uPA-/-小鼠肝纤维化模型中的a-SMA、MMP13表达分析与模型评价

目的 采用uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠构建肝纤维化动物模型,经a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)与金属基质蛋白酶-13(MMP13)的表达分析,评价其可行性.方法 选取成年雄性BL/6J野生型和uPA-/-基因缺失型小鼠,分为4组:对照组(Con-WT,Con-uPA-/-)和模型组(Mod-WT,Mod-uPA-/-),每组20只.模型组小鼠腹腔注射10％ CCl4,对照组小鼠腹腔注射橄榄油,每周2次,连续6周,诱导小鼠肝纤维化.用Real-time PCR方法检测小鼠肝脏组织中a-SMA和MMP13的mRNA表达,Western blot及免疫组化分析a-SMA和MMP13的蛋白表达.结果 Real-time PCR结果显示,uPA-/-小鼠的肝脏中a-SMA、MMP 13的mRNA表达量显著高于WT小鼠;Western blot结果显示,a-SMA蛋白和MMP13蛋白在对照组小鼠肝脏中几乎不表达,在Mod-WT中有少量表达,在Mod-uPA-/-中表达明显增多;免疫组化结果显示,Mod-uPA-/-的a-SMA和MMP13表达高于Mod-WT.结论 a-SMA的mRNA和蛋白表达在uPA-/-小鼠中均明显升高,uPA基因的缺失促进了肝星型细胞向肌成纤维细胞的转化,从而加速了细胞外基质蛋白在肝脏中的沉积;MMP13蛋白表达在肝纤维化模型小鼠中均有明显升高.uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠是建立肝纤维化模型的易感品系.     

肝纤维化小鼠模型研究现状

肝纤维化是肝病领域研究的热点问题,其模型的制备有助于探究发病机理。本论文综述了目前报道的十种常用的肝纤维化小鼠模型,讨论了各自模型的成模原理、造模途径、模型效果、优缺点和用途,比较不同小鼠模型的异同,旨在为模型的选择提供依据,为肝纤维化的研究方向提供参考。     

胆总管结扎和四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的研究

目的:比较胆总管结扎(BDL)与CCl_4诱导小鼠肝纤维化的生化指标、肝脏病理学指标及α-Sma的表达。方法:60只健康雄性Bal B/C小鼠,分为CCl_4肝纤维化模型组(20只)及其对照组(10只)和BDL肝纤维化模型组(20只)及其对照组(10只)。观察小鼠一般情况,生化方法测血清ALT、TBA水平。HE和Masson染色观察肝组织的病理变化及免疫组织化学染色观察肝组织α-Sma的表达。结果:血清生化指标显示两组模型血清的ALT酶活性都明显高于对照组,肝组织的病理指标Masson染色及免疫组化检测均显示模型组的蓝色染色坏死区域明显多于对照组。结论:两种处理方法均可诱导小鼠肝纤维化,且BDL较早引起肝功能及肝纤维化指标升高。     

小鼠胆总管结扎致肝纤维化模型的建立与评价

目的:建立小鼠胆总管结扎致肝纤维化模型,并对其进行初步评价.方法:随机给予小鼠胆总管结扎和假手术,进行血清学指标(AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL)检测;HE染色和天狼猩红染色进行形态学观察;采用免疫组化染色分析α-SMA和CK-19表达;实时荧光定量PCR检测α一SMA、Collagen-1 mRNA的表达.结果:小鼠胆总管结扎后2周可见CK-19阳性的棕褐色细胞明显增生,模型组血清AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL明显增高,α-sMA、Collagen-1表达明显增强.结论:成功构建小鼠胆总管结扎致肝纤维化模型.     

叶下珠复方抗小鼠肝纤维化作用的实验研究

目的探讨叶下珠复方(PUC)对小鼠实验性肝纤维化的影响.方法经小鼠皮下多次注射CCL4,促成小鼠肝纤维化,同时给予大、中、小剂量的PUC,并以秋水仙碱做阳性对照药.给药6周后检测小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)及肝组织中的羟辅氨酸(Hyp)含量,并观察小鼠肝组织病理改变.结果 PUC各剂量组均可升高血清中SOD含量及降低其它指标的含量,并且高剂量PUC对升高SOD和降低ALT、AST、MDA、Hyp的效果优于秋水仙碱,病理观察表明PUC可减轻CCL4所致的小鼠肝组织纤维化程度.结论 PUC有抗CCL4所致的肝纤维化作用.     

叶下珠复方抗小鼠肝纤维化作用的实验研究

目的 探讨叶下珠复方（PUC）对小鼠实验性肝纤维化的影响。方法 经小鼠皮下多次注射CCL4，促成小鼠肝纤维化，同时给予大，中、小剂量的PUC，并以秋水仙碱做阳性对照药。给药6周后检测小鼠血清中的谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），总蛋白（TP），白蛋白（ALB）及肝组织中的羟辅氨酸（Hyp)含量，并观察小鼠肝组织病理改变。结果 PUC各剂量组均可升高血清中SOD含量及降低其它指标的含量。并且高剂量PUC对升高ＳＯＤ和降低ＡＬＴ，AST，MDA，Hyp的效果优于秋水仙碱，病理观察表明PUC可减轻CCL4所致的小鼠肝组织纤维化程度。结论 PUC有抗CCL4所致的肝纤维化作用。     

姜黄素联合维生素E预防大鼠肝纤维化的形态学研究

目的观察研究姜黄素（Cur）和维生素E（VE）联用预防大鼠肝纤维化的疗效。方法建立四氯化碳（CCl4）大鼠肝纤维化模型,Cur和VE及两药联用预防后观察肝左叶HE染色和Masson染色下形态学变化。结果 HE染色与Masson染色结果与模型组比较,预防组较模型组肝纤维化有明显改善,以药物联用组尤为显著。结论 Cur和VE对CCl4诱导的肝纤维化均有预防作用,两者合用预防肝纤维化效果更佳,具有协同作用。     

家兔肝纤维化模型的建立以及血清学与肝纤维化的相关性

目的 探讨血清学指标HA、PⅢP、LN、Ⅳ-C与肝纤维化程度的关系。方法 选取42只普通级家兔,建立家兔肝纤维化模型,然后进行肝纤维化血清学检查。同时取肝脏做病理学检查。数据处理应用SPSS11.0统计分析软件中的单因素方差分析进行分析,P〈0.05为有统计学意义。结果 病理学检查分别获得轻、中、重度组肝纤维化模型,肝纤维化血清学分析结果 为HA具有统计学差异（P〈0.05）。结论 在血清学检查中,以HA判断肝纤维化程度的价值较高,PⅢP、LN、Ⅳ-C的诊断价值在本试验中未得到证实。     

骨髓间充质干细胞影响CCl_4肝纤维化大鼠的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）对实验性肝纤维化大鼠的保护作用。方法从健康SD雄性大鼠股骨和胫骨骨髓中获取BMSCs。选择健康雌性SD大鼠随机分为4组,每组10只。即：1对照组：1周2次,连续6周注射蓖麻油（0.2 ml/100g）;2CCl4组：1周2次,连续6周皮下注射CCl40.2 ml/100g;3CCl4/BMSCs组：大鼠注射CCl46周后,每只大鼠尾静脉注射3×106BMSCs;4CCl4/生理盐水组：大鼠注射CCl46周后,每只大鼠尾静脉注射等体积的生理盐水。BMSCs注射4周后,化学方法检测羟脯氨酸评价肝组织纤维化程度,检测血清ALT和白蛋白水平评估肝脏功能。结果与CCl4组大鼠相比,CCl4/BMSCs组大鼠血清白蛋白含量显著升高（P〈0.05）,而肝脏氨基转移酶（ALT）并未有显著降低（P〉0.05）。组织学观察,CCl4/BMSCs组肝纤维程度显著降低。提示骨髓间充质干细胞具有明显的抗纤维化能力。结论 BMSCs分化为肝细胞后,可明显的降低肝脏纤维化过程,降低胶原纤维沉积,改善肝脏组织损伤。     

肝纤维化动物模型研究进展

肝纤维化动物模型的建立对全面研究肝纤维化的病因机制及临床肝纤维化的早期诊断、治疗及预防手段发展有重大意义。但是由于人和动物种属差异及肝纤维化的病因多样性,肝纤维化动物模型的建立还处于不断研究和探索中。本文就近期研究领域中较成熟的肝纤维化模型进行了简要综述,以供基础及临床研究参考。     

鲨肝刺激物质类似物对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:探讨重组鲨肝刺激物质类似物(r-sHSA)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法:利用腹腔注射CCl4制备小鼠急性肝损伤动物模型,以血清转氨酶活性以及组织病理变化为指标判断r-sHSA对化学性肝损伤的保护作用,并通过定量RT-PCR方法测定肝组织中相关细胞因子表达量的变化。结果:8~200μg/kg r-sHSA均可显著降低损伤小鼠血清转氨酶的活性,明显减轻肝细胞肿胀,减少中性粒细胞浸润,具有显著的肝保护作用,其机制可能与r-sHSA诱导TNF-α和肝细胞生长因子(HGF)表达,并下调TGF-β1的表达有关。结论:r-sHSA对CCl4致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与细胞因子的表达调控有关。     

傣雅解护肝方对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作斥

目的：研究傣雅解护肝方对四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝损伤模型的保护作用。方法：用傣雅解护肝方预防性给药7天后,用CCl4造模,检测造模后小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性;显微镜观察小鼠肝组织病理学变化。结果：傣雅解护肝方各剂量组能明显抑制CCl4致小鼠急性肝损伤模型A岍、AST的升高（P〈0．05）;减轻四氯化碳对肝脏细胞的病理损伤。结论：傣雅解护肝方对CCl4所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。     

肝细胞生长因子对小鼠急性肝损伤的预防和治疗作用

目的 研究肝细胞生长因子（HGF）对小鼠急性肝损伤的预防和治疗作用.方法将小鼠随机分为正常对照组、模型组、预防组和治疗组,用四氯化碳（CCl4）造成急性肝损伤模型,用肝细胞生长因子进行预防和治疗.结果 CCl4造成小鼠急性肝损伤,出现肝功能异常.预防组和治疗组的小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平均比模型组明显降低（P＜0.001）;肝细胞变性、坏死等病理损伤也均比模型组明显减轻.结论 肝细胞生长因子对四氯化碳造成小鼠急性肝损伤模型具有预防和治疗作用。     

两个品系小鼠肺纤维化模型的比较观察

目的采用气管内注射博莱霉素（Bleomycin,BLM）的方法,比较观察两个品系小鼠肺纤维化程度,确定适用的肺纤维化小鼠模型。方法BALB／c小鼠和C57BL／6小鼠分别分成模型组和对照组,模型组气管内注射博莱霉素（5mg／kg）,对照组气管内注射相同体积生理盐水。所有小鼠于造模后第28日处死,观察肺系数、肺组织病理学改变及羟脯氨酸含量的变化。结果光镜下各模型组肺组织呈不同程度纤维化,其中以C57BL／6小鼠最为明显;模型组的羟脯氨酸（HYP）含量均显著高于对照组;C57BL／6小鼠模型组肺系数及HYP明显高于BALB／c小鼠模型组。结论通过气管内注射博莱霉素,BALB／c及C57BL／6小鼠均能复制肺纤维化模型,以C57BL／6小鼠肺纤维化程度最高,获得的肺纤维化模型较为理想。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究

目的构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl4)复制模型方法进行适当改进。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A组10只、B组14只和C组16只。B组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液2 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液5 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、TP、A/G)水平;HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果实验第8周B、C组均可见明显肝功能损害表现。B组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论低剂量CCl4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。     

波棱瓜子提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究波棱瓜子乙酸乙酯提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法:建立四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝损伤模型,以测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织丙二醛(MDA)含量为指标来观察波棱瓜子乙酸乙酯提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用.结果:波棱瓜子乙酸乙酯提取物高中低剂量组均能不同程度的降低动物模型的血清ALT、AST和肝脏MDA的含量.结论:渡棱瓜子乙酸乙酯提取物对化学性肝损伤具有明显的保护作用.     

南五加皮煎剂对小白鼠四氯化碳急性肝损伤的保护作用

目的：观察南五加皮煎剂对小白鼠四氯化碳（ CCl4）化学性肝损伤的保护作用。方法将60只健康的小白鼠均分为南五加皮煎剂小、中、大剂量组,正常组及模型组;采用注射CCl4建立小白鼠急性化学性肝损伤模型,通过测定各组动物血浆丙氨酸氨基转移酶（ ALT）活性,丙二醛（ MDA）含量及肝脏系数、肝糖原含量和观察肝脏组织病理学变化,以评价肝脏损伤程度和药物的保护作用。结果南五加皮煎剂各剂量组小白鼠血浆ALT活性、MDA含量及肝脏系数均降低,肝糖原合成增加,肝脏组织病理损伤得到明显改善,且呈明显的量效关系。结论南五加皮煎剂对CCl 4致动物急性肝损伤具有良好的保护作用。     

三种肝炎模型的生化指标与病理形态学的对比研究

采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)、四氯化碳(CCl_4)和半乳糖胺(Glan)复制肝炎模型,进行血清生化指标和肝组织学的对比研究。结果证明,ANIT 复制肝炎模型能明显升高血清胆红素和谷丙转氨酶,肝细胞和胆管亦见明显损害。可用于筛选退黄和降酶药物的研究。CCl_4复制肝炎模型则以升高SGPT 为主,组织学仅见明显的肝细胞损害,可用于筛选降酶药物的研究。Glan 复制肝炎模型,生化指标和肝组织学改变均不明显,认为该模型不甚理想。