狭基线纹香茶菜对免疫性肝损伤小鼠TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响

目的:以Con A诱导小鼠免疫性肝损伤模型,研究狭基线纹香茶菜对免疫肝损伤小鼠TNF-αmRNA和蛋白表达的影响,以探讨其抗免疫肝损伤的作用机理。方法:小鼠尾静脉注射ConA 25mg/kg制备免疫肝损伤模型,灌胃给予狭基线纹香茶菜水提部位7d后,不同时间点采取肝组织,提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对肝脏TNF-αmRNA进行半定量测定,免疫组化法检测肝组织TNF-α蛋白的表达。结果:与正常组相比,模型组小鼠肝组织4h TNF-αmRNA和蛋白表达显著增强,至8h仍保持较高的表达。阳性药PDTC和狭基线纹香茶菜水提部位大剂量组TNF-αmRNA和蛋白表达显著低于模型组(起效剂量9.2g/kg)。结论:ConA诱导损伤后,肝组织中TNF-αmRNA和蛋白表达明显增强,狭基线纹香茶菜组可通过降低损伤肝组织TNF-αmRNA和蛋白的表达,而对免疫肝损伤小鼠起保护作用。     

狭基线纹香茶菜对刀豆蛋白所致小鼠免疫肝损伤的保护作用

目的研究狭基线纹香茶菜对免疫性肝损伤的保护作用。方法采用小鼠尾静脉注射刀豆蛋白(ConA)致肝损伤模型,小鼠108只随机分为9组,即正常对照组,模型组,狭基线纹香茶菜提取物组(提取物分为水提物、醇提物,各提取物再分为高、中、低剂量组),阳性对照组,每组12只。受试组按18.20,9.10,4.55g·kg-1灌胃给药,阳性对照组口服联苯双酯45mg·kg-1,每天1次,连续5d。末次给药后4h除正常对照组外,各组动物一次性尾静脉注射ConA20mg/kg,禁食不禁水8h后摘[球取血处死,分离血清,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),同时测体重、肝脏重、脾重和胸腺重,求脏器系数。同部位肝脏(肝左叶)用4%福尔马林溶液固定,并取肝组织作病理观察。结果狭基线纹香茶菜可显著降低免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST,对肝重量增大和胸腺萎缩有抑制作用。病理检查结果也显示有明显的保肝作用。结论狭基线纹香茶菜对刀豆蛋白所致小鼠免疫性肝损伤有保护作用。     

狭基线纹香茶菜对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的研究狭基线纹香茶菜对卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法 72只小鼠随机分为正常组,模型组,高、中、低剂量给药组(20,10,5g·kg-1),阳性对照组(联苯双酯60mg·kg-)1,每天给药1次,连续12d。第1天,除正常组外,各组每只小鼠尾静脉注射BCG0.2mL(10mg·mL-)1。末次给药后,除正常组外,各组小鼠尾静脉注射LPS0.2mL(37.5μg·mL-1)造模。造模16h后取血,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),肝组织超氧化物岐化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,同时测体重、肝脏重、脾重和胸腺重,求脏器指数,并观察肝组织病理学变化。结果狭基线纹香茶菜高、中、低剂量组均能显著降低ALT、AST值和MDA含量(P0.05或P0.01),对肝重量和脾重量增加及胸腺萎缩有抑制作用(P0.05或P0.01)。病理检查结果也显示有明显的保肝作用。结论狭基线纹香茶菜对BCG和LPS所致小鼠免疫性肝损伤有保护作用,其保肝机制与其抗脂质过氧化损伤有关。     

狭基线纹香茶菜对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究狭基线纹香茶菜对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法:60只大鼠随机分为正常组、模型组、高、中、低剂量给药组、阳性药对照组6个组。给药组按15,7.5,3.75 g.kg^-1剂量,以狭基线纹香茶菜水提物灌胃;阳性药对照组按45 mg.kg^-1给联苯双酯;每天1次,连续10天。给药第1,4,7,10天(共4次),模型组和给药组按2 mL.kg^-1腹腔注射10%CCl4造模。第11天,末次给药24 h后,取血,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)及总胆红素(T-Bil),同时测体重、肝脏重、脾重和胸腺重,求脏器系数,并取肝组织作病理观察。结果:狭基线纹香茶菜可显著降低急性肝损伤大鼠血清ALT,AST,ALP水平和T-Bil含量,对肝重量增大和胸腺萎缩有抑制作用。病理检查结果也显示有明显的保肝作用。结论:狭基线纹香茶菜对CCl₄所致大鼠急性肝损伤有保护作用。     

狭基线纹香茶菜的化学成分研究Ⅰ

目的 对狭基线纹香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus的化学成分进行研究.方法 采用现代色谱方法进行分离、纯化,经现代波谱技术对化合物进行结构鉴定.结果 从狭基线纹香茶菜中分离得到五个化合物,结构鉴定为2α,3α,24-三羟基乌苏酸(1)、迷迭香酸(2)、迷迭香酸甲酯(3)、咖啡酸(4)、阿魏酸(5).结论 化合物1首次从该植物中分离得到.     

线纹香茶菜,狭基线纹香茶菜,溪黄草水提物抗炎,保肝作用初步研究

对线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜、溪黄草的水提物进行了消炎、护肝和毒性实验。结果表明,线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜、溪黄草的水提物均能抑制二甲苯致小鼠耳部炎症反应,狭基线纹香茶菜、溪黄草提取物能对抗醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,三者均有降低CCl_4引起小鼠急性肝损伤后SGPT升高的作用;小鼠一次口服三者水提物的最大耐受量分别为60、60和90g/kg体重。     

狭基线纹香茶菜保肝、利胆的实验研究

目的 研究狭基线纹香茶菜对酒精性肝损伤、胆汁瘀积型肝损伤等模型动物的保护作用.方法 建立小鼠急性酒精中毒致肝损伤模型,检测药物对小鼠血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝组织中丙二醛(MDA)含量及肝脏指数的影响;建立大鼠慢性酒精性脂肪肝模型,观察药物对大鼠死亡率,肝脏病理损伤程度及肝、胸腺指数的影响;观察药物对大鼠胆汁分泌量的影响;建立大鼠胆汁瘀积型肝损伤模型,观察药物对其死亡率的影响.结果 狭基线纹香茶菜提取物能显著降低急性酒精中毒小鼠血清ATJT、AST含量和慢性酒精性脂肪肝大鼠的死亡率,减轻肝脏组织的病理损伤程度;能促进正常大鼠的胆汁分泌,但对胆汁瘀积型肝损伤的作用不明显.结论 狭基线纹香茶菜能够较好地减轻酒精性肝损伤,且具有一定的利胆作用.     

狭基线纹香茶菜(溪黄草)咖啡酸和迷迭香酸的薄层鉴别与含量测定

目的: 建立狭基线纹香茶菜药材中咖啡酸和迷迭香酸的TLC鉴别及HPLC含量测定方法。 方法: 以正已烷-乙酸乙酯-甲酸(3:3:1)为展开剂,展开后取出晾干,于干燥器内放置过夜后于紫外灯(365 nm)下检视;Dikma Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.3%磷酸,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为329 nm。 结果: 在TLC色谱中咖啡酸和迷迭香酸斑点清晰,分离效果好;咖啡酸和迷迭香酸分别在0.045 4~0.908 0 μg(r=0.999 9)和0.219 2~4.384 0 μg(r=0.999 6)具有良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为96.57% (RSD 1.32%) 和99.48%(RSD 2.53%)。 结论: 该方法准确可靠,可用于狭基线纹香茶菜(溪黄草)药材质量控制。     

RP-HPLC法同时测定狭基线纹香茶菜中4个碳苷黄酮

目的建立同时定量测定狭基线纹香茶菜中viceninⅡ、isoschaftoside、schaftoside、vitexin的RH-HPLC。方法狭基线纹香茶菜70%乙醇提取液分析采用Phenomenex luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长344 nm;柱温为室温(25℃)。结果 ViceninⅡ、isoschaftoside、schaftoside、vitexin线性范围分别为0.38~4.18μg、0.66~7.26μg、0.43~4.73μg、0.48~5.28μg;平均回收率(n=6)分别为97.7%、98.8%、96.9%、100.1%,RSD分别为1.6%、2.1%、1.8%、1.9%。结论本法的检测波长,流动相和提取溶剂的选择在狭基线纹香茶菜中黄酮碳苷类成分的定量分析上是最适合的。     

狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对人肝癌裸鼠移植瘤抑制作用及机制研究

目的:观察狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其机制。方法:建立荷瘤裸鼠动物模型,给药后观察并测量裸鼠瘤体,计算体积大小,并绘制生长曲线。分离瘤体后,计算抑制率,病理组织学检查,TUNEL染色检测移植瘤细胞凋亡。透射电镜观察瘤组织细胞的自噬小体和细胞超微结构,Western blot法检测Beclin1、Atg5、CyclinD1、Caspase-3、Bax、Bcl-2、nm23-Hl和MMP-9蛋白表达。结果:与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮50、100、200 mg/kg具有显著抑制移植瘤生长的作用(P<0.01)。与5-氟尿嘧啶20 mg/kg相比,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100 mg/kg+5-氟尿嘧啶20 mg/kg联合应用能显著地降低肿瘤/体重比(P<0.01)。病理组织检查发现,与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮50、100、200 mg/kg能促使癌细胞核分裂相对减少,肿瘤细胞发生凋亡,可见比较明显的重度坏死。TUNEL染色实验发现,与模型对照组比较,5-氟尿嘧啶20 mg/kg、华蟾素624 mg/kg、联合组、狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100、200 mg/kg能诱导细胞凋亡,移植瘤细胞凋亡率均有显著提高(P<0.01)。电镜观察移植瘤细胞超微结构发现,与模型对照组比较,联合用药组、狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮各剂量组可抑制细胞自噬体的形成。与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100、200 mg/kg能促使细胞核固缩,碎裂、溶解,出现凋亡小体。Western blot法分析表明,与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮三个剂量组、联合组及两个阳性药组能显著上调Bax和Caspase-3蛋白和下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平,诱导移植瘤HepG2细胞发生凋亡(P<0.01),能抑制Beclin1、Atg5、CyclinD1、MMP-9等蛋白的表达,能促进nm23-Hl蛋白的表达(P<0.01),抑制HepG2细胞转移,进而抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。结论:狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮可以抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。     

反相高效液相色谱法测定溪黄草中二萜类成分的含量

目的通过溪黄草中二萜成分含量测定方法的建立及商品药材质量分析,为溪黄草质量标准的制定提供依据。方法采用RP-HPLC法测定6,7-去氢罗伊林酮和(15S)-12,16-环氧-11,14-二羟基-8,11,13-松香烷-7-酮的含量;流动相:0.05%三氟乙酸-乙腈(25∶75),检测波长:210 nm;理论塔板数按6,7-去氢罗伊林酮计算应不低于6 000,按(15S)-12,16-环氧-11,14-二羟基-8,11,13-松香烷-7-酮计算应不低于5 000。结果11批次的测试样品中6,7-去氢罗伊林酮的含量范围在91.5~182.5μg.g-1,(15S)-12,16-环氧-11,14-二羟基-8,11,13-松香烷-7-酮的含量范围在35.4~84.2μg.g-1,建议药材中6,7-去氢罗伊林酮和(15S)-12,16-环氧-11,14-二羟基-8,11,13-松香烷-7-酮的含量限度分别不得低于113.4μg.g-1和52.3μg.g-1。结论经过系统的方法学考察,所建立的测定方法具有操作简便、稳定、专属、可重复的特点,可用于溪黄草药材及含溪黄草的复方制剂的质量控制。     

大孔树脂富集纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸工艺研究

目的研究AB-8型大孔树脂富集、纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸的工艺条件及参数.方法以狭基线纹香茶菜总三萜酸的洗脱率和精制度为指标,考察大孔树脂富集、纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸的吸附性能和洗脱参数.结果狭基线纹香茶菜样品液20 mL(0.5 s/mL)上大孔树脂柱(D15 mm×H120 mm,干重10 g),用蒸馏水200 mL、60%乙醇80mL、90%乙醇160 mL依次洗脱,狭基线纹香茶菜总三萜酸富集于90%乙醇洗脱液部分,且除杂质能力强.通过大孔树脂富集与纯化后的狭基线纹香茶菜总三萜酸洗脱率达93.2%,90%乙醇洗脱液干燥后总固物中狭基线纹香茶菜总三萜酸纯度可达21.0%.结论采用此法可较好地纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸.     

Ethanol extract of Prunella vulgaris var. lilacina inhibits HMGB1 release by induction of heme oxygenase-1 in LPS-activated RAW 264.7 cells and CLP-induced septic mice

The ethanol extract of the flower of P. vulgaris var. lilacina (EEPV) has been used traditionally as an antiinflammatory agent in many countries. Inducers of heme oxygenase‐1 (HO‐1) reduce high mobility group box 1 (HMGB1), a late phase cytokine, in sepsis. Although EEPV has been used as an antiinflammatory agent, no report is available as to whether it modifies HMGB1 in sepsis due to HO‐1 induction. It was found that EEPV increased HO‐1 protein expression in RAW 264.7 cells, which was significantly inhibited by LY294002, but not PD98059, SB203580 or SP600125. In addition, EEPV activated NF‐E2‐related factor (Nrf2) to move from the cytosol to the nucleus, and EEPV‐induced HO‐1 and activation of ARE‐luciferase activity were significantly reduced by siNrf2 transfection and LY294002 but not SB203508. EEPV also significantly inhibited NF‐κB luciferase activity, and decreased both iNOS/NO and COX‐2/PGE₂ production in lipopolysaccharide (LPS)‐stimulated macrophages which was reversed by siHO‐1 RNA transfection. Importantly, EEPV inhibited HMGB1 release in LPS‐activated macrophages in a PI3K‐sensitive manner and reduced serum HMGB1 level and lung HMGB1 expression in cecal ligation and puncture (CLP)‐induced septic mice. It is concluded that EEPV induces HO‐1 expression through PI3K/Nrf2 signal pathways, which may be beneficial for the treatment of sepsis due to a reduction of HMGB1 release. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

电针“扶突”等穴对颈部切口痛大鼠颈段脊髓5-羟色胺1A、5-羟色胺2A受体mRNA表达的影响

目的:观察电针双侧"扶突"等穴对甲状腺区切口痛大鼠颈段脊髓中5-羟色胺(HT)受体(R)亚型5-HT 1AR和5-HT 2AR mRNA及蛋白表达的影响,探讨电针缓解颈部切口痛的可能机制。方法:Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶突组、合谷-内关组、足三里-阳陵泉颈段组、足三里-阳陵泉腰段组,每组8只。沿大鼠颈中线做长约1.5cm的纵行切口,制作切口痛模型。分别电针双侧"扶突""合谷"-"内关""足三里"-"阳陵泉"穴,各30min。用辐射热测大鼠切口部位热痛阈;用荧光定量Real-time PCR和免疫印迹(Western blot)方法检测颈段(C1-C4)、腰段(L1-L3)脊髓5-HT 1A和5-HT 2A受体亚型mRNA和蛋白的表达水平变化。结果:与颈部切口术前比较,各组的热辐射躲避潜伏期明显缩短(P<0.05);电针"扶突"穴或"合谷"-"内关"穴后,与本组术后比较其躲避潜伏期显著延长(P<0.05);电针"足三里"-"阳陵泉"与本组术后比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组颈段脊髓中5-HT 1AR mRNA的表达明显升高(P<0.05),5-HT 2AR mRNA和蛋白的表达均明显上调(P<0.05);与模型组比较,扶突组和合谷-内关组脊髓中5-HT 1AR的mRNA表达水平均明显下降(P<0.05),5-HT 2AR的mRNA和蛋白的表达水平均明显上调(P<0.05),足三里-阳陵泉组5-HT 1AR和5-HT 2AR的mRNA表达水平与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针"扶突"和"合谷"-"内关"穴可缓解大鼠颈部急性切口痛,该作用可能与其下调颈段脊髓中5-HT 1AR mRNA表达、上调5-HT 2AR mRNA和蛋白的表达水平相关。     

Effects of water extract and crude polysaccharides from Liriope spicata var. prolifera on InsR/IRS-1/PI3K pathway and glucose metabolism in mice

Aim of the study

The present study was designed to investigate the effects of water extract (WE) and crude polysaccharides (CPs) from the tuberous root of Liriope spicata var. prolifer on the InsR/IRS-1/PI3K pathway and glucose metabolism in type 2 diabetic mice.

Materials and methods

WE and CPs were administered orally at different doses (200 and 100 mg/kg body weight) to streptozotocin (STZ)-induced type 2 diabetic male BABL/c mice, respectively. After 4 weeks of administration, immunohistochemistry and western blot were applied to detect the expression levels of insulin receptor-α (InsR-α), insulin receptor substrate-1 (IRS-1) and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) in renal tissues of mice. Moreover, the hepatic glycogen content, glucokinase (GK) and glucose-6-phosphatase (G6Pase) activities were measured to investigate the effect of WE and CPs on glucose metabolism.

Results

Compared with diabetic control, greater immunostaining for InsR-α, IRS-1 and PI3K was present in the tubulointerstitial regions of WE and CPS groups in renal tissues and the expression levels of these three signal molecules from WE and CPs groups were significantly increased; the glycogen content and GK activity from WE and CPs groups in liver were significantly increased, yet the G6Pase activity was significantly lower.

Conclusions

It is demonstrated that WE and CPs can ameliorate insulin signaling transduction and glucose metabolism, as a result, lessen IR and hyperglycemia eventually. So, this study has provided more powerful evidences for Liriope spicata var. prolifer to be a potential hypoglycemic agent and insulin sensitizer.