北京鸭红细胞膜β肾上腺素受体放射配基结合测定法

本文以[³H]dihydroalprenolol([³H]DHA)为放射配基。对北京鸭红细胞(RBC)膜β受体进行了系统研究。结果表明,[³H]DHA与北京鸭RBC结合具有饱和性,肾上腺素能激动剂与[³H]DHA竞争结合的强弱顺序与它们的生物活性一致,提示结合有结构特异性和立体特异性,[³H]DHA与鸭RBC结合迅速、可逆。可见北京鸭RBC膜存在β受体,用于放射配基结合测定有取材方便,受体较丰富,膜蛋白得率高,[³H]DHA非特异结合低和易于保存等优点,可以代替火鸡RBC。     

二氢埃托啡对大鼠脑阿片受体的结合特性

本文在大鼠脑匀浆P_2膜上,观察了二氢埃托啡(DHE)对[~3H]纳洛酮,[~3H]DPDPE和[~3H]埃托啡(预先用30nmol/L吗啡和100nmol/L DADLE阻断μ和δ受体)与阿片受体结合的抑制强度。结果表明:DHE对[~3H]纳洛酮与阿片受体结合的抑制强度远远大于对[~3H]DPDPE和[~3H]埃托啡(预先阻断μ和δ受体后)。DHE对μ,δ和κ受体的相对亲和力之比为1951:2:1,提示DHE为μ受体相对选择性配体。     

新抗胆碱药[3H]三环哌酯对人脑M受体的作用

用放射配体受体结合试验法,研究了新化合物三环哌酯与人大脑皮质M受体的结合特性,并与QNB作了比较。饱和实验结果显示,[³H]三环哌酯的结合参数与[³H]QNB相近,两种配体的作用均符合单位点模型。竞争性抑制实验结果表明二者作用强度相当。[³H]三环哌酯的结合和解离速率常数均较[³H]QNB大,且其与皮质M受体的解离受季铵酚的变构调节,结果提示,两种配体与M受体有一些不同的结合特性,在M受体研究中,[³H]三环哌酯可以作为[³H]QNB的补充工具。     

比索洛尔具有两个β_1受体结合部位

β-肾上腺素受体阻滞剂的心脏选择性可用β_1和β_2受体细胞的膜进行受体竞争结合研究来评价。亲脂性的放射配体[~3H]二氢烯丙心安,在完整的心肌细胞中发生高度非特异性结合,本文用亲水性的放射性配体[~3H]-CGP-12177来研究H-I 42BS,HX-CH-44-BS 和比索洛尔(bisoprolol)的竞争性质,     

铅对发育脑纹状体毒蕈碱和多巴胺受体的影响

母鼠从受孕d0至分娩后d21连续饮用含300和1000ppm的铅水。新生大鼠出生后d21处死。结果表明,血和纹状体铅含量明显增加;在1000ppm组,DNA,RNA降低和蛋白质/DNA比值升高;纹状体DA含量亦减少。铅不影响[~3H]spiperone与纹状体DA受体的特异结合。但影响[~3H]QNB与MACh受体的特异结合,受体数目增加,亲和力未变,提示脑纹状体MACh受体功能状态与铅含量有关。铅影响发育脑纹状体的这两种受体的相互平衡,可能是铅对仔代神经毒性的原因之一。     

小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体放射配基受体结合分析方法

目的　建立简便、快速的小鼠腹腔巨噬细胞PAF放射配基受体结合分析法 ,考察巨噬细胞表面PAF受体的特性。方法　以♂C5 7BL/ 6小鼠腹腔巨噬细胞为受体材料 ,[3 H] PAF为标记配基 ,非膜过滤法进行结合放射配基分离 ,液闪计数测定。结果　小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体结合符合简单单位点受体结合模型 ,Scatchard分析求出的PAF受体结合参数Bmax=10 0 2fmol·1× 10 6cells-1,KD=3 2nmol·L-1。 [3 H] PAF与小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体的结合呈现单一、饱和特点 ,并可被特异性PAF受体拮抗剂BN5 2 0 2 1竞争性抑制。结论　利用小鼠腹腔巨噬细胞贴壁特性 ,采用非滤过法处理细胞 ,能够在保持受体生理学活性的状态下 ,用于特异性PAF受体拮抗剂的筛选     

蝙蝠葛碱和粉防己碱对[~3H]WEB 2086与体外牛脑前动脉平滑肌细胞结合的影响(英文)

用标记的血小板活化因子拮抗剂[~3H]WEB 2086,在培养的牛脑前动脉平滑肌细胞上鉴定了血小板活化因子受体。结果表明在25℃时该细胞上存在两种与配基具有不同亲和力的受体结合位点,其中K_(d-1)=22.8±5.0 nmol·L~(-1),K_(d-2)=186+20.5 nmol·L~(-1);B_(max-1)=2.1±0.3 pmol/10~4细胞,B_(max-2)=12.1±1-5 pmol/10~6细胞。蝙蝠葛碱和粉防己碱均能抑制[~3H]WEB2086与上述细胞的结合。     

丁苄腈心安与心得安对大鼠心肌β肾上腺素受体亲和力比较

本文以~3H双氢心得舒(~3H—DHA)作为放射性配基,测定大鼠心肌上β肾上腺素受体的最大结合容量(B_(max))和平衡解离常数(K_D)分别为104.1±4.7fmol/mg蛋白质及10.1±2.7nM,Hill系数(nH)为1.007±0.002。丁苄腈心安和心得安对大白鼠心肌β肾上腺素能受体与~3H-DHA结合的半数抑制浓度(IC_(50))分别为3.30±0.74×10~(-8)M和3.87±0.66×10~(-7)M,表观解离常数各为2.20±0.49×10~(-8)及2.58±0.44×10~(-7)。故丁苄腈心得安对大鼠心肌β肾上腺素受体的亲和力约为心得安的11.7倍。     

用放射受体检定生物体液中β-肾上腺素受体拮抗剂的方法

作者利用被删药物与标记的β-肾上腺素受体拮抗剂([~3H]DHA)在肺膜β-肾上腺素受体结合部位的竞争能力为基础,发展了放射受体检定生物体液中β-肾上腺受体拮抗剂的方法。本法具有简单,非常灵敏和血浆不需要预先提取的优点,并可检出生物活性代谢产     

氚标记强效镇痛剂N-[1-(β-羟基-β-苯乙基)-3-甲基-4-哌啶基]-N-丙酰苯胺的制备以及与阿片受体的结合试验

本文报道以N-[1-(对-溴苯甲酰甲基)-3-甲基-4-哌啶基]-N-丙酰苯胺(Ⅲ)为前体,以PdO/BaSO_4作催化剂,用氚气进行卤—氚置换,氚化还原羰基的反应。反应产物经硅胶纸层析纯化后,用甲基橙比色法定量测定,得到N-{1-[β-羟基-β-氚-β-(对-氚苯基)乙基]-3-甲基-4-哌啶基}-N-丙酰苯胺(Ⅳ,[~3H]F-7302),其比放射性为59 Ci/mM,放化纯度为98％。[~3H]F-7302与小鼠脑内阿片受体的特异性结合在浓度为4.5×10~(-9)M时达到饱和,解离常数Kd=1.25×10~(-9)M,最大结合量B_(max)=93.08×10~(12)M/g蛋白,其特异性结合与非特异性结合比值达10～15。     

从阿拉伯艾蒿分离到两种对苯并二氮杂和α_1肾上腺素能受体有亲和力的黄酮化合物(英文)

干燥阿拉伯艾蒿的酒精提取物对体外[~3H]地西泮和大鼠大脑皮质细胞膜结合产生抑制作用,两种化合物被分离纯化,其化学结构为毛地黄黄酮和玄参黄酮(IC_(50)分别为1.3±s0.1和22.7±S2.5μmol·L~1),两种化合物在体外还能抑制[~3H]哌唑嗪和大鼠脑皮质细胞膜结合,但不能改变[~3H]蝇蕈碱乙酰胆碱受体,[~3H]蝇蕈醇,[~3H]SCH 23390和[~3H]螺哌隆和膜的结合,Scatchard plot分析提示两种化合物对[~3H]地西泮和膜结合的抑制作用是通过竟争性和非竞争性混合机理而实现的。     

可乐定镇痛与中枢Ca~(2+)的关系

用大鼠甩尾法和放射配基结合实验,探讨了可乐定镇痛与中枢Ca~(2+)的关系。CaCl_2(1μmol/rat,icv)和EGTA(0.2μmol/rat,icv)分别拮抗和增强可乐定(1mg/kg,sc)的镇痛。戊脉安(0.1μmol/rat,icy)对可乐定(1 mg/kg,sc)镇痛无明显影响,但可部分翻转CaCl_2对可乐定镇痛的拮抗。CaCl_2(1×10~(-3)mol)对[~3H]-可乐定结合无明显抑制。结果表明可乐定镇痛与脑室周围组织中Ca~(2+)浓度变化密切相关,Ca~(2+)至少部分需经对戊脉安敏感的钙通道进入细胞内方可拮抗可乐定镇痛。推沦:可乐定镇痛与神经元内Ca~(2+)有关。     

氨甲酰胆碱所致CCL137细胞中M-胆碱受体减少的时间过程和特点(英文)

使用亲水性配基[~3H]NMS和亲脂性、膜通透性配基[~3H]QNB,证实氨甲酰胆碱(CCh)所致CCL137细胞中mAChR的减少,可分为两个不同的阶段。第一阶段的特点是完整细胞膜表面上[3~H]NMS的结合部位明显减少,它与CCh的作用时间和用量有关;但对[~3H]QNB的结合没有明显影响;在除去CCh后,不需蛋白质重新合成这种变化即可恢复至正常,故认为该阶段属受体隐没或内移。第二阶段的特点是完整细胞对该二配基的结合均告降低,欲使这种变化恢复正常,需要更长的时间,并需有蛋白质重新合成,故认为该阶段为内移的受体降解或下行调节。     

锰对大鼠脑纹状体多巴胺受体的毒作用

大鼠每日ip15或30mg/kg硫酸锰,连续10d。末次染毒后24h,体重、脑重和纹状体重均未见变化。30mg/kg组,DNA,RNA降低,蛋白质/DNA比值明显增加;电镜下DA神经元个别线粒体肿胀。锰增加[~3H]spiperone与脑纹状体DA受体的特异性结合,同时亦看到染毒大鼠纹状体和突触中锰含量升高,提示脑纹状体DA受体功能状态与其锰含量变化有关。锰的中枢神经毒性表现来源于DA神经功能的损害。     

维拉帕米对人成纤维细胞DNA、RNA和蛋白质合成的影响

为探讨钙拮抗剂对细胞大分子代谢的影响,观察了维拉帕米对[~3H]TdR、[~3H]UR和[~3H]Leu参入人成纤维细胞的作用。维拉帕米抑制DNA和RNA合成的作用为浓度依赖性,ID_(50)分别为12.3mg/L和22mg/L。对蛋白质合成的抑制作用较弱。     

人参糖肽降血糖机制(英文)

目的:研究人参糖肽(GGP)降血糖机制。方法:为了观察GGP对胰岛素分泌和糖酵解的影响,给予GGP后,测定血糖(BG)和肝糖元(LG)含量,及胰岛素、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸(LC)水平。通过测定给予GGP前后肝组织柠檬酸合成酶(CTS)、苹果酸脱氢酶(MDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)活性变化,推测对糖有氧氧化过程的影响。通过测定肝组织腺苷酸环化酶(AC)活性和cAMP水平,研究人参糖肽对糖代谢的影响及与第二信使cAMP的关系。通过检测肝组织磷酸化酶(PP)活性推测药物对肝糖元代谢的影响。检测药物对细胞膜受体的影响,观察了β-受体阻滞剂普萘洛尔和α-受体阻滞剂酚妥拉明对GGP作用的影响。为了证明GGP与β-受体的结合,观察了GGP与[~3H]DHA对北京鸭红细胞膜β-受体的竞争性结合。结果:GGP在降低血糖和肝糖原的剂量下(100,200mg/kg,ip或50,100mg/kg,iv),仅于给药后20分钟,小鼠血浆胰岛素水平即升高,且GGP降低血糖作用可持续16小时;同时,血中LC含量及血和肝组织LDH活性降低。而肝组织AC、CTS、MDH、SDH、COO、PP活力和cAMP水平升高,β-受体阻滞剂普萘洛尔可阻滞GP降低肝糖元作用,GGP可竞争性抑制放射配基[~3H]DHA与红细胞膜β-受体的结合,其IC_(50)为63nmol·L~(-1)。结论:GGP为β-受体激动剂,通过第二信使cAM     

家兔前叶皮质苯二氮受体的动力学与光亲和标记

采用放射配基结合分析法及光亲和标记技术研究家兔脑前叶皮质苯二氮受体的动力学特征及其分子基础。[~3H]FNP与突触体膜P_2饱和结合的Hill系数为0.74,Scatchard分析为双曲线型。低温(0℃)条件下的动力学显示表观不均一性,但提高温度至25℃时,结合与解离过程均符合一位点反应模型。P_2膜制备与[~8H]FNP光亲和标记后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳仅见一条放射性区带,其表观分子量为56000±1600道尔顿。实验结果提示家兔前叶皮质中苯二氮受体可能以二种不同亲和力的构象存在。     

盐酸埃他卡林对心肌ATP-敏感性钾通道的作用

目的　在急性分离的豚鼠心室肌细胞上观察盐酸埃他卡林 (iptakalimhydrochloride ,Ipt)对钾电流的影响 ;研究Ipt对 [3 H]格列本脲 (glibenclamide ,Gli)与心肌ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannel,KATP)的硫脲受体(Sulfonylureareceptor,SUR2A)结合特征以及 [3 H]Gli与心肌膜KATP结合和解离动力学过程的影响 ,以评价Ipt对心肌KATP的作用。方法　分离豚鼠心室肌细胞 ,用全细胞记录技术记录细胞钾电流 ,通过浴槽内灌流给药 ,观察盐酸埃他卡林对钾电流的影响。KATP拮抗剂 [3 H]Gli与大鼠心肌膜特异性结合与解离的动力学试验。结果　①Ipt在浓度为 1和10 0 μmol·L-1时 ,均可明显引起豚鼠心室肌外向钾电流I U曲线上移 ,Ipt作用后 5min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的 12 4 9%± 9 5 % (n =5 )和 15 1 6 %±11 2 % (n =7) ,与溶媒对照组 (6 9 8%± 3 5 % ,n =7)比较差异均有统计学意义 (P <0 0 1)。在相同条件下 ,KATP开放剂吡那地尔 (pinacidil,Pin)的作用与之相似 ,也可明显引起豚鼠心室肌外向钾电流I U曲线上移 ,显著增强细胞外向钾电流。②非标记Gli与 [3 H]Gli和大鼠心肌膜标本在 2 5℃孵育 6 0min ,可浓度依赖性地抑制 [3 H]Gli与心肌膜SUR2A的特异性结合 ,其IC50 值为 (     

[~3H]α-萜品烯醇在豚鼠体内的吸收、分布和排泄

α-萜品烯醇为艾叶油中的平喘成分,本文以inhal,po与iv[~3H]α-萜品烯醇研究其在豚鼠体内的吸收,分布和排泄。结果表明inhal,po后吸收快,但inhal时有大部分药物进入胃肠道;分布广、除细胞内、外间液外,还可能与血浆蛋白结合;在气管平滑肌,肺脏与心肌中有较高的浓度;消除速度快,inhal,po与iv的t_(1/2)β分别为5.92,8.45与13.33h,主要以原形由尿排泄。     

[~3H]-葫芦素B在动物体内的吸收、分布、排泄

口服[~3H]-葫芦素B后,血药浓度变化属二室开放模型。各组织中放射性含量以肝、胆、胃、肺、肾及脾较高,脑组织最低,但连续给药后,小脑、胃、脑干放射性含量增加较为显著。小鼠灌药后24h尿液,未见原形药物。给药后96h,尿、粪排泄量分别占给药量的58.3％及35.8％,其胆汁中代谢物可经肠道再吸收。[~3H]-葫芦素B的血浆蛋白结合率最大可达88.7％。