姜黄素抗小鼠黑色素瘤分子机制的初步研究

目的:探究姜黄素抗小鼠B16黑色素瘤生长与Bcl-2、P53、肿瘤细胞内谷胱甘肽的关系。方法:构建C57BL/6 J移植性小鼠B16黑色素瘤模型考察姜黄素对黑色素瘤体生长的影响,MTT法检测姜黄素对B16细胞的增殖活力的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、P53基因的表达,HPLC分析技术检测姜黄素对C57BL/6 J小鼠B16黑色素瘤组织内GSH水平的影响。结果:姜黄素对C57BL/6 J移植性小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用呈剂量及时间依赖性;姜黄素作用B16细胞24h,Bcl-2蛋白表达减弱,P53蛋白表达增强;姜黄素使C57BL/6 J小鼠B16黑色素瘤组织内的GSH含量下降。结论:姜黄素体内抑制小鼠B16黑色素瘤的生长;体外抑制B16细胞的生长,并能诱导部分细胞凋亡,其作用机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,上调P53蛋白的表达及耗竭肿瘤组织内GSH含量有关。     

丹参不同有效成分对黑色素瘤细胞增殖活力和细胞周期影响的研究

目的:检测不同浓度的丹参酮I、丹参酮IIa、隐丹参酮对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖活力的影响;测定丹参酮I、丹参酮IIa、隐丹参酮对B16细胞周期的影响。方法:采用甲基噻唑基四唑比色法(MTT法)及显微镜细胞观察法检测丹参酮I、丹参酮IIa、隐丹参酮对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖的抑制作用。通过流式细胞仪检测丹参三种成分对B16细胞周期的影响。结果:不同浓度(2.5μg/m L、5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L)的丹参酮I、丹参酮IIa和隐丹参酮均能显著抑制黑色素瘤细胞B16的增殖活性,且呈明显的剂量效应和时间效应。丹参酮I的抑瘤效果最显著,其72 h的IC50仅为0.25μg/m L。高浓度(30μg/m L)的丹参酮I、丹参酮IIa和隐丹参酮均可在作用24 h后抑制小鼠黑色素瘤B16细胞的有丝分裂,主要阻滞于G1期,但其作用效果不显著。结论:不同浓度(2.5μg/m L、5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L)的丹参酮I、丹参酮IIa和隐丹参酮均能显著抑制黑色素瘤细胞B16的增殖活性并阻滞其细胞周期,且具有剂量依赖性。高浓度(30μg/m L)的丹参酮I和丹参酮IIa均可显著引起小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡,其中丹参酮I效果最显著。     

重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制研究

目的:研究重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞增殖的抑制作用;采用DAPI染色于倒置荧光显微镜下观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞诱导凋亡的形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞凋亡率的影响;JC-1染色流式细胞仪检测重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达变化。结果:重楼皂苷Ⅱ对B16细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后凋亡率随药物浓度的升高而升高;线粒体膜电位水平也随之显著降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.01);Western blot检测结果表明Bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论:重楼皂苷Ⅱ可能通过线粒体氧化应激通路从而诱导B16细胞凋亡。     

狼毒对荷瘤小鼠体内恶性黑色素瘤细胞的抑制作用及其分子机制研究

目的 观察狼毒大戟提取液(LDE)对荷瘤小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 观察荷瘤小鼠空白组和狼毒治疗组的肿瘤生长情况;采用ELISA法检测小鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)和骨桥蛋白(OPN)的活性;Western Blot蛋白印迹法检测了狼毒大戟提取液对荷瘤小鼠黑色素瘤B16组织中的Bcl - 2/Bax凋亡蛋白的表达.结果 与对照组相比较,狼毒大戟提取液对荷瘤小鼠体内恶性黑色素瘤B16细胞的生长有显著的抑制作用,能明显减慢肿瘤体积生长趋势和减轻瘤重;与对照组相比较,狼毒治疗组的VEGF、OPN的水平有统计学意义(P＜0.05);HGF的的水平有显著的统计学意义(P＜0.01);狼毒能下调小鼠体内恶性黑色素瘤B16中Bcl - 2/Bax凋亡蛋白的表达.结论 狼毒大戟提取液是一种有效的抗恶性黑色素瘤B16细胞增殖的中药水提液成分.其作用机制可能与诱导细胞凋亡,影响细胞中相关蛋白表达以及肿瘤血管生长和肿瘤转移相关因子VEGF、HGF、OPN的活性有关.     

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。     

南蛇藤对鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖抑制及凋亡诱导作用研究

目的：探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法测定细胞增殖,通过AO/EB染色法观察细胞的凋亡形态,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果：南蛇藤乙酸乙酯提取物可以抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,诱导其凋亡,呈剂量依赖性,并且与药物作用时间呈正相关。结论：南蛇藤乙酸乙酯提取物能够抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,诱导其凋亡。     

异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的研究异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法体外培养MCF-7细胞,分为对照组及不同浓度异乌药内酯处理组。采用MTT实验检测异乌药内酯对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色法检测异乌药内酯对MCF-7细胞周期、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响;采用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白表达情况。结果异乌药内酯以时间和剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖、促进细胞凋亡;能够将MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,诱导线粒体膜电位去极化;上调cleaved Caspase-3和促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导MCF-7细胞的凋亡。结论异乌药内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

人参皂苷Rg3通过干预细胞周期和诱导凋亡影响人食管癌Eca9706细胞生长

目的:研究人参皂苷Rg3对人食管癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法:MTT法检测人参皂苷Rg3对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制,用流式细胞仪分别检测细胞周期和凋亡情况。结果:在25²00μg/ml范围内,不同浓度人参皂苷Rg3能抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性。53μg/ml、86μg/ml、141μg/ml人参皂苷作用Eca9706细胞48h,细胞周期在S期的比例明显增多,细胞凋亡率明显增加。结论:人参皂苷Rg3可能通过干预细胞周期和凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。     

三氧化二砷通过抑制新生血管形成发挥抗小鼠恶性黑色素瘤作用

目的:采用小动物活体成像技术研究三氧化二砷(As2O3)的抗小鼠恶性黑色素瘤作用及其机制。方法:荧光素酶(luciferase,Luc)基因标记小鼠B16黑色素瘤(B16-Luc)细胞,MTT比色法和Annexin V/PI双标记法分别检测细胞增殖活性及凋亡;BALB/c小鼠腋下接种B16-Luc细胞制备荧光黑色素瘤动物模型,腹腔注射4和8 mg/kg As2O3治疗25天,小动物光学活体成像系统连续动态观察肿瘤生长;治疗末期处死动物、剥离肿瘤块、制片,HE和CD34免疫组化染色观察肿瘤病理和新生微血管形成。结果:1.0~32.0μmol/L As2O3体外显著抑制B16-Luc细胞增殖和诱导其凋亡。活体成像技术观察显示As2O3在体内剂量依赖性地抑制小鼠B16-Luc恶性黑色素瘤的生长,肿瘤组织中新生微小血管显著减少,肿瘤组织中心呈明显坏死改变。结论:As2O3体外诱导小鼠恶性黑色素瘤B16细胞凋亡,主要通过降低肿瘤组织新生血管的形成、促使肿瘤坏死而发挥抗恶性黑色素瘤作用。     

新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞线粒体自噬的机制研究

目的探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞线粒体自噬的机制。方法 MTT试验检测新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜观察黑色素瘤B16细胞在新藤黄酸作用下产生的形态变化;透射电镜观察新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞线粒体超微结构的影响;流式细胞术检测新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞线粒体膜电位及ROS的改变;Western blot法检测LC-3、m TOR、AMPK及SIRT3等自噬相关蛋白的变化。结果 MTT结果显示新藤黄酸在体外对黑色素瘤B16细胞的生长及增殖有明显抑制作用,且随着新藤黄酸浓度的增加和作用时间的延长,细胞活力明显下降;倒置显微镜观察黑色素瘤B16细胞显示随着新藤黄酸浓度增加,细胞结构被明显破坏,细胞死亡增多;透射电镜观察发现新藤黄酸作用黑色素瘤B16细胞后,细胞发生明显的线粒体自噬的形态学变化;Western blot法检测表明随着新藤黄酸给药时间的延长,AMPK、SIRT3及LC3-Ⅱ蛋白表达量呈时间依赖性上升,LC3-I蛋白表达量呈时间依赖性下降,m TOR蛋白表达量随着时间延长有所下降。结论新藤黄酸在一定时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞发生线粒体自噬,其诱导细胞线粒体自噬的机制可能与调控ROS/SIRT3/AMPK信号通路有关。