雷公藤内酯醇对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对人喉癌Hep-2细胞生长的影响.方法 采用MTT法检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法(TUNEL)评价细胞凋亡;透射电镜观察雷公藤内酯醇对喉癌Hep-2细胞超微结构的影响.结果 10～40ng/mL的雷公藤内酯醇作用48h后能明显抑制Hep-2细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性;透射电镜观察到明显的细胞凋亡特征.结论 在体外培养的条件下雷公藤内酯醇能明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡.     

三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制。方法 采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法，对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究。结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用，MTT显示生长抑制率为76.3%。DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡。流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的作用研究

目的:研究紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的作用。方法:以不同浓度的紫草素作用于人喉癌Hep-2细胞,MTT法检测紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的抑制率,荧光显微镜观察人喉癌Hep-2细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率变化,荧光定量PCR法测量人喉癌Hep-2细胞增殖诱导配体(APRIL)的表达量。结果:紫草素对人喉癌Hep-2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈明显的量效关系和时间依赖性。紫草素主要阻滞细胞G1期向S期的发展。紫草素作用人喉癌Hep-2细胞后其APRIL mRNA表达量随时间的延长和浓度的增加而升高,48 h后各紫草素浓度组APRIL mRNA表达与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素可以抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,未凋亡的人喉癌Hep-2细胞因APRIL表达升高而有增殖能力增强的潜在趋势。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的初步研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人喉癌Hep - 2细胞的生物学效应及其作用机制。 方法　Hep - 2细胞经不同浓度的As2 O3 处理 4 8h ,通过MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　As2 O3在 2、1、0 .5、0 .2 5 μmol/L的浓度范围作用Hep - 2细胞 4 8h ,细胞生长抑制率分别为 82 %、6 5 %、33%、15 % ,IC50 为0 .85± 0 .2 5 μmol/L ;细胞凋亡率分别为 2 1.7%、19%、5 .2 %、4 .6 %。 结论　As2 O3 对人喉癌Hep - 2细胞的抑制作用呈剂量依赖性 ,细胞生长抑制率与细胞凋亡率呈正的直线相关关系 (P <0 .0 5 )。     

奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的体外作用

 【目的】研究奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用及对Caspase-3活性的影响。【方法】用人宫颈癌HeLa细胞株经奥沙利铂处理后,MTT法测定细胞生长抑制率,透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪和原位末端标记技术法（TUNEL）检测细胞凋亡率,比色法检测Caspase-3活性变化,,并利用AC-DEVD-CHO进行Caspase-3抑制试验。【结果】奥沙利铂（4～64μmol/L）在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌HeLa细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡,奥沙利铂作用细胞株48 h后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;并能增加HeLa细胞的Caspase-3活性,AC-DEVD-乙醛（AC-DEVD-CHO）可有效抑制奥沙利铂诱导的HeLa细胞凋亡。【结论】奥沙利铂在体外能抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,Caspase-3活化参与了奥沙利铂诱导HeLa细胞的凋亡过程。     

三氧化二砷对人喉癌细胞株增殖抑制作用的探讨

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)制剂对人喉癌细胞株(Hep-2)细胞的诱导分化机制,为喉癌治疗提供理论依据。方法:应用MTT染色法观察As2O3对Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期进程变化及凋亡率,相差显微镜观察细胞形态学改变,电子显微镜观察经不同浓度的As2O3作用后Hep-2细胞超微结构改变。结果:As2O3对Hep-2细胞的增殖抑制率成剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡率升高;相差显微镜下实验组细胞帖壁不佳,细胞圆缩,数目减少;电子显微镜下可见线粒体肿胀,有空泡、细胞核染色质趋边凝集,可见凋亡小体。结论:As2O3对Hep-2细胞有显著的增殖抑制作用,可阻止Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

天然植物银杏酸诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的初步研究

目的 研究天然植物银杏酸对喉癌Hep-2细胞生长的抑制作用,并探讨其作用机理.方法 采用四唑盐比色实验(MTT)、DNA电泳、流式细胞仪分析等方法观察不同浓度和不同作用时间银杏酸对喉癌Hep-2 细胞增殖和凋亡的影响.结果 银杏酸对喉癌Hep-2 细胞呈现时间和剂量依赖性的生长抑制作用; DNA经琼脂糖电泳可见典型的梯形条带;流式细胞仪分析显示银杏酸作用后,细胞凋亡率呈时间和剂量依赖性增加.结论 银杏酸可抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡,具有明显的体外抗肿瘤活性.     

大蒜素诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的研究大蒜素（allicin）对喉癌细胞Hep-2的凋亡作用。方法体外培养的喉癌细胞Hep-2分别加入终浓度为12．5;25．0;50．0;100．0μg／ml的大蒜素,应用光学显微镜,MTT比色法及流式细胞仪分析不同剂量大蒜素对喉癌细胞Hep-2的凋亡作用。结果光镜下可见对照组喉癌细胞生长密集,细胞成梭形或多角形。大蒜素小剂量组细胞数量明显减少,随剂量增加细胞数渐少,高剂量组可见坏死细胞。MTT结果显示大蒜素呈时间剂量依赖性抑制喉癌细胞的生长。流式细胞仪表明大蒜素作用后,可将喉癌细胞阻滞在G0／G1期,并诱导喉癌细胞的凋亡。结论大蒜素作用后,可有效抑制的喉癌细胞的生长,并可诱导喉癌细胞的凋亡。     

奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的体外作用

【目的】研究奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用及对Caspase-3活性的影响。【方法】用人宫颈癌HeLa细胞株经奥沙利铂处理后,MTT法测定细胞生长抑制率,透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪和原位末端标记技术法（TUNEL）检测细胞凋亡率,比色法检测Caspase-3活性变化,,并利用AC-DEVD-CHO进行Caspase-3抑制试验。【结果】奥沙利铂（4～64μmol/L）在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌HeLa细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡,奥沙利铂作用细胞株48 h后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;并能增加HeLa细胞的Caspase-3活性,AC-DEVD-乙醛（AC-DEVD-CHO）可有效抑制奥沙利铂诱导的HeLa细胞凋亡。【结论】奥沙利铂在体外能抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,Caspase-3活化参与了奥沙利铂诱导HeLa细胞的凋亡过程。     

天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显。结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应。     

肿瘤抑素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤抑素对体外培养的人喉癌Hep-2细胞系凋亡的影响。方法用MTT法和台盼蓝染色法观察肿瘤抑素对喉癌Hep-2细胞生长的抑制作用。实验分为对照组和治疗组．光镜、电镜观察细胞形态及超微结构变化，采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带，TUNEL标记法检测细胞凋亡情况。结果随着肿瘤抑素浓度的增加喉癌Hep-2细胞的存活率下降。在相同浓度下。随着时间延长存活细胞逐渐减少。电镜观察治疗组细胞出现明显凋亡，琼脂糖电泳结果可见治疗组产生了特征性的DNA梯形条带，TUNEL标记法也证实治疗组可见明显的棕黄色凋亡细胞。结论肿瘤抑素通过诱导凋亡对体外培养的人喉癌Hep-2细胞系产生杀伤作用。     

丝裂霉素对喉癌细胞生长的影响

目的:探讨丝裂霉素(MMC)对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞活性的影响。方法:采用体外细胞培养实验方法,应用MTT、台盼蓝拒染等技术检测MMC对Hep-2细胞活力的影响,同时应用nm23免疫组化染色检测nm23蛋白的表达水平。结果:Hep-2细胞在MMC作用下,48h后细胞死亡率达90%,nm23蛋白在喉癌细胞中随MMC作用时间的延续表达量增多。结论:丝裂霉素影响人喉癌细胞(Hep-2)的生长,降低Hep-2细胞的活性而达到治疗作用。     

维生素D衍生物EB1089对人喉癌细胞Hep-2细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨EB1089对人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,1,10,100nmol／L）EB1089处理24,48,96h对Hep-2细胞的抑制率;TUNEL检测细胞凋亡;分光光度法检测Caspase-3活性．结果：EB1089在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制Hep-2细胞的生长（P〈0．05）,对Hep-2细胞的抑制率为2．6％-70．0％;10,100nmol／LEB1089处理细胞48h,可诱导Hep-2细胞发生凋亡,其凋亡指数分别为22．8±1．6和53．8±3．6,与对照组相比有统计学差异（P〈0．05）;EB1089处理细胞12,24,48,96h后Caspase-3的活性增加,与对照组相比分别增加了2．09,2．72,4．91,5．23倍（P〈0．05）;用Caspase-3活性抑制剂可部分缓解EB1089诱导的Hep-2细胞凋亡．结论：EB1089可能通过诱导Caspase-3活性增加的方式抑制Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

长链非编码RNA MALAT-1基因的敲除抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖和迁移

目的探讨敲除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的影响。方法使用实时聚合酶链反应（RTPCR） 以永生化鼻咽上皮（NPE）细胞株NP-69作为参照检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,使用shmalat1 慢病毒转染Hep-2细胞,RT-PCR检测其MALAT1的表达。增殖速率分析,MTT法明确MALAT-1对细胞增殖的影响。流式细 胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用Transwell 小室检测Hep-2 细胞的迁移。最后使用Matrigel 侵袭实验评估shmalat1 和 shCtrl慢病毒转染的Hep-2细胞的侵袭能力。结果使用qPCR检测FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达,结果 发现与NP-69细胞相比,FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z细胞MALAT1的表达显著增加。敲除MALAT1明显抑制Hep-2细胞增 殖。与MOCK和shCtrl 细胞相比,MALAT1-shRNA 慢病毒转染细胞S期细胞数量显著增加（P<0.01）。此外,细胞在G2/M期 的百分比下降（P<0.01）。下调MALAT1时,Hep-2细胞的侵袭和迁移都受到抑制。结论MALAT1在喉鳞状细胞癌高表达。敲 除长链非编码RNA MALAT-1基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移起抑制作用。     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

EGFR反义cDNA联合p16β干预喉癌细胞信号转导的实验研究

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义cDNA联合野生型p16β在体外对人喉癌Hep-2细胞信号转导的干预作用.方法 将已纯化的EGFR反义cDNA重组腺病毒和p16β在体外转染Hep-2喉癌细胞,采用MTT实验、流式细胞术(FCM)、免疫组化、Western blot等方法检测Hep-2细胞增殖抑制作用;进行细胞周期、DNA含量、细胞凋亡率的定量分析;检测重组腺病毒对Hep-2细胞EGFR蛋白表达的抑制和p16β蛋白过表达.结果 反义EGFR mRNA表达重组腺病毒能有效抑制Hep-2细胞的增殖活性;超过77.7%以上的被转染Hep-2细胞被阻滞在G0/G1期;转染细胞的凋亡率升高;同时出现EGFR蛋白表达的抑制和p16β蛋白的过表达.当p16β重组腺病毒和EGFR反义cDNA重组腺病毒联合转染Hep-2细胞后其抑制Hep-2细胞增殖活性、细胞周期阻滞、抑制细胞调亡作用明细增强.结论 p16β和EGFR反义cDNA能有效地干预人喉癌Hep-2细胞的信号转导机制,从而达到抑制Hep-2细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用.     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的：观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法：采用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞（siRNA-eIF4E组）,同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果：与空白对照组及空质粒组比较, siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调（P<0.01）,Hep-2细胞生存率下降（P<0.05）,细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）,细胞凋亡率增加（P<0.05）,凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调（P<0.05）。结论：siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

Induction of apoptosis and inhibition of proliferation in Hep-2 by antisense survivin RNA in vitro

Objective.. To study induction of apoptosis and inhibition of proliferation in Hep-2 by antisense survivin RNA. Methods： Antisense survivin RNA expression vector was constructed and then was transfected to human laryngeal carcinoma cell line Hep-2 by lipofectamine. HpEGFP/survivin cells （transfected with the combinant of antisense survivin RNA） were obstained by using G418. The levels of survivin protein before and after transfection were determined by Western-blot. Proliferation activity was measured by MTT assay. The experiment of colony formation in soft agar was carried out for assessing ability of proliferation of Hep-2 cell. Apoptosis was assessed by flow cytometry and acrdine orange（AO）. Results： After antisense survivin RNA plasmids were transfected, the level of survivin protein was inhibited in Hep-2. Compared with control, proliferation of HpEGFP/survivin cells were suppressed significantly. The experiment of colony formation in soft agar showed the ability of colony formation decreased in HpEGFP/survivin cells compared to control （P〈0.05）. Apoptosis rate increased about 1.81-folds compared with control. Conclusion.. The antisense survivin RNA can partly inhibit the level of surviivin protein expression in Hep-2 and can induce apoptosis and inhibit the proliferation of Hep-2 by down-regulating the expression of endogenous survivin in vitro.     

洛伐他汀对喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨阿伐他汀对喉鳞状细胞癌（LSCC）细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法给予体外培养Hep-2细胞阿伐他汀处理,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分析超氧化物生成情况。结果阿伐他汀降低了Hep-2细胞活力,引起了Hep-2细胞凋亡,超氧化物水平升高。结论阿伐他汀对LSCC具有潜在的治疗作用。