奥曲肽逆转人胰腺癌细胞多药耐药机制的初步研究

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽对人胰腺癌细胞BxPC-3多药耐药现象的逆转作用及其机理,为临床应用奥曲肽提高胰腺癌化疗疗效提供实验依据.方法:应用不同浓度的奥曲肽(0-1.6 μg/ml)联合化疗药物顺铂、表阿霉素、氟尿嘧啶、吉西他滨共同处理稳定表达SSTR2的胰腺癌细胞BxPC-3-SSTR2,CCK-8比色法测定奥曲肽处理前后各化疗药物的IC50值,判断奥曲肽对胰腺癌多药耐药的逆转.Real-time PCR法检测SSTR2基因转染前后及奥曲肽处理前后的胰腺癌细胞中MDR1、MRP2、LRP基因表达.结果:奥曲肽可以显著降低顺铂、表阿霉素、氟尿嘧啶和吉西他滨的IC50值(P<0.05),并且这种作用呈剂最依赖性.胰腺癌细胞株BxPC-3在转染SSTR2基因后,细胞中MDR1、MRP2、LRP基因的表达分别下调57%、47%和56%(P<0.01);而转染后的胰腺癌细胞经过1.6 μg/ml奥曲肽作用48h后,其所表达的MDR1、MRP2、LRP基因出现进一步的下调,分别下降88%、73%和87%(P<0.01).结论:生长抑素类似物奥曲肽可逆转胰腺癌细胞的多药耐药,其机制可能与降低胰腺癌细胞中MDR1、MRP、LRP基因的表达,使胰腺癌细胞内细胞毒性药物浓度增加有关.     

塞来昔布联合奥曲肽对人胃癌多药耐药细胞生长的影响

背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)抑制剂塞来昔布及奥曲肽(octreotide)均对肿瘤细胞有抑制作用,本研究旨在探讨塞来昔布及其与奥曲肽联合对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR生长的影响。方法:塞来昔布组:塞来昔布浓度为1×10-4～1×10-8mol/L;奥曲肽组:奥曲肽浓度为1×10-5～1×10-9mol/L;合用组:塞来昔布在上述浓度范围内加1×10-6mol/L的奥曲肽;对照组:无血清RPMI-1640培养液。比较各实验组对SGC7901、SGC7901/ADR细胞生长的影响。采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测细胞的增殖;免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达;DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:塞来昔布较对照组明显降低SGC7901/ADR细胞的3H-TdR掺入,掺入值分别为(471.3±79.7)cpm及(917.5±130.8)cpm,塞来昔布与奥曲肽联合应用时,3H-TdR掺入值较单独用药(220.0±19.7)cpm下降53.3%。两药联合对SGC7901/ADR细胞DNA合成的抑制效应与塞郑文斌,等.塞来昔布联合奥曲肽来昔布的浓度呈显著正相关(r=0.996,P<0.001)。单用塞来昔布或联合用药都能明显降低SGC7901/ADR细胞PCNA的表达。单用塞来昔布时SGC7901/ADR细胞凋亡率为32.9%,当其与奥曲肽合用,凋亡率增加至5     

奥曲肽抑制人肝癌细胞生长机制的探讨

生长抑素对肿瘤细胞的抑制作用受到人们越来越多的观注。奥曲肽 (Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ ,ＳＭＳ 2 0 1 995 )是体外合成的一种生长抑素 8肽。同天然的生长抑素 14肽相比 ,Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ具有作用更强、血浆半衰期长、作用时间更持久、使用方便等优点。近来的研究显示 ,Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ能抑制原发性肝癌的生长 ,且效果良好[1] ,但作用机理尚未明了[2 ] 。为此 ,我们观察在体外Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ能否诱导人肝癌细胞凋亡 ,从诱导肿瘤细胞凋亡的角度探讨其抑癌机理。一、材料与方法1 主要试剂与药物 :ＤＭＥＭ培养液 (美国Ｇｉｂ…     

奥曲肽与胃癌治疗的研究现状

奥曲肽（OCT）是近年人工合成的一种长效八肽生长抑素类似物。大量研究表明,OCT对肿瘤细胞具有抗增殖、诱导凋亡及抗新生血管生成的作用,因此OCT或生长抑素类似物将会为胃癌及其他恶性肿瘤的治疗开辟一条新途径。     

奥曲肽与胃癌治疗的研究现状

奥曲肽(OCT)是近年人工合成的一种长效八肽生长抑素类似物。大量研究表明,OCT对肿瘤细胞具有抗增殖、诱导凋亡及抗新生血管生成的作用,因此OCT或生长抑素类似物将会为胃癌及其他恶性肿瘤的治疗开辟一条新途径。     

奥曲肽联合GEMOX方案化疗治疗晚期胰腺癌临床观察

目的:观察奥曲肽(OTC)联合吉西他滨和奥沙利铂(GEMOX)方案治疗晚期胰腺癌,评估其有效性、安全性、疾病相关症状改善状况(DRSI)。方法:57例晚期胰腺癌患者随机分为2组,治疗组29例,采用OCT联合GEMOX方案化疗,对照组28例,采用GEMOX方案化疗,至少用药3周期,以近期疗效、DRSI、血清癌胚抗原(CEA),血清CA199及不良反应为观察指标。结果:两组间客观有效率、疾病控制率差异无统计学意义(P>0.05)。OCT联合GEMOX方案组DRSI为58.62%,GEMOX方案组DRSI为28.57%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。两组间治疗前后血清癌胚抗原(CEA),血清CA199无统计学差异(P>0.05)。OCT联合GEMOX方案组胃肠道反应明显低于GEMOX方案组,组间存在明显差异(P<0.05)。两组间其他相关毒性反应无明显差异(P>0.05)。无严重不良反应发生。结论:OCT联合GEMOX方案治疗晚期胰腺癌可获得较高的DRSI,并且化疗相关的胃肠道反应明显减轻,其不良反应可耐受,没有引起严重并发症。患者化疗耐受性良好,生活质量改善,可能有助于胰腺癌患者从化疗中获益。     

胰腺癌化疗多药耐药研究进展

胰腺癌的化疗效果不理想主要原因与肿瘤细胞的多药耐药有关。胰腺癌细胞多药耐药产生的机制目前并未阐明,随着对多药耐药认识的不断深入,新的逆转剂已经产生。本文通过近5年文献资料的回顾复习,对胰腺癌耐药机制及其逆转剂的研究进展作一综述。     

奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶表达的影响

目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人胃癌细胞株SGC-7901肝素酶(Hpa)表达的影响并探讨其作用机制。方法:取人胃癌细胞株SGC-7901,体外培养后取处于对数生长的细胞制成单细胞悬液,加入不同浓度的OCT共培养24h和48h,以半定量RT-PCR法及免疫细胞化学法检测OCT对胃癌细胞Hpa表达的影响。结果:1)胃癌细胞与1×10^-5mol/L和1×10^-6mol/L的OCT共培养24h后,HpamRNA的表达显著低于对照组(P=0.000和0.001);与1×10^-5mol/L和1×10^-6mol/L的OCT共培养48h后,HpamRNA的表达显著低于对照组(P=0.000和0.000)。1×10^-5mol/L和1×10^-6mol/L的OCT与胃癌细胞共培养48h对HpamRNA表达的抑制效果优于24h(P=0.002和0.003)。OCT1×10^-7mol/L组,OCT1×10^-8mol/L组及对照组各组之间HpamRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2)胃癌细胞经1×10^-5mol/L和1×10^-6mol/L的OCT作用24h和48h后,Hpa蛋白的表达也相应下降。结论:OCT1×10^-5mol/L和OCT1×10^-6mol/L两种浓度能够有效抑制SGC-7901胃癌细胞株Hpa的表达,从而可能对肿瘤的侵袭转移起到抑制作用。     

紫杉醇-奥曲肽耦连药靶向治疗非小细胞肺癌

目的：在合成紫杉醇-奥曲肽（paclitaxel-octreotide,PTX-OCT）耦连药物的基础上,评价耦连药物对人非小细胞肺癌细胞A549和Calu-6的细胞毒性和靶向性。方法：合成并纯化紫杉醇-奥曲肽耦连药物PTX-OCT和2PTX-OCT。RT-PCR法检测人非小细胞肺癌A549和Calu-6细胞及人成纤维细胞中生长抑素受体（somatostatin receptor,SSTR）的表达;设置3种药物浓度为1、100nmol/L和1μmol/L与癌细胞共同培养,培养时间为24~72h,同时设置对照组;MTT法检测药物对A549、Calu-6细胞以及人成纤维细胞的毒性;流式细胞术检测1μmol/L紫杉醇、PTX-OCT和2PTX-OCT作用后A549细胞周期变化。结果：人非小细胞肺癌A549和Calu-6细胞均表达SSTR2和SSTR5 mRNA,在人成纤维细胞中未检测到SSTR亚型mRNA。紫杉醇-奥曲肽耦连药物对A549和Calu-6细胞的杀伤作用与紫杉醇类似,具有浓度依赖性和时间依赖性;1μmol/L紫杉醇及PTX-OCT和2PTX-OCT作用72h,A549细胞生存率分别为（26.9±7.3）%、（26.6±9.2）%和（35.7±4.3）%;Calu-6细胞生存率分别为（29.5±5.0）%、（28.2±9.7）%和（26.5±4.9）%;均低于24h组（P〈0.05）。1μmol/L紫杉醇作用24h后成纤维细胞生存率为（64.7±8.6）%,PTX-OCT和2PTX-OCT组分别为（86.1±1.8）%和（90±5.6）%,均高于紫杉醇组（P〈0.05）。流式细胞术分析PTX-OCT和2PTX-OCT及紫杉醇作用后,A549细胞周期均停滞在G2/M期。结论：紫杉醇-奥曲肽耦连药物具有细胞毒性和靶向性,紫杉醇-奥曲肽耦连药物有希望作为一种新的靶向药物来治疗非小细胞肺癌。     

99Tcm-奥曲肽显像在肺癌诊断中的应用

目的 探讨99Tcm-奥曲肽显像对肺癌的临床诊断意义.方法 30例CT检查被怀疑为肺部肿瘤的患者行99Tcm-奥曲肽显像,计算肿瘤病灶和对侧正常肺组织的摄取比值(T/N)并做半定量分析.结果 99Tcm-奥曲肽显像诊断肺癌的灵敏度、特异度和准确度分别为95.7%、71.4%和90.0%.30例患者中,有24例99Tcm-奥曲肽显像为阳性,其中2例为假阳性;6例患者诊断为阴性,其中1例为假阴性.99Tcm-奥曲肽显像共检出阳性病灶46个,其中3个为超声和CT检查未发现的病灶.小细胞肺癌(SCLC)组的T/N(2.78±1.07)明显高于非小细胞肺癌(NSCLC)组(1.75±0.31,t=3.82,P<0.05).结论 99Tcm-奥曲肽显像能够显示肺癌细胞表面的生长抑素受体(SSTR),对肺癌原发灶和转移灶具有一定的诊断价值;99Tcm-奥曲肽显像更有利于SCLC的检测,可作为常规显像方法的一种有效补充.     

Expression and localization of human multidrug resistance protein (ABCC) family members in pancreatic carcinoma

Pancreatic ductal adenocarcinoma is among the top 10 causes of death from cancer in industrialized countries. In comparison with other gastrointestinal malignancies, pancreatic cancer is one of the tumors most resistant to chemotherapy. An important mechanism of tumor multidrug resistance is increased drug efflux mediated by several transporters of the ABC superfamily. Especially BCRP (ABCG2), MDR1 P-glycoprotein (ABCB1) and members of the MRP (ABCC) family are important in mediating drug resistance. The MRP family consists of 9 members (MRP1-MRP9) with MRP1-MRP6 being best characterized with respect to protein localization and substrate selectivity. Here, we quantified the mRNA expression of BCRP and of all MRP family members in normal human pancreas and pancreatic carcinoma and analyzed the mRNA level of the transporters most abundantly expressed in pancreatic tissue, BCRP, MRP1, MRP3, MRP4 and MRP5, in 37 tissue samples. In addition, we determined the localization of the 4 MRP proteins in normal human pancreas and in pancreatic carcinoma. The expression of BCRP, MRP1 and MRP4 mRNA did not correlate with tumor stage or grading. On the other hand, the expression of MRP3 mRNA was upregulated in pancreatic carcinoma samples and was correlated with tumor grading. The MRP5 mRNA level was significantly higher in pancreatic carcinoma tissue compared to normal pancreatic tissue. These data suggest that MRP3 and MRP5 are involved in drug resistance of pancreatic tumors and that quantitative analysis of their expression may contribute to predict the benefit of chemotherapy in patients with pancreatic cancer.     

甲基莲心碱逆转人胃癌细胞株多药耐药性

目的:研究新的钙阻断剂甲基莲心碱(Nef)对耐长春新碱(VCR)人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法:采用MTT比色法测定药物的细胞毒作用,SP法免疫细胞化学及流式细胞术检测Nef对人胃癌细胞多药耐药性相关蛋白(MRP)表达的影响。结果:①在10μmol/L的浓度下,Nef对SGC7901及SGC7901/VCR无显著细胞毒作用;②2.5、5、10μmol/LNef能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC50从2.32μg/ml依次下降至0.340、0.128、0.053μg/ml,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。在浓度为10μmol/L时,逆转活性较VRP为高(P<0.01);③SGC7901/VCR细胞较SGC7901细胞高表达MRP,经Nef处理后,SGC7901/VCR细胞MRP表达明显下降。表明Nef能下调SGC7901/VCR细胞MRP的表达。结论:甲基莲心碱在体外能逆转耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)的多药耐药性。其机制可能与下调MRP的表达有关。     

紫杉醇对人胰腺癌细胞株BxPC-3增殖抑制作用的研究

目的:通过体外实验探讨紫杉醇(paclitaxel,TAX)对人胰腺癌细胞株Bx-PC-3的增殖抑制作用。方法:人胰腺癌细胞株BxPC-3经过不同浓度的TAX作用不同时间后,在倒置显微镜下观察细胞形态学改变;用甲基噻唑基四唑试验(MTT)检测细胞抑制率;用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:TAX对人胰腺癌细胞株BxPC-3有明显的生长抑制作用,且呈剂量、时间依赖关系。流式细胞仪分析结果显示,BxPC-3细胞经过1000nmol/LTAX分别作用24和48h后,G2～M期细胞比例分别为(66.39±0.23)%和(48.49±1.47)%,明显高于对照组(8.67±2.32)%和(10.85±2.43)%,t值分别为49.41和26.49,P值均为0.000,提示存在G2～M期阻滞。结论:TAX可使人胰腺癌细胞株BxPC-3的生长受到抑制,BxPC-3细胞经过TAX作用后被阻滞于G2～M期。     

体外培养人肝癌细胞对阿霉素耐药机理及电镜形态研究

目的应用人肝癌细胞株SMMC-7721,研究多药耐药（MDR）的产生机理。方法通过不断提高培养液中阿霉素（ADM）的浓度,长期筛选培养,得到人肝癌多药耐药株SMMC-7721／ADM。用MTT法检测常用6种化疗药物对肝癌细胞敏感株SMMC-7721／S和耐药株SMMC-7721／ADM的毒性;用流式细胞技术检测肝癌细胞MDRI基因产物—P—精蛋白（P-gp）的表达以及细胞内柔红霉素（DNR）浓度。结果SMMC-7721／ADM细胞对阿霉素的敏感性下降了59.33倍,同时对表阿霉素（EPi）、柔红霉素（DNR）、丝裂霉素（MMC）也具有显著的交叉抗药性,对顾铂（CDDP）、氯甲喋吟（MTX）无抗药性。耐药株P-gp较敏感株有非常明显升高,耐药细胞内柔红霉素相对该区明显少于其敏感细胞。结论SMMC-7721／ADM对结构和作用不同的亲脂类化疗药物都表现出交叉抗药性。P-gp过度表达引起的细胞内药物浓度减少是SMMC—7721／ADM细胞抗药性的主要原因。     

shRNA逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞株（MCF-7/AdrR）的多药耐药性

目的〖HT5"SS〗： 利用短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达载体逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞株(MCF7/AdrR)的多药耐药性（multidrug resistance,MDR）。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 构建2个MDR1基因shRNA表达质粒,稳定转染MCF7/AdrR细胞。RTPCR分析MDR1基因mRNA的表达,Western blotting检测P糖蛋白(Pgp)的表达,流式细胞术和MTT法分别检测乳腺癌细胞的凋亡和对阿霉素的敏感     

三氧化二砷逆转人胃癌细胞SGC7901/ADR耐药性的作用机制

Objective: To investigate the reversal effect of arsenic trioxide (As2O3) on the multidrug resistance of human gastric tumor SGC7901/ADR cell line to adriamycin (ADM) and its reversal mechanisms. Methods: The non-cytotoxic concentration of As2O3 and the sensitivity of SGC7901/ADR cells to ADM were detected by MTT assay. The drug concentration and P-gp function of SGC7901/ADR cells were measured with flow cytometry (FCM), and the impacts of As2O3 on the GST-π and TopoⅡ expressions of SGC7901/ADR cells were analyzed by immunohistochemical method. Results: As2O3 at 0.4 to 0.8 μmol/Lconcentrations were not significantly cytotoxic to SGC7901/ADR cells. As2O3 at 0.8 μmol/L could improve the sensitivity of SGC7901/ADR cells to ADM via inhibiting P-gp function, down-regulating GST-π expression and increasing the intracellular accumulation of ADM in SGC7901/ADR cells. Conclusion: As2O3 can reverse partly the drug-resistance of SGC7901/ADR cells to ADM, which may be related with inhibiting the P-gp function and down-regulating GST-π expression.     

耐药相关基因二氢叶酸还原酶在人胰腺癌细胞株中的表达

目的探讨耐药相关基因二氢叶酸还原酶（DHFR）在胰腺癌细胞株中的表达。方法通过RT—PCR和Western-blot方法分别测定六株人胰腺癌细胞（SW1990,Capan-1,AsPC-1,MiAPaCa-2,PANC-1,P3）中的DHFR在基因和蛋白水平上表达。结果在六株人胰腺癌细胞株中,DHFR在基因水平上的表达各细胞株之间没有显著性差异（P〈0．05）;DI-IFR蛋白的表达水平以AsPC-1和P3较高,与其余四株细胞之间均存在着显著性差异（P〈0．05）,而SW1990、Capan-1、MiAPaCa-2、PANC-1之间及AsPC-1、P3之间则无显著性差异（P〉0．05）。结论结合本组先前研究结果提示胰腺癌细胞株对DHFR抑制剂的低敏感性与DHFR蛋白的高水平表达有关,DHFR参与了胰腺癌对化疗的耐药。