表达睫状神经营养因子的人胚肺成纤维细胞视网膜下间隙移植延缓RCS大鼠光感受器变性

目的以遗传性视网膜变性RCS大鼠为模型,探讨视网膜下间隙移植表达睫状神经营养因子(CNTF)的人胚肺(HFL)成纤维细胞治疗视网膜变性的可行性。方法通过脂质体将编码CNTF的表达质粒转入HFL成纤维细胞、MTX及ELISA筛选高水平表达CNTF的细胞克隆。手术显微镜直视下经角膜缘后1mm注射5μl含1×105个高水平表达CNTF的HFL成纤维细胞至4～5周龄RCS大鼠右眼视网膜下间隙,左眼不手术或注射PBS作为对照。分别于移植术后2、4、6、8、10、12及15周随机取1只鼠摘除眼球作光镜观察,随机取2只鼠摘除眼球作电镜观察。结果稳定转染CNTF的HFL成纤维细胞能高水平表达CNTF(91046.15pg/ml),7只经光镜观察的移植眼中的4只,其视网膜外颗粒层明显较对照眼厚,保存的光感受器数量明显较对照眼多(P≤0.002)。14只经电镜观察的移植眼中的10只,视网膜外颗粒层光感受器凋亡明显较对照眼少。在光感受器与视网膜色素上皮间堆积的盘膜碎片亦较少。宿主视网膜色素上皮细胞的形态保存较好,并可见吞噬小体。结论经过CNTF基因修饰的HFL成纤维细胞视网膜下间隙移植能够延缓RCS大鼠视网膜光感受器变性     

视网膜下移植睫状神经营养因子编码基因修饰的细胞保护SD大鼠视神经横断伤后视网膜节细胞变性

目的探讨移植表达睫状神经营养因子(CNTF)的细胞对SD大鼠视神经横断伤后视网膜节细胞的保护作用。方法通过脂质体将CNTF表达质粒转移至人胚肺成纤维细胞,建立稳定、高水平表达CNTF的细胞株。采用双侧背外侧膝状体及上丘核团注射3%荧光金逆行标记视网膜节细胞。将标记后的大鼠分为两组,于标记后7d手术切断眶内段视神经其中一组左眼不做手术作为正常对照组,右眼切断视神经作为手术对照组;另一组双眼均手术切断视神经,左眼注射PBS作为治疗对照组,右眼视网膜下移植表达CNTF的细胞作为实验组。术后5、14、17、21及28d取出眼球,铺片后荧光显微镜观察并计数视网膜内存活的节细胞。结果手术切断眶内段视神经后2周,视网膜内节细胞数减少6744%,视网膜下移植表达CNTF的细胞后第5、17、21d视网膜内存活的节细胞数明显多于治疗对照组(P<005)。结论视网膜下移植高水平表达CNTF的细胞对视网膜节细胞有保护作用。     

视网膜移植治疗视网膜色素变性的研究进展

视网膜色素变性（ＲＰ）是一种遗传性眼病,目前尚无切实有效的治疗方法,视网膜移植是最有前景的治疗措施。本就视网膜移植治疗视网膜色素变性的方法学、免疫学、解剖学及临床研究进展作一综述。     

睫状神经营养因子对视网膜保护作用的研究进展

睫状神经营养因了（CNTF）可诱导视网膜神经细胞分化，减少神经细胞凋亡和促进细胞再生。CNTF能促进轴突切断和视网膜缺血后RGCs的存活和轴突生长，减少视网膜色素变性动物模型的光感受器存活，为治疗视网膜缺血性损伤、神经退行性病变等视网膜疾病提供了可能。本就CNTF及其受体的分子结构、组织分布、基因结构及其表达调控和CNTF对视网膜作用的研究进展作一综述。     

睫状神经营养因子对视网膜色素变性中感光细胞的作用

遗传性视网膜色素变性类疾病是人类的主要致盲眼病之一,目前尚无有效阻止病变进展和恢复视网膜功能的治疗方法.此类疾病的最后结果是感光细胞不可逆的凋亡.阻断感光细胞走向凋亡的进程是近年来研究的热点.在大量的体内外实验中发现,很多神经生长因子对遗传性视网膜色素变性类疾病有一定的治疗作用,其中睫状神经营养因子保护感光细胞、延缓感光细胞凋亡的作用颇受关注.本文就近年来睫状神经营养因子对视网膜色素变性疾病中感光细胞的作用研究作一综述.     

细胞因子对视网膜变性疾病防治作用的研究进展

视网膜变性疾病是严重的致盲性眼病,感光细胞的凋亡是其主要表现。细胞因子是机体组织细胞合成和分泌的小分子多肽类因子,参与多种细胞生理功能的调节,减少细胞的凋亡。随着对各种细胞因子,特别是神经营养因子作用机理的不断阐明,越来越多的研究发现外源性的给予或内源性的诱发其表达,对于变性视网膜光感受器的保护是有积极作用的。本文将近年来用于视网膜变性疾病方面研究的神经营养因子和部分非神经营养因子类细胞因子,包括神经生长因子、睫状神经营养因子、脑源性神经生长因子、碱性成纤维生长因子、神经营养因子-3、促红细胞生成素等作一综述。     

睫状神经营养因子对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞突起再生的影响

目的观察睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）突起再生的影响。方法取新生SD大鼠视网膜，消化并利用筛网纯化后接种于96孔板，加入不同浓度（10μg·L-1、20μg·L-1、30μg·L-1、40μg·L-1）CNTF作为实验组，不加CNTF作为对照。根据细胞形态及免疫细胞化学的方法鉴定细胞，观察RGCs生长规律，观测随机选取视野下的RGCs数和有突起细胞数（400倍荧光显微镜和相差显微镜）。结果 纯化的RGCs在含体积分数20％胎牛血清DMEM培养液中可存活30d。加入CNTF后3~5d，40μg·L-1组突起率显著高于对照组（P〈0.05）。7~15d，20μg·L-1、30μg·L-1、40μg·L-1组突起率显著高于时照组（P〈0.05），30μg·L-1、40μg·L-1组突起率显著高于10μg·L-1、20μg·L-1组（P〈0.05）。结论CNTF能显著促进RGCs突起再生，CNTF的浓度和突起率存在量效关系，一定浓度范围内．高浓度CNTF可较早促进突起再生。     

视网膜色素变性的视网膜移植治疗

视网膜色素变性是一种遗传性致盲性眼病,发病率较高,危害性较大。临床上治疗方法很多,但尚无一种理想有效的方法。传统中医治疗,药物治疗,近几年兴起的基因治疗及视网膜移植治疗各有特点。其中视网膜移植治疗是近几年研究的热点,并且被认为是最有前景的治疗措施。现就视网膜移植治疗视网膜色素变性的相关研究进展作一综述。     

睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的 观察不同浓度睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)对培养大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell，RGC）生长、存活的影响。 方法 取15只生后2～3d Wistar大鼠视网膜组织进行细胞培养，通过Thy-1单克隆抗体免疫细胞化学对培养的RGC进行鉴定。实验分对照组和10、20、40 ng/mlCNTF组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组），记录RGC存活时间，将培养第3、5、7天的RGC行四甲基偶氮唑盐（methylthio tetrazole,MTT）法测量吸光度(A)值［旧称光密度(OD)］。 结果 Thy-1单克隆抗体免疫组织化学检查显示培养3d的存活细胞90%以上为RGC。细胞存活期间实验组与对照组细胞均无明显突起,细胞体积无明显增大，实验组细胞存活时间比对照组长3~4d。培养第5、7d，Ⅰ组A值分别为0.075 8±0.0139、0.0693±0.0113，Ⅱ组A值分别为0.0902±0.0114、0.0825±0.0125，Ⅲ组A值分别为0.0792±0.0133、0.0653±0.0086，对照组A值分别为0.0620±0.0071、0.0513±0.0068。实验组与同时间对照组A值相比差异有显著性的意义（Ⅱ组与对照组相比P＜0.01，Ⅰ、Ⅲ组与对照组相比P＜0.05）。 结论 一定浓度的CNTF能促进培养大鼠RGC的存活，对RGC形态无影响。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 283-285)     

细胞凋亡与视网膜变性

细胞亡是细胞的一种特殊方式，不同于细胞死亡，它既可以是生理性的，也可以是病理的性，文中阐述了细胞凋亡的基本概念，分子生物学特点，凋亡与坏死的区别，及其在视网膜退行性病变听原关联。     

睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压眼视网膜神经节细胞的保护作用

背景 青光眼可以引起视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡,据报道睫状神经营养因子(CNTF)对外伤性视神经损伤有修复作用,其是否对青光眼视神经病变有保护作用尚少见报道. 目的 观察CNTF对大鼠急性高眼压眼RGCs的保护作用.方法 24只Wistar大鼠双眼采用眼前房平衡盐液加压灌注法建立大鼠急性高眼压模型,造模前2d左眼玻璃体内注入0.5μg CNTF 5μl,右眼以同样的方法注射磷酸钠溶液5μl,另取3只正常大鼠作为正常对照.造模后1、3、7、14 d过量麻醉法处死动物并摘除眼球,制备视网膜组织学切片后采用苏木精-伊红染色法进行形态学观察,光学显微镜下计数RGCs数目;采用免疫组织化学染色法观察RGCs层谷氨酸的表达情况.结果 正常对照组大鼠视网膜各层排列整齐,细胞边界清晰;模型对照组大鼠RGCs细胞膜、细胞核均发现异常改变,有细胞空泡样变;CNTF治疗组大鼠造模后变性的RGCs数量少.与模型对照组比较,造模后3、7、14 d CNTF治疗组RGCs数目明显增加,差异均有统计学意义(均P=0.000).免疫组织化学染色表明,造模后3～7d,CNTF治疗组RGCs层谷氨酸阳性细胞数分别为(5.50±1.04)个／3个高倍视野和(6.00±1.41) 个/3个高倍视野,明显低于模型对照组的(9.00±2.91)个／3个高倍视野和(10.83±1.94)个／3个高倍视野,差异均有统计学意义(均P=0.000),而造模后1d和14 d两组间谷氨酸阳性细胞数的差异均无统计学意义(P=0.578、0.180).结论 CNTF能够下调急性高眼压眼谷氨酸在RGCs中的表达,从而对RGCs提供保护作用.     

视神经损伤时视网膜睫状神经营养因子受体的表达

目的研究睫状神经营养因子受体于视神经损伤后不同时间在视网膜中的表达情况,探讨外源性的睫状神经营养因子在神经损伤疾病中的应用价值。方法采用钳夹视神经的方法建立神经损伤的模型,在损伤后1、7、14、28d获取视网膜,提取总RNA及总蛋白,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定视网膜中睫状神经营养因子受体(CNTFR)αmRNA的表达,用WesternBlot方法了解损伤后不同时间CNTFRα蛋白水平的表达。结果在正常大鼠视网膜内CNTFRαmRNA无表达,在损伤后的1、7、14、28d均有一定水平的CNTFRαmRNA的表达,与正常对照比较差别具有显著性意义(P<0.01);损伤后备时间均有CNTFRα蛋白的表达,但CNTFRα蛋白的表达较弱。结论神经损伤后CNTF的表达先短暂升高以后持续下调,而CNTFRα-mRNA在损伤后4周内均有一定量的表达,提示补充外源性CNTF可能改善神经再生的微环境而发挥保护效应。     

视网膜感光细胞的药物干预研究

视网膜变性疾病累及感光细胞，以感光细胞的渐进性凋亡以及死亡为结局。对感光细胞进行药物干预是治疗这类疾病的一种方法和途径。多种神经营养因子有保护感光细胞，延缓其凋亡的作用；牛磺酸是一种条件必需氨基酸，在视网膜感光细胞的发育和分化过程中起重要作用；DHA是唯一能减少感光细胞凋亡数目的多不饱和脂肪酸；多种维生素以及一些蛋白质也对感光细胞有保护作用。本就这些物质单独和／或联合干预感光细胞作用研究现状及进展作一介绍。     

视网膜变性疾病基因治疗的研究进展

分子生物学的进展为基因治疗视网膜变性疾病开拓了良好的应用前景,但目的基因的有效转染和长期表达等问题亟待解决,对有丝分裂后的视网膜感光细胞,解决这一问题就显得更为迫切。本文在阐述这些问题的研究现状的基础上对感光细胞的转基因营救及基因修饰的神经前体细胞回体移植的应用前景作一综述。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 268-270)     

色素上皮细胞移植治疗视网膜变性疾病:问题与展望

近年来对色素上皮细胞移植如PRE移植、自体虹膜色素上皮细胞移植以及干细胞移植等作为视网膜变性疾病的再生性疗法进行了许多研究,为视网膜变性疾病开辟新的治疗途径。色素上皮细胞移植治疗更能直接地解决视网膜的局部问题。然而,多数方法尚处在实验和试验阶段及存在不足与风险,其手术适应证、手术方法、供体细胞来源、伦理问题、移植后细胞存活、免疫、生理功能等多种问题均亟待深入研究。     

视网膜的细胞移植

随着神经生物学的迅速发展，神经的移植及再生问题成为生命科学的一大研究热点，近年来开展的视网膜移植技术也取得了较大的进展。本综合阐述了最近在视网膜的色素上皮及感光细胞移植方面的研究进展，这些就成为眼底疾病的治疗提供了更为广阔的前景。     

CNTF和Ad-BDNF对视神经夹伤后视网膜神经节细胞存活的影响

目的:观察大鼠视神经夹伤后玻璃体腔内注射睫状神经营养因子(CNTF)和腺病毒介导脑源性神经营养因子(Ad-BDNF)对视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGC)存活的影响。方法:制作大鼠视神经定量夹伤模型,玻璃体腔内注射CNTF和Ad-BDNF,经上丘荧光金(FG)逆行标记RGC,计数视网膜铺片上的RGC并行统计学分析。结果:正常SD大鼠视网膜上RGC密度为2155±265个/mm2(n=12),视神经夹伤后RGC在1~2wk内下降速率最快,到3,4wk时RGC细胞数量虽仍有减少但下降速度已经明显减慢。CNTF组在视神经夹伤后1wk时视网膜RGC数显著高于对照组,但2~4wk的结果和对照组比较差异不明显。Ad-BDNF组视神经夹伤后1~4wk视网膜RGC数均显著高于对照组。结论:CNTF治疗组玻璃体腔内一次性注射CNTF可以在损伤早期2wk内为损伤的RGC提供神经营养因子,减少RGC的早期死亡。Ad-BDNF治疗组的这种保护作用可以持续到损伤后4wk,能够为RGC提供长时间地营养支持,但这种作用比较局限,可能与单一营养因子作用有关。     

退行性视网膜病变中睫状神经营养因子神经保护作用的研究进展

多项体内外及临床试验结果均证实睫状神经营养因子(CNTF)对光感受器细胞具有良好的神经保护作用,同时也对视网膜多种神经细胞的结构和功能产生不同的影响.CNTF对光感受器细胞保护作用的分子机制涉及Stat、Erk及Akt等信号传导途径,其中Müller细胞发挥着重要作用.细胞包囊技术为CNTF提供了有效的给药途径,在多种退行性视网膜病变的动物模型中均取得良好疗效,其临床应用中的安全性和有效性正在进行评估,这将为CNTF进入临床应用奠定基础.(中华眼科杂志,2011,47:568-572)

Abstract：

Ciliary neurotrophic factor (CNTF) has been showing neuroprotective effects on photoreceptors in a variety of in vivo and in vitro experiments and clinical trials. CNTF causes morphological and functional alterations in various retinal nerve cells. The neuroprotection mechanism of CNTF involves STAT-dependant, ERK-dependant, and Akt-dependant signaling technology (ECT) device is an efficient administration approach to deliver CNTF into the eyes, which is effective in retarding photoreceptor degeneration in several animal models with retinal degenerative diseases. The safety and efficiency of the device in clinical trials are also being evaluated currently for further clinical use in human eyes as a potential treatment.     

小鼠光性损伤后视网膜神经上皮层移植的初步探讨

目的 探讨光性损伤后视网膜光感受器能否被拯救的可能性。方法 用自制的光损伤箱建立网膜光性损伤的小鼠模型,将光照后的６０只小鼠分为２组,Ⅰ组２０只为光损伤组,Ⅱ组４０只为移植组,又将Ⅱ组分为ⅡＡ组２０只鼠和ⅡＢ组２０只鼠,分别于光性损伤后２０ｈ和１周上经路方法行视网膜神经上皮层移植,分别于术后６、１２、１８及３０天时处死受体鼠,用光镜检查移植物是否能救光性损伤后受体鼠视网膜的光感受器。结果 Ⅰ组,可     

视网膜小胶质细胞参与糖尿病视网膜神经变性的分子机制研究进展

糖尿病视网膜神经变性(DRN)是由高血糖引起的视网膜神经血管单位破坏和血视网膜屏障功能障碍的一类疾病,神经元凋亡是该疾病的主要特征,可造成患者与视觉相关的生活质量下降。视网膜小胶质细胞(RMC)是视网膜胶质细胞的主要种群之一,主要参与视网膜神经元的发育,并维持视网膜神经元的功能。已有研究表明RMC的功能改变与DRN密切相关,靶向RMC可减少视网膜神经元损伤并减缓DRN的发生发展。本文就RMC参与DRN及其调控靶点和治疗药物展开综述,以期提供更多有效的防治策略。