液压性脑损伤后室下区神经干细胞的分离培养与鉴定

目的分离液压性脑损伤室下区巢蛋白（nestin）和胶质酸性纤维蛋白（GFAP）阳性（nestin^＋／GFAP^＋）共存细胞进行培养和诱导分化，观察其分裂、增殖和分化能力，以阐明损伤反应性星形胶质细胞增生过程中nestin^＋／GFAP^＋共存细胞是否具有神经干细胞特性。方法用液压冲击法建立动物模型，分离损伤成年SD大鼠室下区nestin^＋／GFAP^＋共存细胞，制成单细胞悬液，培养和诱导分化，以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及原代和传代培养诱导分化的细胞进行鉴定。结果结果显示培养及传代的细胞不断分裂增殖，可以形成悬浮生长nestin阳性的神经球；神经球诱导分化后可以分化为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞。结论成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，是中枢神经系统神经干细胞。     

成体脑室管膜下区神经发生的研究进展

室管膜下区(SVZ)是指沿着整个脑室侧壁分布的区域,在成年哺乳动物终生存在着神经发生。许多神经退行性疾病的病理过程可促进该区域的神经发生,这些新生的SVZ区神经细胞可以迁移到病灶处,以取代或修复死亡或损伤的细胞。本文介绍了成体SVZ的起源、结构特征和近几年来SVZ神经发生与神经退行性疾病相关性研究的进展。     

尼莫地平对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的防治作用

目的 :新生儿缺氧缺血性脑损伤 (hypoxic- ischemic brain damage,HIBD)严重危害新生儿的生命质量和健康 ,我们采用新生大鼠 IHBD模型 ,探讨尼莫地平对新生儿 HIBD的防治作用。材料和方法 :选用 7日龄 SD大鼠 32只 ,随机分为四组 :1伪手术组 ;2 IBD组 ;3HIBD+尼莫地平治疗 A组 ;4 HIBD+尼莫地平治疗 B组。除第一组外 ,其余各组均制成 HIBD模型 ,3、 4组用尼莫地平治疗 ,2 4小时后断头取脑组织 ,进行病理学检查 ,并测定脑组织中水分、钙、兴奋性氨基酸含量。结果 :1.2组与 1组相比 ,脑组织水分、钙、谷氨酸、天门冬氨酸含量均增高 (P<0 .0 1) ,神经细胞数明显减少 ,变性、坏死的细胞数明显增多 ;2 .3、 4组与 2组相比 ,病理学改变明显减轻。结论 :尼莫地平对新生大鼠 HIBD具有显著的防治作用 ,为新生儿 HIBD的防治提供了可靠的理论依据     

嗅球电刺激对成年大鼠室管膜下区神经发生的影响

目的 探讨嗅球电刺激对成年大鼠室管膜下区(SVZ)神经前体细胞(NPC)增殖及其向嗅球迁移的影响,并对其相关机制进行初步探讨. 方法 SD大鼠80只按随机数字表法分为正常对照组、假刺激组、电刺激ld组、电刺激3d组、电刺激1周组、电刺激2周组、电刺激3周组、电刺激4周组,每组10只,后6组大鼠制备嗅球电刺激模型,以5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记新生细胞,免疫组化染色观察大鼠SVZ区内源性NPC的增殖,RT-PCR检测嗅球内Prokineticin 2 (prk2)mRNA的表达;另取大鼠15只,按随机数字表法分为正常对照组、假刺激组和电刺激4周组,每组5只,免疫组化染色观察嗅球内Brdu阳性细胞的表达. 结果 8组大鼠SVZ区Brdu阳性细胞数不同,差异有统计学意义(F=51.475,P=0.000).与正常对照组和假刺激组比较,电刺激ld、3d、l周、2周组大鼠刺激侧Brdu阳性细胞增高,差异有统计学意义(P＜0.05);8组大鼠嗅球内prk2 mRNA的表达不同,差异有统计学意义(F=154.067,P=0.000).与正常对照组和假刺激组比较,电刺激ld、3d、l周、2周、3周、4周组prk2 mRNA增加,差异有统计学意义(P＜0.05);3组大鼠嗅球内Brdu阳性细胞数不同,差异有统计学意义(F=36.472,P=0.000).电刺激4周组嗅球内Brdu阳性细胞数较正常对照组和假刺激组明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 电刺激嗅球可促进SVZ区NPC的增殖并向嗅球迁移,这可能与电刺激提高嗅球内Prk 2的表达水平有关.     

硫胺素对MPTP致成年小鼠脑室管膜下区神经发生受损的保护作用

目的：探讨硫胺素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的急性帕金森病（PD）小鼠模型脑室管膜下区（SVZ）神经发生的保护作用。方法：给予C57BL小鼠腹腔注射MPTP,1 d内连续4次,每次注射间隔2 h,每次20 mg.kg-1,制作PD模型（PD组）;在PD组基础上给予小鼠腹腔注射硫胺素100 mg.kg-1.d-1（从MPTP使用前1周开始注射至MPTP使用后1周）设为硫胺素干预PD组（PDT组）。另设正常对照组（Ctrl组）和正常硫胺素组（CtrlT组）。利用免疫荧光染色法检测各组小鼠脑SVZ区5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）和双皮质蛋白（Dcx）阳性细胞的分布和数目。结果：PD组SVZ区BrdU和Dcx阳性细胞与Ctrl组比较均显著减少（P〈0.05）;PDT组SVZ区BrdU和Dcx阳性细胞与PD组比较明显增加（P〈0.05）。结论：MPTP诱导的急性PD小鼠模型脑SVZ区神经发生明显减少,硫胺素对PD小鼠模型脑SVZ区受损的神经发生具有保护作用。     

表皮生长因子促进脑梗死后室管膜下区神经干细胞迁徙机制的初步研究

目的观察表皮生长因子（EGF）对大鼠脑梗死后室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）的调节作用。方法采用肾血管性高血压大鼠复制成一侧大脑中动脉皮层支闭塞（MCAO）模型。MCAO）术后24h，64只EGF组大鼠侧脑室注入10μl EGF（0．1μg／μl），连续2d，共2μg；64只vehicle组大鼠只注入不含EGF的等量溶液。MCAO术后1、2、3和4周，免疫组化检测SVZ内巢蛋白（nestin），Western blotting检测双侧半球nestin、神经细胞粘附分子（NcAM）和瑞林蛋白（reelin）表达。结果与同期vehicle组相比，EGF组大鼠梗死灶同侧SVZ内nestin染色更强，可见从SVZ沿胼胝体向梗死灶迁徙的nestin阳性细胞带；Western blotting显示EGF促使脑梗死灶同侧nestin、NCAM和reelin更早期和更高的表达（P〈0．05）。结论EGF可能通过促使卒中后nestin、NCAM和reelin等神经可塑性物质的早期高峰表达而调节SVZ内NSCs增殖和向梗死灶迁徙。     

次声对成年大鼠脑室下区神经前体细胞增殖的影响

目的探讨次声作用对成年大鼠脑室下区（SVZ）神经前体细胞增殖的影响。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠（n=24）随机分为正常对照组、对照组和次声组,次声组动物置于次声压力仓（16Hz、130dB）内连续作用7d（2h/d）。照射结束后,分别于3d、7d、10d和14d处死。处死前各组大鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶尿苷（BrdU）3次,以BrdU免疫组织化学法检测各组SVZ内增殖细胞数目的变化。结果次声照射结束后3d,次声处理组动物SVZ区的BrdU阳性细胞数目较对照组显著减少（P〈0.01）,7d时阳性细胞数继续降低（P〈0.01）,但10d时开始逐渐恢复,14d时达到正常水平（P〉0.05）。结论16Hz、130dB次声可抑制成年大鼠SVZ神经前体细胞增殖。     

链脲佐菌素所致高血糖对大鼠缺血性脑损伤的影响

目的 研究链脲佐菌素所致糖尿病性高血糖（ＨＧ）对大鼠缺血性脑损伤的影响。方法 链脲佐菌素引起糖尿病４周的大鼠造成１０ｍｉｎ前脑缺血,观察缺血后脑组织的病理改变和癫痫发作情况。结果 在海马ＣＡ１区和下脚区,ＨＧ组与正常血糖（ＮＧ）组动物脑神经元损伤程度相似。然而,ＨＧ组动物有严重的顶叶皮质神经元坏死和“额外脑结构损伤”。ＨＧ组中４２．１％的动物脑缺血后出现癫痫发作,血浆葡萄糖浓度低于１２ｍｍｏｌ／Ｌ     

亚硝酸钠对脑梗死后周细胞及室管膜下区神经发生的影响

目的探讨亚硝酸钠对脑梗死后周细胞及室管膜下区神经发生的影响。方法采用线栓法制备小鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。采用随机数表法将66只小鼠随机分为假手术+溶剂组,脑梗死+溶剂组,脑梗死+亚硝酸钠组。脑梗死后第3天测定小鼠脑含水量及缺血周围区PDGFRβ~+周细胞的数量,脑梗死后第7天采用免疫荧光测定BrdU~+/DCX~+神经母细胞,脑梗死后第1、3和7天采用五分法评估小鼠神经功能缺损。结果脑梗死后第3天,与假手术+溶剂组相比,脑梗死+溶剂组小鼠脑含水量明显增多,缺血周围区PDGFRβ~+细胞数明显减少(P0.05);应用亚硝酸钠后,脑含水量明显降低,PDGFRβ~+细胞数明显增多(P0.05)。脑梗死后第7天,与假手术+溶剂组相比,脑梗死+溶剂组小鼠BrdU~+/DCX~+神经母细胞的数量均明显增多;与脑梗死+溶剂组相比,脑梗死+亚硝酸钠组小鼠室管膜下区的BrdU~+/DCX~+神经母细胞的数量均明显增多(P0.05)。脑梗死后第1和3天,脑梗死+溶剂组和脑梗死+亚硝酸钠组小鼠的神经功能缺损评分差异无统计学意义(P0.05);但在第7天,脑梗死+亚硝酸钠组小鼠的神经功能缺损评分较脑梗死+溶剂组明显降低(P0.05)。结论亚硝酸钠可促进脑梗死后周细胞的存活和室管膜下区神经发生。     

脑缺血再灌注大鼠脑内angiogenin的动态变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后angiogenin（ANG）在脑内表达水平的动态变化。方法大鼠大脑中动脉栓塞法（MCAO法）制作脑缺血再灌注模型,免疫组化染色检测ANG表达水平。结果ANG在正常大鼠脑内普遍弱阳性表达,脑膜、室管膜及血管染色较强。脑缺血2h再灌注3h后缺血脑区ANG表达水平较对侧增强（P＜0．05）,缺血再灌注24h后ANG表达水平达高峰,缺血再灌注3d及7d时ANG表达维持较高水平,缺血再灌注14d时ANG表达水平有所降低,但仍高于对照组,缺血再灌注21d时ANG表达水平与对照无显著差别。结论脑缺血再灌注大鼠缺血脑区ANG表达水平增强,并且表达水平随缺血再灌注后时间而变化。     

大鼠颅脑创伤后脑红蛋白表达变化的实验研究

目的研究弥漫性颅脑创伤后大鼠脑组织中脑红蛋白的核酸与蛋白表达变化情况，初探脑红蛋白与颅脑创伤的关系。方法选择Marmarou’s自由落体打击装置复制弥漫性颅脑创伤模型，采用实时定量PCR及Westernblotting分别检测伤后不同时间（30min、1h、2h、6h、12h、24h、48h、72h、5d）脑组织中脑红蛋白核酸及蛋白水平的表达情况，并对所得数据进行统计学分析。结果在伤后30min，脑组织中脑红蛋白的核酸表达m现首个高峰，相应地其蛋白表达于伤后1h增高，于伤后2h达峰值；伤后12h，脑红蛋白的核酸表达再次升高，于伤后48h达高峰，其蛋白表达亦于伤后24h增高，至72h达峰值。结论颅脑创伤后脑组织中脑红蛋白呈“双峰”样表达。提示脑红蛋白可拮抗对神经元的创伤应激及伤后继发缺血、缺氧性损害，对创伤后脑组织具有一定的保护作用。     

大鼠脑缺血区皮层XIAP表达的动态变化及其意义

目的观察大鼠脑缺血区皮层XIAP表达的动态变化,探讨其在缺血后抗神经元凋亡过程中的可能机制。方法采用RT-PCR,免疫组化和western blot等方法分别从mRNA和蛋白水平测定脑缺血区皮层不同时间点XIAP表达的变化。结果XIAP转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性;RT-PCR显示模型组大鼠在脑缺血后3h就有XIAP mRNA转录水平的明显上调,持续至24h后逐渐下降;免疫组化和western blot显示在脑缺血后6h有XIAP蛋白表达的增加,12h时XIAP蛋白表达至高峰（P〈0．01）,48h基本恢复至缺血前水平。结论XIAP在脑缺血过程中可能具有抗凋亡作用。     

局灶性脑缺血大鼠脑内Angiogenin表达水平的变化

目的　脑梗死患者存活时间与脑内血管增生程度相关。血管生长素 ( angiogenin)具有促血管生成作用。本研究旨在观察大鼠脑缺血后血管生长素在脑内表达水平的变化。方法　大鼠大脑中动脉栓塞法 ( MCAO法 )制作局灶性脑缺血模型 ,脑切片免疫组织化学染色检测血管生长素蛋白表达。结果　血管生长素在正常大鼠脑中普遍弱阳性表达 ,脑膜、室管膜及血管染色较为明显。脑缺血后 6 h缺血脑区血管生长素表达水平明显增强 ( P<0 .0 1) ,缺血 2 4 h内血管生长素表达水平逐渐升高。结论　脑缺血可诱导缺血脑区血管生长素蛋白表达增强     

Basic fibroblast growth factor stimulates the proliferation and differentiation of neural stem cells in neonatal rats after ischemic brain injury

A little is known about the proliferation and fate of neural stem cells in the subventricular zone (SVZ) after cerebral ischemia. However, how endogenous neural stem cells are activated in the premature brain is not clear, although basic fibroblast growth factor (bFGF) is important in neurogenesis. To investigate the effect of bFGF on the proliferation and differentiation of neural stem cells after brain ischemia, we observed cellular changes in the subventricular zone (SVZ) of 3-day-old rats (approximately equivalent to premature infants) using immunofluorescence assays, Western blot analysis, and real-time quantitative PCR methods. The bilateral common carotid artery (BCCA) was occluded in 108 animals, then half received bFGF 10ng/g. Besides, 54 rats without ischemia as normal control. Proliferating cells were labeled by bromodeoxyuridine (BrdU) through intraperitoneal injection in a pulsed or a cumulative protocol. Rats were killed at 4, 7, and 14 days after ischemic injury. The number of proliferating cells in the SVZ in bFGF-treated rats was higher than that in untreated rats; bFGF also promoted neural stem cell differentiation into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. Western blot analysis and real-time quantitative PCR assays confirmed these results. We suggest that bFGF promotes the repair of ischemia brain injury through increasing the proliferation of neural stem cells and their differentiation into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes.     

Subventricular zone neural precursor cell responses after traumatic brain injury and binge alcohol in male rats

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of disability worldwide. Additionally, many TBI patients are intoxicated with alcohol at the time of injury, but the impact of acute intoxication on recovery from brain injury is not well understood. We have previously found that binge alcohol prior to TBI impairs spontaneous functional sensorimotor recovery. However, whether alcohol administration in this setting affects reactive neurogenesis after TBI is not known. This study, therefore, sought to determine the short- and long-term effects of pre-TBI binge alcohol on neural precursor cell responses in the subventricular zone (SVZ) following brain injury in male rats. We found that TBI alone significantly increased proliferation in the SVZ as early as 24 hr after injury. Surprisingly, binge alcohol alone also significantly increased proliferation in the SVZ after 24 hr. However, a combined binge alcohol and TBI regimen resulted in decreased TBI-induced proliferation in the SVZ at 24 hr and 1 week post-TBI. Furthermore, at 6 weeks after TBI, binge alcohol administered at the time of TBI significantly decreased the TBI-induced neuroblast response in the SVZ and the rostral migratory stream (RMS). The results from this study suggest that pre-TBI binge alcohol negatively impacts reparative processes in the brain by decreasing short-term neural precursor cell proliferative responses as well as long-term neuroblasts in the SVZ and RMS.     

miR-93、miR-191、 miR-499在颅脑损伤患者血清中的表达及其临床意义

目的 探讨miR-93、miR-191、miR-499在创伤性脑损伤患者中的表达情况及其临床意义。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测本院2010年9月～2015年9月收治的96例创伤性脑损伤患者以及招募的49例健康者中miR-93、miR-191、miR-499的表达水平,分析其与脑损伤的损伤程度、临床疗效以及诊断价值的关系。结果 miR-93、miR-191、miR-499在创伤性脑损伤患者血清中的表达水平明显高于对照组(P<0.05); 轻度,中度和重度三种不同程度脑损伤患者血清中miR-93、miR-191、miR-499水平都显著性上升,差异具有统计学意义(P<0.05); 而且重度脑损伤患者血清中的miRNAs水平最高; 治疗后临床疗效好的患者血清中miR-93,miR-191,miR-499水平显著低于临床疗效差的患者,差异具有统计学意义(P<0.05); miR-93,miR-191,miR-499三种miRNAs ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.952 0(95%CI,0.906 5～0.997 4; P<0.001),0.874 6(95%CI,0.793 3～0.955 8; P<0.001),0.780 7(95%CI,0.671 9～0.889 5; P<0.001)。 结论 miR-93,miR-191,miR-499 在创伤性脑损伤患者中高表达,可以作为创作性脑损伤患者的预后和损伤程度指标以及诊断靶标。     

Neuroglobin expression in rats after traumatic brain injury

In this study,we used a rat model of severe closed traumatic brain injury to explore the relationship between neuroglobin,brain injury and neuronal apoptosis.Real-time PCR showed that neuroglobin mRNA expression rapidly increased in the rat cerebral cortex,and peaked at 30 minutes and 48 hours following traumatic brain injury.Immunohistochemical staining demonstrated that neu-roglobin expression increased and remained high 2 hours to 5 days following injury.The rate of in-crease in the apoptosis-related Bax/Bcl-2 ratio greatly decreased between 30 minutes and 1 hour as well as between 48 and 72 hours post injury.Expression of neuroglobin and the anti-apoptotic factor Bcl-2 greatly increased,while that of the proapoptotic factor decreased,in the cerebral cortex post severe closed traumatic brain injury.It suggests that neuroglobin might protect neurons from apoptosis after traumatic injury by regulating Bax/Bcl-2 pathway.     

缺血性脑损伤诱导大鼠巢蛋白表达的实验研究

目的探讨缺血性脑损伤对内源性神经干细胞增殖、迁移的影响。方法选用健康雄性SD大鼠62只，随机分为正常组（6只）、脑缺血10min再灌流1、3、5、7、10、15、20d组（简称手术组，每时间点6只）、假手术对照组（14只，每时间点2只），参照Pulsinelli—Brierley方法制作短暂性全脑缺血动物模型：用SABC免疫组化法显示巢蛋白（nestin）阳性细胞；光镜下观察nestin阳性细胞的形态学变化并计数，半定量分析脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖、迁移的变化过程。结果手术组的nestin阳性细胞在缺血再灌流24h后表达增多，7～10d到高峰，15d时仍有显著表达；在室管膜下区的nestin阳性细胞有向皮质、海马迁移的迹象。结论缺血性脑损伤能诱导内源性神经干细胞增殖，这可能对脑损伤后的修复发挥作用。     

Cell tracking technologies for acute ischemic brain injury

Stem cell therapy has showed considerable potential in the treatment of stroke over the last decade. In order that these therapies may be optimized, the relative benefits of growth factor release, immunomodulation, and direct tissue replacement by therapeutic stem cells are widely under investigation. Fundamental to the progress of this research are effective imaging techniques that enable cell tracking in vivo. Direct analysis of the benefit of cell therapy includes the study of cell migration, localization, division and/or differentiation, and survival. This review explores the various imaging tools currently used in clinics and laboratories, addressing image resolution, long-term cell monitoring, imaging agents/isotopes, as well as safety and costs associated with each technique. Finally, burgeoning tracking techniques are discussed, with emphasis on multimodal imaging.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层Homerla蛋白改变及意义

目的探讨大鼠脑血再灌注损伤后皮层组织Homerla蛋白的表达改变及其意义。方法选择成年雄性SD大鼠59只,随机分为正常对照组、缺血再灌注损伤后10rain、1h、3h、6h、12h、24h、48h及72h共9组,每组6只。免疫组化染色法和Western blot法测定Homerla蛋白含量,T-PCR法测定HomerlaRNA表达。结果在实验过程中5只动物死亡,54只进入结果分析。与对照组比较缺血再灌注损伤后Homerla蛋白和mRNA灰度值表达出现3个峰值,分别在10min、6h和24h,但在72h仍维持较高水平;与对照组Homerla蛋白免疫评分相比,缺血再灌注损伤后出现两个峰值,分别在6h和24h;Homerla蛋白除神经元外,在胶质细胞也表达。结论在缺血再灌注损伤后,Homerla出现3个表达高峰,可能在不同的机制的影响下对脑损伤发生发展起重要作用。