眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织TLR4、MyD88表达的影响

目的探讨眼针治疗脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(My D88)的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MACO)动物模型。酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β水平,Western印迹检测大鼠缺血侧脑皮层TLR4、My D88蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β水平明显升高(P0.01),缺血侧脑皮层组织TLR4、My D88蛋白水平均显示高表达(P0.01);眼针组同模型组相比,血清IL-1β水平显著下降(P0.01),缺血侧脑皮层组织TLR4、My D88蛋白表达明显下调(P0.01)。结论眼针抑制脑皮层组织中TLR4、My D88的表达,降低炎症反应,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织FADD表达的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠大脑皮层组织中FADD的表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型。RT-PCR、免疫组化及Western印迹方法检测大鼠缺血侧脑皮层FADD的mRNA和蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层FADD mRNA和蛋白水平均显示出高表达(P<0.01),眼针组同模型组相比,FADD mRNA和蛋白表达则下调(P<0.05)。结论眼针抑制脑皮层组织中FADD的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKKβ/NF-κB表达的影响

目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中IκB激酶β(IKKβ)及核因子-κB (NF-κB)表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制.方法 健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组.CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型.Western blot检测大鼠缺血侧脑皮层IKKβ、NF-κB蛋白表达的变化.结果 与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKKβ及NF-κB蛋白水平均显示出高表达(P＜0.01),眼针组同模型组相比,IKKβ及NF-κB蛋白表达则下调(P＜0.01).结论 眼针抑制脑皮层组织中IKKβ及NF-κB的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一.     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ICAM-1表达的影响

目的观察眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞间黏附因子(ICAM-1)表达的影响。方法 64只SD大鼠随机分为4组:正常组(未处理)、假手术组(同模型组,仅鱼线插入深度1 cm)、模型组(应用线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,鱼线插入深度1.8～2 cm)和眼针组(模型成功后取肝区、上焦区、下焦区、肾区进行眼针治疗20 min,每日2次),每组16只。于再灌注后3 h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达的变化。结果眼针治疗后可使大鼠神经功能缺损评分明显下降,并显著降低脑组织ICAM-1蛋白及mRNA表达(P<0.01)。结论眼针具有明显地改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与下调脑组织ICAM-1表达有关。     

眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清ICAM含量的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清细胞间黏附因子(ICAM)含量的影响,探讨眼针对脑缺血再灌注损伤治疗的作用机制。方法应用线栓法复制脑缺血再灌注大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后3 h2、4 h、72 h进行神经功能缺损评分,采用ELISA方法测定大鼠血清ICAM含量的变化。结果与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损程度评分明显下降,大鼠血清ICAM含量比模型组降低(P<0.01)。结论眼针具有明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,其机制与降低机体血清ICAM含量有关。     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织脑源性神经因子表达的影响

目的 探讨眼针治疗急性脑缺血再灌注损伤的机制.方法 应用线栓法复制急性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后3h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western印迹、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定脑组织脑源性神经因子(BDNF)蛋白及mRNA表达的变化.结果 与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损评分明显下降,脑组织BDNF蛋白及mRNA表达明显上调(P＜0.05).结论 眼针具有明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用;其机制与上调脑组织BDNF表达有关.     

丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70与TLR4表达的影响

目的观察热休克蛋白(HSP70)与Toll样受体4(TLR4)在局灶性脑缺血再灌注中的表达规律及丁苯酞(NBP)预处理对其表达规律的影响,探讨NBP预处理防治脑缺血的作用。方法 72只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、NBP预处理组(缺血再灌注组),根据再灌注时间不同分为再灌注6 h、12 h、24 h4、8 h亚组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型,HE染色观察脑组织形态病理学变化;采用DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测神经元凋亡;免疫组化法测定大鼠脑缺血再灌注不同时间HSP70与TLR4的平均灰度值。结果与假手术组比较,缺血再灌注组HSP70在缺血再灌注6 h明显升高,于24 h达到峰值(P<0.05),TLR4在缺血再灌注6 h时表达较高,随灌注时间延长表达逐渐增高(P<0.05);NBP预处理组HSP70与TLR4阳性表达在各时间点明显增加但低于手术组(P<0.05)。结论 NBP预处理可降低脑缺血再灌注损伤大鼠TLR4及其内源性配体HSP70的表达,有效防治脑缺血再灌注损伤。     

Toll 样受体4与脑缺血再灌注损伤的关系研究进展

Toll样受体4(TLR4)是先天性免疫系统的一种跨膜受体蛋白,属于Ⅰ型跨膜糖蛋白受体,可以识别外源性病原相关分子模式和内源性损伤相关分子模式,并启动免疫应答。在脑缺血再灌注过程中,小胶质细胞、星形胶质细胞及损伤的神经元等产生并释放大量的低分子透明质酸、热休克蛋白等物质,作为内源性配体激活TLR4介导的信号通路,产生炎性级联反应,在脑缺血再灌注损伤的发生、发展过程中发挥关键作用。     

TLR4对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝组织Th17细胞相关细胞因子表达的影响

目的 观察Toll样受体4（TLR4）对肝脏缺血再灌注大鼠肝组织Th17细胞相关因子[IL-17A、IL-23、孤核儿相关受体（RORrt）]表达的影响,并探讨其可能机制.方法 将40只健康雄性SD大鼠分为4组各10只,假手术组只分离同侧的颈总动脉和股动静脉,并进行相应插管注入相同剂量的肝素;模型组、抗TLR4组、同型抗体组均制备创伤失血性休克再灌注肝损伤模型,抗TLR4组、同型抗体组分别于再灌注前10 min经股静脉注入TLR4抗体50μg、同型对照抗体50 μg,整个过程用微量注射器缓慢注射.于12 h后处死取材.采用Western blot法检测各组肝组织TLR4蛋白,ELISA检测IL-17A、IL-23蛋白,观察IL-17A、IL-23、RORrt mRNA,并对模型组、抗TLR4组、同型抗体组IL-17A、IL-23、RORrt进行相关性分析.结果 模型组TLR4蛋白表达较假手术组相比明显升高（P＜0.01）,应用抗TLR4抗体后表达明显减少（P＜0.01）,而同型抗体组较模型组无明显差异（P＞0.05）.与假手术组比较,模型组、抗TLR4组、同型抗体组IL-17A、IL-23蛋白及mRNA表达升高,RORrt mRNA表达升高;与模型组比较,抗TLR4组IL-17A、IL-23蛋白及mRNA表达降低,RORrt mRNA表达降低（P＜0.05或0.01）.IL-23水平与IL-17A水平呈正相关,IL-23 mRNA水平与RORrt mRNA呈正相关.结论 中和TLR4可减少IL-23、IL-17A、RORrt的表达;机制可能是中和阻断TLR4可通过降低IL-23的表达,影响Th17特异性转录因子RORrt,进而降低肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝组织Th17/IL-17A的表达.     

眼针对大鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点海马组织TNF-α表达的影响

目的 观察眼针对大鼠脑缺血再灌注后肿瘤坏死因子-α( TNF-α)蛋白表达的影响,以探讨眼针对缺血再灌注大鼠脑海马区细胞的保护作用及其作用机制.方法 健康SD大鼠,雌雄不拘,设正常对照组、假手术组、模型组、眼针组;采用改良的线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,选取眼穴肝区、肾区、上焦区、下焦区,平刺,进针3 mm,留针20 min;分别于脑缺血再灌注后3、24、72 h处死动物并取材;应用蛋白质印迹法(Western印迹)检测海马组织中TNF-α蛋白的表达.结果 眼针组海马组织TNF-α在脑缺血再灌注后3、24、72 h均较模型组明显降低,差异显著.结论 眼针疗法可以降低脑缺血再灌注模型大鼠海马组织TNF-α的表达,进而抑制由脑缺血再灌注诱导的炎症反应,发挥脑保护作用.     

Toll样受体4对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠皮质TRIF表达的影响.方法 小鼠随机分为3组,分别为假手术组和缺血再灌注组、TLR4阻断组,各组又分1、2、3、4 d 4个时间点组.采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western印迹检测皮质TLR4蛋白、干扰素-β(IFN-β)蛋白表达量,免疫组化方法检测TRIF表达变化.结果 缺血再灌注组TLR4蛋白、IFN-β和TRIF表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、IFN-β和TRIF表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05).结论 缺血再灌注可激活TLR4,并引起TRIF和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,TRIF和IFN-β表达量减少,提示TLR4通过上调TRIF表达参与脑缺血再灌注的反应机制.     

山楂叶总黄酮对脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对脑缺血-再灌注(CIR)损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,对其进行行为指标评分,TTC染色测定梗死范围,HE染色检测脑组织病理变化,透射电镜检测神经元超微结构变化,并检测大鼠脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量的变化.结果 FMCL可明显改善大鼠神经行为,缩小梗死范围,减轻脑组织病理改变,并可提高脑组织中SOD活性,降低脑组织中MDA及NO含量(P＜0.05或P＜0.01).结论 FMCL可减轻CIR神经细胞损伤,其机制可能与抗自由基损伤、减轻NO神经毒性有关.     

眼针与体针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质脑源性神经营养因子表达的影响

目的分别观察眼针与体针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨眼针疗法与体针疗法的效应差异性,为眼针疗法自成诊疗体系提供相关依据。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)再灌注模型。将SD大鼠随机分为六组,即正常对照组、假手术组、模型组、眼针穴区组、眼针穴区外组与体针组。采用Zea Longa评分法进行大鼠神经功能评分;实时定量PCR方法检测缺血再灌注3 h后脑皮质BDNF mRNA的表达;Western印迹法检测缺血再灌注3 h后脑皮质BDNF蛋白的表达。结果脑缺血再灌注3 h后,眼针穴区组和体针组大鼠神经功能缺损评分较模型组大鼠降低(P0.01),眼针穴区组与体针组相比差异无统计学意义(P0.05);眼针穴区组、体针组和眼针穴区外组较模型组大鼠脑皮质BDNF mRNA和蛋白质含量均升高(P0.01),但以眼针穴区组和体针组升高较明显,眼针穴区组与体针组比较无统计学差异(P0.05)。结论眼针与体针在改善急性脑缺血再灌注损伤中的效应相当,且两种疗法的作用机制可能与上调脑皮质BDNF表达有关。     

氯胺酮对急性肺损伤大鼠HMGB1及TLR4表达的影响

目的研究氯胺酮对急性肺损伤大鼠肺组织中高迁移率族蛋白(HMGB1)及Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法创建大鼠脓毒症致急性肺损伤模型,随机分为对照组、脓毒症组、氯胺酮组。观察建模后大鼠的一般状态。于6h、12h、24h颈椎脱臼法处死大鼠,取肺组织,HE染色显微镜下观察大鼠肺组织结构改变。RT-PCR法检测大鼠肺组织HMGB1及TLR4表达的变化。结果对照组大鼠健康正常,肺组织结构清晰;脓毒症组大鼠30min后逐渐出现肺损伤症状,肺组织结构破坏;氯胺酮组大鼠肺损伤症状轻微,组织破坏程度轻。脓毒症组与氯胺酮组大鼠肺组织HMGB1、TLR4的表达均高于对照组;随着建模时间延长,脓毒症组及氯胺酮组大鼠肺组织HMGB1、TLR4表达均逐渐升高,且氯胺酮组两者的表达均低于脓毒症组。结论氯胺酮能够减轻脓毒症所致的急性大鼠肺损伤,这可能与其降低了肺组织的HMGB1、TLR4表达相关。     

西比灵对大鼠急性脑缺血再灌注损伤自由基影响的实验研究

目的 进一步探讨西比灵对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法 采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｉ四血管闭塞法（４ＶＯ）缺备大鼠急性脑缺血再灌注模型,利用Ｔｓｕｃｈｉｄａ的ＷＰＳ法测定ＬＰＯ,利用化学发光法测定ＳＯＤ活性,并观察西比灵对上述指标的影响。结果 西比灵可降低ＬＰＯ含量,稳定ＳＯＤ活性。结论 西比灵可抑制脑缺血再灌注时脑组织内自由基的生成。     

纳洛酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的：探讨纳洛酮对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：24只Wister大鼠随机分为3组,采用腔内线栓法制备动物模型,检测纳洛酮治疗组及对照组髓过氧化物酶（MPO）含量。结果：大鼠脑缺血再灌注后脑组织MPO含量明显增加（P〈0.05）,应用纳洛酮后缺血侧脑组织MPO含量显著下降（P〈0.05）。结论：纳洛酮可以减轻脑缺血再灌注损伤,纳洛酮具有神经保护作用。     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的　从神经细胞凋亡方面研究脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法　采用线栓法建立老龄大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察脑脉通对老龄大鼠脑缺血 3h及再灌注 3h、6h、1 2h、2 4h、72h各组神经细胞凋亡及相关的Bcl 2、Bax基因表达影响 ,并与尼莫地平对照。结果　脑缺血再灌注脑组织细胞损伤明显 ,细胞凋亡显著 ,Bax表达增强。脑脉通和尼莫地平能够明显改善脑组织损伤 ,降低神经细胞凋亡。在脑缺血再灌注过程中 ,尼莫地平可使缺血 3h及再灌注 3h的Bcl 2表达增强 ,降低缺血再灌注过程中Bax表达。脑脉通可明显促进Bcl 2表达和降低Bax表达。脑脉通促进Bcl 2表达的作用明显强于尼莫地平。结论　脑脉通可以通过调控细胞凋亡相关基因Bcl 2 /Bax基因表达 ,对局灶性脑缺血 /再灌后神经元起保护作用