SARS病变组织细胞凋亡检测及其意义

目的 检测SARS病变组织标本中的细胞凋亡情况和凋亡细胞类型，探讨细胞凋亡在SARS发病过程中的作用及可能机制。方法 DNA片段原位末端检测和免疫组化碱性磷酸酶法单染和双染检测正常组织和SARS病变组织中的细胞凋亡以及白细胞分化相关抗原CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD20、CD68的表达情况。结果 与正常组织相比，SARS病人的脾脏、肺组织和淋巴结细胞凋亡明显增多，凋亡细胞包括肺泡上皮细胞、淋巴细胞和单核／巨噬细胞等；各病变组织内均有大量CD68^ 单核／巨噬细胞；病变肺组织基本没有CD45RA^ ／CD20^ B细胞和CD4^ /CD8^ T细胞浸润，淋巴结和脾脏的CD4^ ／CD8^ T细胞、CD45RA^ ／CD20^ B细胞也明显减少，现存的具有上述抗原特性的T细胞和B细胞较少凋亡。结论(1)细胞凋亡现象在SARS病变组织中普遍存在，提示细胞凋亡在SARS发病过程中起一定作用；(2)病变组织内浸润的炎细胞主要为单核细胞，说明单核细胞可能在SARS发病中起重要作用；(3)淋巴结和脾脏的细胞凋亡现象和CD4^ /CD8^ T细胞及CD45RA^ ／CD20^ B细胞减少提示SARS病毒可能对免疫细胞有一定的杀伤效应。     

免疫细胞在SARS病变组织中的表达及其作用

目的观察并探讨免疫细胞标志物及其活化抗原在严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)病变组织中的表达及其在SARS发病中的作用。方法采用14种免疫细胞标志物及其活化抗原,用免疫组化DAB及碱性磷酸酶(AP)双重染色法检测3例SARS尸检病变肺、脾、淋巴结免疫细胞及其活性表达情况。结果(1)病变肺、脾、淋巴结内均可见大量增生的单核巨噬细胞,部分经CD25标记显示阳性(活化单核巨噬细胞)。(2)肺组织炎症灶内可见散在的CD45RO阳性T淋巴细胞,而KI67阳性的T淋巴细胞(活化T淋巴细胞)则很少表达。(3)淋巴结内经KI67及CD45RO双染标记的T淋巴细胞(活化的T淋巴细胞)呈散在阳性;T淋巴细胞亚群数量均明显减少,CD4 、CD8 T淋巴细胞及NK细胞减少则更为严重。结论单核巨噬细胞在SARS发病过程中活性显著增加,为主要反应细胞,而T淋巴细胞亚群则显著减少。单核细胞及T淋巴细胞可能在SARS发病机制中起着重要作用。     

免疫细胞在SARS病变组织中的表达及其作用

目的 观察并探讨免疫细胞标志物及其活化抗原在严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)病变组织中的表达及其在SARS发病中的作用。方法 采用14种免疫细胞标志物及其活化抗原，用免疫组化DAB及碱性磷酸酶(AP)双重染色法检测3例SARS尸检病变肺、脾、淋巴结免疫细胞及其活性表达情况。结果(1)病变肺、脾、淋巴结内均可见大量增生的单核巨噬细胞，部分经CD25标记显示阳性(活化单核巨噬细胞)。(2)肺组织炎症灶内可见散在的CD45RO阳性T淋巴细胞，而l(167阳性的T淋巴细胞(活化T淋巴细胞)则很少表达。(3)淋巴结内经l(167及CD45RO双染标记的T淋巴细胞(活化的T淋巴细胞)呈散在阳性；T淋巴细胞亚群数量均明显减少，CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞及NK细胞减少则更为严重。结论 单核巨噬细胞在SARS发病过程中活性显著增加，为主要反应细胞，而T淋巴细胞亚群则显著减少。单核细胞及T淋巴细胞可能在SARS发病机制中起着重要作用。     

鼻咽癌中浸润的淋巴类细胞与瘤细胞凋亡的关系

:【目的】研究鼻咽癌中浸润的淋巴类细胞与癌细胞凋亡间的相关性。【方法】收集中山医科大学病理学教研室38例未经治疗的鼻咽癌活检标本。应用TUNEL(TdTmediateddUTPNickEndLabeling)方法定量检测凋亡癌细胞计数(每5000个鼻咽癌细胞中的凋亡细胞数)。以免疫组化法分别检测T细胞,单核/巨噬细胞,B细胞和树突状细胞。【结果】①在未经治疗的鼻咽癌活检标本各例间癌细胞凋亡计数差异很大,平均为(129±139)/5000;②凋亡癌细胞计数与T细胞指数(I,即平均每个高倍视野浸润的T淋巴细胞数)和单核/巨噬细胞指数(moncytemacrophageindex,MMI,即平均每个高倍视野浸润的单核/巨噬细胞数)均呈正相关,P<0.05,但凋亡癌细胞计数与B细胞指数(平均每个高倍视野浸润的B淋巴细胞数)和树突状细胞指数(平均每个高倍视野浸润的树突状细胞数)无相关性,P>0.05。【结论】①代表细胞介导免疫的浸润性T淋巴细胞可以诱导鼻咽癌细胞凋亡;②浸润的单核/巨噬细胞可能主要是癌细胞凋亡的诱导者也可能部分是凋亡的后果;③代表体液免疫的浸润性B淋巴细胞和递呈抗原的树突状细胞与鼻咽癌细胞的凋亡无直接相关性     

CCL28-CCR10通路在类风湿关节炎单核细胞迁移中的作用

目的：观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者关节中单核/巨噬细胞趋化因子受体CCR10的表达,探讨趋化因子CCL28与其受体CCR10在RA单核细胞迁移中的作用及机制。方法：采用免疫组织化学法分析8例RA患者、4例骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者和4例正常对照者滑膜组织中CCR10的表达并进行细胞染色评分(0～5分),流式细胞术检测26例RA患者和20例健康对照者外周血、15例RA患者滑液CD14⁺单核细胞中CCR10阳性细胞比例,Transwell迁移实验检测CCL28对RA和健康对照单核细胞的趋化性,Western blotting检测CCL28干预RA单核细胞的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路磷酸化。结果：CCR10表达在RA滑膜衬里层细胞及衬里下层的巨噬细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞;RA滑膜衬里层细胞和衬里下层巨噬细胞的CCR10表达明显高于OA和正常对照的滑膜(P均&l...     

CD8+T细胞依赖的急性移植物抗宿主病小鼠模型的建立

目的建CD8^＋T细胞依赖的急性移植物抗宿主病（GVHD）小鼠模型。方法分别以主要组织相容性抗原（MHC）相同,而次要组织相容性抗原（miHAs）不同的8～12周龄C3H.SW（H-2D^b,CD45．2^＋）和B6／SJL（H-2D^b,CD45．1^＋）雌性小鼠为供受体,从供体骨髓分离去除T细胞的骨髓细胞（T—BM）,与其脾脏和淋巴结来源的CD8^＋T细胞混合,经尾静脉输注给受致死剂量^137γ照射的受体鼠。观察移植后受体的体重、毛色、皮肤和生存率的变化,并用流式细胞术（FACS）和组织病理学进一步分析受鼠靶器官细胞浸润和损伤状况。结果移植后受体鼠出现体重明显减轻、毛发脱落、皮肤溃疡等表现,并在28d后出现死亡;FACS证实浸润受鼠骨髓、脾脏和肝脏的细胞主要为CD45．2^＋的供鼠细胞,实验组中还有大量CD45．2^＋CD8^＋T细胞浸润;组织病理学发现肝脏中大量淋巴细胞浸润,皮肤结构破坏,组织坏死。结论成功建立了miHAs不匹配的异基因骨髓移植诱导的CD8^＋T细胞依赖的GVHD动物模型,该模型模拟了目前临床病人采用的同种异基因骨髓移植配型方式,可为异基因骨髓移植GVHD发病机理及该病的防治研究提供良好的实验平台和工具。     

人胎儿脾脏T细胞表型分析

本文研究了人胎儿脾脏T细胞的表型,结果显示:(1)胎儿脾脏T细胞比例偏低,TCRαβ+T细胞占CD 3+T细胞的84.5％;(2)CD4/CD8比值和胎龄成正相关,这提示抑制性T细胞在自身耐受形成中可能具有重要意义;(3)胎儿脾细胞的74％表达CD38抗原。     

狼疮肾炎患者肾小管间质病变与肥大细胞巨噬细胞转化生长因子β_1和T细胞表达的相关分析

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者肾组织中肥大细胞(MC)、巨噬细胞、T细胞(CD4+,CD8+)的和转化生长因子(TGF)-β1与LN肾小管间质病变程度的关系。方法收集51例LN患者的肾活检标本,采用免疫组织化学技术检测MC、巨噬细胞、T细胞(CD4+,CD8+)的及TGF-β1在LN患者肾组织中的表达,并分析其与LN肾小管间质病变的关系。结果肾小管间质中浸润的CD4+细胞、CD8+细胞和CD68+细胞数量与对照相比差异均有统计学意义(P<0.05)。MC的表达与LN肾组织间质纤维化程度存在正相关关系(P<0.05);TGF-β1的表达及T细胞(CD4+,CD8+)、CD68+的巨噬细胞浸润与LN肾组织间质炎症存在正相关关系(P<0.05)。结论MC可能是LN肾间质纤维化的重要参与者;TGF-β1可能是MC、巨噬细胞和T细胞的重要趋化因子。     

原位杂交检测尸检组织中SARS-CoV RNA

目的从分子水平检测急性重症呼吸综合征(SARS)患者的病变组织中SARS病毒(SARS-associated coronavirus, SARS-CoV)的存在和分布情况。方法应用原位杂交技术检测因SARS死亡患者的肺、脾脏、淋巴结、垂体、胰腺、甲状旁腺、肾上腺、胃肠道、皮肤、脑、肝、肾、血管、四肢横纹肌组织、骨髓、心脏、卵巢、子宫和睾丸等组织的SARS-CoV RNA的表达和定位。结果尸检组织多部位(包括肺泡上皮细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、肺内单核/巨噬细胞、脾脏和淋巴结的单核/巨噬细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、食道鳞状上皮、胃肠道上皮细胞及胃粘膜壁细胞、皮肤汗腺细胞、大脑神经元细胞、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞)SARS-CoV RNA阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官;SARS-CoV在机体的分布情况与冠状病毒受体CD13分布相似;皮肤汗腺、消化道上皮及肾远曲小管上皮细胞SARS-CoV RNA阳性对确定SARS传播途径具有重要意义。     

原位杂交检测尸检组织中SARS-CoVRNA

目的 从分子水平检测急性重症呼吸综合征(SARS)患者的病变组织中SARS病毒(SARS-associatcd coronavirus，SARS—CoV)的存在和分布情况。方法 应用原位杂交技术检测因SARS死亡患者的肺、脾脏、淋巴结、垂体、胰腺、甲状旁腺、肾上腺、胃肠道、皮肤、脑、肝、肾、血管、四肢横纹肌组织、骨髓、心脏、卵巢、子宫和睾丸等组织的SARS-CoVRNA的表达和定位。结果 尸检组织多部位(包括肺泡上皮细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、肺内单核／巨噬细胞、脾脏和淋巴结的单核／巨噬细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、食道鳞状上皮、胃肠道上皮细胞及胃粘膜壁细胞、皮肤汗腺细胞、大脑神经元细胞、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞)SARS-CoVRNA阳性。结论 SARS-CoV可侵犯全身多种器官；SARS-CoV在机体的分布情况与冠状病毒受体CD13分布相似：皮肤汗腺、消化道上皮及肾远曲小管上皮细胞SARS-CoVRNA阳性对确定SARS传播途径具有重要意义。     

Expression of immune cells and their roles in the involved tissues of SARS patients]

OBJECTIVE: To study the expression of the immune cell markers and their active antigens in the involved tissues of patients with severe acute respiratory syndrome (SARS). METHODS: Specimens of the lungs, spleens and lymph nodes were obtained from autopsy of 3 SARS cases to investigate the expression of the immune cells and their activities with double immunohistochemical staining (DAB and AP) by using 14 immune cell markers and their active antigens. RESULTS: A large quantity of proliferated macrophages could be observed in the lungs, spleens and lymph nodes of the SARS patients, some of which were positive for CD25 marker (active macrophages). In the lungs of the 3 patients, localized necrosis occurred where infiltration of CD45RO (+) T lymphocytes was observed, with only scarce Ki67 (+) T lymphocytes (active T lymphocytes) and B lymphocytes. In the lymph nodes, scattered T lymphocytes positive for Ki67 and CD45RO markers (active T lymphocytes) were seen, but the T lymphocytes subpopulations were obviously decreased, which was especially so with CD4+ and CD8+ T lymphocytes and NK cells. CONCLUSION: Significantly enhanced activity of the macrophages occurs in SARS as the major reactive cells, but T lymphocyte subsets are obviously decreased, indicating the important roles of the macrophages and T lymphocytes in the pathogenesis of SARS.     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达

目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达

目的 观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法 应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoVN蛋白。结果 肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞／巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoVN蛋白单克隆抗体均为阳性。结论 SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoVN蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达，对研究SARS—CoV传播途径具有重要意义。     

肺癌模型小鼠肿瘤和主要免疫器官组织中调节性T细胞和NK细胞的数量变化及其意义

目的：探讨肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）和自然杀伤细胞（NK）在外周免疫器官和肿瘤组织中数量的变化,阐明其对肿瘤发展的影响。方法：C57BL/6小鼠分为Lewis肺癌细胞系（LLC）注射组和正常对照组,LLC注射组小鼠采用LLC腋窝注射制备皮下肿瘤模型,正常对照组小鼠采用生理盐水等量注射。采用细胞表面和细胞内特异荧光抗体染色和流式细胞术检测肺癌小鼠脾脏、淋巴结和肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺T细胞、Treg细胞及脾脏组织中NK细胞数量。结果：与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏和淋巴结中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显升高（P < 0.05）,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg细胞数量也明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。LLC接种组小鼠肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显高于脾脏和淋巴结（P < 0.05）。与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏组织中NK细胞比例明显降低（P < 0.05）。结论：肺癌小鼠主要免疫脏器官组织中Treg细胞比例和数量升高,NK细胞比例降低,其可促进肿瘤发展,抑制机体对肿瘤细胞的免疫应答。     

新甲型H1N1流感重症死亡病例呼吸道及外周免疫器官病理形态学及免疫细胞的变化

目的 探索新型甲型H1N1流感病毒感染重症死亡病例呼吸道及外周免疫器官病理形态学及免疫细胞的变化。方法收集2009年北京甲型H1N1流感重症死亡病例8例,其中2例为系统尸体解剖标本,6例为床旁穿刺标本,以手足口病1例作为对照。HE染色观察病理形态学变化;免疫组织化学技术检测肺、脾和淋巴结免疫细胞变化。结果 实验组表现为坏死性支气管炎和周围炎,弥漫性肺损伤、肺出血、纤维化,巨噬细胞明显增生,淋巴细胞浸润不明显。甲型H1N1流感病毒血凝素和核蛋白抗原主要表达于呼吸道上皮及巨噬细胞。免疫细胞计数:CD68⁺巨噬细胞显著增多,CD20⁺B淋巴细胞、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞减少,CD56⁺细胞偶见,各类细胞与对照组比较差异无统计学意义。脾和淋巴结病变基本一致,灶状组织细胞增生,"噬红现象"明显,淋巴组织萎缩,残留滤泡内以滤泡树突状细胞(follicular dendritic cell, FDC)细胞为主。免疫细胞计数:CD68⁺巨噬细胞显著增多,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CD20⁺B淋巴细胞、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T免疫细胞数明显低于对照组(P<0.05);CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞的比值与对照组相比,差异无统计学意义;CD56⁺细胞在脾脏明显低于对照组,淋巴结内两组均偶见。结论 新型甲型H1N1流感重症患者外周免疫器官明显萎缩,特异性免疫功能减弱,其中细胞免疫反应下降更明显。     

应用四色荧光分析技术测定造血干细胞移植后患者CD45RA+细胞的变化

目的探讨流式细胞技术测定造血干细胞移植(HSCT)后患者外周血中初始T细胞CD45RA 的变化与临床意义。方法收集来自南方医院的49例造血干细胞移植病人的移植前、移植之后15、30、90和180 d不同时间点的90份肝素抗凝外周血标本。应用流式细胞技术测定外周血CD4 CD45RA /CD8 CD45RA 细胞数的动态变化。结果在49名造血干细胞移植患者外周血标本中选择90份样本进行检测,移植后30 d,CD8 CD45RA 细胞即能恢复到正常水平,而CD4 CD45RA 细胞产量半年之内仍低于正常并持续缓慢增长。经HSCT患者的胸腺再生输出功能明显低于自体干细胞移植患者(P<0.01)。异体外周血干细胞移植患者的胸腺恢复能力显著比异体骨髓移植患者更快(P<0.05)。结论通过流式细胞仪检测患者外周血中CD4 CD45RA / CD8 CD45RA 细胞的变化,可以相对定量地检测患者的胸腺再生输出功能,并通过测量新生T细胞的合成来监视胸腺功能在免疫重建中的作用,为临床干细胞移植治疗提供有力的数据。