慢性乙型肝炎、肝硬化和肝衰竭患者肠道菌群变化研究*

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）、肝硬化(LC)和肝衰竭(LF)患者肠道菌群的结构差异。方法 纳入CHB患者23例,失代偿期LC患者20例,LF患者6例和成年健康人9例,采用粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取粪便肠道菌群DNA,应用16SrDNA测序技术检测肠道菌群。应用相关生物学软件和统计学软件对测序结果进行分析。结果 肠道菌群门分类水平分析显示,每个样本均以拟杆菌门为主,其次为变形菌门;CHB组拟杆菌门丰度 （617.83）显著高于LC组（343.16）、LF组（182.15）和健康组（236.66）,差异有统计学意义（P<0.05）;LC组变形菌门丰度（183.16）多于CHB组（35.86）、LF组（18.87）和健康组（53.40,P<0.05）;属分类水平显示,CHB组、LC组和LF组均以拟杆菌属为主,其次为普氏菌属、梭菌属;CHB组普氏菌属丰度（345.28）较LC组（46.75）、LF组（5.63）和健康组（20.14）明显增多,LC组拟杆菌属丰度最少（150.28,P<0.05）。结论 CHB、LC和LF患者肠道菌群结构有显著性差异。拟杆菌为肠道优势菌群,在各样本中菌群丰度发生了变化,了解这些变化可能有助于对疾病发生和处理的认识。     

急性肝衰竭大鼠肠道菌群和内毒素的动态研究

目的 研究急性肝衰竭大鼠肠道菌群及内毒素的动态变化。 方法 腹腔注射半乳糖胺建立急性肝衰竭大鼠模型。40只SD大鼠随机分为A组(对照组)10只;B组12只,C组18只(均为肝衰竭大鼠)。实验开始时(A组)、造模后24 h(B组)和48 h(C组)分别处死各组大鼠并检测肝功能,定性、定量分析空肠、回肠及结肠菌群,定量测定门静脉、右心室血,回肠及结肠内毒素。 结果 肝功能检测显示:B组大鼠的肝脏损伤最为严重;与B组相比,C组大鼠的肝功能开始好转。肠道菌群分析显示:B组大鼠肠道内肠杆菌科细菌显著增加(空肠、回肠间,P<0.01;结肠间,P<0.05)、乳酸杆菌下降(P<0.01);与B组相比,C组空肠和结肠内的肠杆菌科细菌出现下降(P<0.05)、乳酸杆菌增加,以空肠为显著(P<0.05)。内毒素测定表明B组回肠内毒素增加(P<0.05);C组空肠和回肠内毒素继续增高与对照组差异有显著性(P<0.01);门静脉内内毒素在B组最高,与A、C两组比较差异有显著性(P<0.01)。 结论 急性肝衰竭大鼠肠道存在菌群失调、肠杆菌科细菌过度生长,菌群失调程度与肝损伤程度有关;肠道菌群失调伴有回肠和结肠内内毒素升高;门静脉内毒素的增加与肠道菌群失调有关     

Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究*

目的 探讨冬凌草甲素（oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF） 小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-α mRNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果 模型组小鼠肝细胞凋亡率为（36.4±1.8） %,显著高于两个oridonin干预组的[（19.4±3.3）%和（11.4±0.3）%,P<0.01];模型组小鼠肝组织TNF-α mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个oridonin干预组肝组织TNF-α mRNA水平显著低于模型组（P<0.01）;模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异（P>0.01）。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响*

目的 探讨冬凌草甲素（Oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF）小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法 取150只小鼠,随机分成5组,每组 30 只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平。结果 模型组小鼠48 h存活率为0.0% （0/30）,而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5% （19/30）和80.6% （24/30,P<0.01）; 组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为（345.3 ± 54.1） U/L和（500.2±53.5） U/L,明显高于对照组的[（42.3±0.6）U/L和（117.1±9.8）U/L,P<0.01],两个Oridonin干预组分别为 （303.9±39.5） U/L和（340.6±2.8） U/L及[（130.2±38.3） U/L和 （209.8±36.2） U/L,P<0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著低于模型组 （P<0.01）。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。     

罗格列酮对D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的 观察罗格列酮对D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭的保护作用,并研究其可能的作用机制.方法 雄性昆明小鼠随机分为3组:正常组、对照组、治疗组.对照组和治疗组以D-GalN/LPS腹腔注射构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组则相应予以生理盐水腹腔注射;治疗组于造模前2 h予以罗格列酮灌胃,正常组和对照组则相应予以生理盐水灌胃.比较各组小鼠24 h存活率、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平、肝组织病变程度及肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平.结果 治疗组小鼠24 h存活率明显高十对照组(P<0.05),血清ALT、AST水平明显低于对照组(P<0.05);治疗组与对照组比较,肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞以变性为主,未见明显坏死;治疗组小鼠肝组织TNF-α、Caspase-3 mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05).结论 罗格列酮对D-GalN/LPS小鼠急性肝衰竭有保护作用,可改善肝细胞炎症和坏死.降低急性肝衰竭死亡率,其机制可能与罗格列酮下调TNF-α、Caspasc-3表达有关.     

罗格列酮对D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的观察罗格列酮对D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭的保护作用,并研究其可能的作用机制。方法雄性昆明小鼠随机分为三组:正常组、对照组和治疗组。对照组和治疗组以D-GalN/LPS腹腔注射构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组则相应予以生理盐水腹腔注射;治疗组于造模前2 h予以罗格列酮灌胃,正常组和对照组则相应予以生理盐水灌胃。比较各组小鼠24 h存活率,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织病变程度及肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达水平。结果治疗组小鼠24 h存活率明显高于对照组(P0.05),血清ALT、AST水平明显低于对照组(P0.05);治疗组与对照组比较,肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞以变性为主,未见明显坏死;治疗组小鼠肝组织中TNF-α、Caspase-3 mRNA表达水平明显低于对照组(P0.05)。结论罗格列酮对D-GalN/LPS小鼠急性肝衰竭有保护作用,可改善肝细胞炎症和坏死,降低急性肝衰竭的死亡率,其机制可能与罗格列酮下调TNF-α、Caspase-3的表达有关。     

双黄连对MHV-3诱导的暴发型肝衰竭小鼠的保护作用研究*

目的 探讨双黄连对病毒感染诱导的暴发性肝衰竭小鼠的保护作用。方法 取BABL/cJ小鼠36只,随机均分为对照组、模型组和双黄连处理组。取滴度为1×10⁶ PFU/ml的3型鼠肝炎病毒（MHV-3）,采用高压水注射法经小鼠尾静脉注入小鼠体内,诱导暴发性肝衰竭模型。在造模后给予10%双黄连或生理盐水灌胃治疗7 d。采用RT-PCR法检测小鼠肝组织IP-10 mRNA和血清MHV-3 DNA水平,并检测血清转化生长因子-βl（TGF-βl）、白细胞介素-10（IL-10）、层黏连蛋白（LN）、透明质酸（HA）和肝功能指标。结果 在治疗7 d,模型组和双黄连组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）分别为（229.03±30.56） IU/L和（22.83±6.02） IU/L,谷草转氨酶（AST）为（139.01±11.75） IU/L和（32.45±4.59） IU/L,LN分别为（99.86±10.57） nmol/L和（57.02±7.24） nmol/L,HA为117.05±16.72） nmol/L和（53.01±11.35） nmol/L,TGF-βl分别为（319.46±39.12） pg/ml和（93.87±11.20）pg/ml,IL-10为25.70±3.87） pg/ml和（1.07±0.09） pg/ml, MHV-3 DNA分别为12.47±3.05） lg copies/mL和（1.24±0.10）lg copies/mL,肝组织IP-10 mRNA分别为【（25.70±3.87）和（12.79±3.08）,P<0.05】。结论 双黄连有一定的抗MHV-3作用,可能是通过抑制肝内IP-10 mRNA水平,减少IL-10对肝细胞的炎性损伤,阻止了肝组织纤维化而促进了肝功能的恢复。     

酒精性肝病患者血清细胞因子水平和肠道菌群分布变化研究*

目的 调查酒精性肝病（ALD）患者血清细胞因子水平和肠道菌群分布变化情况。方法 本研究纳入34例ALD患者和34例健康人,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和核因子κB （NF-κB）水平,采用Celsis ^® Advance II^TM快速微生物检测系统检测肠道菌落数。结果 ALD患者空腹血糖（FBG）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）水平分别为（5.3±1.8）mmol/L、（2.3±0.9） mmol/L、（5.1±1.8） mmol/L、（2.1±0.6） mmol/L和（0.9±0.2） mmol/L,与健康人的（5.2±1.3）mmol/L、（2.2±1.1） mmol/L、（5.1±1.6） mmol/L、（2.0±1.5） mmol/L和（0.8±0.1） mmol/L比,差异无统计学意义（P>0.05）;ALD患者血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）和总胆红素（TBIL）水平分别为（99.5±41.8） U/L、（106.9±55.7） U/L、（229.4±148.3） U/L和（35.3±8.6） μmol/L,显著高于健康人【分别为（35.6±9.7）U/L、（36.2±8.4） U/L、（46.7±14.5） U/L和（16.4±2.3） μmol/L,P<0.05】;ALD患者血清TNF-α、IL-6和N F-κB 水平分别为（9.8±3.4） ng/L、（0.9±0.4） pg/mL和（3.7±6.3） ng/L,显著高于健康人【分别为（5.7±2.1） ng/L、（0.5±0.3） pg/mL和（0.5±0.4） ng/L,P<0.05】;ALD患者粪便粪肠球菌和大肠埃希菌数分别为【（8.7±1.4） lg CFU/g和（7.6±1.2）lg CFU/g】,显著高于健康人【分别为（7.2±1.3） lg CFU/g和（6.6±1.5） lg CFU/g,P<0.05】,而双歧杆菌数为（7.1±1.2）lg CFU/g,显著低于健康人【（8.9±1.3） lg CFU/g,P<0.05】。结论 相对于健康人群,ALD患者存在肠道菌群和血清细胞因子水平紊乱现象,可能参与了疾病的发生发展过程。     

D-氨基半乳糖/脂多糖诱导急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的电镜观察

目的通过透射电镜观察急性肝衰竭大鼠肝脏超微结构,以了解肝细胞凋亡的形态学变化。方法给予雌性Wistar大鼠D-氨基半乳糖/脂多糖联合腹腔注射,计算其死亡率及生存时间,动态观察给药后4、8、12小时肝功能和组织病理学变化,并以TUNEL法检测和电镜观察原位细胞凋亡。结果实验组80%大鼠死于急性肝衰竭,平均生存时间为15.6±1.8小时。给药后4小时电镜观察,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞浆包含体形成,部分细胞核呈早期凋亡表现,细胞内凋亡小体形成;8小时时,肝细胞凋亡明显增多并呈不同阶段表现,凋亡肝细胞内线粒体病变程度不一;TUNEL检测给药后8小时肝细胞,凋亡指数达高峰,与电镜观察结果一致。结论肝细胞凋亡为D-氨基半乳糖/脂多糖致急性肝衰竭大鼠肝细胞的主要病理形态学表现,这可能为该类型肝衰竭的主要病理学变化基础。     

中西医结合治疗肝衰竭对肠道微生态的影响研究

目的 观察中西医结合方案治疗肝衰竭的临床疗效及其对肠道菌群丰度和多样性的影响。方法 采用随机对照临床研究方法,将2019年6月至2020年12月在成都市公共卫生临床医疗中心住院治疗且符合条件的77例肝衰竭患者简单随机抽样分入试验组(39例)和对照组(38例),同时设健康对照组20例。试验组采用中西医结合治疗,对照组采用西医治疗,疗程4周,观察两组患者治疗前后肠道菌群丰度和多样性变化情况,以及与健康对照组肠道菌群的差异。结果 与健康对照组相比,肝衰竭患者菌群丰度有显著差异(P <0.05),在门水平上厚壁菌门减少,变形菌门增加,在属水平上克雷伯氏菌属、链球菌属、埃希菌属等条件致病菌属增多。经β多样性分析,试验组治疗前后的肠道菌群多样性存在差异(P <0.05);经LEfSe分析,试验组治疗后患者肠道乳酸杆菌等有益菌的相对丰度升高,克雷伯氏菌属、埃希菌属等条件致病菌属的相对丰度降低。结论 肝衰竭患者存在肠道微生态紊乱,表现为条件致病菌增多、有益菌减少,经中西医结合治疗可提高肠道乳酸杆菌等有益菌相对丰度、降低条件致病菌属相对丰度,改善肠道微生态。     

急性肝衰竭小鼠肝组织IL-25和IL-17受体mRNA水平变化

目的 探讨白介素-25（IL-25）在急性肝衰竭发病中的作用。方法 采用D-氨基半乳糖和脂多糖混合腹腔注射法制备小鼠急性肝衰竭模型;采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肝组织IL-25及其受体白介素17受体B（IL-17RB）基因信使核糖核酸（mRNA）水平;采用酶联免疫吸附试验法检测小鼠肝组织匀浆上清IL-25水平。计量资料采用t检验进行统计学分析。结果 肝衰竭小鼠肝组织IL-25和IL-17RB mRNA相对水平分别为（18.05±2.46）和（1.89±0.42）,均显著高于对照组（P<0.05）;肝组织匀浆上清IL-25蛋白表达水平为（26.17±14.00）pg/mg,也显著高于对照组【（12.50±4.68）pg/mg,P<0.05】。结论IL-25可能参与了急性肝衰竭的发生和发展过程。     

丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的大鼠急性肝损伤保护作用机制研究

目的 探讨丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖(D-GaIN)/脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其可能的作用机制.方法 将110只SD大鼠随机分为对照组、模型组、小剂量、中剂量和大剂量丹栀逍遥散干预组,每组22只.采用D-GaIN)/LPS腹腔注射建立ALI模型,分别给予生理盐水或药物灌胃干预.采用EL...     

Chinese herbal medicine for treatment of dislipidemia

Prevalence of dislipidemia is increasing rapidly in China and there has been a growing interest in Chinese herbal medicine for the treatment of hyperlipidemia both inside and outside China. In this article, lipids regulating effects of 9 herbs or their extracts and 5 herbal formulae which have been published in English-language literature are reviewed. Although evidence from animals and humans consistently supports the therapeutic activities of these Chinese herbal medicines, few multi-center large-scale clinical trials have been conducted to confirm the efficacy and evaluate their safety.     

甲基莲心碱减轻D-半乳糖胺/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤作用研究

目的 研究甲基莲心碱对D-半乳糖胺/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 将80只小鼠随机分为4组（n=20）,在正常组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃,而在另两实验组则分别给予小剂量（100 mg.kg^-1）和大剂量（300 mg.kg^-1）甲基莲心碱灌胃。然后在实验组给予D-半乳糖胺/脂多糖诱导制备急性肝损伤模型。每组选择10只小鼠取血,分别检测血清ALT、AST、SOD、MDA、GSH、TNF-α、IL-6和IL-10水平,并取肝组织,行病理学检查,另10只小鼠用于观察存活期。结果 模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为（272.4±42.8） U/L和（497.2±62.1） U/L,甲基莲心碱处理组小鼠血清ALT和AST水平均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）,而以大剂量甲基莲心碱处理组为明显;模型组小鼠血清SOD和GSH水平分别为（37.5±6.2） U/mL和（11.8±2.7）μmol/L,血清MDA水平为（9.2±1.4） mol/L,甲基莲心碱处理组小鼠血清SOD和GSH水平显著高于模型组,而血清MDA水平显著低于模型组（P<0.05）;模型组小鼠血清TNF-α、IL-6和IL-10水平分别为（587.6±48.9） pg/ml、（153.4±18.0）pg/ml和（96.4±9.7）pg/ml,甲基莲心碱处理组小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著降低,血清IL-10水平显著升高（P<0.05）,而大剂量甲基莲心碱处理组小鼠血清TNF-α、IL-6和IL-10水平与小剂量甲基莲心碱处理组比,差异无统计学意义（P>0.05）;模型组小鼠12 h存活率为60.0%,24 h存活率为10.0%,小剂量甲基连心碱处理组小鼠12 h存活率为80.0%,24 h存活率为50.0%,而大剂量甲基莲心碱处理组小鼠12 h存活率为90.0%,24 h存活率为70.0%,组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 甲基莲心碱可缓解D-半乳糖胺/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抑制氧化应激反应有关。     

The therapeutic effect of CORM-3 on acute liver failure induced by lipopolysaccharide/D-galactosamine in mice

BACKGROUND: Acute liver failure(ALF) is a severe and lifethreatening clinical syndrome resulting in a high mortality and extremely poor prognosis. Recently, a water-soluble CO-releasing molecule(CORM-3) has been shown to have anti-inflammatory effect. The present study was to investigate the effect of CORM-3 on ALF and elucidate its underlying mechanism.METHODS: ALF was induced by a combination of LPS/D-Gal N in mice which were treated with CORM-3 or inactive CORM-3(i CORM-3). The efficacy of CORM-3 was evaluated based on survival, liver histopathology, serum aminotransferase activities(ALT and AST) and total bilirubin(TBi L). Serum levels of inflammatory cytokines(TNF-α, IL-6, IL-1β and IL-10) and liver immunohistochemistry of NF-κB-p65 were determined; the expression of inflammatory mediators such as i NOS, COX-2 and TLR4 was measured using Western blotting.RESULTS: The pretreatment with CORM-3 significantly improved the liver histology and the survival rate of mice compared with the controls; CORM-3 also decreased the levels of ALT, AST and TBi L. Furthermore, CORM-3 significantly inhibited the increased concentration of pro-inflammatory cytokines(TNF-α, IL-6 and IL-1β) and increased the anti-inflammatory cytokine(IL-10) productions in ALF mice. Moreover, CORM-3 significantly reduced the increased expression of i NOS and TLR4 in liver tissues and inhibited the nuclear expression of NF-κB-p65. CORM-3 had no effect on the increased expression of COX-2 in the ALF mice. An i CORM-3 failed to prevent acute liver damage induced by LPS/D-Gal N. CONCLUSION: These findings provided evidence that CORM-3 may offer a novel alternative approach for the management of ALF through anti-inflammatory functions.