LC-MS/MS同时检测大鼠血浆中芍药苷和芍药内酯苷的浓度及其药代动力学研究

目的:研究白芍中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内的药代动力学。方法:应用高效液相色谱-串联质谱联用分析方法,测定大鼠灌胃给予白芍提取物后芍药苷和芍药内酯苷的时间-血药浓度,根据药-时曲线计算药代动力学参数。结果:芍药苷和芍药内酯苷线性范围分别为1.0~1000 ng·m L-1,2.0~2000 ng·m L-1,回收率均大于80%,日间RSD≤10%,日内RSD≤11%,RE在-4.9%~2.4%之间。芍药苷和芍药内酯苷药代动力学参数如下:Tmax为(0.89±0.27)、(0.97±0.37)h;t1/2为(1.97±0.63)、(2.25±0.59)h;Cmax为(301.3±96.8)、(122.9±42.2)μg·L-1。AUC0-t为(1495.1±521.2)、(688.5±222.9)μg·h·L-1;AUC0-∞为(1541.1±548.0)、(720.1±241.0)μg·h·L-1。结论:该法简便、灵敏、特异,适用于血浆中芍药苷和芍药内酯浓度的测定。白芍中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内药代动力学行为均符合二室模型。     

赤芍、白芍及芍药苷、芍药内酯苷对急性血瘀证大鼠血液流变学及血管内皮功能的影响

目的比较研究赤芍、白芍及芍药苷、芍药内酯苷对急性血瘀证大鼠血液流变学和血管内皮功能的影响,探讨赤芍、白芍对血瘀证作用的物质基础。方法大鼠皮下注射盐酸肾上腺素复合冰水浴复制大鼠急性血瘀证动物模型,以丹参酮胶囊为对照药,通过检测大鼠全血黏度、红细胞最大凝集指数(Red blood cell maximum agglutination index,MAXD)、红细胞最大变形指数(Red blood cell maximum deformation index,MAXDI)水平,用放射免疫法测定血浆内皮素1(endothelin,ET-1)含量、采用比色法测定血清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。观察不同剂量的赤芍、白芍对大鼠全血黏度、MAXD、MAXDI、血清NO、血浆ET-1的影响。采用同样的方法通过检测大鼠全血黏度、血清NO、血浆ET-1指标研究芍药苷、芍药内酯苷对急性血瘀证大鼠的影响。结果与模型组相比,赤芍高剂量组及芍药苷高剂量组、中剂量组各切变率的全血黏度显著降低(P0.05,P0.001,P0.01);赤芍中剂量组、赤芍低剂量组及白芍高剂量组中切变率及低切变率全血黏度降低(P0.05)。与模型组比较,赤芍高剂量组MAXD、MAXDI均有显著改变(P0.001,P0.01),白芍高剂量组和白芍中剂量组MAXD降低(P0.01)。与模型组比较,赤芍、白芍、芍药苷各剂量组及芍药内酯苷高剂量组、中剂量组血清NO值显著升高(P0.05);各组血浆ET-1无显著差异。结论赤芍、白芍均能降低急性血瘀证大鼠的血黏度,芍药苷是两者起作用的共同活性成分,芍药内酯苷对血瘀证的作用不及芍药苷;赤芍对血瘀证的作用优于白芍,这与其芍药苷含量较多,而芍药苷有较强改善血液流变学异常和保护血管内皮功能作用有关。     

白芍总苷大鼠在体胃肠吸收动力学研究

目的:研究白芍总苷在大鼠体内胃、肠道吸收的动力学特征。方法:采用HPLC色谱法,以芍药苷和芍药内酯苷为指标,测定白芍总苷分别在1 mg/ml、2 mg/ml、4 mg/ml 3个浓度下在体胃吸收情况,白芍总苷3个浓度(其中芍药苷浓度分别为40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml,芍药内酯苷浓度14.275μg/ml、28.55μg/ml、42.817μg/ml)的肠循环液在小肠整个肠段的吸收情况,白芍总苷溶液(芍药苷浓度80μg/ml,芍药内酯苷浓度28.55μg/ml)在十二指肠、空肠、回肠、结肠等各肠段的吸收情况。结果:3个浓度白芍总苷在胃内吸收量与药物浓度成正比。白芍总苷3个浓度在小肠内吸收量与药物浓度呈正比,3个浓度吸收速率常数值基本一致。白芍总苷在十二指肠、空肠的吸收量较回肠、结肠大,在十二指肠、空肠吸收速率常数值较回肠、结肠大,在十二指肠、空肠吸收半衰期较回肠、结肠短,经SPSS11.5软件统计分析显示均有显著差异。结论:白芍总苷在胃内吸收可能为被动扩散机制,十二指肠可能为白芍总苷在肠段内吸收主要部位。     

芒果苷在糖尿病大鼠和正常大鼠血浆中蛋白结合率的比较

目的建立芒果苷血浆蛋白结合率的测定方法,比较芒果苷在糖尿病大鼠及正常大鼠血浆中蛋白结合率的异同。方法采用血浆平衡透析法,LC-MS/MS法测定透析袋两侧溶液中芒果苷的质量浓度,分别计算其在糖尿病大鼠和正常大鼠血浆中的蛋白结合率。结果血浆和磷酸盐缓冲液(PBS)中,芒果苷分别在200~3 000ng·mL~(-1)(r=0.998 3),50~2 000 ng·mL~(-1)(r=0.997 9)范围内线性关系良好,准确度均在94.7%~108.6%之间,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于15%。芒果苷质量浓度为100,200,500 ng·mL~(-1)时,糖尿病大鼠的平均血浆蛋白结合率分别为:(84.5±1.4)%、(82.6±1.4)%、(82.4±1.7)%;正常大鼠的平均血浆蛋白结合率分别为:(65.5±0.6)%、(66.6±1.0)%、(68.4±0.7)%,两者比较差异有统计学意义(P0.01)。结论 LC-MS/MS法可用于芒果苷血浆蛋白结合率的测定。芒果苷与糖尿病大鼠的血浆蛋白结合率属于高度结合(80%),具有非浓度依赖性,且明显高于正常大鼠。     

基于UPLC-MS/MS的芍药苷及其代谢产物在大鼠体内药动学研究

目的建立快速、灵敏、简便的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中芍药苷及其代谢产物芍药内酯苷的暴露量,并研究单次ig给予大鼠低、中、高剂量(20、60、120 mg/kg)的芍药苷水溶液后,芍药苷、芍药内酯苷在大鼠体内的药动学特征。方法以栀子苷为内标,血浆样品经甲醇(含0.1%甲酸)沉淀蛋白后,通过ACQUITY UPLC BEH-C_(18)柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,色谱运行时间为4.5 min。采用电喷雾离子源(ESI),负离子扫描模式,以多反应监测方式(MRM)进行定量测定。结果芍药苷、芍药内酯苷的标准曲线的线性范围均为2.00~400 ng/m L,定量下限均为2.00 ng/m L,2者日内和日间精密度RSD均小于9.10%。芍药苷在低、中、高3个剂量给药组中的t_(max)分别为(1.56±0.62)、(1.13±0.35)、(1.28±1.92)h,Cmax分别为(85.45±47.49)、(390.75±139.26)、(1 223.5±420.15)μg/L;其中芍药苷水溶液低、中剂量组未检测到代谢产物芍药内酯苷,芍药苷水溶液高剂量组芍药内酯苷的tmax为(1.81±0.53)h,C_(max)为(19.81±8.98)μg/L。结论本方法简便、准确、专属性强,适用于芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内的药动学研究。     

白芍护肝片中芍药苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的：研究白芍护肝片中芍药苷在大鼠体内的药代动力学,为临床用药提供参考。方法：灌胃法给予大鼠白芍护肝片,不同时间点采血,甲醇水沉淀法处理血浆样品,气质联用法测定芍药苷血药浓度,并用DAS 2.0计算动力学参数。结果：血浆中的内源性杂质不干扰芍药苷测定,芍药苷的线性范围为10.0～2 000 ng/m L,定量下限为10.0 ng/m L (RSD<9.0%)。芍药苷的药代动力学参数如下：t_1/2为(4.78±3.66) h;T_max为(0.86±0.57) h;C_max为(495.9±150.6)μg/L;CLz为(76.55±20.24) L/(h·kg);AUC₍(0-t))为(1 378.4±495.9);AUC₍(0-∞))为(1 407.9±477.4)。结论：本品将白芍总苷与白芍多糖按一定比例组合。经前期药理实验证实,本品对大鼠急性肝损伤和亚急性肝损伤均具有良好的保护作用。所建立的方法准确、灵敏度高,专属性好,适于评价白芍护肝片在体内的吸收行为。本实验对大鼠口...     

白芍总苷对胶原诱导性关节炎大鼠长期给药的组织分布研究

目的 研究白芍总苷的主要成分芍药苷、芍药内酯苷对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠长期给药后的组织分布。方法 建立超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）法,测定白芍总苷长期给药后大鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、胸腺、滑膜等组织中芍药苷和芍药内酯苷的分布情况。结果 长期给药后,芍药苷和芍药内酯苷主要分布于小肠和肾,其次为脾、胸腺、滑膜、肝、肺、心。2种成分在CIA大鼠中的组织分布大多低于正常大鼠。结论 揭示了白芍总苷长期给药后的组织分布特征,为探讨白芍总苷治疗类风湿性关节炎的靶器官以及疗效的改进提供了参考。     

白芍总苷在免疫性肝损伤小鼠药代动力学研究

目的:研究白芍总苷在免疫性肝损伤小鼠体内的药动学特点。方法:采用卡介苗加脂多糖尾静脉注射法建立小鼠免疫性肝损伤模型,HPLC法测定模型小鼠和正常小鼠灌胃给予白芍总苷(0.47g/kg、1.41g/kg、2.82g/kg)后15、30、60、90、120、150、180、240、360、480、720min血浆中芍药苷和芍药内酯苷浓度,根据药时曲线计算药动学参数,采用SPSS11.5软件分析各组各剂量间药动学参数的异同。结果:与正常组相比,模型组小鼠体内白芍总苷的Tmax明显提前,t1/2明显延长,Cmax、AUC0-t和AUC0-∞显著增大;各剂量间白芍总苷的Tmax和t1/2没有差异,芍药苷剂量与Cmax、AUC0-t和AUC0-∞有一定的相关性。结论:免疫性肝损伤小鼠对白芍总苷的吸收速度较正常小鼠加快,吸收量较大,消除减慢。     

白芍总苷在佐剂性关节炎大鼠与正常大鼠体内的药动学差异

目的:比较白芍总苷在佐剂性关节炎大鼠与正常大鼠体内药动学参数的差异,为临床合理用药提供参考。方法:采用大鼠右后足垫皮下注射完全弗氏佐剂建立大鼠佐剂性关节炎模型,应用RP-HPLC测定模型大鼠和正常大鼠灌胃给予白芍总苷后不同时间点的芍药苷的血药浓度,运用PKSolver V2.0软件计算药动学参数。结果:高、中、低剂量(1.80,0.90,0.47 g·kg~(-1))给药时,模型组大鼠体内芍药苷的药峰浓度(C_(max))分别为(7.93±1.09),(4.81±1.06),(1.02±0.82)mg·L~(-1),达峰时间(T_(max))均为180 min;在正常大鼠体内,芍药苷的半衰期(t_(1/2))分别为(215.63±5.26),(213.16±4.18),(208.55±4.94)min;C_(max)分别为(52.39±2.49),(24.52±1.69),(5.79±0.52)mg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(12 564.08±467.37),(5 839.10±380.86),(1 439.95±144.39)mg·L~(-1)·min;T_(max)均为150 min。结论:在类风湿性关节炎状态下芍药苷的吸收速率减缓,C_(max),AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)均显著减小;类风湿性关节炎能影响白芍总苷在大鼠体内的药动学行为。     

芍药苷对大鼠慢性肝损伤及肝纤维化的保护作用

目的观察芍药苷(PF)对四氯化碳(CCl4)所致大鼠慢性肝损伤及纤维化的治疗作用。方法将大鼠随机分为6组,利用高脂低蛋白饲料和CCl4制作大鼠肝损伤模型,并同时给予相应药物灌胃,9周后取材送检。血液生化检测肝功能指标:丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBil);放射免疫法测定肝纤维化指标:透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ);制备肝干粉,分光光度计检测羟脯氨酸(Hyp)。结果模型组大鼠血清ALT、AST、HA、CⅣ和肝组织中Hyp明显高于正常组(P<0.05或0.01);与模型组比较,芍药苷3个剂量组可明显降低肝纤维化大鼠血清中ALT、AST;芍药苷408,0 mg/kg剂量组可明显降低肝纤维化大鼠血清中HA含量及根据肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量计算的胶原蛋白量(P<0.05和0.01)。结论芍药苷对慢性肝损伤及纤维化有保护作用。     

白芍总苷在急性CCl4肝损伤大鼠与正常大鼠体内的药代动力学比较研究

 目的 比较白芍总苷在急性CCl₄ 肝损伤大鼠与正常大鼠体内药物动力学过程的异同,为临床合理用药提供参考。方法 采用一次性腹腔注射CCl₄建立大鼠急性肝损伤模型,采用HPLC测定模型大鼠和正常大鼠灌胃给予白芍总苷后,不同时间点的Pae和Alb的血药浓度,根据药-时曲线计算药代动力学参数。结果 在模型组大鼠体内,白芍总苷中芍药苷（Pae）和芍药内酯苷（Alb）在高、中、低剂量（0.047、0.141、0.282 g·mL^-1）时的 t1/2分别为 5.02、4.52、4.91 h;5.22、5.04、5.05 h。ρ_max分别为22.54、14.52、5.49 μg·mL^-1;9.02、5.04、2.34 μg·mL^-1。AUC_0-t分别为（146.55±7.52）、（84.14±7.84）、（31.62±2.97）μg·h·mL^-1;（56.56±8.70）、（32.18±3.49）、（13.48±1.66） μg ·h·mL^-1。tmax 均为 2 h。在正常大鼠体内,Pae和Alb在高、中、低剂量（0.047、0.141、0.282 g·mL^-1）时的 t1/2 分别为3.95、3.69、3.95 h;3.74、3.98、3.79 h。ρ_max分别为19.16、11.60、4.46 μg·mL^-1;7.16、4.00、1.93 μg·mL^-1。AUC_0-t 分别为（116.26.6±19.99）、（67.74±12.79）、（25.01±2.62） μg·h·mL^-1;（45.03±5.84）、（27.26±3.57）、（10.59±1.86）μg·h· mL^-1。tmax为 2.5 h。结论 与正常组比较,模型组的ρ_max、AUC_0-t 显著增大,t1/2延长,t_max明显缩短。模型组和正常组的tmax和t1/2不受白芍总苷剂量影响,但剂量与ρ_max和AUC_0-t具一定的相关性。
     

高效液相色谱法测定白芍总苷的不确定度分析

目的:建立高效液相色谱法同时测定白芍总苷中的芍药苷和芍药内酯苷的不确定度评定方法.方法:采用高效液相色谱法测定芍药苷和芍药内酯苷含量,分析影响其不确定度的因素来源,对各个不确定度因素进行评定,并计算合成不确定度,最终给出测量结果的扩展不确定度和置信水平.结果:不确定度评估芍药苷为±1.48％、芍药内酯苷为±0.66％....     

Pharmacokinetic properties of paeoniflorin,albiflorin and oxypaeoniflorin after oral gavage of extracts of Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba in rats

Aim of the study

To establish a HPLC–MS method and investigate the pharmacokinetic properties of paeoniflorin, albiflorin and oxypaeoniflorin and the pharmacokinetics difference of Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba.

Materials and methods

The extracts of Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba were separately administrated to rats. The concentrations of paeoniflorin, albiflorin and oxypaeoniflorin in rat plasma were determined by HPLC–ESI-MS method. The plasma samples were pretreated by protein precipitation with methanol and chromatographic separation was performed on a C₁₈ column with a mobile phase consisted of 0.1% formic acid and methanol (67:33, v/v). The detection was accomplished by multiple-reaction monitoring (MRM) scanning via electrospray ionization (ESI) source operating in the negative ionization mode. Main pharmacokinetic parameters were estimated and the total AUC of the three components were compared.

Results

The pharmacokinetic parameters of paeoniflorin, albiflorin and oxypaeoniflorin were significantly different. There was significant difference between the pharmacokinetic characteristics of Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba.

Conclusions

A specific and sensitive HPLC–ESI-MS method was developed for simultaneous determination of paeoniflorin, albiflorin and oxypaeoniflorin in rat plasma and was successfully applied to pharmacokinetic study. The results might be helpful for the investigation of different effects of Radix Paeoniae Rubra and Radix Paeoniae Alba.     

强肝糖浆对大鼠四氯化碳慢性肝损伤的保护作用

目的 :观察强肝糖浆对大鼠四氯化碳慢性肝损伤的保护作用。方法 :皮下注射 10 % CCl4油溶液0 .1m l/ 10 0 g诱发大鼠肝损伤病理模型 ,赖氏法测定血清 AL T活性 ,比色法测定 AST活性 ,双缩脲法测定总蛋白 ,溴甲酚绿法测定白蛋白含量 ,光镜下观察肝组织病理学改变。结果 :强肝糖浆显著降低血清 AL T、AST,升高白蛋白、白蛋白 /球蛋白比值 (P<0 .0 5 ) ,减轻 CCl4引起大鼠肝细胞变性、坏死及炎细胞浸润。结论 :强肝糖浆对四氯化碳致大鼠的慢性肝损伤有一定的改善作用     

京尼平苷对CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤保护作用研究

目的:研究京尼平苷对CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤的保护作用。方法:每周给大鼠腹腔注射2次一定体积比的CCl4豆油混悬液,连续9周,致大鼠肝纤维化。然后对肝损伤大鼠每天灌服一定剂量的京尼平苷进行治疗,连续4周,末次灌服13小时后,取血以及肝脏,对血清中的AST、ALT、AKP、NO以及肝匀浆中CuZn-SOD、GSH-Px、MDA、HYP和CAT等各项生化指标进行测定,并对肝组织进行光镜分析。结果:当京尼平苷的灌服剂量为100mg/kg时,能显著改善肝损伤大鼠血清中AST、ALT水平,提高肝组织中SOD、CAT和GSH的活力,降低肝组织中MDA的含量,并减轻组织炎症及纤维化。结论:京尼平苷对大鼠慢性肝损伤有较好的保护作用。     

白芍总苷保肝作用的药动学和药效学研究进展

白芍总苷为白芍的有效部位,主要含芍药苷、芍药内酯苷等活性成分,具有广泛的药理作用,尤其是近年来对白芍总苷的保肝作用开展了大量的药动学和药效学研究,但还未见其相关产品进入市场。笔者综述了近十几年来白芍总苷保肝作用的药动学和药效学研究进展,以期为白芍总苷保肝作用产品的研究开发和临床合理应用提供参考。白芍总苷在体内的吸收、分布、代谢和排泄的药动学特性比较明确,肝损伤疾病能够显著影响其体内代谢过程。白芍总苷具有抗急性肝损伤、非酒精性脂肪肝、慢性肝纤维化和抗肝癌等多种保肝作用。但现有研究还未能完全阐明白芍总苷的保肝作用机制及其体内过程,肝损伤如何影响白芍总苷的体内代谢、其多靶点整合调节的作用机制需要进一步深入研究,同时应开展其保肝作用的药动学和药效学相结合研究。     

大枣多糖对CCl4所致大、小鼠肝损伤模型的保护作用

目的:探讨大枣多糖对四氯化碳(CCl4)所致大、小鼠肝损伤模型的保护作用。方法:采用第1、4、7天灌服0.2%CCl4花生油液造小鼠肝损伤模型,第1、5天大鼠皮下注射25%CCl4花生油液造大鼠肝损伤模型;大、小鼠眼眶取血测血清ALT水平,取大、小鼠肝脏作病理切片,观察肝脏的病理变化。结果:给小鼠灌服0.2%CCl4或大鼠皮下注射25%CCl4可成功建立肝损伤模型。大、小剂量大枣多糖均可显著降低小鼠及大鼠肝损伤模型血清ALT水平,显著改善大、小鼠肝脏病理变化。结论:大枣多糖对CCl4所致大、小鼠肝损伤有好的保护作用。     

Effect of a urinary preparation on liver injury by short-term carbon tetrachloride treatment in rats.

The hepatoprotective effect of a preparation of human urine (PHU) was assessed against short-term carbon tetrachloride (CCl4) treatment in rats. Significant prevention of liver injury by PHU was found after CCl4 treatment, judging by the changes of serum biochemical parameters, and hepatic protein and triglyceride contents. The increased liver lipid peroxidation, and decreased liver vitamin C concentrations observed after CCl4 treatment were significantly prevented by PHU administration. The increase in liver glutathione (GSH) contents observed after CCl4 treatment was further increased by PHU treatment. Liver catalase activity decreased after CCl4 treatment, while liver superoxide dismutase and GSH-peroxidase activities did not change. PHU administration further inhibited the decrease in liver catalase activity after CCl4 treatment. These results indicate that PHU administration can prevent liver injury induced by CCl4 in rats by inhibiting enhanced lipid peroxidation and by improving disrupted active oxygen metabolism in the injured liver.