E1A基因对裸鼠移植瘤化疗增敏的实验研究

目的 探讨E1A基因对人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤化疗的增敏作用及其相关作用机制.方法 通过E1A基因对裸鼠移植瘤化疗增敏实验,观察E1A基因对裸鼠移植瘤化疗敏感性的影响;采用RT-PCR鉴定E1A在肿瘤细胞中的表达及E1A转染后对HER-2/neu基因表达的影响.结果 E1A基因化疗增敏实验结果显示:E1A基因组裸鼠肿瘤体积缩小最明显,肿瘤重量明显小于对照组及空载体组(均P＜0.05);而后两组差异无显著性(P＞0.05).RT-PCR结果显示:E1A基因在宫颈癌细胞中能稳定表达并且显著降低HER-2/neu在宫颈癌细胞中的表达水平.结论 E1A基因能够显著增加紫杉醇对裸鼠移植瘤的药物敏感性.该作用机制可能与E1A基因降低HER-2/neu蛋白的表达有关.     

TNF—α对鼻咽癌放射增敏的体内实验研究

目的探讨TNF—α对鼻咽癌放射敏感性的影响。方法裸鼠体内移植瘤实验观察CNE-2Z、H5、S1放射后的体内增殖能力,采用HE染色观察各组裸鼠移植瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率,免疫组织化学染色和图像分析法检测不同方法处理的s1裸鼠移植瘤组织中Caspase-3和Survivin的表达。结果鼻咽癌细胞CNE-2Z存在放射敏感性异质性,S1细胞是具有放射抵抗潜能的亚克隆株。TNF-α联合放射治疗对s1裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用（P〈0．01）,TNF—α联合放射治疗组中瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率与生理盐水联合放射治疗组比无明显差异（P〉0．05）。TNF—α联合放射治疗组S1裸鼠体内移植瘤细胞核中Caspase-3表达高于单独TNF—α处理组（P〈0．05）;各组S1裸鼠移植瘤细胞浆中Caspase-3及Survivin的表达无明显差异（P〉0．05）。结论TNF—α联合放射治疗可能通过影响胞核中Caspase-3表达抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长。     

非小细胞肺癌组织Survivin和Caspase基因表达及其关系

目的 探讨Survivin和Caspase-3基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其相互关系.方法 应用免疫组织化学等技术与方法检测74例NSCLC组织细胞中Survivin和Caspase-3基因的表达.结果 在NSCLC组织细胞中,Survivin基因表达率为64.9%(48/74),其表达与NSCLC TNM分期、淋巴结转移和细胞分化程度密切相关(X2=5.00～5.20,P<0.05);Caspase-3基因表达率为55.4%(41/74), 其表达与淋巴结转移密切相关(X2=5.98,P<0.05);在NSCLC组织细胞中,Survivin基因表达与Caspase-3基因表达呈高度负相关(r=-0.404,P<0.01).结论 在NSCLC组织细胞中,Survivin基因表达上调,Caspase-3基因失活或低表达;Survivin结合激活的Caspase-3,抑制其活性,阻止细胞凋亡;Survivin基因表达预示肺癌组织有较高的侵袭性和预后不良.     

裂果薯皂苷Ⅰ抗人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤的作用机制研究

目的：探讨裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHI)对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤模型,成瘤裸鼠随机分为模型组、吉西他滨（GEM）组、SSPHI低剂量组（SSPHI-L）组、SSPHI中剂量（SSPHI-M）组和SSPHI高剂量（SSPHI-H）组,连续给药15 d后取瘤组织,测量肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;苏木精-伊红（HE）染色法观察人胰腺癌移植瘤组织病理形态变化,TUNEL染色观察肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法测定裸鼠移植瘤Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达。结果：与模型组相比,SSPHI低、中、高剂量组和GEM组移植瘤体积和瘤重均降低,细胞凋亡率升高（P<0.01）,移植瘤组织Caspase-9、Caspase-3和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论：SSPHI可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,诱导移植瘤细胞凋亡有关。     

新城疫病毒作用下卵巢癌裸鼠移植瘤Survivin、Caspase-3的表达

目的研究新城疫病毒（Newcastle diseasevirus,NDV）对卵巢癌裸鼠移植瘤Survivin、Caspase-3表达的影响。方法①细胞培养：人卵巢癌细胞SKOV-3细胞的培养;②建立裸鼠移植瘤模型;③实验分组：分为实验组与对照组,实验组为肿瘤内注射NDV病毒抗卵巢癌;④应用免疫组化SP法观察Survivin、Caspase-3的表达。结果Survivin表达实验组与对照组均为阳性,实验组明显弱于对照组,差异有显著性（P〈0．05）;Caspase-3表达实验组均为阳性,对照组1例表达,实验组明显强于对照组,差异有显著性（P〈0．05）。结论NDV可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制其生长;其机制可能通过激活Caspase-3凋亡,抑制Survivin抗调亡作用。     

三氧化二砷对人恶性黑素瘤A375细胞抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑素瘤A375细胞的生长抑制作用,以及对Caspase-3活性表达以及肿瘤细胞凋亡的影响,为临床治疗恶性黑素瘤提供理论和实验依据。方法:将不同浓度的As2O3作用于人恶性黑素瘤A375细胞,荧光染色观察A375细胞的凋亡变化,流式细胞术检测A375细胞的凋亡率;用免疫组织化学染色法检测不同浓度As2O3作用于A375细胞后Caspase-3蛋白的表达;半定量RT-PCR法检测Survivin蛋白的表达。结果:荧光染色后镜下可见As2O3可致A375细胞的细胞核呈致密浓染的不规则黄绿色颗粒状或块状荧光的凋亡现象;As2O3能诱导A375细胞的凋亡,用5、10、20μmol/L的As2O3诱导A375细胞24 h:检测其细胞的凋亡率依次为7.07%、38.66%和4.34%,可诱导Caspase-3蛋白的表达,抑制Survivin蛋白的表达。结论:As2O3能致A375细胞形态改变,诱导细胞凋亡;As2O3可诱导A375细胞表达Caspase-3蛋白,抑制Survivin蛋白的表达。     

葡萄籽原花青素对人卵巢癌裸鼠移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨葡萄籽来源的原花青素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤增殖和凋亡的影响和机制.方法 建立24只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,分成3组(n=8):原花青素高浓度组(200 ms/kg)、原花青素低浓度组(100 mg/kg)、空白对照组.观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况,HE染色观察肿瘤细胞形态,流式细胞分析细胞凋亡,RT-PCR,Westernblot检测肿瘤细胞Bax,Caspase-3在RNA及蛋白水平的表达情况.结果 原花青素处理组皮下移植瘤抑瘤率分别为34.303%、28.594%,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05);治疗组肿瘤细胞出现明显的凋亡形态学变化,流式细胞检测治疗组肿瘤细胞凋亡率分别为67.965%,24.650%;原花青素还可以明显增高Bax、Caspase-3 RNA和蛋白的表达,且呈浓度依赖性.结论 葡萄籽原花青素对卵巢癌皮下移植瘤生长有抑制作用,并促进其凋亡,其作用可能通过增强Bax、Caspase-3的表达而实现.     

槲皮素与顺铂对人膀胱癌裸鼠移植瘤抑瘤作用的研究

目的 观察槲皮素（Quercetin）与顺铂(Cisplatin, DDP)联用对膀胱癌 BIU-87 细胞的BALB/ c 裸鼠移植瘤生长的抑制作用,检测移植瘤中 Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达水平及肿瘤细胞凋亡指数,探讨其作用机制。方法 建立膀胱癌细胞株BIU-87裸鼠移植瘤模型并随机分成4组：对照组（A组）、顺铂组（B组）、槲皮素组（C组）、槲皮素+ 顺铂组（D组）。治疗间观察移植瘤体积和裸鼠体重的变化,第15天后将移植瘤完整取出,称瘤重,计算抑瘤率,并用免疫组织化学技术检测各组移植瘤组织中Bcl-2, Caspase-3 和 PCNA 的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 B 、C、 D各用药组肿瘤的生长受到明显抑制,瘤体质量明显低于A组,其抑瘤率分别为46.10 %、 39.17 %、 64.09 %, 联合用药组抗瘤作用进一步增强。Bcl-2和PCNA的表达在A组高于 B、C、D 组,Caspase-3 表达在A组明显低于 B、 C、 D 组,各用药组与对照组相比差异均有统计学意义( P < 0. 05);肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对照组明显提高,差异有统计学意义( P < 0. 05)。结论 槲皮素和顺铂均可明显抑制膀胱癌细胞在小鼠体内的生长作用,两药联合应用的抑瘤效果优于两药单用。其作用机制可能是通过调控肿瘤中 Bcl-2和 Caspase-3 的表达,也可能通过调节 PCNA 的表达,从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

Survivin-shRNA 对A431 皮肤鳞状细胞癌 抑制作用的实验研究

目的 观察Survivin-shRNA 对A431 皮肤鳞状细胞癌的作用效果，探讨核因子κB（NF-κB）在 Survivin-shRNA 对皮肤鳞状细胞癌（SCC）抑制作用中的分子生物学机制。方法 构建Survivin-shRNA 腺病 毒载体，筛选最佳干扰序列。将培养好的A431 细胞混悬液皮下接种于裸鼠，复制A431 裸鼠移植瘤模型，随机 分为空白对照组、阴性对照组、Survivin-shRNA 转染组和Res 阳性对照组，每组5 只，瘤内注射相应试剂，第 20 天处死所有裸鼠，取瘤组织分别测量瘤体积、瘤重，绘制肿瘤生长曲线，计算抑瘤率；HE 染色观察细胞形 态；TUNEL 检测细胞凋亡情况；Western blot 法测定Survivin、IκB、P65、P53、Caspase-3 蛋白的表达。结果 Survivin-shRNA 转染组或Res 阳性对照组的裸鼠移植瘤，瘤体积及瘤重降低，与空白对照组及阴性对照组比 较差异有统计学意义（P <0.05）；TUNEL 检测结果示Survivin-shRNA 转染组、Res 阳性对照组的裸鼠移植瘤， 细胞凋亡率增高，与空白对照组及阴性对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）；Survivin-shRNA 转染组及 Res 阳性对照组可见肿瘤细胞较少，分布稀疏，有变性的液化坏死灶，癌细胞皱缩变圆，胞核固缩；SurvivinshRNA 转染组或Res 阳性对照组裸鼠移植瘤，Survivin、P65 蛋白的表达均降低，与空白组对照组及阴性对照组 比较，差异有统计学意义（P <0.05），IκB、P53、Caspase-3 蛋白表达增高，与空白对照组及阴性对照组比较， 差异有统计学意义（P <0.05）。结论 Survivin-shRNA 可以抑制皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的生长，其机制 之一可能是通过抑制NF-κB 信号通路，活化抑癌基因P 53，进而促进肿瘤细胞凋亡，抑制SCC 移植瘤的生长。     

奥曲肽对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤凋亡的影响

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对裸鼠人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法建立人肝癌细胞株BEL-7402裸鼠移植瘤模型,实验组皮下注射OCT100μg/kg.d-1,对照组给予相同容积的无菌生理盐水皮下注射,免疫组织化学染色检测OCT作用后裸鼠人肝癌BEL-7402组织中Bcl-2、Bax表达情况的改变,透射电镜观察OCT作用后裸鼠人肝癌BEL-7402组织超微结构的改变。结果 OCT作用后,移植瘤组织中凋亡抑制基因Bcl-2阳性表达率比对照组明显下降（P〈0.05）,凋亡促进基因Bax阳性表达率比对照组显著升高（P〈0.05）。电镜下可见OCT组移植瘤细胞表面微绒毛减少或消失,凋亡细胞多见等改变。结论 OCT能引起人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤组织中凋亡基因Bcl-2及Bax的表达发生改变,诱导组织细胞发生凋亡;OCT能引起裸鼠人肝癌BEL-7402组织超微结构发生典型的凋亡改变。     

Survivin基因在膀胱癌中的表达及其与Bcl-2 和Caspase-3基因表达的相关性

目的探讨Survivin基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其与Bcl-2和Caspase-3表达的相关性。方法应用免疫组化（sP法）检测40例膀胱癌组织中Survivin、Bcl-2和Caspase-3基因的表达。结果在40倒膀胱癌患者中，Survivin基因的阳性表达率为67．5％，Bcl-2和Caspase-3的阳性表达率分别为52．5％和45％。Survivin的阳性表达与膀胱癌的恶性程度、病理分级、是否复发、Bcl-2和Caspase3蛋白的阳性表达密切相关伊〈0．05），而与年龄、性别、肿瘤的临床分期无明显相关性。结论Survivin基因在膀胱癌的恶性程度、肿痛转移及预后等方面有较大的意义。Survivin基因表达抑制了Caspase-3的活性；Survivin与Bcl-2可能在调控肿瘤凋亡中的起协同作用，而若在膀胱癌中检测到Survivin和Bcl-2的表达，预示肿瘤的恶性程度较高，术后转移和复发的可能性较大，应密切观察病情进展。     

莱菔硫烷对食管癌细胞凋亡以及Caspase-3和Survivin表达的影响

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对食管癌细胞凋亡的影响以及能否影响细胞凋亡蛋白酶（Caspase）-3和存活素（Survivin）的表达。方法培养食管癌细胞EC9706,用10—50μM的SFN处理后,流式细胞分析术检测细胞的凋亡情况以及Caspase-3和Survivin的表达水平。结果10～50μM的SFN能明显促进EC7906细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性,同时,SFN还能促进Caspase-3的表达和下调Survivin水平。结论SFN可能通过促进肿瘤细胞凋亡和增加Caspase-3的水平,抑制Survivin表达而实现抗肿瘤效应的。     

双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞体内生长及Caspase-3表达的影响

目的：研究双氢青蒿素（DHA）对前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤生长的抑制作用及对半胱天冬酶_3（Caspase-3）表达的影响,并探讨其可能的作用机制．方法：采用人前列腺癌PC·3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机分为对照组,二甲基亚砜（DMSO）溶剂组,DHA0．1,0．2mmo/kg组．各组经13d干预后,计算抑瘤率;光镜及电镜观察肿瘤组织形态学变化,以Hoechst33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3的表达水平．结果：DHA0．1,0．2mmol／kg组瘤质量明显〈对照组及DMSO溶剂组（P〈0．05）,DHA0．1,0．2mmol／kg组抑瘤率分别为69．221％,63．186％．光镜及电镜可观察到典型的凋亡细胞和凋亡小体;Hoechst33258染色可见DHA0．1,0．2mmol／kg组凋亡细胞明显增多,其凋亡细胞密度显著增大（P〈0．05）;免疫组化结果显示,DHA0．1,0．2mmol/fkg组Caspase-3表达明显升高（P〈0．05）．结论：DHA能够抑制前列腺癌PC．3细胞裸鼠种植瘤的生长,其机制可能与上调凋亡相关基因Caspase-3表达有关．     

卵巢原发癌和转移癌中Survivin的表达与Caspase-3、血管内皮生长因子的相关性研究

目的探讨凋亡抑基因Survivin mRNA在卵巢原发癌和转移癌中的表达及其与凋亡终末效应器(Caspase-3mRNA)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性。方法应用原位杂交技术检测Survivin mRNA、Caspase-3mRNA、免疫组化S-P法检测VEGF蛋白在卵巢正常组织、良恶性肿瘤中的表达。结果Survivin、Caspase-3、VEGF在卵巢正常组织、良性肿瘤与卵巢恶性肿瘤(原发癌和转移癌)中的表达比率均有统计学意义P<0.01。3种基因表达在卵巢原发癌中与临床分期有关,VEGF表达与淋巴结转移有关。统计学分析显示:Survivin与Caspase-3的表达呈负相关关系P<0.01,r=-0.434,Survivin与VEGF的表达呈正相关关系P<0.05,r=0.317。结论Survivin、VEGF在卵巢原发癌和转移癌中高表达,与临床分期关系密切,可能参与卵巢恶性肿瘤的发生发展和转移,是重要的预后因子。Caspase-3在卵巢恶性肿瘤中低表达,与Survivin的负相关关系提示,Survivin在肿瘤凋亡过程中承担其重要作用。VEGF的过表达对探讨卵巢恶性肿瘤血管形成机制及对肿瘤血管生成的治疗具有重要价值。     

重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌荷瘤裸鼠的治疗研究

目的 探讨重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌移植模型的治疗作用.方法 裸鼠皮下接种MCF-7人乳腺癌细胞,建立人乳腺癌移植模型.用质粒PGL3-DF3-DTA,质粒PGL3-DF3和生理盐水分别给裸鼠移植瘤瘤内多点注射.观察肿瘤大小和组织形态学变化,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡改变.结果 重组质粒PGL3-DF3-DTA组裸鼠乳腺癌生长受到明显抑制,抑制率为50.08%,肿瘤细胞的凋亡率增加.结论 重组质粒PGL3-DF3-DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的生长具有明显抑制作用,为乳腺癌基因治疗提供了新的方法.     

加味茵陈蒿汤抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的机制

目的:观察加味茵陈蒿汤对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响。方法:建立人肝癌裸鼠皮下移植模型,随机分为生理盐水组、加味茵陈蒿汤组各8只,比较各组裸鼠瘤质量情况,流式细胞学技术检测各组瘤体细胞凋亡的分布、线粒体膜电位的分布、Caspase-3和Caspase-9的分布;透射电镜检测各组瘤体细胞形态;蛋白印迹法检测各组瘤体线粒体凋亡相关蛋白的表达。结果:加味茵陈蒿汤组的平均瘤质量均低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞学技术检测显示:加味茵陈蒿汤组干预的皮下移植瘤的凋亡率高于生理盐水组、加味茵陈蒿汤组发生线粒体膜电位的比率高于生理盐水组、加味茵陈蒿汤组的Caspase-3和Caspase-9的活性均高于生理盐水组,差异均有统计学意义(P<0.05)。透射电镜显示:加味茵陈蒿汤组皮下移植瘤细胞出现细胞浆肿胀、凋亡。Western blot检测分析显示:加味茵陈蒿汤干预后的肿瘤组织中Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白的表达水平明显上升,Bcl-2和Bcl-x蛋白的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味茵陈蒿汤可抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长,其作用机制可能通过活化线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡而实现。     

Survivin反义寡核苷酸诱导人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的研究

目的研究survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其诱导人胃癌移植瘤凋亡的分子生物学机制。方法建立SGC-7901胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,即survivin-ASODN+脂质体组、survivin-ASODN组、脂质体组和空白对照组(蒸馏水)。瘤体内隔日给药,停药后48小时处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。western-blot法检测各组凋亡相关蛋白survivin、Caspase-3蛋白的表达。结果 survivin-ASODN+脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为:33.19%。survivin-ASODN+脂质体组的survivin蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05),Caspase-3蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论 survivin反义寡核苷酸转染胃癌移植瘤能够明显抑制肿瘤生长,其主要机制与降低survivin蛋白的表达,诱导Caspase-3高表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关。