN-γ表达主要分布在血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节、Corti器及蜗轴小血管周围。结论:在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,诱导并造成IMIED模型的成功率较高。正常豚鼠内耳中几乎没有IFN-γ表达,而在IMIED豚鼠内耳中IFN-γ有显著表达,提示IMIED发生发展可能与IFN-γ表达有关。     

自身免疫性感音神经性聋豚鼠子代的内耳功能与形态学研究

目的:观察自身免疫性感音神经性聋(ASNHL)雌性豚鼠子代内耳听觉生理功能及组织结构病理变化,探讨内耳自身免疫因素与子代内耳听觉损伤的相关性。方法:采用同种粗制内耳抗原(CIEAgs)免疫,造成雌性豚鼠ASNHL,妊娠后持续抗原强化免疫,对其所产子鼠进行相关指标测试和观察,包括听神经复合动作电位阈值、幅值和耳蜗微音器电位伪阈,血清抗CIEAgs抗体水平以及内耳病理形态学观察。结果:ASNHL雌鼠的子代36只中有18只(22耳)出现听力损伤,血清抗CIEAgs抗体增高,螺旋神经节细胞变性,数目减少,蜗螺旋管内炎性细胞浸润。结论:ASNHL所产子鼠可出现先天性感音神经性聋和内耳病理损伤,其发生可能与特异性体液免疫有关。     

IL-10基因内耳局部治疗自身免疫性感音神经性聋的实验研究

目的:探索局部应用IL-10基因与慢病毒重组载体对实验性自身免疫性感音神经性聋(ASNHL)的治疗作用。方法:采用纯化同种内耳抗原免疫豚鼠,造成ASNHL动物模型,再将重组载体分别经鼓阶、内淋巴囊和圆窗龛局部注射或渗透,观察听觉功能和内耳病理形态学变化,同时行免疫组织化学试验了解慢病毒转染和基因产物在内耳的分布。结果:治疗前后ABRⅢ波阈值的均值对比分析结果显示,各实验组局部基因治疗后均降低;治疗后各实验组组间比较差异无统计学意义。慢病毒主要转染部位是血管纹、Corti器、蜗轴小血管周围及其内淋巴囊等处。基因产物表达部位与转染部位基本相同。结论:重组载体经不同途径均可转导入内耳,并在内耳表达基因产物,对ASNHL发挥有效的治疗作用。     

Waardenburg综合征Ⅱ型的人工耳蜗植入

目的 探讨Waardenburg综合征Ⅱ型合并极重度感音神经性聋患者的人工耳蜗植入的有关问题.方法 分析我科在2006～2007年对Waardenburg综合征Ⅱ型合并极重度感音神经性聋6例进行的人工耳蜗植入术.结果 6例患者均成功的植入了Nucleus 24型人工耳蜗,电极植入鼓阶顺利,经开机调试一月后,声场测听(啭音)言语频率平均听阈达35 dBSPL.结论 Waardenburg综合征Ⅱ型合并极重度感音神经性聋患者是人工耳蜗植入适应证,术后听觉效果和NRT反应阈等同于一般的耳蜗植入患者,其语言康复效果有待于进一步随访.     

自身免疫性内耳病发病机制的研究现状

<正>内耳由于存在血迷路屏障、缺乏淋巴管,外淋巴液中免疫球蛋白含量仅为血清的1/1000,所以内耳曾被认为是免疫豁免器官.1958年Lehnhardt首先针对特发性突聋提出免疫反应的病因学说.1979年McCabe基于对1例乳突根治术后进行性感音神经性耳聋患者的病理研究和全身类固醇治疗使听力提高这一现象,首次提出自身免疫性感音神经性耳聋的概念.以后的研究发现自身免疫性损害不仅可累及耳蜗,也可累及前庭,故McCabe又称之为自身免疫性内耳病(autoimmune innerear disease,AIED).后来发现其损害还可累及第八对颅神经.AIED是以进行性、波动性、双耳或单耳感音神经性聋为特点,可伴有耳鸣、眩晕、病程为数周、数月或数年,听力检查结果为耳蜗性,蜗后性或混合性聋.随着内耳免疫学的发展,为进一步探讨某些不明原因的内耳病,特别是自身免疫性内耳病的发病机制开辟了新的途径,并为AIED的治疗提供理论依据.本文就有关自身免疫性内耳病发病机制的研究现状进行综述:     

特异性体液转移免疫致豚鼠先天性感音神经性聋实验研究

目的：探讨并证实孕豚鼠针对内耳组织抗原特异性抗体是否可以通过胎盘进而造成其子鼠自身免疫性先天性感音神经性聋。方法：采用同种粗制内耳抗原免疫豚鼠,造成自身免疫性感音神经性聋（ASNHL）动物模型[ELISA法测定示血清抗体水平升高和耳蜗电图（EcochG）示听神经复合动作电位和（或）耳蜗微音器电位阈值或伪闽升高],取其血清（含特异性抗内耳组织抗原的抗体）持续转移免疫妊娠豚鼠,采用EcochG测试被动免疫妊娠母鼠和子鼠的听觉功能,再采用颞骨火棉胶切片和HE染色,光镜观察内耳组织形态学改变。结果：各组出现听觉损伤的动物情况是：采用ASNHL模型动物血清被动免疫的8只妊娠母鼠中有5只（7耳）和其所产子鼠8只中有6只（10耳）、采用非ASNHL模型动物血清免疫的妊娠豚鼠所产子鼠5只中有1只（2耳）。出现听损的被动免疫母鼠和子鼠内耳病理形态学改变主要为螺旋神经节细胞变性和Rosenthal管中炎症细胞（以单个核细胞为主）浸润,部分动物出现膜迷路积水。结论：同种体液转移免疫可造成自身免疫性内耳病变：子鼠产生听觉功能障碍主要是由于母鼠所产生的特异性抗内耳组织抗原抗体经胎盘到达子鼠体内所致。     

骨保护素基因修饰的Beagle犬骨髓基质细胞在牙周组织再生中的作用

目的观察骨保护素(OPG)基因修饰的骨髓基质细胞(BMSCs)复合PLGA材料移植对牙周骨缺损的修复作用。方法4只成年Beagle犬,选其24颗前牙丝线结扎饲以高糖饮食构建牙周病模型。翻瓣检查修整近中牙槽骨缺损至3mm,实验牙分为3组:实验组(缺损处植入OPG基因修饰的BMSCs复合PLGA)、阴性对照组(缺损处植入BMSCs复合PLGA)、空白对照组(常规牙周翻瓣治疗)。6周后临床、X线片观察,切片组织学观察,统计学分析相关数据。结果OPG基因修饰的BMSCs明显促进骨缺损的修复,组织学评分与两对照组相比差异有显著性(P<0.01)。结论OPG能有效促进犬牙周骨缺损的骨组织再生。     

腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰对骨髓基质细胞功能的影响

目的　通过腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSCs) ,探讨基因修饰对BM SCs主要功能的影响。方法　以CTLA4Ig 重组腺病毒转染BMSCs,通过测定粘附于BMSCs层的3 H TdR标记CD34+ 细胞的cpm值 ,观察基因修饰对其粘附力影响 ;通过观察骨髓基质细胞支持CD34+ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数 (colonyformingcell,CFC)的变化 ,评价基因修饰对BMSCs支持CD34+ 细胞扩增能力的影响。结果　转染组与对照组BMSCs对CD34+ 细胞的粘附力及支持CD34+ 细胞扩增的能力均无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　适当条件下 ,腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰BMSCs不影响其对CD34+ 细胞的粘附力及支持CD34+ 细胞扩增的能力     

蜗神经3.0T磁共振成像在感音神经性聋中的应用研究

目的探讨采用蜗神经磁共振成像技术在感音神经性聋中的应用价值,为今后感音神经性聋的诊断提供有价值的参考与指导。方法选择从2010年1月至2013年1月期间我院就诊的80例感音神经性聋患者(50例患者大于等于18岁,30例患者小于18岁)采用GE HDxt 3.0T磁共振扫描仪对感音神经性聋患者进行蜗神经磁共振成像及内耳水成像。结果 50例大于或等于18岁患者中,46例92耳显示蜗神经、迷路正常,1例2耳蜗神经信号缺失,2例3耳前庭导水管扩大,1例2耳耳蜗神经细小;小于18岁患者中,15例30耳显示正常,Michel畸形为3例5耳,Mondini畸形有2例3耳,1例2耳耳蜗神经细小,还有2例4耳为前庭导水管扩大。结论蜗神经磁共振成像技术在感音神经性聋中有着不可或缺的地位,为患者的明确诊断提供了可靠依据,值得推广。     

射干麻黄汤对哮喘豚鼠气道EOS凋亡、IL-5mRNA及IL-10mRNA表达的影响

目的 探讨中药射干麻黄汤对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平、白细胞介素(IL)-5mRNA及IL-10mRNA表达水平的影响.方法 40只健康雄性Hartley系豚鼠随机分为射干麻黄汤组、地塞米松组、哮喘组和正常对照组.采用原位末端标记技术(TUNEL)、荧光酶标记法和RT-PCR技术检测BALF中EOS凋亡、ECP水平、IL-5mRNA及IL-10mRNA表达水平.结果 射干麻黄汤组BALF中的EOS明显较哮喘组低,EOS凋亡率明显较哮喘组高(P＜0.01); ECP水平明显较哮喘组低(P＜0.05);IL-5mRNA水平明显较哮喘组低,IL-10mRNA水平明显较哮喘组高(P＜0.05).结论 射干麻黄汤可以通过减少IL-5mRNA的表达,增加IL-10mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升,增加EOS的凋亡;降低ECP水平.     

猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用

目的：克隆猪白细胞介素4（IL－4）cDNA，观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法：通过RT－PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL－4 cDNA，测序后重组入真核表达载体pcDNA，在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果：获得的猪IL－4cDNA列与献报道的完全一致，在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL－4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论：构建了一高效表达猪IL－4的真核表达质粒，初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。     

红霉素对哮喘豚鼠IL-2、IL-6的影响

目的通过研究红霉素对哮喘豚鼠白细胞介素 2 (IL -2)和白细胞介素 6 (IL- 6)的影响,探讨红霉素治疗哮喘的作用机制。方法将豚鼠随机抽样分成三组:哮喘组、红霉素组和对照组,每组 8只。哮喘组先用 10%卵清蛋白(OVA)生理盐水注射于豚鼠的腹腔,使豚鼠致敏,第 14天后用 1%OVA雾化吸入激发豚鼠哮喘发作;红霉素组致敏处理同哮喘组,并于激发前 30min和激发后 6h分别腹腔注射红霉素;对照组用生理盐水代替0VA,处理方法同哮喘组。上述各组均于激发 24小时后将豚鼠处死,取其肺组织匀浆,应用放射免疫技术检测其IL- 2、IL- 6的含量。结果哮喘组肺组织匀浆IL- 2、IL- 6的含量明显高于对照组和红霉素组,P值分别<0. 01和<0. 05;红霉素组与对照组IL -2、IL- 6的含量无明显差异,P值均 >0. 05。结论红霉素可能通过降低哮喘豚鼠IL -2、IL- 6水平,以达到控制哮喘的目的。     

NO-1886对高脂/高糖/高胆固醇饲养的小型猪组织中CRP和IL-6蛋白表达的影响

目的探讨脂蛋白酯酶活化剂NO-1886对高糖／高脂／高胆固醇饲养的小型猪组织中CRP及IL-6蛋白表达的影响。方法15只雄性巴马小型猪,按体重随机分为3组：正常组：喂基础猪饲料;三高组：喂高脂／高蔗糖／高胆固醇饲料（含10％猪油、37％蔗糖和2％胆固醇）;加药组：在高脂／高蔗糖／高胆固醇饲料里加1．0％NO．1886。5个月后处死动物,用油红0染色检测脂质在小型猪肝脏组织的蓄积情况,Westernblot技术检测炎症因子CRP和IL-6在肝脏和脂肪等组织中的表达。结果正常组和加药组肝脏结构正常,未见明显脂滴;而三高组肝脏组织内充满了大量大小不等的红染脂滴。与正常组比较,高脂／高糖／高胆固醇饮食能诱导巴马小型猪肝脏和脂肪等组织中ClIP和IL-6的蛋白表达增加,而在高脂／高糖／高胆固醇饲料中添加1．0％NO-1886后,NO-1886能降低肝脏和脂肪等组织中CRP和IL-6的蛋白表达。结论NO-1886能明显抑制脂质在肝脏组织中的蓄积,降低高脂／高糖／高胆固醇饲养的小型猪组织中CRP及IL-6的蛋白表达。     

滨蒿内酯对哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和IL-2生成的影响

目的：研究哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和白细胞介素2（IL-2）含量的变化及滨蒿内酯（Sco）对其的影响。方法：建立卵蛋白致敏的哮喘豚鼠模型。MTT比色分析法测定光密度值，比较不同浓度Sco对淋巴细胞增殖、植物血凝素（PHA）诱导的T淋巴细胞转化以及脾细胞分泌IL-2活性的影响。结果：Seo剂量依赖地对哮喘豚鼠淋巴细胞增殖有抑制作用；Seo能够抑制PHA诱导的哮喘朦鼠T淋巴细胞转化；哮喘豚鼠IL-2生成水平高于正常对照组。Seo也可抑制哮喘豚鼠IL-2的活性。结论：Seo在体外抑制哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和脾淋巴细胞产生IL-2的水平，可能是其治疗哮喘的免疫学机制之一。     

转化生长因子β_1、白细胞介素-1β、白细胞介素-6在豚鼠分泌性中耳炎动物模型中的表达

目的:检测转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)在分泌性中耳炎(SOM)动物模型鼓室黏膜中的表达,探讨TGF-β1、IL-1β、IL-6在SOM发病和转归中的作用。方法:应用灭活肺炎链球菌注入豚鼠中耳腔,制作SOM动物模型,采用免疫组织化学方法检测致病鼠鼓室黏膜上皮在注入细菌后6h、1 d、3 d、7 d、14 d及30 d后TGF-β1,IL-1β,IL-6的表达。结果:第3天造模成功,SOM动物模型的鼓室黏膜上皮中TGF-β1、IL-1β,IL-6急性期均有表达。IL-1β术后3 d达高峰,IL-6术后1 d达高峰,TGF-β1在术后7 d表达明显增强,第30天时达高峰。结论:灭活肺炎链球菌致SOM中,IL-1β,IL-6在SOM早期发挥作用,TGF-β1可能与SOM慢性迁延有关。     

哮喘中外周血单个核细胞白细胞介素5表达及意义研究

该文研究了哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）在外周血及支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中的变化,用ＲＴ－ＰＣＲ半定量测定了外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及支气管组织白细胞介素５（ＩＬ－５）ｍＲＮＡ表达量。结晶显示哮喘豚鼠ＥＯＳ及ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达量均较对照组及地塞米松干预组显著升高,ＰＢＭＣ中ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达量与支这组织ＩＬ－５表达及外周血ＥＯＳ计数成正相关。提示哮喘豚鼠ＰＢＭＣ、ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达     

丙氨酰谷氨酰胺对猪体外循环后肠黏膜屏障的保护作用

目的探讨体外循环丙氨酰谷氨酰胺对猪体外循环后肠黏膜屏障保护作用。方法将16头上海白猪随机分为对照组和实验组,每组8头。实验组在体外循环升主动脉阻断及体外循环60min后开放升主动脉时分别静脉给予N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺0.4g/kg。围手术期检测血浆内毒素、IL-6及TNF-a含量。通过超声检测肠道蠕动情况,评价肠道功能,并对术后肠道进行病理检测。对照组给予同剂量生理盐水,其余步骤同实验组。结果与对照组相比,实验组在体外循环后血浆内毒素、IL-6、TNF-a均降低,超声检查示术后实验组较对照组肠道蠕动增加。术后病理显示,实验组较对照组肠道黏膜屏障破坏明显减轻。结论丙氨酰谷氨酰胺对猪体外循环后肠黏膜屏障有一定的保护作用,并可以指导临床用药。     

火把花根片对哮喘豚鼠肺泡灌洗液白细胞介素3受体mRNA的表达及嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的探讨火把花根片对哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)白介素-3(IL-3)受体mRNA的表达及嗜酸性粒细胞(Eos)浸润的影响。方法32只健康豚鼠随机分为4组:正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组和火把花根片治疗组。后3组制作成哮喘豚鼠模型,再激发用药。测定BALF的细胞总数和细胞分类,观察肺组织的病理改变,进行BALF的IL-3受体mRNA RT-PCR半定量分析。结果火把花根片治疗组BALF的Eos数较正常组和哮喘组有显著差异(P<0.05和P<0.01)。火把花根片组肺组织充血水肿明显,但Eos肺组织浸润较哮喘组有明显减少。BALF的IL-3受体mRNA RT-PCR半定量分析显示,火把花根片治疗组与地塞米松治疗组无显著差异,但与正常组和哮喘组比较有显著差异(P<0.01)。结论火把花根片能显著抑制哮喘豚鼠的气道炎症,为临床治疗哮喘提供初步的实验依据。