凉血化瘀方对MRL/lpr狼疮鼠蛋白尿及抗ds-DNA抗体的影响

[目的]研究凉血化瘀方对MRL/lpr狼疮鼠蛋白尿及抗ds-DNA抗体的影响。[方法]MRL/lpr小鼠35只,饲养至3月龄。将35只雌性MRI/lpr小鼠随机分为五组,每组7只。分别为:阴性组、模型组、西药强的松加环磷酰胺组、中药加强的松加环磷酰胺组、中药组。实验小鼠均于灌胃前、灌胃21d、灌胃49d时代谢笼采集24h尿蛋白定量;眼眶后静脉丛采血,取血并分离血清后,置-70℃冰箱保存,行ELISA检测抗ds-DNA抗体的表达。[结果]MRL/lpr小鼠模型组ds-DNA水平较阴性组明显升高,蛋白尿高于阴性组。经过西药(CTX、强的松)、中药(凉血化瘀方)及中西医结合治疗(CTX、强的松、凉血化瘀方),各治疗组蛋白尿显著少于模型组。但降蛋白尿上,西药组疗效优于中药组,中西医结合组疗效优于单用中药或单用西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。抗ds-DNA抗体血清含量模型组3.026±0.129,阴性组1.404±0.064,两组相比,P<0.01。[结论]中药凉血化瘀方具有降低血抗ds-DNA水平及蛋白尿的作用。     

砒霜对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的生存时间及血清抗ds-DNA水平的影响

目的:探讨砒霜中的有效成分亚砷酸(Arsenic Trioxide,ATO)对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的生存时间及血清抗ds-DNA水平的影响。方法:12周龄(发病期)MRL/lpr狼疮小鼠40只,设C57正常小鼠40只做参照,随机平分两组,即治疗(亚砷酸)组和对照(生理盐水)组,亚砷酸组ATO 0.4 mg/(kg.d)隔日腹腔注射,生理盐水组隔日腹腔注射同等量生理盐水,疗程至120 d结束,观察至210 d,比较亚砷酸组和生理盐水组在死亡率上的差异;采用ELISA法检测小鼠血清抗ds-DNA抗体的表达水平。结果:对两组MRL/lpr小鼠及C57小鼠的死亡率及血清抗ds-DNA抗体的水平的观察,结果发现MRL/lpr小鼠亚砷酸组累积死亡率(35%)低于生理盐水组(65%);血清抗ds-DNA抗体(OD值)亚砷酸组(0.9163±0.0667)低于生理盐水组(1.7975±0.2631,P<0.01)。生理盐水组为1.7975±0.2631,亚砷酸组为0.9163±0.0667,低于生理盐水组(P<0.01)。而C57小鼠中没有发现在生理盐水组及亚砷酸组中有统计学差别。结论:砒霜(ATO)可降低MRL/lpr小鼠的死亡率,延长其生存时间,同时可以使其外周血抗ds-DNA抗体的表达水平降低。     

加减青蒿鳖甲汤对MRL/lpr小鼠肾组织IL-17、Tim-3表达的影响

目的:探讨加减青蒿鳖甲汤对自发SLE动物模型MRL/lpr小鼠肾组织IL-17、Tim-3的表达以及肾脏病变的影响。方法:24只MRL/lpr小鼠分为3组,每组8只,模型组予生理盐水,中药干预的2组分别予高、低剂量的加减青蒿鳖甲汤水煎剂浓缩液。用药6周后,ELISA法检测小鼠血清ds-DNA抗体浓度;观察小鼠肾脏病理改变;免疫组化法检测肾组织IL-17、Tim-3的表达水平。结果:中药高剂量组组MRL/lpr小鼠血清ds-DNA抗体浓度显著低于模型组(P=0. 001)和中药低剂量组(P=0. 007);中药高剂量组(P=0. 000)和中药低剂量组(P=0. 000)小鼠狼疮肾炎肾组织活动性指数(AI)评分均显著低于模型组;中药高剂量组IL-17表达的肾髓质评分(P=0. 028)及总评分(P=0. 024)较模型组均有显著性差异;小鼠肾组织Tim-3表达水平评分在各组间无显著差异;小鼠肾组织IL-17表达水平总评分与血清ds-DNA抗体浓度呈正相关(r=0. 5859,P=0. 0026)。结论:高剂量的加减青蒿鳖甲汤可能通过抑制IL-17在肾组织的表达而发挥抑制MRL/lpr小鼠肾损害、控制SLE病情进展的作用,但对MRL/lpr小鼠肾组织Tim-3的表达无显著影响。     

纳米雄黄干预TWEAK-NF-κB信号通路下调MRL/IPr小鼠肾脏趋化因子表达的机理

目的：探讨纳米雄黄治疗SLE（LN）具体分子机制。方法：通过分别给予MRL/lpr小鼠等体积高、中、低剂量的纳米雄黄混悬液及生理盐水灌胃,观察小鼠血清ANA、ds-DNA抗体、IgG、IgM的水平,及肾脏组织的TWEAK、NF-κB、MCP-1 mRNA及蛋白表达水平。结果：与生理盐水组比较,纳米雄黄高、中、低剂量各组的ANA、ds-DNA抗体、IgG、IgM的水平明显降低,TWEAK、NF-κB、MCP-1 mRNA水平明显降低,TWEAK、NF-κB、MCP-1蛋白表达水平明显降低。结论：纳米雄黄可以通过干预TWEAK-NF-κB信号通路下调MRL/IPr小鼠肾脏MCP-1表达,从而降低ANA、ds-DNA抗体、IgG、IgM的水平,缓解自身免疫损伤,而起到治疗SLE（LN）的作用。     

两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用

目的:探讨两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用及其作用机制,为中药及中西医结合治疗红斑狼疮提供实验和理论基础。方法:34只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为6组。A组:中药方1组(清热凉血、祛风除湿方);B组:中药方2组(养阴清热活血、滋补肝肾方);C组:泼尼松组;D组:中药方1+泼尼松组;E组:中药方2+泼尼松组;F组:空白对照组。ELISA法测小鼠血浆中抗dsDNA抗体的含量;对小鼠肾脏做普通组织病理及免疫病理检测,观察各组小鼠肾脏的变化;各组每10天用尿蛋白试纸比色(四溴酚兰指示剂法)测定新鲜尿液的蛋白质含量。结果:各药物组治疗后的抗dsDNA抗体水平均低于空白对照组(P<0.05)。中药方1+泼尼松组和中药方2+泼尼松组的抗体水平均显著低于中药方1组、中药方2组(P<0.01),低于泼尼松组(P<0.05)。各给药组尿蛋白的含量均明显低于空白对照组。肾脏组织病理检查发现各给药组均可减轻小鼠肾脏损害,其中以中药+泼尼松组最为明显。结论:中药方剂与糖皮质激素均对MRL/lpr狼疮小鼠有治疗作用,中西医综合治疗疗效优于单纯使用中药或糖皮质激素,能显著降低抗dsDNA抗体水平和减轻肾脏损害。     

砒霜对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察

目的探讨砒霜中的有效成分三氧化二砷（ATO）对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察。方法20周龄（发病期）MRL/lpr狼疮小鼠24只,设C57正常小鼠24只做参照,随机平分为治疗组和对照组,治疗组ATO 0.4 mg/（kg.d）隔日腹腔注射,对照组隔日腹腔注射同等量生理盐水,疗程为60 d,比较治疗组和对照组在体质量、病死率、血常规上的差异;采用ELISA法检测小鼠血清抗ds-DNA抗体的表达水平。结果MRL/lpr狼疮小鼠中治疗组体质量增长幅度明显高于对照组（P=0.006）;累积病死率25%低于对照组（50%）;血小板较对照组有所上升（P=0.009）;血清抗ds-DNA抗体（OD值）对照组为1.798 5±0.262 1,治疗组为0.918 3±0.067 7,治疗组低于对照组（P〈0.01）。C57小鼠未见在对照组和治疗组中有显著性差异。结论ATO可以延长MRL/lpr小鼠动物生存期限,可降低动物的死亡率,降低外周血抗ds-DNA抗体的表达水平,而对C57正常小鼠则无明显作用。     

砒霜对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察

目的探讨砒霜中的有效成分三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr自发性狼疮小鼠的疗效及安全性观察。方法20周龄(发病期)MRL/lpr狼疮小鼠24只,设C57正常小鼠24只做参照,随机平分为治疗组和对照组,治疗组ATO 0.4 mg/(kg.d)隔日腹腔注射,对照组隔日腹腔注射同等量生理盐水,疗程为60 d,比较治疗组和对照组在体质量、病死率、血常规上的差异;采用ELISA法检测小鼠血清抗ds-DNA抗体的表达水平。结果MRL/lpr狼疮小鼠中治疗组体质量增长幅度明显高于对照组(P=0.006);累积病死率25%低于对照组(50%);血小板较对照组有所上升(P=0.009);血清抗ds-DNA抗体(OD值)对照组为1.798 5±0.262 1,治疗组为0.918 3±0.067 7,治疗组低于对照组(P<0.01)。C57小鼠未见在对照组和治疗组中有显著性差异。结论ATO可以延长MRL/lpr小鼠动物生存期限,可降低动物的死亡率,降低外周血抗ds-DNA抗体的表达水平,而对C57正常小鼠则无明显作用。     

益肾养阴合剂通过CXCR4/STAT3信号通路对MRL/lpr小鼠肾脏发挥保护作用

目的:研究益肾养阴合剂对系统性红斑狼疮小鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机制。方法:MRL/lpr疾病模式小鼠饲养发病后,益肾养阴合剂灌胃给药(17.25 g·kg-1),同时阳性药组用醋酸泼尼松灌胃给药(0.65 mg·kg-1),正常C57背景小鼠和实验MRL/lpr小鼠组灌胃同体积生理盐水,每天2次,连续给药28 d,每7 d收集尿液,检测尿蛋白变化情况;第29天取材肾脏组织,免疫荧光染色检测免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;Raybiotech抗体芯片检测308个细胞因子变化情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)验证部分变化因子(小鼠肾脏组织与患者血清水平);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Janus激酶2/信号转导和转录活化蛋白3(JAK2/STAT3)信号的磷酸化水平、基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4(SDF1/CXCR4)信号轴、辅助性T细胞17(Th17)分泌因子白细胞介素-17(IL-17)的表达情况。结果:与MRL/lpr组比较,在中药和激素给药组,随着给药时间延长,尿蛋白含量逐渐降低,在第4周变化最为明显(P0.05),在给药28 d后,益肾养阴合剂组与醋酸泼尼松组的肾脏IgG沉积均有减轻(P0.05)。经Raybiotech抗体芯片筛查后发现,与C57正常小鼠,MRL/lpr疾病小鼠的肾脏SDF1,CXCR4蛋白信号表达有显著增强(P0.01);与MRL/lpr疾病小鼠比较,益肾养阴合剂组的小鼠肾脏SDF1,CXCR4蛋白信号表达显著降低(P0.01),经大样本量ELISA实验验证后,SDF1/CXCR4蛋白的抗体芯片结果可靠,进一步经Western blot实验检测发现,与正常C57小鼠比较,MRL/lpr小鼠肾脏组织中JAK2/STAT3信号通路被激活,其磷酸化蛋白表达增高(P0.05),SDF1,CXCR4,IL-17蛋白表达明显升高(P0.05);与模型小鼠比较,给予中药和激素灌胃处理28 d后JAK2,STAT3的磷酸化水平明显降低(P0.05),SDF1,CXCR4蛋白表达下降(P0.05),IL-17的表达也有明显的减少(P0.05)。结论:益肾养阴合剂可降低MRL/lpr模型小鼠的尿蛋白水平,其可通过抑制JAK2/STAT3与SDF1/CXCR4信号通路的激活,降低辅助性T细胞17的活性,减少IL-17的分泌,起到肾脏保护作用。     

补肾药与祛风药配伍控制狼疮小鼠狼疮肾炎进展的实验研究

[目的]观察补肾中药与祛风中药配伍对狼疮小鼠病情活动的影响。[方法]50只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为5组,补肾组、祛风组、补肾祛风组、西药组、生理盐水组,同时设置10只BAbl/c小鼠对照。分别给予对应的中西药物治疗6周,观察小鼠体质量、尿蛋白、尿红细胞、尿白细胞及双链(天然)脱氧核糖核酸(ds-DNA)、白介素-17(IL-17)变化。[结果]各组小鼠随着周龄增长体质量均有增加,其中祛风组增加较少,与其他各组比较差异有统计学意义(P0.05)。各给药组ds-DNA水平低于生理盐水组(P0.05)。补肾祛风组ds-DNA下降明显,优于其他各给药组(P0.05)。与生理盐水组比较,其他各给药组IL-17下降明显(P0.05),且补肾祛风组优于西药组,西药组优于补肾组及祛风组(P0.05)。尿常规情况,生理盐水组7只小鼠出现红细胞,其他各组与生理盐水组比只数较少,但各组与生理盐水组比较差异均无统计学意义(P0.003 12)。生理盐水组所有小鼠均出现尿蛋白阳性,与其他各组比差异有统计学意义(P0.003 12);除生理盐水组,其他各给药组之间差异无统计学意义(P0.003 12)。[结论]补肾药与祛风药配伍能明显降低狼疮小鼠IL-17和ds-DNA表达,起到控制狼疮肾炎的作用,效果优于单独使用补肾药和祛风药。     

凉血化瘀解毒法对MRL/lpr系统性红斑狼疮模型鼠肝肾功能的相关性研究

目的：评价造模情况及药物对肝肾功能的影响。方法：观察药物对MRL/lpr系统性红斑狼疮模型鼠体质量、饮食、饮水、肝肾功能、尿蛋白、抗双链（天然）脱氧核糖核酸（抗ds-DNA抗体）、抗核小体抗体的影响及各指标之间相关性。结果：造模、灌胃对体质量影响较少,主要在于药物因素。模型组有肝损伤,阴性组肝损伤不明显,用药组均有降丙氨酸氨基转移酶（ALT）作用,中药组降ALT作用较弱,用药组间比较,无统计学差异。模型组TG、TCH升高,用药组对TG的影响不明显,中药组对降TCH有一定作用。造模组蛋白定量、血BUN较高,用药各组均有降低尿蛋白及BUN作用,中西药结合降尿蛋白具有协同作用。尿葡萄糖酐酶变化无明显规律,药物作用影响不明显。结论：MRL/lpr鼠有一定肝肾损伤,中药复方为犀角地黄汤加减用药较为安全,有一定保肝及降尿蛋白、降抗dsDNA作用。     

清热化瘀滋阴方对狼疮性 MRL/lpr 小鼠免疫功能的影响

目的观察中药清热化瘀滋阴方对狼疮性MRL／lpr小鼠免疫功能的影响。方法选用C57BL／6J小鼠作为对照组,将MRL／lpr小鼠随机分为模型组、中药组（清热化瘀滋阴方组）、西药组（泼尼松组）、中西药结合组（清热化瘀滋阴方加泼尼松组）,每组各8只。对照组和模型组给予生理盐水,其余各组连续灌胃给予相应药物4周,4周末荧光显微镜观察肾组织IgG的沉积,测定血清IgG、抗ds—DNA抗体、IL-6、IL-10、ICAM-1的含量。结果与模型组比较,中药组、西药组、中西药结合组MRL／lpr小鼠肾组织IgG荧光强度显著降低、血清IgG、抗ds—DNA抗体、II,6、IL-10、ICAM—1的含量下调,其中以中西药结合组效果更为明显（P〈0．05或P〈0．01）。结论清热化瘀滋阴方具有改善狼疮性MRL／Ipr小鼠免疫功能的作用。     

滋阴清热小复方对MRL／lpr狼疮鼠影响的实验研究

目的：观察滋阴清热小复方对MRL／lpr狼疮鼠的影响。方法：将40只MRL／lpr狼疮模型鼠随机分为4组,即模型对照组、滋阴狼疮方治疗组、强的松治疗组、滋阴清热复方＋强的松治疗组,每组10只,分别给予生理盐水、中药滋阴清热复方、强的松悬液、滋阴清热复方＋强的松悬液灌胃治疗10周。正常组：选用昆明种小鼠10只,生理盐水灌胃。均每日1次,每次0．5ml,连续用药饲养10周后,取血及肾脏标本。结果：与对照组相比,各治疗组动物死亡率、24h尿蛋白含量、血清抗-dsDNA水平、肾脏病理均有不同程度改善,以中西医结合治疗组最为明显。结论：中药滋阴清热复方及西药强的松对狼疮鼠模型均有良好的治疗作用,尤以中西医结合治疗效果最好。     

3味解毒中药单用或不同组合对MRL/lpr小鼠分泌活性因子表达的影响

目的探讨解毒祛瘀滋肾方中3味解毒中药单用或不同组合对MRL/lpr小鼠血清及肾组织调节正常T细胞表达和分泌活性因子(regulated on activation normal T cell expressed and secreated,RANTES)表达的影响。方法 54只MRL/lpr小鼠随机分成9组,每组6只,分别以青蒿、蛇舌草、升麻、青蒿蛇舌草、青蒿升麻、蛇舌草升麻、青蒿蛇舌草升麻煎剂、泼尼松混悬液、生理盐水灌胃,12周后取血及肾脏,以ELISA法及RT-PCR法分别检测血清和肾组织中RANTES的表达。结果治疗12周末,泼尼松组的RANTES表达水平均显著下降;青蒿、升麻对RANTES表达水平的抑制作用不明显,蛇舌草、青蒿联合蛇舌草、青蒿联合升麻、蛇舌草联合升麻虽均有一定的抑制作用,但均不如青蒿联合蛇舌草及升麻的抑制作用明显。结论青蒿、蛇舌草、升麻三药联用能抑制RANTES的表达。     

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞增殖和IFN-γ、IL-4分泌的调节作用

 目的探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4^+T细胞增殖以及IFN-γ和IL-4转录和翻译水平的影响。方法免疫磁珠分别分选15只MRL/lpr狼疮小鼠和15只C57BL正常对照小鼠脾脏CD4⁺T细胞,进而将CD4⁺T细胞随机分为空白组(RPMI1640),对照组(PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1),ATO组[PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1(48h)后+ATO1.0μmol·L^-1],体外共培养至72h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组CD4⁺T细胞的增殖和抑制水平;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清液中IFN-γ和IL-4水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述细胞因子基因的转录水平。结果①分选后获得的CD4⁺T细胞纯度为(94.12±1.08)%,细胞存活率为(95.82±3.41)%;②MRL/lpr小鼠对照组CD4⁺T细胞的增殖水平(A值)(0.343±0.019)较空白组(0.054±0.008)高(P<0.001);却低于C57BL小鼠对照组的水平(0.375±0.018)(P<0.05);③MRL/lpr和C57BL小鼠ATO组CD4⁺T细胞增殖水平(A值)分别为(0.324±0.013)和(0.362±0.013),均低于对照组(P<0.05,P<0.05);④MRL/lpr小鼠对照组IFN-γ的表达水平[(562.287±60.345)ng·L^-1]明显高于C57BL小鼠对照组[(253.208±59.434)ng·L^-1](P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γ的抑制程度大于C57BL小鼠(P<0.05);MRL/lpr小鼠对照组的IL-4表达水平[(41.332±8.039)ng·L^-1]与ATO组[(23.046±3.253)ng·L^-1]和C57BL小鼠对照组[(29.303±8.038)ng·L^-1]比较,也具有明显的统计学差异(P<0.05和P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IL-4的抑制程度高于C57BL小鼠(P<0.05);⑤在转录水平上,与C57BL小鼠相比,ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γmRNA和IL-4mRNA的抑制程度更加明显(P<0.05和P<0.05);ATO对IFN-γ和IL-4表达水平的抑制和转录水平的抑制正相关,r=0.720(P<0.001)和r=0.557(P<0.01)。结论MRL/lpr小鼠存在CD4⁺T细胞的异常增殖,ATO能在不影响细胞存活率的浓度下抑制MRL/lpr小鼠CD4⁺T细胞的异常增殖活化,通过抑制其细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA分泌影响两者的表达,且对MRL/lpr小鼠抑制程度大于C57BL小鼠,表明ATO能抑制狼疮鼠的异常免疫功能,可进一步用于SLE的治疗。     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

滋阴清热方对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠CD4~＋CD25~＋T细胞亚群及Foxp3表达的影响

目的：探讨滋阴清热方对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠CD4＋CD25＋T细胞亚群及Foxp3表达的影响。方法：选用自发性系统性红斑狼疮（SLE）模型MRL/lpr小鼠40只,随机平均分为4组,即模型组、滋阴狼疮方治疗组（中药组）、强的松治疗组（西药组）、滋阴清热复方＋强的松治疗组（中西药组）。另选用昆明小鼠10只作为对照组。连续用药10周后,流式细胞仪分析外周血CD4＋CD25＋T细胞亚群的百分比及CD4＋CD25highT细胞与CD4＋CD25intT细胞的比率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA的表达。结果：各组外周血CD4＋CD25＋T细胞、CD4＋CD25highT细胞和CD4＋CD25intT细胞占CD4＋T细胞的百分比组间比较,无统计学差异（P〉0.05）,而CD4＋CD25highT细胞与CD4＋CD25intT细胞的比率和T细胞Foxp3 mRNA表达水平,模型组与对照组比较,明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,各治疗组均高于模型组（P〈0.05）,尤其是中西医结合组（P〈0.01）。结论：中药滋阴狼疮方可上调MRL/lpr狼疮鼠Foxp3 mRNA表达水平,从而调节CD4＋CD25＋T细胞亚群比率,发挥对SLE的免疫治疗作用。