荧光定量PCR方法检测婴儿尿液中人类巨细胞病毒基因的含量

目的探讨FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA含量对于临床症状性HCMV感染的诊断价值,同时,比较FQ-PCR方法与定性PCR方法的敏感性.方法应用双标探针水解的FQ-PCR方法检测89例临床怀疑有巨细胞病毒感染患儿(病例组)尿液中的HCMV-DNA拷贝数,并以82例同年龄组健康婴儿做对照,比较两组阳性标本中HCMV-DNA含量.同时,在两组中随机选取94例(其中疑诊为HCMV感染的56例,健康儿38例),用FQ-PCR方法与普通定性PCR方法共同检测进行比较.结果病例组阳性52例,称为症状性感染组,对照组阳性30例,称为无症状性感染组.症状性感染组52例,尿液HCMV-DNA拷贝数对数值(log10X)在3.81-9.93,平均为5.30;无症状性感染组30例,尿液中HCMV-DNA拷贝数对数值在2.70-4.60,平均为3.46,两组均值差异有显著性(T=8.09,P＜0.01),拷贝数大于105拷贝/mL高度预示症状性HCMV感染.FQ-PCR方法阳性率为60.64%(57/94),定性PCR方法阳性率32.98%(31/94),两方法一致率70.21%(χ2=25.30>6.63,P＜0.01),FQ-PCR方法优于定性PCR方法(χ2=23.32>6.63,P＜0.01).结论婴儿尿液中HCMV-DNA拷贝数与临床症状性HCMV感染密切相关,FQ-PCR方法检测婴儿尿液中HCMV-DNA量可以作为临床诊断HCMV症状性感染的一种快速、有效的实验室方法.     

尿足细胞标志蛋白检测对肾脏疾病的诊断价值

目的 探讨尿液中足细胞检测在肾病综合征(NS)和紫癜性肾炎(HSPN)中的临床诊断价值.方法 采用足细胞特定标志蛋白podocalyxin(PCX) ELISA检测试剂盒对89例儿童清晨首次尿标本进行检测.其中75例采自本院儿科住院患儿,包括NS活动期患儿21例、NS缓解期患儿14例、HSPN缓解期患儿14例、HSPN活动期患儿16例、轻型过敏性紫癜(HSP)患儿10例;另选14例体检健康儿童作为健康对照组.采用SPSS 13.0软件进行统计分析.结果 1.NS和HSPN疾病活动期及缓解期患儿尿PCX水平明显高于健康对照组(P≤0.009);轻型HSP患儿与健康对照组比较无显著性差异(P=0.754).2.NS活动期患儿尿PCX水平与缓解期患儿比较差异显著[(0.593±0.271) μg/L vs (0.162±0.093) μg/L P=0];HSPN活动期患儿尿PCX水平与缓解期比较具有显著性差异[(1.822±1.342) μg/L vs (0.236±0.141) μg/L P=0.004];轻型HSP患儿尿PCX水平为(0.089±0.061) μg/L,与HSPN活动期及缓解期患儿比较均有显著性差异(Pa＜0.05).3.NS活动期患儿尿PCX水平与24 h尿蛋白排泄量呈正相关(r=0.785 P=0.01).结论 NS与HSPN患儿发病过程中存在足细胞损伤与脱落,且疾病活动期足细胞脱落明显增加.尿足细胞检测对预测急性期肾小球损伤程度具有重要的临床意义.     

肾病综合征患儿血清铁与转铁蛋白的变化

目的：肾病综合征(NS)患儿尿中丢失白蛋白的同时也伴有转铁蛋白的丢失,测定血清铁及转铁蛋白等铁代谢相关指标以及尿转铁蛋白,了解其变化及其相互关系。方法：NS患儿37例,测定其治疗前和恢复期铁代谢相关指标(血清铁、铁蛋白、转铁蛋白、转铁蛋白饱和度、总铁结合力以及外周血红细胞参数)及尿转铁蛋白,并与正常对照组比较。结果：①在NS治疗前血清铁为18.8±3.8μmol/L,分别与恢复期的21.0±3.5μmol/L,及对照组的22.2±3.8μmol/L比较,差异有显著性(P<0.01);转铁蛋白为1.9±0.3g/L,分别与恢复期的2.9±0.6g/L和对照组的3.1±0.5g/L比较,差异有显著性(P<0.01);总铁结合力为56.4±9.2μmol/L,分别与恢复期的51.9±7.7μmol/L和对照组的50.7±6.8μmol/L比较,差异亦有显著性(均P<0.01);转铁蛋白饱和度为(55.7±9.2)%,与NS恢复期及对照组的(47.4±13.3)%,(46.4±8.2)%比较,差异有显著性(P<0.01)。②血清白蛋白与转铁蛋白呈正相关(r=0.609,P<0.01)。③血清转铁蛋白浓度与尿转铁蛋白呈负相关(r=-0.550,P<0.01)。结论：NS患儿血清铁及转铁蛋白明显降低,可能与转铁蛋白从尿中丢失有关。     

荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿尿液人巨细胞病毒DNA对人巨细胞病毒感染的诊断意义

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）方法检测婴儿尿液人巨细胞病毒（HCMV）DNA水平对婴儿HCMV感染的诊断价值。方法采用FQ-PCR检测348例临床疑似HCMV感染婴儿尿液中HCMVDNA水平。同时采用化学发光免疫分析法（CLIA）检测婴儿血清HCMV-IgM抗体。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中比较血清HCMV-IgM抗体检测阳性与阴性患儿尿液中HCMVDNA拷贝数差异。结果FQ-PCR检测尿液HCMVDNA的阳性率为41.74%,CLIA检测婴儿血清HCMV-IgM抗体的阳性率为19.83%。2种方法对HCMV感染诊断的符合率为76.7%。前者诊断阳性率显著高于后者（χ^2=69.44P〈0.01）。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中,IgM抗体阳性组尿液HCMVDNA拷贝数显著高于阴性组（P〈0.01）。结论FQ-PCR检测尿液HCMVDNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法。HCMV感染婴儿尿液中高HCMVDNA拷贝数与活动性HCMV感染密切相关;FQ-PCR方法检测尿液HCMVDNA水平对于判断是否为HCMV活动性感染具有一定意义。     

病毒性心肌炎患儿巨细胞病毒感染的研究

目的：研究小儿病毒性心肌炎的病例中巨细胞病毒的感染情况。方法：用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测急性病毒性心肌炎患儿血清巨细胞病毒(CMV)特异IgM抗体,同时取健康小儿血清标本作为对照。结果：70例病毒性心肌炎中CMV-IgM阳性13例,阳性率 18.6%;与对照组比较阳性1/37,阳性率2.7%,差异有显著性意义(χ2=4.04, P<0.05)。结论：CMV感染是病毒性心肌炎的常见病因之一。     

儿童腹型过敏性紫癜与幽门螺杆菌感染的关系探讨

目的：探讨腹型过敏性紫癜(HSP)的发病及反复发作与幽门螺杆菌(HP)感染的关系。方法对36例腹型HSP及32例非腹型HSP中的16例进行胃、十二指肠内镜检查并行快速尿素酶试验,另设30例健康儿童作为对照组。3组均进行14C尿素呼气试验、血清抗HP抗体检测。结果36例腹型HSP患儿HP阳性21例（58.3%）, 其中反复发作16例,HP阳性13例（81.3%）,首次发作20例HP阳性9例（45.0%）。32例非腹型HSP患儿HP阳性9例（28.1%）;对照组HP阳性2例（6.7%）。三组比较差异具有非常显著性意义（χ2=14.7,P<0.01）,反复发作与首次发作比较差异具有显著性意义（χ2 =4.49,P<0.05）。结论 腹型HSP的发病及反复发作与HP感染有关。［中国当代儿科杂志,2007,9（4）：367-369］     

婴儿血液、尿液及母乳中病毒DNA检测在诊断人巨细胞病毒感染中的应用

目的 定量检测疑似人巨细胞病毒(HCMV)感染婴儿血液、尿液及对应母亲乳汁中的HCMV-DNA,评估三者在不同年龄组内辅助诊断HCMV感染的意义。方法 选取170例疑似HCMV感染婴儿,根据年龄分为两组:新生儿组(< 28 d, n=43)和28 d~5个月组(n=127),分别收集血液、尿液及母乳,应用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测HCMV-DNA。结果 新生儿组血液、尿液及母乳HCMV-DNA阳性检出率分别为65.1%、18.6%和93.0%,28 d~5个月组三者检出率分别为64.6%、92.9%和72.4%,28 d~5个月组尿液检出率显著高于新生儿组(P<0.01),而母乳检出率却显著低于新生儿组(P<0.01)。82例血液和尿液HCMV-DNA为阳性的患儿,其尿液HCMV-DNA拷贝数明显高于血液。结论 不同年龄组尿液及母乳中HCMV-DNA检出率不同,根据年龄选择合适的送检标本对提高检出率具有重要意义。     

小儿喘息性疾病与肺炎支原体感染关系的研究

目的：研究小儿喘息性疾病与肺炎支原体(MP)感染关系及该地喘息性疾病患儿MP感染状况。方法：观察喘息性疾病患儿120例及健康对照组儿童46例。采用酶联免疫法微滴板技术检测MP特异性抗体IgM。结果：喘息组MP特异性抗体IgM阳性54例,阳性率45%,而健康对照组仅3例弱阳性,占6.5%,阳性率两组之间差异非常显著(P<0.01)。结论：小儿喘息性疾病与MP感染有密切关系,对喘息患儿对症治疗同时,应合理使用抗生素。     

川崎病患儿抗心磷脂抗体检测的意义

目的：检测川崎病(KD)患儿血清中抗心磷脂抗体(ACA),探讨ACA与KD血管损害的关系。方法：55例急性期KD患儿,采用ELISA方法检测血中ACA-IgG,IgM和IgA三种亚型。结果：55例急性期KD患儿血清ACA-IgG阳性31例,ACA-IgM阳性13例。急性期KD组ACA-IgG,IgM阳性率比对照组显著增高(P<0.01);治疗后ACA-IgG阳性率仍高于对照组(P<0.05),而ACA-IgG阳性或阴性两组的临床表现比较差异均无显著性(P>0.05),但6例伴有血栓形成者有5例ACA-IgG阳性。结论：ACA-IgG是KD常见的抗体,ACA-IgG阳性与KD血栓性血管损害关系密切,但对病情判断无作用。     

儿童自身免疫性疾病人细小病毒B19感染及其临床特征

目的探讨儿童自身免疫性疾病(AD)人细小病毒B19(B19)的感染情况及其临床特征。方法采用巢式聚合酶链反应(nPCR)技术检测133例AD患儿血清(BS)或骨髓(BM)标本B19-DNA。另设35例健康儿童为对照组。结果AD患儿B19-DNA总阳性率为29.3%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。62例过敏性紫癜(AP)患儿BS标本B19-DNA阳性率20.9%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。30例幼年特发性关节炎(JRA)B19-DNA阳性率40.0%(12/30例),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);全身型、多关节型和少关节型B19-DNA阳性率依次为44.4%、36.4%和40.4%,两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论AD可能与B19感染有关,感染的临床表现多种多样;B19感染相关性AP临床表现多样,症状重,关节症状更突出;B19相关性JRA可表现为JRA各型。     

婴儿期特发性血小板减少性紫癜与人巨细胞病毒感染的关系

目的探讨婴儿期特发性血小板减少性紫癜(ITP)与人巨细胞病毒(HCMV)感染及免疫功能的关系。方法对54例ITP患儿(病例组)及30例正常婴儿(对照组)采用酶联免疫吸附法(ELISA)行HCMV抗体检测,PCR法行HCMV DNA检测,并对病例组采用直接免疫荧光染色法行血T细胞亚群检测,比较两组差异。结果两组HCMV抗体、DNA阳性数比较,差异有显著性意义(P均<0.01)。病例组HCMV-IgM阳性与阴性者T细胞亚群CD4 、CD8 及CD4 /CD8 比较,差异有显著性意义(P均<0.01)。结论婴儿期HCMV感染可能为ITP发病的重要因素之一。免疫功能紊乱与ITP发生、发展密切相关。     

婴儿癫(癎)与人巨细胞病毒感染的关系

目的探讨婴儿癫癎与人巨细胞病毒(HCMV)感染的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿癫癎52例及健康儿童20例尿HCMV-DNA,比较HCMV阳性与HCMV阴性癫癎患儿头颅CT、脑干听觉诱发电位(BAEP)异常率。结果婴儿癫癎组HCMV-DNA检出率为59.62%(31例),对照组为30%(6例),二者比较有显著差异(P<0.05)。HCMV阳性癫癎组头颅CT、BAEP异常率(54.84%、25.81%)远高于HCMV阴性癫癎组(23.81%、4.76%)(Pa<0.05)。结论HCMV感染可能是婴儿癫癎的重要致病因子之一,其感染导致的脑组织损伤在婴儿癫癎的发生发展中可能起重要作用。     

CLIA和ELISA检测婴儿肝病综合征患者人巨细胞病毒特异性IgM抗体的比较

目的评价LIAISON化学发光免疫分析法（CLIA）检测人巨细胞病毒（HCMV）特异性IgM抗体的方法学特点。方法采用CLIA法对婴儿肝病综合征患者血清进行HCMVIgM检测,同时用ELISA试验进行同一批样本中部分的测定。结果CLIA检测584例,阳性132例,阳性率22.6%。两种检测方法的一致性为88.8%,但CLIA法的敏感性和特异性均高于ELISA（P〈0.05）。结论CLIA检测HCMV IgM具有灵敏度高、检测所需时间短、人为影响因素少、结果准确等优点,适用于临床检测。     

母乳喂养对人巨细胞病毒感染婴儿免疫功能的影响

目的 探究母乳喂养对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染患儿免疫功能的影响。方法 回顾性分析2021年1月—2022年5月郑州大学附属儿童医院收治的135例喂养方式为母乳喂养的HCMV感染患儿的病例资料,根据母乳HCMV-DNA检测结果分为母乳阳性组(78例)和母乳阴性组(57例),再根据母乳HCMV-DNA载量中位数,将母乳阳性组患儿分为母乳高病毒载量亚组(39例)和母乳低病毒载量亚组(39例),分别比较母乳阳性组和母乳阴性组、母乳高病毒载量亚组和母乳低病毒载量亚组患儿外周血淋巴细胞亚群CD3⁺T、CD3⁺CD4⁺T、CD3⁺CD8⁺T、CD19⁺B百分率,CD4⁺T/CD8⁺T比值,IgG、IgM、IgA及尿液HCMV-DNA载量。结果 母乳阳性组和母乳阴性组、母乳高病毒载量亚组和母乳低病毒载量亚组患儿在CD3⁺T、CD3⁺CD4...     

特发性血小板减少性紫癜巨核系祖细胞巨细胞病毒感染的临床研究

目的特发性血小板减少性紫癜（ITP）是儿童常见的出血性疾病,其病因尚不十分清楚。很多研究表明,该病的发生与病毒感染密切相关。探讨人类巨细胞病毒（HCMV）感染巨核系祖细胞致ITP血小板减少的发病机制及其有效的治疗方法。方法HCMV相关ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）体外培养技术收集集落细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCMV晚期抗原基因mRNA,并给予更昔洛韦治疗。结果46例血清HCMV-DNAPCR阳性或血清HCMV-IgM阳性的ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）集落细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性19例,更昔洛韦治疗有效16例;mRNA阴性27例,更昔洛韦治疗有效4例。阳性组疗效高于阴性组,P〈0．01,差异有统计学意义。结论HCMV可感染CFU—MK而成为1TP血小板减少的原因之一。巨核系祖细胞HCMV晚期抗原基因mRNA检测阳性者更昔洛韦治疗有效,能使血小板上升或恢复正常。     

Quantitative detection of HCMV-DNA in saliva from infants and breast milk on real-time polymerase chain reaction

Background:  The role of breast milk in viral transmission has not been fully studied. To determine the effect of breast milk on the establishment of primary human cytomegalovirus (HCMV) infection in term infants, HCMV-DNA was measured in breast milk and infant saliva.
Methods:  The study population consisted of 48 healthy term infants and their mothers. The copy number of HCMV-DNA in the infants' saliva and mothers' milk was measured on quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR).
Results:  HCMV-DNA was detected in both saliva and breast milk from 21 infant–mother pairs, in milk only from four pairs, in saliva only from 12 pairs, and in neither from 11 pairs. HCMV-DNA was first detected in the saliva of 10 infants at age 4 months, seven infants at 7 months, 13 infants at 10 months, and three infants at 12 months. The viral loads peaked 4–10 months after birth, and thereafter decreased or became negative. The peak copy number and rate of HCMV-DNA detection in saliva were significantly related to peak copy number and rate of detection in the corresponding breast milk.
Conclusion:  Thus, HCMV passed through breast milk 1–7 months after delivery affects the persistence and level of HCMV-DNA in infant saliva and is the most important route of primary infection.     

早期诊断和监测系统性红斑狼疮患儿活动性人类巨细胞病毒感染的研究

目的：了解系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE)患儿活动性人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV)感染的状况,并比较不同实验室检测方法的诊断价值,方法：实验组观察了２１例初诊为ＳＬＥ并接受免疫抑制治疗的患儿,对照组观察了２１例免疫力正常的骨科患儿,治疗前后应用间接免疫荧光法检测外周自多形核白细胞（polymorphonuclear leukocytes,PMNLs）中的ＨＣＭＶpp65抗原和p７２抗原,ＰＣＲ方法检测血清中的ＨＣＭＶＤＮＡ,ＥＬＩＳＡ方法检测血清中的ＨＣＭＶＩgM和ＩgG抗体,结果,实验组活动性ＨＣＭＶ感染发生率为２９％（６／２１）,４例发生于免疫抑制治疗后,另外２例发生免疫抑制治疗前,对照组无１例发生活动性感染,两组相比差异有显著性（Ｐ＝０．０２７）,实验组各项实验室检测的阳性率分别为:pp6524%(5/21),p7214%(3/21),DNA43%(9/21),IgM10%(2/21),IgG91%(19/21).实验组各项实验室检测方法诊断活动性ＨＣＭＶ感染的敏感性分别为：pp6583%(5/6),p7250%(3/6),NDA100%(6/6),IgM33%(2/6),IgG(双份血清抗体滴度呈≥４倍增高）５０％（３／６）,特异性ＰＣＲ方法为８０％（１２／１５）外,其余均为１００％（１５／１５）,结论：ＳＬＥ患儿活动性ＨＣＭＶ感染发生率较免疫力正常的儿童显著增高,免疫抑制治疗前后可发生,ＨＣＭＶpp65抗原血症检测是早期诊断和监测ＳＬＥ患儿活动性ＨＣＭＶ感染的较好指标。     

套式聚合酶链反应加限制酶分析检测母婴巨细胞病毒感染

为评价套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）加限制酶分析在孕妇巨细胞病毒感染及其母婴宫内传播检测中的应用，采用套式ＰＣＲ加限制酶分析，病毒分离、电镜观察和特异性抗体测定，对各孕期孕妇外周血，脐血及死胎组织进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果：３６７名孕妇ＨＣＭＶ阳性检出率为５．５％，其中，套式ＰＣＲ检出率（４．９％）高于病毒分离（３．０％，Ｐ＜０．０５）。６份ＨＣＭＶＤＮＡ阳性母血中，３份配对脐血ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母－婴宫内传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ，病毒分离及特异性ＩｇＭ、ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＡ阳性，ＩｇＭ阴性。提示：套式ＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ的特异性与敏感性，对孕妇及胎儿／新生儿ＨＣＭＶ感染的研究有重要意义。     

人巨细胞病毒UL134基因在临床低传代分离株的多态性研究

目的：人巨细胞病毒（HCMV）呈现一定的基因多态性。病毒的致病性可能与不同分离株的基因变化有关。HCMV Toledo株和其他低传代临床分离株基因组UL/b′区中发现的19个基因（UL133-UL151）可能在病毒潜伏、复制、逃避机体免疫和不同组织细胞嗜性等方面起重要作用。该文研究HCMV不同临床分离株UL134基因及其编码蛋白氨基酸序列的多态性，分析这种多态性与人巨细胞病毒感染引起的各种疾病之间的关系,提供了HCMV基因多态性的一项基本数据。方法：对荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA阳性的32株临床低传代分离株进行UL134基因全序列PCR扩增、测序及分析。结果：32株临床低传代分离株UL134基因PCR扩增均阳性。与Toledo株比较，临床分离株UL134基因核苷酸和预测编码蛋白质的氨基酸序列较保守，同源性分别为96.4%~98.3%和92.7%~94.9%，但预测编码蛋白质新增一个SUL位点。结论： 与Toledo株比较，临床分离株UL134基因比较保守，但仍具有一定的多态性, 未发现UL134基因与HCMV致病性之间的本质联系。［中国当代儿科杂志，2007，9（6）：583-586］     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关