清开灵有效治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的　研究清开灵治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)的可能性及有效性。方法　应用蛋白脂质蛋白1 39- 1 51 ( PLP1 39- 1 51 )免疫 SJL/ J小鼠诱发慢性复发 -缓解性 EAE模型 ,研究清开灵对 PLP1 39- 1 51 诱导的小鼠淋巴结细胞增殖反应及 γ-干扰素 ( IFN-γ)分泌的作用 ,并通过神经功能评分观察清开灵治疗 EAE的有效性。结果　清开灵可抑制 PLP1 39- 1 51 诱导的淋巴结细胞增殖反应及 IFN-γ的分泌 ( P <0 .0 0 1 ) ,有效改善 EAE小鼠神经功能评分 ( P <0 .0 1 ) ,使发病时间延迟 ( P <0 .0 1 )。EAE小鼠发病数和死亡数较对照组减少 ,但其差异并无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论　清开灵可有效治疗 EAE,为清开灵用于临床治疗多发性硬化提供了实验依据。     

连翘提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎抗原特异性T细胞增殖和细胞因子分泌的影响

目的探索连翘提取物对髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151特异性T细胞增殖及细胞因子分泌的影响。方法应用PLP139-151免疫SJL/J小鼠,免疫后10d取淋巴结细胞进行体外培养,按处理条件将淋巴细胞分为对照组、PLP抗原刺激组、大剂量连翘组、中剂量连翘组、小剂量连翘组。采用MTT法测定吸光度〔D(λ)〕值,以观察连翘提取物对淋巴细胞增殖的影响;ELISA法测定IFN-γ、IL-10的水平。结果对照组、PLP抗原刺激组、小剂量连翘组、中剂量连翘组、大剂量连翘组D(λ)值分别为0.20±0.017、0.47±0.022、0.60±0.041、0.74±0.027、0.80±0.073,PLP抗原刺激组与对照组比较差异具有统计学意义(t=-30.710,P<0.01);后四组比较差异具有统计学意义(F=416.06,P<0.001)。与对照组相比,PLP抗原刺激组IFN-γ水平增高(455.7±25.4vs.2507.0±79.8),IL-10水平降低(1702.2±87.4 vs.1167.4±58.7)(t=-69.602,t=16.063,均P<0.01)。与PLP抗原刺激组相比,小剂量、中剂量、大剂量连翘提取物组IFN-γ水平降低(2507.0±79.8 vs.360.6±43.1、349.0±38.2、288.3±23.2)(F=4628.61,P<0.001);IL-10水平增加(1167.4±58.7vs.1189.1±75.4、1208.2±78.1、1515.5±92.7)(F=454.230,P>0.05)。结论连翘提取物促进抗原特异性淋巴结细胞增殖,降低PLP139-151特异性淋巴细胞增殖分泌IFN,但对IL-10的分泌无影响。     

日本血吸虫虫卵抗原对实验性脑脊髓炎的干预研究

目的利用日本血吸虫虫卵抗原(SEA)来干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型,试图探讨寄生虫感染与EAE的关系。方法利用血吸虫虫卵抗原干预EAE小鼠,观察行为学和病理改变。同时取不同抗原刺激的淋巴结细胞培养,ELISA法测定上清IL-4、IFN-γ的含量。结果用SEA不同时间段干预EAE,发现可以减轻EAE的发病程度,但在延缓和阻止发病方面作用不明显,并在行为学和病理学上得到证实。而用SEA和PLP178-191体外刺激联合免疫后小鼠的淋巴结细胞,发现SEA刺激后可以升高IL-4,降低IFN-γ,而PLP178-191刺激则相反。在单用PLP178-191免疫和联合免疫相比较中,发现PLP178-191体外再刺激后联合免疫组细胞分泌IFN-γ降低,IL-4升高。结论SEA可以减轻EAE的发病程度。细胞因子在寄生虫感染影响EAE的发病中起了重要的作用,调节Th1/Th2平衡,纠正体内Th1偏移是寄生虫抗原能够调节EAE发病的原因之一。     

小胶质细胞在PLP_(139-151)诱导SJL小鼠EAE模型中的作用研究

目的观察髓鞘蛋白脂质蛋白139-151(proteolipid protein,PLP_(139-151))诱导SJL小鼠构建的复发缓解型的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型复发期脑内小胶质细胞的病理改变。方法应用100μg、150μg PLP_(139-151)多肽片段免疫SJL小鼠构建复发缓解型EAE模型(分别简称为100μg PLP组、150μg PLP组),另设健康对照组(对照组;采用与实验组等体积溶媒处理),观察35 d。观察两组EAE小鼠的发病情况及神经功能残疾进展评分差异,选择发病快、神经功能残疾进展评分高者(计为EAE组)观察复发期小胶质细胞活化情况。EAE组于复发期疾病高峰时,对照组于相同时间点,取小鼠大脑皮层组织,应用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色及免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色比较两组小胶质细胞的活化情况。结果 150μg PLP组小鼠在两个发病高峰(分别为免疫第13、28天)均早于100μg PLP组(分别为免疫第15天、31天),神经功能评分第2次发病高峰高于100μg PLP组(3.00±0.79 vs. 1.75±0.90,t=2.33,P0.05),第1次发病高峰与100μg PLP组差异无统计学意义(P0.05),故选择150μg PLP组(计作EAE组)观察复发期(免疫后第28天)小胶质细胞活性。与对照组相比,EAE组小鼠复发期大脑皮层中小胶质细胞的活化明显增多,组织染色上表现为Iba-1表达增高,细胞体积增大,细胞突起增多。结论 150μg PLP_(139-151)多肽片段免疫SJL小鼠构建的复发缓解型EAE模型复发期小鼠大脑皮层小胶质细胞明显活化。     

奥曲肽对EAE豚鼠外周血单个核细胞分泌IFN-γ、IL-4水平的影响

目的通过研究奥曲肽对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)豚鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的影响,探讨奥曲肽对EAE发病保护作用的免疫学机制。方法将40只雌性豚鼠随机分为健康对照组、EAE对照组和EAE高、低剂量治疗组,每组各10只。EAE对照组及EAE高、低剂量治疗组采用粗制髓鞘碱性蛋白(cMBP)诱发急性EAE,EAE低、高剂量治疗组自造模前7 d始分别按体质量3、12 μg/(kg·d)予皮下注射奥曲肽直至试验结束。观察4组豚鼠神经功能障碍评分变化,并用ELISA法测定PBMC培养上清液中IFN-γ和IL-4水平变化。结果 EAE高、低剂量治疗组神经功能障碍评分较EAE对照组显著降低(P0.01,P0.05),且EAE高剂量治疗组降低更明显(P0.05)。PBMC分泌IFN-γ水平EAE低、高剂量治疗组、EAE对照组较健康对照组显著升高(P0.01),EAE高、低剂量治疗组较EAE对照组显著降低(均P0.01),且EAE高剂量治疗组降低更明显(P0.05)。PBMC分泌IL-4水平EAE对照组较健康对照组明显降低(P0.01),EAE高、低剂量较EAE对照组均明显增高(均P0.01),且EAE高剂量治疗组增高更明显(P0.05)。EAE对照组及EAE高、低剂量治疗组发病高峰期外周血IFN-γ/IL-4比值与神经功能障碍评分均呈正相关(r=0.753、P0.05,r=0.835、P0.01,r=0.779、P0.01)。结论奥曲肽对EAE豚鼠发病具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制IFN-γ生成、促进IL-4生成而发挥对Th1/Th2失衡的调节作用。     

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的抗炎机制

目的 探讨雌激素减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)炎症反应的可能机制.方法 用MOG35-55多肽诱发60只EAE小鼠模型,做去卵巢术.分为治疗组(n=30)和对照组(n=30),治疗组予雌激素治疗.比较两组EAE小鼠的临床症状评分.取脑和脊髓,行H-E染色观察病理学改变,实时荧光定量PCR及ELISA检测EAE小鼠CNS中白细胞介素(interleukin,IL)-17、IL-23、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)、IL-4水平.结果 治疗组EAE小鼠与对照组相比临床症状减轻(P＜0.05);H-E染色显示治疗组炎细胞浸润减少(P＜0.05),实时荧光定量PCR及ELISA结果示治疗组CNS中IL-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ表达降低而IL-4增加(P＜0.05).结论 雌激素可能通过降低IL-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ,增加IL-4,从而减轻EAE小鼠炎症反应.     

马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠Th1/Th2细胞炎症因子平衡的影响

目的探讨马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠白细胞介素-4(IL-4)、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)表达的调节作用。方法将8~10周雌性C57BL/6小鼠54只随机分成对照组、模型组、治疗组。每组再随机均分为发病后10d及20d亚组,每亚组9只。采用皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽0.1mL诱导EAE模型。自发病当天起,治疗组小鼠给予马索罗酚10mg/(kg·d)治疗,模型组及对照组给予等量5%二甲基亚砜(DMSO)10mL/(kg·d)处理。比较3组小鼠临床症状评分。应用实时定量PCR检测小鼠脊髓和脾组织中IL-4、IL-12、IFN-γmRNA表达水平。应用ELISA检测脑组织中IL-4、IL-12、IFN-γ蛋白表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠临床症状较减轻(P0.05)。与模型组相比,治疗组小鼠10d时脊髓和脾组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),IL-4mRNA水平增高(P0.05),脑组织IL-12、IFN-γ蛋白水平降低(P0.05),IL-4蛋白水平增高(P0.05);与模型组相比,治疗组20d时脊髓组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),脑组织IFN-γ含量降低(P0.05)。结论马索罗酚可能通过降低脑、脊髓及脾组织中IL-12、IFN-γ表达,增加IL-4表达,调节Th1/Th2细胞炎症因子平衡,进而改善EAE小鼠疾病严重程度。     

阿托伐他汀对实验性变态反应性脑脊髓炎T辅助细胞功能的影响

目的探讨阿托伐他汀对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)豚鼠T辅助细胞功能的影响,探讨阿托伐他汀对EAE发病保护作用的免疫调节机制。方法皮下注射粗制碱性髓鞘蛋白(MBP)建立EAE模型。40只豚鼠分成4组:正常对照组、EAE对照组、EAE低剂量组和EAE高剂量组,每组10只,雌雄各半。ELISA法测定EAE发病高峰期外周血单个核细胞培养上清液的细胞因子INF-γ、IL-4水平。结果EAE对照组IL-4浓度低于正常对照组(P<0.01),EAE高、低剂量组IL-4浓度高于EAE对照组(P<0.01),EAE高剂量组IL-4浓度比EAE低剂量组高(P<0.01)。EAE对照组IFN-γ浓度高于正常对照组(P<0.01),EAE高、低剂量组IFN-γ浓度低于EAE对照组(P<0.01),EAE高剂量IFN-γ浓度比EAE低剂量组低(P<0.01)。结论EAE豚鼠存在Th1细胞的过度活化、Th2细胞分泌活性降低;阿托伐他汀能具有抑制Th1细胞活性、提高Th2细胞分泌能力,具有调节Th1/Th2失衡作用。     

甲基强的松龙治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的作用机制

目的:研究细胞因子、T细胞凋亡和淋巴细胞增殖在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)形成中的作用及甲基强的松龙(MP)治疗EAE的作用机制。方法:采用人脑纯化的髓鞘碱性蛋白(MBP)与完全福氏佐剂免疫Lewis大鼠,建立EAE动物模型。用双抗体夹心ELISA法检测各组大鼠血清中IL-10、TNF-α、IFN-γ的含量:流式细胞仪检测外周血T细胞凋亡;3H-TdR释放法检测外周血淋巴细胞转化率。结果:与对照组比较,EAE组的外周血IFN-γ、TNF-α水平明显增高,IL-10水平明显降低,MP治疗后IFN-γ和TNF-α水平下降,IL-10浓度上调。MP还诱导外周血T细胞凋亡和抑制MBP致敏淋巴细胞增殖并呈剂量依赖性。结论:应用人MBP成功建立EAE大鼠模型,MP可能通过调节Th细胞因子格局、促进Th2细胞因子分泌、抑制MBP致敏淋巴细胞增殖及外周血T细胞凋亡而发挥治疗多发性硬化的作用。     

MK-801对EAE动物模型轴索损伤的保护作用研究

目的通过建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型,对EAE的发病机制和轴索损伤进行研究,并进行药物干预,寻找新的治疗方法。方法选用髓鞘蛋白脂蛋白(PLP139-151)多肽作为抗原免疫雌性SJL/J小鼠,诱发EAE小鼠模型,应用MK-801(0.30mg/kg)进行干预。发病后取脑、脊髓组织切片,进行免疫组织化学检查。结果模型组23(23/30)只小鼠发病,发病率为76.7%,平均发病时间为19±2.58天,平均神经功能评分为2.14±0.69分。药物(MK-801)治疗组16(16/30)只小鼠发病,发病率为53.3%,平均发病时间为21±1.25天(P<0.05),平均神经功能评分为1.08±0.42分(P<0.02);病理显示药物干预后病灶减少,病变减轻。结论PLP多肽诱发SJL/J小鼠的EAE动物模型的病理改变主要累及脊髓。谷氨酸的兴奋性毒性参与MS发病和轴索损伤,应用NMDA受体拮抗剂MK-801可以减少神经功能缺失,降低发病率。