叶酸通过下调ERK1/2信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探讨叶酸(folic acid,FA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:取SD大鼠的主动脉,采用组织贴块法培养VSMCs,随机分组进行实验。采用CCK-8和Ed U法检测叶酸对VSMCs活力和增殖能力的影响。采用划痕实验和Transwell法检测叶酸对VSMCs迁移和侵袭的影响。采用Western blot法检测细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白表达以及血小板源性生长因子受体(PDGFR)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的磷酸化水平。结果:叶酸抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导的VSMCs的活力,并呈浓度依赖性(P0.05)。叶酸抑制PDGF诱导的VSMCs的迁移,并呈浓度依赖性(P0.05)。叶酸降低PCNA表达和PDGFR磷酸化水平,并抑制PDGF激活的ERK1/2信号通路。结论:叶酸降低PDGF诱导的VSMCs PCNA和p-PDGFR蛋白水平,下调ERK1/2信号通路,从而抑制VSMCs的增殖和迁移。     

ERK信号通路参与调控周期性张应变诱导的人牙周膜细胞增殖

目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞 （human periodontal ligament cell , hPDLCs ) 增殖的影响及其相关机制。方法 应用FX-4000T 细胞应变加载系统,对体外培养的人牙周膜细胞施加周期性张应变,幅度分别为10 % 和20 %,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组。Western blot 法检测细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞内信号转导分子p-ERK1/2表达的变化。用ERK1/2的特异性抑制剂PD 98059预处理细胞后,在0.1 Hz,10 % 幅度条件下,加载6 h,检测p-ERK1/2的表达水平变化对细胞PCNA表达的影响。 结果 与静态组相比,周期性张应变诱导人牙周膜细胞的PCNA和p-ERK1/2表达增加,10 % 幅度和20 % 幅度相比无显著性差异。同一幅度张应变,加载6 h和24 h对细胞PCNA和p-ERK1/2表达的影响无显著性差异。ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2 活化,而且张应变诱导的细胞PCNA表达也被明显抑制。结论 周期性张应变可激活ERK信号通路,促进体外培养人牙周膜细胞的增殖。     

FPR2通过ERK1/2信号通路调控炎症状态下滋养细胞生物学功能

目的：明确甲酰肽受体2(FPR2)在炎症状态下对滋养细胞生物学功能的影响,分析其在绒毛膜羊膜炎中的作用,并探讨其机制。方法：收集10例绒毛膜羊膜炎患者和10例正常产妇的胎盘组织,利用免疫组化和Western blot检测胎盘组织中FPR2的定位和表达。应用脂多糖（LPS）建立人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/SVneo体外炎症模型,利用Western blot检测FPR2表达;应用小干扰RNA敲减FPR2基因,检测正常组、LPS处理组和LPS+FPR2敲减组细胞培养液上清中促炎因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,并通过EdU实验、流式细胞术、Transwell实验和划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移;利用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中关键因子细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、pJNK、p38和p-p38蛋白表达。结果：绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织中FPR2表达显著增加（P<0.01）。FPR2敲减显著降低LPS诱导的HTR-8/SVneo细胞I...     

降钙素基因相关肽通过ERK1/2信号通路对角质形成细胞增殖的影响

目的： 研究降钙素基因相关肽（CGRP）对角质形成细胞增殖活性的影响，并探讨其可能涉及的信号转导通路。方法： ①胸腺嘧啶掺入法（［3H］-TdR）观察CGRP诱导的角质形成细胞株HaCaT细胞增殖，及CGRP受体拮抗剂CGRP8-37、细胞外信号调节激酶ERK1/2特异性抑制剂PD98059对CGRP诱导的增殖活性的影响；②免疫印迹技术观察CGRP诱导后ERK1/2的磷酸化，及CGRP8-37、PD98059对ERK1/2磷酸化的影响。结果： ①CGRP在一定范围内可剂量依赖性地诱导HaCaT细胞增殖，该作用可被CGRP8-37和 PD98059阻断；②CGRP可时间依赖性地诱导HaCaT细胞ERK1/2的磷酸化，CGRP8-37和PD98059可减弱其作用。结论： CGRP可诱导HaCaT细胞增殖，CGRP受体及其相关的ERK1/2信号通路参与其调控机制。     

肿瘤坏死因子α调控ERK1/2信号通路促进长骨骨样细胞凋亡

文题释义：肿瘤坏死因子α：是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子,并参与正常炎症反应和免疫反应。MAPK信号通路：生物体内重要的信号转导系统之一,参与介导细胞生长、发育、分裂和分化等多种生理及病理过程,ERK是MAPK通路中极其重要的组成部分之一。激活的ERK1/2通过核转位进入细胞核,激活其下游的相关转录因子或激活胞质和胞核激酶等调控细胞的生存、增殖和分化。背景：肿瘤坏死因子α作为促炎因子可诱导成骨细胞凋亡,增强破骨细胞功能,从而造成炎症性骨破坏,但是其作用机制尚不明确。 目的：探讨炎症因子肿瘤坏死因子α对长骨骨样细胞MLO-Y4增殖、凋亡的影响及可能机制。方法：将MLO-Y4细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α组、ERK1/2抑制剂组。肿瘤坏死因子α组用含50 μg/L肿瘤坏死因子α的α-MEM完全培养基孵育24 h,ERK1/2抑制剂组用含50 μmol/L PD98059的α-MEM完全培养基孵育24 h,对照组单纯采用α-MEM完全培养基孵育24 h,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒检测细胞氧化应激水平,用Western blot法测定PCNA、cleaved caspase-3、p-ERK1/2、ERK1/2的蛋白水平。结果与结论：①与对照组相比,50 μg/L肿瘤坏死因子α处理24 h后,细胞增殖能力下降,凋亡率上升;细胞脂质过氧化物丙二醛水平显著增加,而抗氧化物酶超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低;②与对照组相比,肿瘤坏死因子α组细胞增殖相关蛋白PCNA的表达显著降低,细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达显著升高,p-ERK1/2的表达降低,而总蛋白ERK1/2的表达基本保持不变。ERK1/2抑制剂组上述指标与肿瘤坏死因子α组无显著差异;③结果表明,50 μg/L肿瘤坏死因子α可使长骨骨样细胞MLO-Y4增殖能力下降,细胞凋亡增多,其作用机制可能与抑制MAPK-ERK1/2信号通路的活化有关。ORCID: 0000-0003-0863-8618(史方富)中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

ERK1/2信号传导途径参与调控NK细胞的杀伤活性

目的：阐明NK细胞系持续活化的信号通路ERK1／2在调节NK细胞增殖和杀伤活性中可能发挥的作用。方法：制备NK-92和YT细胞的全细胞提取物，进行Westrn blot，检测在细胞系中持续活化的信号传导途径，信号通路特异性阻断剂PD098059阻断ERK1／2活化，MTT方法评价ERK1／2在调节NK细胞杀伤和增殖活性中发挥的作用，RT-PCR检测阻断试剂作用前后杀伤相关分子表达水平的变化。结果：2个代表性的NK细胞系(YT，IL-2非依赖；NK-92，IL-2依赖)中存在ERK1／2(p44／42MAPK)、NF-kB和STAT3信号通路的持续磷酸化，去除IL-2和血清较长时间后仍保持活化状态，而其它信号途径(STAT1、STAT6、PI-3K、p38MAPK)则未见活化。特异性阻断剂PD098059 200μmol／L阻断ERK1／2活化后，NK细胞杀伤。K562靶细胞的能力显著降低。但细胞的增殖活性不受影响。RT-PCR证实，PD098059阻断ERK1／2抑制NK细胞毒活性的同时，杀伤相关分子IFNγ、FasL 、pcrforin的表达水平也不同程度地下调。结论：NK细胞系中持续性活化的ERK1／2主要传递与NK细胞细胞毒性相关的信号，并不参与调节细胞的增殖，该途径通过控制杀伤相关分子IFNγ、FasL、perforin的基因表达从而主导NK对靶细胞的杀伤。     

ERK1/2信号通路在IGF-1诱导新生小鼠海马神经干细胞增殖分化中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)诱导新生小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖分化中的作用。方法:取新生C57BL/6J小鼠海马体外分离、培养NSCs,分别加入终浓度100 ng/ml的IGF-1和20μmol/L的抑制剂U0126。CCK-8试剂盒检测IGF-1对NSCs增殖的影响;免疫荧光细胞染色法检测IGF-1对细胞分化的影响;Western blot检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达,并对各组进行比较。结果:CCK-8测定细胞增殖,第3 d U0126组相对OD值显著低于IGF-1组,第7 d时IGF-1组OD值则显著高于对照组和U0126组(P<0.05)。倒置荧光显微镜下可观察到IGF-1组βⅢTubulin和GFAP阳性分化率均明显高于对照组和U0126组(P<0.05)。Western blot结果显示:IGF-1组蛋白表达量显著高于对照组和U0126组(P<0.05),IGF-1促进ERK磷酸化,U0126则抑制ERK的活化。结论:IGF-1可显著诱导NSCs的增殖和分化,ERK1/2信号通路可能具有重要作用,同时IGF-1可能参与ERK1/2的活化。     

miR-223通过作用CDK2及ERK信号通路参与Lewis肺癌细胞周期调控

目的研究miR-223对Lewis肺癌细胞（LLC）周期调控作用及其分子机制。方法将miR-223真核表达载体转染至LLC细胞中,应用流式细胞仪检测其细胞周期分布变化,实时定量PCR、western blot检测对CDK2表达和ERK信号通路的影响。结果流式细胞周期检测显示miR-223过表达导致G0/G1细胞由53.8%减少到45.3%,G2细胞由4.29%增加到13.2%;实时定量PCR及western blot显示,miR-223过表达抑制CDK2 mRNA及蛋白表达,并下调ERK信号通路。结论 miR-223通过作用CDK2及ERK通路参与Lewis肺癌细胞周期调控。     

葛根素通过ERK1/2信号通路促进内皮细胞增殖

目的:体外观察葛根素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促增殖作用,并对其机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度葛根素对HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测p-ERK1/2蛋白表达水平。结果:葛根素能剂量依赖性促进HUVEC增殖,在80μM效果最明显,且作用36h时,能显著减少早期凋亡,激活ERK1/2磷酸化。结论:葛根素素对人脐静脉内皮细胞有明显的促进增殖作用,其作用可能与ERK1/2的活化有关。     

γδT细胞的发育与其信号传导

γδT细胞在机体的天然与获得性免疫中起重要作用，其发育与组织分布、生物学功能密切相关。本文主要综述了γδT细胞在不同组织中的发育及其信号传导方面的研究进展。     

鞘氨醇激酶1通过ERK1/2信号通路促进非小细胞肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:选取31例外科手术切除并经常规组织学检查确诊为NSCLC的肿瘤组织标本和配对癌旁肺组织标本,应用免疫组织化学染色和RT-qPCR检测SphK1的表达。将pcDNA3. 1-SphK1载体(SphK1组)、空白pcDNA3. 1载体对照(NC组)、SphK1 siRNA(siSphK1组)和对照siRNA(siNC组)分别转染人肺腺癌A549细胞,Western blot法检测SphK1、E-cadherin、fibronectin和p-ERK1/2的表达;利用Transwell实验评估过表达SphK1和抑制ERK1/2对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:SphK1在NSCLC组织中高表达,并与肿瘤分期相关。SphK1过表达可显著促进A549细胞的迁移和侵袭,提高p-ERK1/2和fibronectin蛋白水平,减少E-cadherin蛋白表达(P<0. 05),而干扰SphK1则呈现相反的结果。ERK1/2抑制剂U0126可显著抑制SphK1过表达诱导的p-ERK1/2和fi...     

Notch1信号通路调控γδT17细胞表达参与EAT小鼠甲状腺自身免疫损伤

为探讨γ-分泌酶抑制剂阻断Notch1信号通路对实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis, EAT)小鼠γδT17细胞表达及甲状腺自身免疫损伤的影响,将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照(normal control, NC)组(n=10)、EAT-A组[给予猪甲状腺免疫球蛋白(porcine thyroid immunoglobulin, pTg)多点皮下注射,n=10]、EAT-B组{pTg皮下注射前给予γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯[N-(N-3,5-difluorophenacetyl-L-alanyl)-S-phenylglycine t-butyl ester, DAPT]腹腔注射,n=10}。应用H-E染色、ELISA、流式细胞术、qRT-PCR等评估甲状腺炎症程度,检测γδT17细胞比例及其效应细胞因子IL-17A、Notch1信号通路主要组分的表达水平。结果显示,EAT-A组小鼠血清甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody, TgAb)滴度,...     

CSF1通过CSF1R/PLCG2/ERK/Nrf2信号通路减少缺氧缺血性脑病大鼠神经元凋亡

目的:探讨集落刺激因子1(CSF1)通过CSF1受体(CSF1R)减轻缺氧缺血性脑病(HIE)大鼠神经元凋亡的下游信号通路.方法:采用原代大鼠皮质神经元建立氧糖剥夺(OGD)神经元损伤模型,重组人CSF1(rh-CSF1)干预该模型,通过CCK-8和MTT检测细胞活力,测定LDH漏出,Western blot检测CSF...     

CD36/Src/ERK通路参与单核细胞向巨噬细胞的分化

目的:探讨脂肪酸转位酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)在单核细胞向巨噬细胞分化中的作用。方法:采用不同浓度(0、100和200μg/L)佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人源单核细胞THP-1向巨噬细胞分化;用CD36小片段干扰RNA(CD36 small interfering RNA,siCD36)干扰THP-1细胞CD36的表达;又用CD36 cDNA的重组慢病毒转染THP-1细胞,构建CD36过表达细胞系。显微镜下观察细胞形态;结晶紫染色法检测细胞黏附能力;流式细胞术和Western blot检测细胞分化过程中CD36的蛋白表达,real-time PCR检测CD36、CD11b和CD80的mRNA水平。Western blot检测THP-1细胞向巨噬细胞分化过程中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和Src酪氨酸激酶的表达。结果:THP-1细胞向巨噬细胞分化的过程中,CD36表达增加(P<0. 01)。与正常细胞相比,s...     

mTOR和ERK/MAPK信号通路调控自噬在孤独症发病中的作用

<正>孤独症是一种以重复刻板样行为和社交缺陷为主要特征的神经发育障碍性疾病,发病率高的特点使其逐渐成为研究的热点。中国与西方国家孤独症的发病率相似,约为1%,位于儿童精神疾病的前列^[1]。目前认为孤独症由环境和遗传因素共同决定,病因复杂,具体机制尚不明确。随着研究的深入,自噬在孤独症发病机制中的作用受到广泛关注。     

γδT细胞的发育与其信号传导

γδT细胞在机体的天然与获得性免疫中起重要作用 ,其发育与组织分布、生物学功能密切相关。本文主要综述了γδT细胞在不同组织中的发育及其信号传导方面的研究进展。     

石蒜碱通过调控MAPK/ERK信号通路抑制人结肠腺癌LoVo细胞生长

目的:探讨石蒜碱(lycorine)对人结肠腺癌LoVo细胞活力、凋亡和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法:不同浓度(1～8μmol/L) lycorine处理LoVo细胞,CCK-8法检测细胞活力;划痕愈合和Transwell小室实验检测迁移和侵袭能力;Hoechst染色及流式细胞术实验检测凋亡改变;萤光素酶报告基因系统检测MAPK/ERK信号通路活化情况;同时采用Western blot法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志物、凋亡相关蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白水平的变化。结果:与空白对照组相比,lycorine处理组LoVo细胞的活力和迁移侵袭能力受到显著抑制(P<0.05),同时EMT相关标志物基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7, MMP-7)和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调(P<0.05),而凋亡细胞数及cleaved casp...     

虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移

目的:探讨虫草素对胆囊癌细胞SNU-308增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:MTT法和平板集落形成实验检测不同浓度虫草素对胆囊癌SNU-308细胞活力和集落形成能力的影响;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白以及Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平;免疫荧光染色法检测细胞内LC3的表达水平;划痕愈合实验和Transwell实验检测虫草素对胆囊癌细胞迁移能力的影响;划痕实验检测Akt抑制剂和ERK1/2抑制剂及Ezrin基因沉默对细胞迁移能力的影响。结果:虫草素可显著抑制胆囊癌细胞的活力和集落形成能力(P0.05)。流式细胞术结果显示,虫草素可诱导胆囊癌细胞凋亡(P0.05)。Western blot结果显示,虫草素处理后Bcl-2表达降低,Bax、细胞色素C(Cyto C)、Fas、Fas L和cleaved caspase-3蛋白水平升高,自噬标识蛋白LC3-II/I比例和beclin 1表达上调(P0.05)。免疫荧光染色结果显示,虫草素处理后SNU-308细胞胞浆中LC3荧光颗粒的数量明显增多。划痕实验和Transwell实验结果显示虫草素可抑制细胞迁移(P0.05)。虫草素明显抑制Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平(P0.05)。Ezrin基因沉默及Akti-1/2和GDC-0994均可抑制胆囊癌细胞的迁移作用(P0.05)。结论:虫草素通过诱导凋亡和自噬抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与调控ERK1/2,Ezrin和Akt信号通路有关。     

Netrin-1通过DCC/ERK信号通路减缓心肌梗死大鼠心室重构

目的 探讨netrin-1对心肌梗死大鼠心室重构的影响及其作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为假手术组、心肌梗死模型组、心肌梗死+netrin-1低剂量组(低剂量组),心肌梗死+netrin-1高剂量组(高剂量组),每组8只。成功建立急性心肌梗死大鼠模型后,腹腔注射netrin-1干预4周,小动物超声系统检测大鼠心脏功能指标变化;HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化;Masson染色检测大鼠心肌纤维化情况;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌组织DCC、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达。结果 与模型组相比,netrin-1低、高剂量组大鼠左心室收缩压(LVSP)和左心室内压力的最大上升和下降速率(±dp/dtmax)值明显升高,左心室舒张末期压(LVEDP)值显著降低;大鼠心质量/体质量(HW/BW)、(左心室+室间隔)质量/体质量[(LV+S)/BW]和(左心室+室间隔)质量/心质量[(LV+S)/HW]均显著降低。心肌细胞坏死明显减少,炎症细胞浸润减轻,胶原沉积减少;凋亡心肌细胞数量明显减少;DCC与p-ERK1/2蛋白表达水平显著升高。结论 ...     

Edaravone对大鼠脑创伤后ERK1/2信号通路及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨Edaravone对脑创伤后ERK1/2信号通路及神经细胞凋亡的影响及其机制。方法 用Marmarou,s法建立SD大鼠中度弥漫性轴索损伤模型(n=120),随机分为3组: (1)假手术对照组(A 组, n=24 )、(2)创伤组(B组, n=48)、(3)Edaravone干预组(C组, n=48)。分别在伤后1、6、24、48和72 h 5个时相点收取脑组织标本,硫代巴比妥酸法检测大脑皮质中MDA含量;Western-blot法检测皮质区p-ERK1/2活性;免疫组化法检测p-ERK1/2、Bax 和bcl-2蛋白的表达;TUNEL法标记神经细胞凋亡数。计算机图像分析系统,进行定量分析。结果 与假手术组比较,创伤组中MDA含量（伤后6～72 h）、ERK1/2（p-ERK1/2）活性（伤后1～48h）、Bax/bcl-2比值（伤后6～48 h）及凋亡的神经细胞数目（伤后6～72 h）显著增高(p＜0.05); Edaravone干预显著缓解上述改变 (p＜0.05)。结论 Edaravone可减少脑创伤后的神经细胞凋亡,其机制与其可清除氧自由基、抑制ERK1/2通路活化有关。