不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响

目的探讨不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针转染乳腺癌SK-Br-3细胞株后,对其形态及表达的影响。方法将反义探针含铁质量浓度分别定为5、10、25、50、100 mg/L,转染乳腺癌SK-Br-3细胞24 h。采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,台盼蓝排除实验、CCK-8试剂盒观察细胞活性,Western blot法检测蛋白质表达,磁共振成像研究信号强度的变化。结果 SK-Br-3细胞对反义探针在一定质量浓度范围内(5、10、25 mg/L)呈依赖式摄取。当探针质量浓度为25 mg/L时,细胞内铁含量为(18.38±0.28)pg,细胞活力、存活率及细胞内c-erbB-2蛋白表达量明显降低(P均<0.05),磁共振扫描图像显示该组细胞T2值出现明显降低(P<0.05)。50及100 mg/L组各项结果与25 mg/L组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论当磁性c-erbB-2反义探针质量浓度为25 mg/L时,可有效转染并特异性抑制SK-Br-3细胞株的表达,并被磁共振成像所检测。     

超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用

目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。     

磁性c-erbB2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响

的：探讨磁性c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响,阐明该探针是否同时具有诊断与治疗功能。方法：磁性c-erbB2反义探针转染高表达c-erbB2的SK-Br-3肿瘤细胞作为实验组,磁性c-erbB2反义探针转染Fuda肿瘤细胞株、SPIO及ASODN转染SK-Br-3肿瘤细胞、未转染的SK-Br-3肿瘤细胞设置为4个对照组,普鲁士蓝染色光镜观察细胞内铁的分布,透射电镜观察其超微结构,并检测细胞cerbB2蛋白表达变化及铁含量,行体外MR成像。结果：光镜显示SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内散在分布铁颗粒,透射电镜观察到SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内铁颗粒、团状吞饮体,细胞出现胞膜空泡化、细胞固缩、核固缩及凋亡小体,而对照组细胞无上述改变;与对照组比较,实验组SK-Br3细胞蛋白的表达抑制率明显升高,细胞铁含量增加(P<0.01),MR扫描显示信号减低(P<0.05)。结论：磁性c-erbB2反义探针能够顺利进入SK-Br-3肿瘤细胞,不仅能导致SK-Br-3细胞的凋亡,还能够被体外MR成像所检测,可能成为一种具有治疗与诊断意义的双功能探针。     

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响

目的 探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法 设定质量浓度为45 mg/L的SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞,并将SKOV3细胞分为3组:未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。采用流式细胞术检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞增殖及活性,Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白水平,荧光定量PCR检测EGFR mRNA 水平,磁共振(MR)扫描检测细胞内信号强度变化。结果 与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P=0.001);实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均＜0.05);实验组的MR图像信号强度明显降低( P=0.0004)。结论 外加磁场可以诱导SPIO-shRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高细胞的转染率。     

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响

目的探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法设定质量浓度为45 mg/L的SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞,并将SKOV3细胞分为3组:未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。采用流式细胞术检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞增殖及活性,Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白水平,荧光定量PCR检测EGFR mRNA水平,磁共振(MR)扫描检测细胞内信号强度变化。结果与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P=0.001);实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均<0.05);实验组的MR图像信号强度明显降低(P=0.0004)。结论外加磁场可以诱导SPIO-shRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高细胞的转染率。     

超顺磁性氧化铁-短发夹 RNA 双功能分子探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度

目的：采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁 短发夹RNA(superparamagnetic iron oxide-short hairpin RNA,SPIO-ShRNA)分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞,观察细胞形态,检测细胞的生物学行为,寻找最佳的转染浓度。方法：将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100 mg/L的探针转染SKOV3细胞后,采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况,普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒,原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量,cell counting kit 8(CCK-8）检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）蛋白的表达,磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）检测细胞内信号强度变化。结果：在5~30 mg/L铁浓度范围内,细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大,当探针铁浓度为45 mg/L时,进入细胞达到饱和,标记率接近100%;细胞活性随探针质量浓度的增加而降低,各实验组细胞活性分别为94.626%±1.050%、93.373%±1.180%、91.700%±3.122%、75.100%±4.362%、72.983%±3.233%、71.010%±2.910%,5、15、30 mg/L组细胞活性未见明显下降,差异无统计学意义（P=0.475,P=0.226,P=0.068）;≥45 mg/L细胞活性明显下降(P<0.001); 探针浓度≥45 mg/L时,探针对SKOV3细胞EGFR蛋白表达抑制率明显增加,45 mg/L组蛋白表达率为68.905%±3.510%,与5、15、30 mg/L组相比差异具有统计学意义（P<0.001,P=0.001,P=0.003,P均<0. 01）;MRI显示随着探针质量浓度增加,细胞信号强度逐渐降低,45 mg/L组细胞信号强度为165.55±4.92, 信号强度明显降低,45 mg/L组与空白组（相同体积的磷酸盐缓冲液）、正常细胞组（未标记的卵巢癌SKOV3细胞）、5、15、30 mg/L各组信号强度相比,差异均有统计学意义（P均<0.001）。结论：当SPIO ShRNA分子探针铁浓度为45 mg/L时,可有效转染并特异性抑制卵巢癌SKOV3细胞的表达,能被MRI所检测,初步证实具有诊断与治疗的双重作用。     

EGFR靶向性MRI探针的制备及其与NSCC细胞靶向结合的研究*

目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）靶向性磁共振成像（MRI）探针的制备及其与鼻咽部鳞状细胞癌（NSCC）细胞靶向结合的研究。方法 利用NSCC表面EGFR作为靶受体，构建一种具有EGFR靶向性MRI探针，检测探针的性质，将探针与NSCC和正常鼻咽细胞孵育，进行普鲁士蓝染色、间接免疫荧光 及MRI，观察铁染色、荧光染色及T2WI信号强度变化，并计算信号强度变化率。结果 EGFR靶向性MRI探针的粒径为（77.0±1.5）nm，超顺磁性氧化铁（SPIO）负载率为（306.0±4.9）μg/ml，阿霉素（DOX）负载率为（103.3± 3.1）μg/ml，弛豫率为（110.4±2.9），提示EGFR靶向性MRI探针制备成功。EGFR靶向性MRI探针与NSCC细胞共孵育后，细胞内可见不同量的蓝色铁Fe颗粒，随着SPIO浓度的升高而增加；EGFR靶向性MRI探针与正常鼻咽细胞共孵育，细胞内未见明显铁颗粒存在。西妥昔单抗（阳性对照）对NSCC细胞膜有强烈的绿色荧光表达，阴性对照呈现很微弱的绿色荧光表达，EGFR靶向性MRI探针与DOX荧光强度相近。随浓度5、10、 20、40和80?mg/ml梯度增高，EGFR靶向性MRI探针T1信号基本无变化，EGFR靶向性MRI探针T2信号强度逐渐减弱，EGFR靶向性MRI探针在20、40和80 mg/ml 3个时间点比较，T2信号强度明显下降，其中80?mg/ml时T2信号强度下降最显著。EGFR靶向性MRI探针与NSCC细胞共孵育后MRI信号在T2WI上有不同程度的降低（P?<0.05），SPIO浓度越高MRI信号强度降低越明显（P?<0.05）。结论 EGFR靶向性MRI探针的粒径小，可降低MRI的T2信号强度，具有高度的靶向性。     

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针用于活体荷瘤裸鼠卵巢癌肿瘤MR成像的影响

目的：探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针用于活体荷瘤裸鼠卵巢癌肿瘤MR成像的影响。方法：设定探针注射浓度为含铁18 mg/kg,扫描时间为探针注射后27 h;将30只BALB/c荷瘤裸鼠随机分为3组,即磁转染组（实验组）,探针转染组（阴性对照组）,荷瘤裸鼠组（空白对照组）,每组样本量分别为10只荷瘤裸鼠,并在扫描前对磁转染组行外加磁场处理。采用磁共振MR扫描检测裸鼠体内肿瘤组织及邻近肌肉组织信号强度变化;每次检查完成后立即处死裸鼠,取出肿瘤组织及肌肉组织行HE、普鲁士蓝染色,并在光学显微镜下观察。结果：T1WI序列各组间肿瘤组织信号强度差异不具有统计学意义（F=2.623,P=0.091）,各组间肌肉组织信号强度差异不具有统计学意义（F=0.434,P=0.652）;T2WI及T2*序列磁转染组及探针转染组肿瘤组织信号强度较荷瘤裸鼠组减低,差异具有统计学意义（P=0.000）,且磁转染组较探针转染组差异更显著,差异具有统计学意义（P=0.000）;而T2*序列磁转染组肌肉组织信号强度较其余组信号减低,差异具有统计学意义（P=0.000）;HE染色显示各组肿瘤组织结构紊乱,细胞核异型性增多;普鲁士蓝染色表明在磁转染组和探针转染组中均存在蓝染铁颗粒,且磁转染组蓝染颗粒更为丰富。结论：外加磁场能够诱导SPIO-shRNA分子探针靶向作用于卵巢癌肿瘤组织并提高肿瘤组织摄取     

整合素αvβ3受体靶向的MR分子探针制备及体外成像

目的: 构建结缔组织生长因子多肽(CTGFP)超微超顺磁氧化铁粒子(USPIOs)磁共振(MR)分子探针,以显示高表达整合素αvβ3受体人肝癌Bel7402细胞.方法: 用免疫细胞化学方法检测Bel7402细胞αvβ3受体表达情况;用邻苯二马来酰亚胺(OPDM)将USPIO和CTGFP偶联;将USPIO-CTGFP、USPIO分别与Bel7402细胞孵育,同时设立多肽竞争组及对照组,行普鲁士蓝染色显示铁颗粒,体外磁共振成像(MRI)观察在T2WI上T2弛豫时间变化.结果: Bel7402细胞αvβ3受体表达阳性;普鲁士蓝染色可见USPIO-CTGFP组铁颗粒分布在细胞膜,而USPIO组及竞争组细胞膜上和细胞内铁颗粒极少;体外MRI显示USPIO-CTGFP组T2弛豫时间低于USPIO组、竞争组及对照组(P＜0 05).结论: USPIO-CTGFP对αvβ3受体具有较好靶向作用,可通过MRI显示高表达整合素αvβ3受体Bel7402细胞.     

探讨不同浓度 SPIO 对人成纤维细胞标记率和细胞活力影响及其MRI的实验研究

目的:探讨不同浓度超顺磁性氧化铁纳米粒子( Super-paramagnetic iron oxide,SPIO)体外标记人成纤维细胞 (Human fibroblast cells,Hfbs) 的磁性标记率、对细胞生长活力的影响,以及体外磁共振成像(Magnetic resonance imaging,MRI) 成像的特征.方法:将单纯 SPIO(铁浓度为 200 μg/ml )、不同浓度的SPIO-多聚赖氨酸复合物分别与培养基混合( 铁的终浓度分别为 150、100、50、25 μg/ml,PLL 终浓度为 7.5 μg/ml ),加入 Hfbs 共同培养 12、24、48、72 h 后收集细胞.采用台盼蓝排除试验检测细胞活性和普鲁士蓝染色法检测细胞铁分布.运用光学显微镜、透射电镜观察铁颗粒在细胞内的位置、计算其标记率;MR 扫描观察细胞信号强度变化情况.结果:SPIO-多聚赖氨酸复合物组细胞标记率显著高于单纯 SPIO 标记组 (P<0.05 ), 台盼蓝排除试验显示,100 μg Fe/ml 及其以下浓度组细胞活力与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05 ).普鲁士蓝染色显示每个标记细胞胞质内可见多少不等的蓝染铁颗粒,电镜显示铁颗粒集中于内涵体和溶酶体中;含量在 25～50 μg Fe/ml 的培养液是 SPIO 标记干细胞的安全浓度,在此浓度阈值标记后孵育 18～24 h 即可有效标记细胞 95%～100% ;MR扫描显示标记细胞信号强度明显降低.结论:自制合成的 SPIO-多聚赖氨酸复合物可以简便、安全的标记人成纤维细胞.并且在适当浓度 25 μg Fe/ml 标记细胞不仅标记效率高,而且对细胞活力无明显影响,SPIO 标记细胞明显降低MR扫描下的细胞信号强度.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。