听毛细胞表皮板病变的观察

本实验对卡那霉素耳中毒豚鼠的听毛细胞表皮板进行了光镜和扫描电镜联合观察，从显微和亚显微水平评判毛细胞表皮板形态与功能的关系，并探讨了毛细胞表柴油板深染现象。认为，光镜下呈硝酸银深染的细胞可视为病变细胞，少数细胞表皮板穿孔可致明显的毛细胞功能障碍。     

听毛细胞表皮板的光镜与电镜联合观察

本文采用光镜与扫描电镜联合观察豚鼠听毛细胞表皮板结构，以确定毛细胞表皮板的较早期病变和清晰显示毛细胞表皮板的亚显微结构，从而提供了内耳病理实验依据。     

碳酸酐酶在豚鼠耳蜗的分布及其意义

本文应用组织化学和超微细胞化学方法显示碳酸酐酶（ＣＡＨ）在豚鼠血管纹（ＳＶ）和Ｃｏｒｔｉ器中的分布。光镜观察到ＳＶ和Ｃｏｒｔｉ器均含有丰富的ＣＡＨ，电镜观察到ＳＶ的边缘细胞和外毛细胞（ＯＨＣ）呈强阳性反应，ＳＶ的中间细胞和基底细胞、内毛细胞（ＩＨＣ）见到少量反应产物。结果表明耳蜗ＣＡＨ的分布与其功能有密切关系。     

还原型谷胱甘肽拮抗庆大霉素耳毒性作用观察

目的观察还原型谷胱甘肽对庆大霉素耳蜗毒性的拮抗效果,并且比较了两种给药方法对其效果的影响.方法健康黑目豚鼠41只,随机分为五组,各组动物在观察期结束后,检测由8kHz、4kHz、2kHz频率短音诱发的脑干听觉诱发电位Ⅲ波反应阈;扫描电镜观察外毛细胞形态变化;采用耳蜗基底膜铺片的方法,对深染的外毛细胞表皮板进行计数.结果谷胱甘肽组耳蜗三排外毛细胞呈V字型排列有序.庆大霉素组外毛细胞纤毛散乱、倒伏,深染的表皮板数明显增加,Ⅲ波反应阈明显提高.合并给药组深染的表皮板数较庆大霉素组明显减少,Ⅲ波反应阈的提高幅度明显减小(P＜0.05).后继给药组深染的表皮板数和8kHz、4kHz的Ⅲ波反应阈与庆大霉素组比较均无统计学差异(P＞0.05),然而2kHz的Ⅲ波反应阈与庆大霉素组比较差异有显著性(P＜0.05),谷胱甘肽组与生理盐水组差异无显著性(P＞0.05).结论还原型谷胱甘肽与庆大霉素合并应用可以显著地减轻庆大霉素的耳毒性;庆大霉素停药后再给予还原型谷胱甘肽,对耳蜗高频段的毛细胞所受庆大霉素毒性可能难以产生拮抗作用,但是对耳蜗中、低频段的毛细胞可能提供一定程度的保护作用.     

激光扫描共焦显微镜在内耳形态学研究中的应用

激光扫描共焦显微镜（ＬＳＣＭ）可直接、无创性地对组织进行连续光学切片，观察同一标本表面和内部结构。为探索ＬＳＣＭ在内耳形态学研究领域的应用前景，应用ＬＳＣＭ结合免疫荧光组织化学双标记技术，观察５只豚鼠耳蜗毛细胞及支持细胞上部构像。通过毒伞素标记毛细胞肌动蛋白纤维，以抗角质蛋白单克隆抗体标记支持细胞。在ＬＳＣＭ下可清楚观察到毛细胞静纤毛、表皮板以及毛细胞顶部无表皮板区；可同时观察到外柱细胞头板、Ｄｅｉｔｅｒ细胞指状突顶板以及位于网状层下方的Ｄｅｉｔｅｒ细胞指状突。ＬＳＣＭ为研究Ｃｏｒｔｉ器形态增加了一种新的手段。     

激光扫描共焦显微镜在内耳形态学研究中的应用

激光扫描共焦显微镜（ＬＳＣＭ）可直接，无创性地对组织进行连续光学切片，观察同一标表面和内部结构，为探讨ＬＳＣＭ在内耳形态学研究领域的应用前景，应用ＬＳＣＭ结合免疫荧光组织化学标记技术，观察５只豚鼠耳蜗毛细胞及支持细胞上部构象，通过毒伞素标主民毛细胞肌动蛋白纤维，以抗角蛋白单克隆抗体标记支持细胞，在ＬＳＣＭ下可清楚观察到毛细胞静纤毛，表皮板以及毛细胞顶部无表皮板区，可同时观察到外柱细胞头枝，Ｄｅｉｔ     

磷霉素鼓室注射对多粘菌素B内耳毒性的保护作用

本实验旨在探索磷霉素和多粘菌素Ｂ混合鼓室注射对耳用的影响。应用４５只豚鼠进行ＣＡＰ检测及耳蜗光镜和扫描电镜观察，结果发现两种浓度多粘菌素Ｂ均引起明显ＣＡＰ阈值升高、潜伏期延长和毛细胞的损害，随浓度增加而病变加重；当与磷霉索混合用药时，ＣＡＰ和耳蜗形态学改变较单独用多粘菌素Ｂ明显减轻，但高浓度混合液底转有部分或散在外毛细胞和内毛细胞损害。故混合液中多粘菌素Ｂ浓度不宜大高，提示临床上可试用该混合滴耳剂治疗中耳化脓性炎症。     

GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗外毛细胞凋亡时程观察

目的探讨GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗毛细胞缺失方式和具体时间。方法 GJB2基因条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2-Cre(cCx26)由转基因小鼠Cx26loxp/loxp与Cx26loxp/--Pax2-Cre小鼠杂交获得,分别选取P8、P14、P18和P21四个发育阶段各6只小鼠进行实验。野生型BALB/c小鼠作为正常对照。常规解剖出耳蜗基底膜,鬼笔环肽-FITC及碘化丙啶(PI)分别染色、铺片,激光共聚焦显微镜观察、拍照。结果与野生型小鼠相比,cCx26小鼠P8时耳蜗外毛细胞纤毛、细胞核形态均未见明显异常改变;P14时,鬼笔环肽染色显示耳蜗中回表皮板疏松,外毛细胞纤毛染色开始不规则,PI染色外毛细胞核排列极性欠佳,细胞核着色不均匀,可见深染的胞核,尚未见明显的外毛细胞缺失;P18时,鬼笔环肽染色显示表皮板出现区域性的模糊和单个外毛细胞纤毛的消失,外毛细胞核出现皱缩、片断化,甚至缺失,这一改变以中回最为明显,底回次之,顶回改变最轻微;P21时,表皮板出现了片状缺失,外毛细胞丢失明显,残余细胞排列紊乱。与野生型小鼠相比,cCx26ko小鼠各阶段内毛细胞纤毛染色不规则,深浅不一,细胞核未见明显形态异常及缺失。结论 GJB2基因缺失可引起小鼠耳蜗Corti器表皮板破损以及外毛细胞的凋亡,表皮板及外毛细胞纤毛的变化开始于P14,P18时外毛细胞出现典型的凋亡表现。     

接触式显微内窥镜喉气管检查与手术

目的探讨接触式显微内窥镜结合支撑喉镜进行喉气管检查与手术的价值。方法：①全麻下进行常规支撑喉镜检查；②应用连接好电视图像系统的接触式显微内窥镜进行全景内窥镜检查；③用１％的美兰作声带粘膜活体染色，进行接触式显微内窥镜检查；④在显微内窥镜下进行相应的喉气管显微手术。结果：接触式显微内窥镜最大放大倍数１５０倍，分辨率达到细胞水平，既可作为掌规硬管内窥镜全景检查，也可进行显微检查。能清楚地显示活体原位状态下粘膜表面上皮细胞及毛细血管的形态结构及分布排列，可直接观察到上皮细胞是否规则，核染色，核大小，核浆比率，核外形，胞核是否存在、细胞角化程度及毛细血管微循环情况等，７３例正常与异常声带表层上皮细胞及微血管存在一定的特征与差异。在支撑喉镜下应用显微内窥镜进行显微手术，图像清晰，分辨率高，视角大，手术可作得更加精细，既能彻底切除病灶，又能较好地保留正常粘膜，术后声带功能恢复良好。结论：应用接触式显微内窥镜在活体原位情况下观察粘膜上皮表层细胞及微血管的某些生理及病理改变，有助于对某些喉气管病变的诊断及治疗。在显微内窥镜下手术，可作得更加精细彻底，喉功能保存好。     

一氧化氮合酶在正常豚鼠低位听觉径路及血管纹的分布

采用ＮＯＳ的组织化学技术，研究豚鼠低位听觉径路及血管纹的一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）的分布，结果发现，在耳蜗核有密集的ＮＯＳ阳性胞体，阳性纤维散在，阳性胞体主要集中在耳蜗背侧核，腹侧核内阳性反应较少；螺旋神经节ＮＯＳ阳性细胞呈圆形或椭圆形，有明确的突起；耳蜗各回内外毛细胞均呈ＮＯＳ阳性反应，内毛细胞区较外毛细胞区染色深；血管纹的边缘细胞呈强阳性反应。文章讨论了ＮＯＳ在低位听觉径路及血管纹的分布特点及生理意义。     

鸡内耳基底乳头毛细胞的透射电镜观察

了解鸡内耳基底乳头毛细胞的超微结构对其电生理及其毛细胞再生的研究有重要意义。为此应用透射电镜对成年鸡内耳基底乳头毛细胞的超微结构进行观察，依据毛细胞的形态、表皮板的大小及其神经分布的特点，可将毛细胞分为：高毛细胞、过渡型毛细胞和矮毛细胞。从基底乳头的上缘到其下缘，每个毛细胞的静纤毛呈楼梯状增高排列。该文并对毛细胞的表皮板及纤毛在耳蜗生理中的作用进行了初步的探讨。     

鸡内耳基底乳头毛细胞的透射电镜观察

了解鸡内耳基底乳头毛细胞的超微结构对其电生理及其毛细胞再生的研究有重要意义。为此应用透射电镜对成年鸡内耳基底乳头毛细胞的超微结构进行观察，依据毛细胞的形态、表皮板的大小及其神经分布的特点，可将毛细胞分为：高毛细胞、过渡型毛细胞和矮毛细胞。从基底乳头的上缘到其下缘，每个毛细胞的静纤毛呈楼梯状增高排列。该文并对毛细胞的表皮板及纤毛在耳蜗生理中的作用进行了初步的探讨。     

支持细胞在内耳发育及耳蜗毛细胞损伤后的作用

耳蜗毛细胞损伤后如何再生及恢复其听功能是现今耳科学研究的热点问题之一。目前国内外的研究热点为调控参与内耳毛细胞调控的基因、干细胞移植、生长因子诱导、内耳前体细胞向毛细胞分化等。对于螺旋器中支持细胞在内耳发育、耳蜗毛细胞损伤后保持听觉上皮完整以及毛细胞再生中的作用关注较少。本文就支持细胞在内耳发育、毛细胞损伤后的作用等研究做一综述。     

庆大霉素中毒性耳聋

庆大霉素目前仍是主要的致聋抗生素，庆大霉素中毒性耳聋的发病机制包括自由基损伤学说、内耳微循环障碍学说、毛细胞线粒体功能失常学说、细胞凋亡等，并发现一些与耳聋相关的基因。聚DL-天冬氨酸（PAA）、表皮生长因子（EGF）表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、神经营养凼子3（NT3）、高压氧等对庆大霉素的耳毒性有一定的拈抗作用。中医药丹参、天鼓冲剂、复聪片、耳聋左慈丸等也可减轻庆大霉素的耳毒性。庆大霉素中毒性耳聋基因治疗具有良好的前景。制造一种由病毒DNA序列和非病毒载体结构共同组成的复合型载体，也许是未来基因治疗载体得到完善、基因治疗得到突破性进展的着手点之一。     

正常雏鸡基底乳头的扫描电镜观察

对１０只出壳后３～７天的雏鸡的基底乳头进行扫描电镜观察及ＡＢＲ阈值测定，发现雏鸡基底乳头由近及远逐渐增宽，毛细胞数逐渐增多，毛细胞表面的纤毛逐渐变长，纤毛间的长短差异逐渐变小，表皮板直径由大到小。毛细胞表面呈较为规则的六边形或五边形，细胞间均由支持细胞表面突起分隔开来。据此推测鸡听乳头可能具有周围分析器功能，而从表面结构上是难以区分高、矮细胞的。     

头面部常规~（60）钴照射及顺铂应用对豚鼠耳蜗的影响

将实验豚鼠分成￣（６０）钴７０Ｇｙ照射组，￣（６０）钴５０Ｇｙ照射组，顺铂治疗组，￣（６０）钴５０Ｇｙ照射加顺铂治疗组，对照组，共５组每组９耳。顺铂腹腔注射２ｍｇ／ｋｇ／次，共１０次。用电反应测听仪分别在实验前、￣（６０）钴照射后或应用顺铂后１０周测定ＡＢＲ阈值。对全耳蜗铺片基底膜上的内、外毛细胞及柱细胞缺损数进行定量观察计数。结果各组实验耳在ＡＢＲ阈值测定上均无显著性差异。在基底膜内、外毛细胞及柱细胞缺损方面，提示随着放射剂量的增大，耳蜗毛细胞的损伤也随之增加。应用顺铂后可加重放射对耳蜗的损害，但按临床常规应用顺铂的剂量则对耳蜗是安全的。     

内毛细胞的分离和形态学特点

目的　探讨内毛细胞 (innerhaircells ,IHC)的分离技术和形态学特征。方法　从豚鼠耳蜗制备基底膜活体铺片 ,微分干涉倒置显微镜下用显微分离结合酶消化的方法单离IHC。高倍显微镜下 ,用两个钨丝电极沿IHC和第一排外毛细胞 (outerhaircells,OHC)之间的Corti隧道显微切割 ,游离的IHC团被吸引至玻璃微吸管内。结果　从每只豚鼠耳蜗可分离到 3 0～ 5 0个活性良好的单离IHC ,并存活 2h左右。典型的IHC胞体具有特征性 ,呈梨状或长颈的烧瓶形状 ,胞体中间可见大的圆形细胞核。胞体内包含较多细胞器 ,颗粒状 ,粗糙感。大部分可观察到静纤毛 ( 93 / 98)。静纤毛分布沿表皮板一侧 ,排列呈线状或“C”形。部分细胞可观察到明显狭窄的颈部 ( 61/ 98)。IHC的表皮板一般为倾斜状 ,凹面向上 ,较厚。另外 ,IHC的表皮板通常与细胞胞体长轴成锐角或钝角。豚鼠耳蜗IHC长度为 13～ 3 1μm ,平均 ( 2 2 45± 4 14) μm ( x±s,n =98,下同 ) ;直径为 7～ 15 μm ,平均 ( 11 95±1 5 9) μm。静纤毛长度为 2～ 7 5 μm ,平均 ( 5 2 1± 1 0 0 ) μm。 结论　本研究成功建立一种能够分离到大量的、生物活性好的IHC的技术 ;内、外毛细胞单离后在形态学上的鉴别要点是表皮板 ,尤其是表皮板与细胞胞体长轴的成角特征     

豚鼠椭圆囊斑微纹区和边缘区毛细胞损伤后恢复的比较观察

利用扫描电镜和连续半薄切片的观察，对豚鼠椭圆囊斑微纹区和边缘区的毛细胞损伤后的恢复情况进行研究。结果，正常豚鼠的椭圆囊斑微纹区的感觉细胞主要是Ⅰ型毛细胞，连续１２天皮下注射庆大霉素（１００ｍｇ／ｋｇ），豚鼠椭圆囊斑的损伤主要发生在微纹区，损伤后较长存活期实验组豚鼠的椭圆囊斑微纹区中，形态类似Ⅱ型毛细胞的感觉细胞占绝大多数。提示这些类似Ⅱ型毛细胞的感觉细胞是修复过程中产生的毛细胞。     

Ribbon突触关键蛋白与感音神经性聋

Ribbon突触是耳蜗内毛细胞与螺旋神经元传入神经末梢之间形成的突触连接。听觉感受依赖内毛细胞Ribbon突触上神经递质不同程度快速、精确的释放实现。研究表明Ribbon突触数量、形态和功能的异常可直接导致感音神经性聋。内毛细胞的特殊结构使其在环境中能更好对声音信息进行转换和传递。目前已发现许多在突触发生和胞吐作用中起关键作用的蛋白,对这些蛋白结构和功能的研究将有助于深入了解感音神经性聋的发生发展机制,并为基因治疗制定靶点。     

耳蜗支持细胞与毛细胞再生研究进展

耳蜗毛细胞损伤缺失是导致感音神经性聋的主要原因,如何激活毛细胞再生一直是研究的热点。本文就近年来内耳支持细胞在毛细胞损伤后的作用、支持细胞增殖或转分化为毛细胞的机制及影响因素的相关研究进展做一综述。