铅对大鼠C6细胞GRP78表达的影响

目的观察不用时间点暴露于不同剂量醋酸铅后大鼠神经胶质瘤C6细胞葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)表达量的影响,探讨不同时间不同剂量铅暴露对内质网应激反应的影响。方法Wistar大鼠神经胶质瘤C6细胞培养于含醋酸铅的培养液中,分别于不同时间终止染铅,用Western印迹法检测内质网GRP78表达量。结果(1)0.2μmol/L染铅组:7和30 d GRP78蛋白表达显著增高,其余各个时间点均无显著性变化;(2)1.0μmol/L染铅组:1 d后GRP78蛋白表达量开始显著增高,染铅30 d时已达到染铅前的6.3倍;(3)2.0μmol/L染铅组:0.5 h起GRP78表达量即显著增高,染铅7 d时达到高峰,是染铅前的4.3倍,到30 d时表达量又下降为染铅前的2.6倍。结论铅可以使Wistar大鼠神经胶质瘤细胞内质网上的GRP78蛋白应激性表达增加,内质网上的GRP78是铅的重要蓄积库。     

壬基酚暴露致小鼠睾丸GRP78和CHOP表达改变

目的 观察壬基酚暴露下小鼠睾丸中内质网应激相关分子表达改变,初步探索壬基酚对雄性生殖功能影响的机制.方法 将32只SPF级雄性昆明小鼠随机分为对照组(等体积注射玉米油)、壬基酚(50 mg/kg·bw)组、壬基酚(50 mg/kg·bw) +4-PBA(100 mg/kg·bw)组和4-PBA(100 mg/kg·bw...     

姜黄素对大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡及GRP78表达的影响

目的 观察姜黄素对大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡及GRP78表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组。采用无创性动脉夹夹闭肠系膜上动脉1 h后实施再灌注来建立肠缺血再灌注模型,姜黄素组在手术前5 d开始每天按200 mg/kg ig给药1次,假手术组仅分离肠系膜上动脉,不夹闭。采用HE染色观察肠黏膜损伤情况并进行病理评分;TUNEl法观察肠黏膜细胞凋亡情况并计算凋亡指数;Western blotting检测再灌注损伤3 h时肠黏膜GRP78及Caspase-12蛋白表达。结果 模型组肠黏膜损伤严重,绒毛上皮成块脱落,固有层破坏、溃疡,腺体破坏严重;姜黄素组肠黏膜绒毛上皮仅部分脱落,腺体排列紊乱,与模型组比较,病理评分显著降低（P<0.05）;模型组肠黏膜隐窝可见大量凋亡阳性细胞;与模型组比较,姜黄素组肠黏膜隐窝上皮细胞凋亡情况明显减轻,凋亡指数显著下降（P<0.05）;与模型组比较,姜黄素组GRP78蛋白表达量显著增加（P<0.05）,Caspase-12蛋白表达量显著下降（P<0.05）。结论 姜黄素有可能通过上调GRP78表达,减少内质网应激所致肠黏膜细胞凋亡,来减轻肠黏膜的再灌注损伤,达到保护肠黏膜作用。     

抑制MEK对内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡的增敏作用

目的探讨抑制MEK/ERK信号通路对人乳腺癌细胞内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激途径细胞凋亡的影响,以期为乳腺癌化疗提供新的靶点。方法不同浓度(0、1.5、3、6、9、12μmol.L-1)衣霉素(tunicamycin,TM)处理乳腺癌细胞SK-BR-3,48h后溴化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡率;TM(3μmol.L-1)处理SK-BR-3细胞不同时间(0、6、12、24、36h),Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、ERK1/2、pERK1/2的表达;MEK抑制剂U0126(20μmol.L-1)预处理1h后再给予TM(3μmol.L-1)同上处理,检测上述指标,比较U0126作用前后上述指标的变化。结果SK-BR-3细胞对TM诱导的细胞凋亡率<20%,且TM上调GRP78的表达;TM没有诱导ERK1/2的进一步激活;U0126明显增加TM诱导的细胞凋亡率(78%),同时下调GRP78的表达和阻断TM对GRP78的上调作用。结论MEK/ERK信号通路的抑制增强人乳腺癌细胞SK-BR-3对ER应激途径细胞凋亡的敏感性,抑制非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的诱导。     

辣椒素经内质网应激反应途径诱导K562/ADM耐药细胞凋亡

目的：研究辣椒素（capsaicin）是否经内质网途径诱导耐药性白血病K562/ADM细胞凋亡。方法：以耐药性白血病K562/ADM细胞为靶细胞,采用MTT比色法测定细胞增殖活性;细胞形态学和AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,电镜观察凋亡细胞内质网形态结构变化;实时定量RT-PCR检测GRP78mRNA的表达;Western blot法检测GRP78蛋白的表达。结果：不同浓度的辣椒素显著抑制K562/ADM细胞的增殖活性,20、50μmol/L辣椒素诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率明显增高,分别为39.67%和41.78%。辣椒素诱导凋亡过程中,K562/ADM细胞出现内质网明显扩张和脱颗粒现象,GRP78mRNA的表达增高,GRP78蛋白的表达量分别增高1.5和2.2倍,随时间延长有所降低。结论：辣椒素可能通过内质网应激反应性途径诱导K562/ADM细胞发生凋亡。     

内质网应激介导白藜芦醇对心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞肥大的保护作用及与内质网应激的关系。方法利用ISO建立乳鼠心肌肥大细胞模型,分为正常对照组、ISO组,白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组。检测心肌细胞表面积和ANP基因表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)漏出量;实时定量PCR和Western blot分析GRP78和CHOP的基因和蛋白表达。结果 Res有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡,表现为降低心肌细胞表面积和ANP基因表达,减少LDH、MDA漏出量和心肌细胞凋亡率,同时下调GRP78和CHOP的基因和蛋白表达。结论Res可能通过抑制内质网应激相关因子GRP78和CHOP表达发挥对心肌肥大的保护作用。     

微小RNA在调控髓系细胞及急性髓系白血病表达中的研究进展

微小RNA(miR)是一种长度在22个核苷酸左右的内源性非编码单链小RNA。它通过与靶基因mRNA的结合来调控mRNA的降解或抑制其编码蛋白的转录。miR参与了多种生物学过程,包括细胞分化、增殖和凋亡等。考虑到miR潜在的临床相关性,在各种人类疾病中可能作为肿瘤治疗的更好的预测生物标志物和治疗靶点。本文对一些具有代表性的miR及其靶基因或信号通路和对髓系细胞的调控机制、急性髓系白血病发生发展的相关研究进行综述。鉴于miR在肿瘤群体用于疾病的诊断、预后、分型和治疗指导的巨大临床应用前景,总结出一些具有预后或治疗价值的miR及对化疗药物耐受性的关系等及miR开发治疗靶点的优势和存在的问题,并展望了miR在急性髓系白血病诊断和治疗方面的应用潜力。     

原花青素对脑缺血再灌注后大鼠海马内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的:探讨原花青素(procyanidin,PC)对脑缺血再灌注后大鼠海马内质网应激(endoplasmic re-ticulum stress,ERS)相关分子表达的影响。方法:将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PC组,每组60只。PC组于术前1周灌胃给予PC(100 mg.kg-1)然后建立脑缺血再灌注模型,分别在脑缺血再灌注后3,6,12,24和48 h处死大鼠。观察不同时间点大鼠的神经行为表现;焦油紫染色处理大鼠海马组织切片,光镜观察病理学改变;末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;采用免疫组化及RT-PCR方法检测脑缺血再灌注后不同时间点大鼠海马GRP78和CHOP的表达。结果:PC组大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺损明显改善,与模型组相比具有统计学差异(P<0.01),其细胞凋亡数亦明显少于模型组(P<0.05);模型组与假手术组相比,GRP78与CHOP明显升高(P<0.01),PC组GRP78表达高于模型组(P<0.05),而PC组CHOP表达低于模型组(P<0.05)。结论:PC对脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与其增加GRP78表达、拮抗CHOP表达、阻断内质网应激(E...     

细胞凋亡与内质网应激机制

内质网应激介导的细胞凋亡是一种新的凋亡途径,不同于死亡受体信号途径和线粒体途径.短期的内质网应激有保护细胞的作用,但是长期的内质网应激将激活一些凋亡信号分子如CHOP、JNK、Caspase,而诱导细胞凋亡.     

蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达。利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况。结果血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调。成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株。ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调。随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞。结论血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异。     

黄芪对老年急性髓系白血病患者BCL-2家族凋亡因子的相关影响

目的：本研究探讨黄芪（astragalus）对老年急性髓系白血病患者疗效评估,并检测其对患者Bcl-2家族凋亡相关因子的影响,从而探讨黄芪对老年急性髓系白血病患者治疗的作用机制。方法随机分配42例老年急性髓系白血病患者,分为对照组和治疗组,两组均予以化疗,治疗组在此基础上给予黄芪,统计两组病患治疗后完全缓解率,患者治疗后白血病细胞凋亡情况运用流式细胞仪检验,患者治疗前后Bcl-2,Bax、Bak、BCL-xl的mRNA表达状况运用RT-PCR方法进行检测,统计两组患者治疗后疗效情况。结果治疗组患者明显优于对照组,治疗组患者完全缓解率高于对照组（P<0.05）。治疗组患者给予黄芪后,白血病细胞凋亡较对照组明显增高,治疗组治疗后Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bak的表达较治疗前差异有统计学意义（P<0.05）,其中Bcl-2、Bcl-xl较治疗前明显下降,Bax、Bak较治疗前明显升高;对照组治疗后Bcl-2、Bax、Bak、BCL-xl表达水平较对治疗前差异无明显统计学意义（P>0.05）。结论黄芪能促进白血病细胞的凋亡,提高患者疗效,其机制可能是通过减低Bcl-2、BCL-xl的表达,增加Bax、Bak的表达来完成。     

辛伐他汀通过内质网应激途径诱导K562细胞凋亡

探讨内质网应激在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ｃa²⁺浓度，RT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)、钙蛋白酶(calpain)基因mRNA表达水平，Western blotting检测GRP78、 calpain、 caspase-3， -6， -7， -9， -12蛋白水平。结果显示，10、 20、 30 μmol·L^-1辛伐他汀(simvastatin，Sim)作用K562细胞72 h后，细胞出现典型的凋亡形态，凋亡率分别为12.41%、 19.08%和23.41%；细胞内Ca²⁺浓度增加，荧光强度分别为43、54和64；GRP78、calpain基因mRNA表达上调；calpain、 caspase-3， -6， -7， -9， -12蛋白剪切活化、GRP78蛋白表达增强。以上结果表明，内质网作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡。辛伐他汀将可能被用于临床治疗白血病。     

内质网应激在三氧化二砷抑制HL-60增殖过程中的效应机制

目的探究三氧化二砷(ATO)引起内质网应激的效应机制,为掌控急性早幼粒白血病治疗药物监测提供间接药理学指标。方法通过ATO的毒理学数据库关联基因数据整理建立蛋白-蛋白互作网络,使用MCODE算法对网络拓扑关系聚类分析寻找关联基因群;采用HL-60细胞模型进行实验研究。MTT法评价ATO对HL-60的细胞毒活性;Realtime PCR法检测细胞内质网应激相关基因表达变化;Western blot检测内质网应激相关蛋白表达水平;用ER-Tracker Red对内质网进行特异性荧光染色;流式细胞技术检测细胞分化及凋亡指标变化。结果 ATO相关的206个基因PPI网络中有3 794对关系,排名前4的基因群中内质网应激模块凸显;ATO能抑制HL-60细胞增殖,并呈浓度依赖性;ATO在给药4 h即可引起细胞内质网应激,GRP78和GRP94表达较明显,随着时间延长基因表达水平变化明显,1~4μmol·L~(-1)引起GRP78、GRP94和Nrf2表达,8μmol·L~(-1)引起CHOP大量表达。ATO在1、2μmol·L~(-1)时引起e IF2α蛋白磷酸化水平增加,在8μmol·L~(-1)时诱导CHOP蛋白大量表达;内质网染色结果显示,4、8μmol·L~(-1)的ATO诱导内质网的肿胀;流式结果表明ATO在1μmol·L~(-1)时引起细胞分化,在2μmol·L~(-1)时出现明显分化群,4、8μmol·L~(-1)时细胞分化同样明显,但在8μmol·L~(-1)时细胞同时出现凋亡群。结论 ATO抑制HL-60细胞增殖过程中出现内质网应激,并呈浓度依赖性阶段性切换效应。     

60例老年急性髓系白血病临床分析

目的分析老年急性髓系白血病(AML)的临床特点。方法对2004年2月至2012年8月来院就诊的60例老年急性髓系白血病患者(观察组)的临床资料进行回顾性分析,同时与同期入院的58例中青年患者(对照组)的临床资料比较。结果观察组完全缓解率为25.9%,总有效率为43.1%,对照组完全缓解率达到73.7%,总有效率达到89.5%(P<0.01)。观察组的预后不良核型发生率为53.1%,而对照组为33.3%(P<0.05),老年组有无骨髓增生异常综合征(MDS)病史的患者CR率分别是0.0%与34.9%(P<0.05),伴淋系抗原表达患者和不伴淋系抗原表达患者的CR率分别是0.0%和33.3%(P<0.05),CD34+与CD34-患者的CR率分别为15.0%与60.0%(P<0.05)。结论老年急性髓系白血病患者有较多的不良预后因素,具有缓解率低和病死率高的特点,临床上具有一定的特殊性,因此治疗上要注意个体差异。     

老年急性髓系白血病的诊治分析

目的分析总结老年急性髓系白血病的临床特点及治疗、预后。方法回顾分析自2000年3月至2012年1月本院收治老年（〉60岁）AML患者的临床资料。结果本组患者以M2为主,其次为M5患者,CD34阳性率为48.48%,HLA-DR阳性率为51.51%。结论老年患者由于其自身特点预后常不佳,部分患者采用强劲的支持和诱导治疗,临床预后较好。     

黄芪甲苷抑制内质网应激及CHOP信号通道改善衣霉素诱导的系膜细胞凋亡

目的 观察黄芪甲苷对衣霉素诱导的系膜细胞凋亡、内质网应激标志蛋白和CHOP信号通路表达的影响,从系膜细胞凋亡角度探讨黄芪甲苷治疗早期糖尿病肾病的可能机制.方法 采用衣霉素诱导大鼠系膜细胞产生内质网应激,分为模型对照组、黄芪甲苷小剂量组(AS-IVL,50 μg·mL-1)、黄芪甲苷大剂量组(AS-IVH,100 μg·...     

初发急性髓系白血病外周血早期白血病清除速度与预后的临床研究

目的本研究旨在检测初发急性髓系白血病(AML)患者诱导治疗第2、4、6天外周血残存的白血病数量,探讨其与疾病预后的关系。方法收集2010年1月至2013年1月的30例初发AML患者的临床和实验室资料。根据初诊时白血病相关免疫表型特征,采用流式细胞术检测患者诱导治疗第2、4、6天外周血残存的白血病数量。结果 9例于化疗第2天外周血残留白细胞数量(MRD)低于0.01%;16例于化疗第4天外周血MRD低于0.01%;5例在化疗第6天外周血MRD仍高于0.01%。随访时间2~26个月,第2天外周血MRD水平较低组均早期达CR,至随访结束无1例复发;而第6天外周血MRD水平较高组经一次诱导达CR者仅1例,4例经多次诱导均未达CR,至随访结束,5例均于6个月内复发。结论采用流式细胞术检测早期外周血白血病细胞数量能较好预测患者的CR率与长期的生存率。     

硫化氢抑制葡萄糖调节蛋白78减轻6-OHDA诱导的PC12细胞损伤

目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过改变葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达参与其对抗6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法应用具有神经毒性的6-OHDA损伤PC12细胞为帕金森病细胞模型,以硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;DFCH-DA染色检测细胞内活性氧（ROS）的水平;Rh123染色检测细胞线粒体膜电位（MMP）;Western blot检测GRP78的表达。结果200μmol/L的6-OHDA引起PC12细胞的存活率显著降低,ROS生成增加及MMP降低,且诱导了GRP78的高表达。应用25~400μmol/L的NaHS预处理30 min,呈浓度依赖性抑制6-OHDA引起的细胞存活率降低,其中400μmol/L的NaHS作用最明显,此浓度也可以显著减少6-OHDA引起的ROS增多,提高MMP,同时明显抑制6-OHDA诱导的GRP78高表达。结论 H2S具有抗6-OHDA氧化应激损伤的PC12细胞保护作用,抑制内质网应激分子GRP78的表达可能是其机制之一。