PI3K阻断剂LY294002对TNF-α诱导心肌肥大的Ca~(2+)-CaMKⅡ和CaN通路的影响

目的研究PI3K是否通过Ca2+-Ca MKⅡ和Ca N信号途径参与肿瘤坏死因子-α诱导的心肌肥大。方法应用激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞内Ca2+浓度变化。Lowry法测心肌细胞蛋白含量。计算机图象分析测心肌细胞体积。应用Western blot法测定心肌细胞Ca MKⅡδB和Ca N蛋白表达。结果 1PI3K阻断剂LY294002(50μmol/L)明显抑制TNF-α(100μg/L)诱导的心肌细胞内钙离子浓度增高(P0.01),对正常心肌细胞内Ca2+浓度无明显影响。其抑制程度与LY294002+2-APB(30μmol/L)组相近(P0.05),小于LY294002+ryanodine(50μmol/L)组(P0.05)。2LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞蛋白含量的增加及细胞体积的增大;其程度与LY294002+2-APB无统计学差异,但大于单用2-APB组,小于LY294002+ryanodine组(P0.05)。PI3K阻断剂LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞Ca MKⅡδB和Ca N表达增加(P0.01),其抑制程度与LY294002+2-APB组相近(P0.05)。结论 PI3K通过作用IP3R使心肌细胞内Ca2+浓度增加,进而调节心肌细胞内Ca MKⅡδB和Ca N的表达,从而参与TNF-α诱导的心肌肥大。     

PI3K阻断剂LY294002对TNF-α诱导心肌肥大的

目的　研究PI3K是否通过Ca²⁺-CaMKⅡ和CaN信号途径参与肿瘤坏死因子-α诱导的心肌肥大。方法　应用激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞内Ca²⁺浓度变化。Lowry法测心肌细胞蛋白含量。计算机图象分析测心肌细胞体积。应用Western　blot法测定心肌细胞CaMKⅡδB和CaN蛋白表达。结果　①PI3K阻断剂LY294002（50　μmol/L）明显抑制TNF-α（100　μg/L）诱导的心肌细胞内钙离子浓度增高（P<0.01）,对正常心肌细胞内Ca²⁺浓度无明显影响。其抑制程度与LY294002+2-APB　（30　μmol/L）组相近（P>0.05）,小于LY294002+ryanodine（50　μmol/L）组（P<0.05）。②LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞蛋白含量的增加及细胞体积的增大;其程度与LY294002+2-APB无统计学差异,但大于单用2-APB组,小于LY294002+ryanodine组（P<0.05）。PI3K阻断剂LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞CaMKⅡδB和CaN表达增加（P<0.01）,其抑制程度与LY294002+2-APB　组相近　（P>0.05）。结论　PI3K通过作用IP3R使心肌细胞内Ca²⁺浓度增加,进而调节心肌细胞内CaMKⅡδB和CaN的表达,从而参与TNF-α诱导的心肌肥大。     

钙神经素信号途径在前列腺素F2α诱导乳鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨Ca2 /钙调蛋白(CAM)依赖的钙神经素(CAN)信号途径在前列腺索F2α(PGF2α)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法:用PGF2α(1 μmol/L,0.1μmol/L,0.01 μmol/L,0.001μmol/L)刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用CaN特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.以心肌细胞总蛋白含量和心肌细胞面积作为反映心肌肥大的指标,用免疫印迹(Western-blot)测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达,用Fura 2/AM为荧光指示剂测定心肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i).结果:除0.001μmol/L浓度的PGF2α外,1.0μmol/L,0.1μmol/L,0.01μmol/L的PGF2α均可明显提高心肌细胞内蛋白质浓度,而其中0.1μmol/L PGF2α作用最显著,增加了(67.78±11.19)%,并且使乳鼠心肌细胞面积增加了(68.94±1.52)%.0.1μmol/L PGF2α刺激的心肌细胞CaN-α蛋白表达增加和[Ca2 ]i提高,并且加入CsA可阻断0.1μmol/L PGF2α诱导的乳鼠心肌细胞肥大效应.结论:PGF2α可能通过Ca2 /CaM-CaN信号途径刺激乳鼠心肌细胞发生肥大.     

从钙离子调控改变探讨兔肾素血管紧张素系统阻断剂逆转甲状腺素促心肌肥厚的机制

目的 研究甲状腺素诱导的肥厚心肌细胞内钙调控变化及其机制,探讨肾素血管紧张素系统(RAS)阻断剂逆转甲状腺素促心肌肥厚的机制.方法 腹腔注射左旋甲状腺素(L-Thy)建立兔甲状腺素性心肌肥厚模型,经胸二维超声心动图测定室间隔厚度(IVS)、左心室内径(LV)及左心室后壁厚度(LVPW)后收集心肌标本,光镜及透射电镜下观察心肌细胞结构改变,Fluo3/AM荷载共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度,逆转录聚合酶链半定量检测L型Ca2+通道(LCC)、兰尼碱受体(RyR)、肌浆网钙泵(SERCA)mRNA表达,对硝基苯磷酸酯(P-nitrophenyl phosphate,P-NPP)法检测SERCA活性,免疫组织化学法检测IP3R蛋白表达.结果 甲状腺素可诱导心肌肥厚、心肌细胞结构改变及纤维组织增生,甲状腺素组细胞内钙离子浓度明显高于对照组,分别为(576.2±41.7)nmol/L比(314.6±35.6)nmol/L(P<0.01);甲状腺素组RyR mRNA、SERCA mRNA及IP3R蛋白较对照组表达上调,分别为1.19±0.21比0.73±0.15(P<0.01)、1.01±0.08比0.76±0.09(P<0.01)、65.3±13.7比47.9±10.2(P<0.01);LCC mRNA表达和SERCA活力降低,分别为0.48±0.11比0.75±0.16(P<0.01)、(0.062±0.013)μmol·min-1·g-1比(0.133±0.022)μmol·min-1·g-1(P<0.01).咪达普利和缬沙坦干预可显著抑制甲状腺素诱导的心肌细胞肥厚,降低细胞内钙离子浓度,咪达普利组和缬沙坦组细胞内钙离子浓度分别为(376.4±32.5)nmol/L和(392.6±41.2)nmol/L均显著低于甲状腺素组(576.2±41.7)nmol/L(P<0.01);咪达普利和缬沙坦干预后LCC mRNA表达高于甲状腺素组,分别为0.68±0.14比0.48±0.11(P<0.01)、0.64±0.13比0.48±0.11(P<0.01);咪达普利和缬沙坦干预增加SERCA的活力,分别为(0.115±0.019)μmol·min-1·g-1比甲状腺素组(0.062±0.013)μmol·min-1·g-1(P<0.01)、(0.109±0.015)μmol·min-1·g-1比甲状腺素组(0.052±0.013)μmol·min-1·g-1(P<0.01),但对RyR mRNA、SERCA mRNA及IP3R蛋白表达无影响.结论 RAS和细胞内钙超载可能参与甲状腺索性心肌肥厚的发病机制,SERCA活力降低可能是导致甲状腺素性肥厚心肌细胞内钙超载的重要因素.咪达普利和缬沙坦可以改善L-Thy诱导的心肌重构和细胞内钙超载并对SERCA活力具有保护作用.     

NADPH氧化酶在肿瘤坏死因子-α致乳鼠心肌细胞肥大中的作用

目的 探讨NADPH氧化酶来源的活性氧(ROS)在肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导乳鼠心肌细胞肥大中的作用.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为正常对照组,TNF-α组(80ng/ml),APO(100 μmol/L)组和TNF-α+APO组.BCA法测定心肌细胞蛋白合成总量.荧光染料(DCFH-DA)及激光共聚焦显微镜检测心肌细胞活性氧水平.RT-PCR检测p22phox mRNA的表达.免疫细胞化学染色法检测心肌细胞p22phox的表达.结果 TNF-α可显著增加心肌细胞ROS生成,APO显著抑制TNF-α刺激后ROS的产生.TNF-α促进心肌细胞p22phox mRNA和蛋白的表达,APO可抑制TNF-α的作用.结论 TNF-α可能通过上调NADPH氧化酶亚基p22phox的表达,促进心肌产生ROS增加,导致了心肌细胞肥大的发生.     

腺苷A1受体激动抑制心肌细胞肥大

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷A1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropy1) adenosine(R-PIA)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制特别是与CaMK Ⅱ表达的关系及对心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化的影响.方法 新生大鼠心肌细胞分组给药,以10 μmol/L的异丙肾上腺素(β肾上腺素激动剂,β-AR)诱导心肌肥大,观察1 μmol/L的R-PIA的作用以及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂KN93(0 2 μmol/L)防止腺苷A1受体的激活对心肌肥厚的作用.[3H]亮氨酸leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成;Western blot法测细胞核内CaMKⅡδB的表达水平;Till图像测定系统,以Fura-2做荧光标志,观察心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化.结果 1 μmol/L的R-PIA可以明显抑制Iso诱导的蛋白合成增加[(974 8±58 6)vs(1220 8±240 5)计数/(min·孔),P<0 01],抑制[Ca2 ]i瞬变增加[(189 9±10 7) vs (312 5±8 8)nmol/L,P<0 05]和心肌细胞核内CaMK Ⅱδ B的表达含量增加的作用,该抑制作用可以被A1受体抗拮剂8-cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.并且当R-PIA与KN93合用时二者有协同抑制作用,其作用较单用KN93组明显[分别为蛋白合成:(R-PIA KN93合用:758 1±80 7)vs(KN93单用:981 3±184 4),P<0 05;[Ca2 ]i瞬变浓度:(R-PIA KN93合用:169 96±10 02)vs(KN93单用:202 39±16 58),P<0 05].结论 在低血清环境下,Iso明显诱导心肌细胞肥大.腺苷通过激动A1受体明显抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制可能通过降低心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达.     

氯通道参与脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流

研究Cl-通道在牛脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流中的作用.采用培养的脑血管平滑肌细胞,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura-2/Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2+浓度.结果发现① Cl-通道阻断剂DIDS(0.75 μmol/L)能降低内皮素1(10-7 mol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为29.6%±3.9%,随后加入Cl-通道阻断剂NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为44.9%±8.7%;交换加药顺序,NPPB能降低内皮素1刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.②DIDS(0.75 μmol/L)能降低三磷酸腺苷(10 μmol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为26.7%±10.5%,随后加入NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为54.3%±9.6%;交换加药顺序,NPPB能降低三磷酸腺苷刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.③DIDS(0.75 μmol/L)能降低环匹阿尼酸(10 μmol/L)刺激引起的脑血管平滑肌细胞Ca2+内流,抑制率为26.5%±5.0%,随后加入NPPB(10 μmol/L)能继续降低平台相,抑制率为46.1%±4.2%;交换加药顺序,NPPB能降低环匹阿尼酸刺激引起的Ca2+内流,DIDS能进一步降低Ca2+内流.提示对DIDS、NPPB敏感的非同一性Cl-通道参与内皮素1、三磷酸腺苷、环匹阿尼酸触发的脑血管平滑肌细胞 Ca2+池操纵性Ca2+内流.     

黄芪抑制去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞内游离钙含量升高的作用

目的 :研究黄芪对去甲肾上腺素 (NE)诱导大鼠心肌细胞内游离钙 [Ca2 + ]i 含量升高的作用。方法 :应用AR CM MIC阳离子检测系统 ,采用Ca2 + 指示剂Fura 2 /AM检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察Am对NE诱导大鼠心肌细胞内 [Ca2 + ]i 升高的影响。结果 :当细胞外Ca2 + 浓度为 1 .3mmol/L时 ,大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 为 ( 97.1 1 +8.2 1 )nmol/L ,给予 1 0 -5mol/L的NE ,可使大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 增至 ( 2 91 .73± 1 5 .0 3 )nmol/L,而经黄芪处理的大鼠心肌细胞的 [Ca2 + ]i则由 ( 95 .98±8.1 4)nmol/L增至 ( 1 1 4.2 8± 9.2 9)nmol/L。结论 :NE能诱导大鼠心肌细胞内游离钙含量明显升高 ,黄芪对心肌细胞静息 [Ca2 + ]i无明显影响 ,但能抑制NE诱导大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 升高     

黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌肥大的保护作用

目的探讨黄芪甲苷对高糖诱导的心肌细胞肥大的保护作用。方法利用体外培养模型,以25mmol/L高糖诱导心肌肥大。新生大乳鼠心肌细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+16μmol/L黄芪甲苷组、高糖+32μmol/L黄芪甲苷组和高糖+64μmol/L黄芪甲苷组,用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;MTT法检测细胞存活率;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i的瞬间变化。结果与正常对照组相比,高糖使心肌细胞蛋白质含量增加35.7%,体积增大81.3%,[Ca2+]i瞬变增加62.5%%,心肌细胞存活率降低36.1%。加入16μmol/L黄芪甲苷后,与高糖组相比,心肌细胞蛋白质的含量和细胞体积分别降低20.3%和10.6%,[Ca2+]i瞬间变化降低8.0%,心肌细胞的存活率增加20.0%。结论黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌细胞肥大具有保护作用。     

慢性低氧后钙转运的变化(英文)

目的 :本文研究大鼠慢性低氧后心肌钙转运的变化。方法 :将大鼠放置于 10 %氧环境下 4周 ,分离正常及慢性缺氧大鼠的右心室肌细胞 ,用光谱荧光法测定电刺激和咖啡因引起的细胞内 [Ca2 + ]i瞬变 ,并测定肌浆网膜上的Ca2 + ATP酶 （SERCA）和ryanodine受体 （RyR）蛋白的水平。结果 :低氧后电刺激和咖啡因引起的细胞内 [Ca2 + ]i瞬变的幅度降低且时程延长 ,RyR水平无明显改变但SERCA已显著减少。结论 :Ca2 + ATP酶活性和蛋白水平的降低是低氧钙转运异常的主要原因。     

RyR与PKC在UTP对猪冠状动脉平滑肌上STOCs调控中的作用

目的 探讨三磷酸尿苷(UTP)对STOCs作用的胞内信号转导机制及RyR、PKC对其过程的干预作用.方法 应用全细胞穿孔膜片钳记录技术,观察三磷酸尿苷(UTP)对猪冠状动脉平滑肌细胞膜上大电导钙激活钾通道(BKCa)介导的自发性瞬时外向钾电流(STOCs)的作用,及兰诺定受体(RyR) 和蛋白激酶C(PKC)的特异性阻断剂ryanodine、BisI预处理细胞后UTP对猪冠状动脉平滑肌细胞STOCs的作用.结果 ①50 μmol/L的UTP可使STOCs的幅度与频率明显增加[(23.53±2.55)pA,(0.2167±0.0217)Hz vs (40.76±5.75)pA,(0.369 5±0.035 8)Hz,n=7,P<0.01].②50 μmol/L ryanodine处理细胞后,50 μmol/L UTP不能再激活STOCs.③5 μmol/L的U-73122处理细胞后,50 μmol/L UTP也不能激活STOCs[(22.76±6.43)pA,(0.222 7±0.097 7)Hz vs (23.28±8.43)pA,(0.195 3±0.061)Hz;n=7,P>0.05].④1 μmol/L的BisI处理细胞后,50 μmol/L UTP仍可激活STOCs[(46.32±6.17)pA,(0.407±0.061)Hz vs(65.53±8.34)pA,(0.693 7±0.059 7)Hz;n=10,P1<0.05,P2<0.01],且BisI存在时UTP对STOCs的激活作用明显大于UTP单独存在时的激活作用(n=10/7,P1<0.05,P2<0.01).结论 PLC、RyR和PKC均参与了UTP激活猪冠状动脉平滑肌上STOCs的过程.     

κ阿片受体激动通过钙调神经磷酸酶和胞外信号调节激酶信号抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌肥大

目的探讨κ阿片受体(κ-OR)激动抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的信号转导机制。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察κ-OR激动剂U50488 H1μmol/L的作用,并进一步探索在钙调神经磷酸酶(CaN)特异性抑制剂环孢菌素A(CsA)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126、L型钙通道阻滞剂维拉帕米及β肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化;Western blot法测CaN、ERK表达。结果U50488 H1μmol/L可以明显抑制Iso诱导的心肌蛋白含量增加、体积增大和胞内[Ca2+]i瞬间变化的增高,其抑制程度与CsA、U0126、维拉帕米及普萘洛尔相似;U50488 H可以抑制Iso诱导的CaN表达增加和ERK磷酸化增加;CaN抑制剂CsA可以抑制Iso诱导的ERK磷酸化增加,ERK抑制剂U0126可以抑制Iso诱导的CaN表达增加。结论κ-OR...     

肌浆网/内质网钙调控在心血管疾病中的研究进展

肌浆网/内质网(SR/ER)是细胞内重要的钙储库及调控系统,主要通过Ca2+释放通道雷尼丁受体(RyR)和1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R),以及Ca2+摄取蛋白肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA)和基质交感分子1(STIM1)等调节钙信号,维持细胞内钙稳态。研究发现,SR/ER钙平衡对细胞正常生理功能的发挥和信息传递非常重要,SR/ER钙稳态失调与缺血性心脏病、心肌肥厚、高血压及心力衰竭等心血管疾病的发生发展密切相关。本文就SR/ER钙调控在心血管疾病中的研究进展作一概述,重点阐述SR/ER钙离子通道和相关调控蛋白对细胞内钙信号的调节机制,以期为临床心血管疾病的治疗提供重要策略和潜在靶点。     

腺苷A_1受体激动抑制心肌细胞肥大

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷 A_1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制特别是与 CaMK Ⅱ表达的关系及对心肌细胞[Ca~(2+)]i 瞬间变化的影响。方法新生大鼠心肌细胞分组给药,以10μmol/L 的异丙肾上腺素(β肾上腺素激动剂,β-AR)诱导心肌肥大,观察1 μmol/L 的 R-PIA 的作用以及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂 KN93(0.2 μmol/L)防止腺苷 A_1受体的激活对心肌肥厚的作用。[~3H]亮氨酸 leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成;Western blot 法测细胞核内 CaMK ⅡδB的表达水平;Till 图像测定系统,以 Fura-2做荧光标志,观察心肌细胞[Ca~(2+)]i 瞬间变化。结果 1 μmol/L 的 R-PIA 可以明显抑制 Iso 诱导的蛋白合成增加[(974.8±58.6)vs(1220.8±240.5)计数/(min·孔),P<0.01],抑制[Ca~(2+)]i 瞬变增加[(189.9±10.7)vs(...     

当归挥发油含药血清对肥大心肌细胞钙离子浓度的影响

目的:研究当归挥发油含药血清对肥大心肌细胞钙离子浓度的影响。方法:超临界萃取当归挥发油,制备含药血清。原代培养大鼠心肌细胞,血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导制备心肌细胞肥大模型,5%当归挥发油含药血清进行干预。以图像分析软件测量心肌细胞表面积,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量,Fluo-3测定肥大心肌细胞内Ca2+荧光强度变化。结果:AngⅡ组(10-7 mmol/L)心肌细胞表面积、蛋白含量均明显增加,与空白组相比(P0.05),心肌细胞肥大模型成功建立。5%当归挥发油含药血清处理组细胞内钙离子浓度明显下降,与AngⅡ组相比(P0.05),当归挥发油可减少AngⅡ(10-7 mmol/L)诱导的肥大心肌细胞内Ca2+的浓度。结论:当归挥发油含药血清可能对AngⅡ诱导的肥大心肌细胞具有钙通道阻滞的作用。     

腺苷A1受体与к阿片肽受体激活对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的交互作用

目的观察腺苷A1受体与κ阿片肽受体(κ-OR)激活对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的交互作用及机制。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,以Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenylIsopropyl)adenosine(R-PIA)1μmol/L和κ-OR激动剂U50,488H1μmol/L对其作用,进一步探讨腺苷A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)0.1μmol/L存在时κ-OR的激活对细胞肥大的影响和κ-OR拮抗剂nor-binaltorphimine(NOR-BNI)1μmol/L存在时腺苷A1受体的激活对心肌细胞肥大的影响。通过Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;以Fluo-3/AM为荧光探针,共聚焦显微镜下测量心肌细胞内[Ca2+]i变化;RT-PCR法检测心肌细胞心房钠尿肽(ANP)的mRNA表达。结果 10μmol/LIso可以诱导心肌细胞肥大,1μmol/L的R-PIA(腺苷A1受体激动剂)可以明显抑制Iso诱导的心肌细胞蛋白合成增加、体积增大、ANPmRNA表达增加、心肌细胞内[Ca2+]i荧光强度增大,该抑制作用可以被1μmol/Lκ-OR拮抗剂NOR-BNI部分阻断;κ-OR激动剂U50,488H1μmol/L可以明显抑制Iso诱导的心肌细胞蛋白合成增加、体积增大、ANPmRNA表达增加、心肌细胞内[Ca2+]i荧光强度增大,该抑制作用可以被腺苷A1受体拮抗剂CPDPX部分阻断。结论腺苷可通过激动A1受体、阿片肽可通过激动κ受体抑制Iso诱导的心肌肥大,二者可以通过影响心肌细胞内[Ca2+]i浓度的增大而交互抑制Iso诱导的心肌肥大。     

横纹肌肌浆网Ca2+释放通道的调节

横纹肌细胞内Ca2+转运的中心环节是肌浆网Ca2+释放通道(RyR)。RyR是565 kDa蛋白分子组成的四聚体,其位于胞浆的部分可与离子、小分子和蛋白相结合,并有磷酸化、氧化与亚硝基化位点,跨肌浆网膜部分形成Ca2+通道。在心肌与骨骼肌,因离子、小分子与蛋白-蛋白的相互作用,以及蛋白修饰等调节机制的差别,使得经细胞膜L-型Ca2+通道介导的RyR开放机制并不相同,对RyR通道关闭的调节也不相同。但是,心肌与骨骼肌中的Calstabins在RyR的多个结构域上存在结合位点,从而通过影响RyR结构域的相互作用,便可调节其空间构象而改变RyR通道的功能。因此,基因突变改变RyR的空间构象可导致遗传性心肌病与肌病,药物JTV519则通过稳定RyR的空间构象而防治心律失常,对抗骨骼肌疲劳。     

TNF-α对培养乳鼠心肌细胞的作用

目的:探讨不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对培养的乳鼠心肌细胞活力、蛋白合成、分泌AngⅡ及AT1受体表达的影响。方法: 体外培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为对照组和不同浓度TNF-α（20、40、60、80、100 μg/L）干预组,用BCA法测定心肌细胞蛋白合成总量,MTT比色法和LDH检测反映心肌细胞的活力,ELISA法检测心肌细胞培养液中AngⅡ的含量,免疫细胞化学染色法检测心肌细胞膜AT1受体表达的变化。结果: TNF-α浓度依赖性地增强乳鼠心肌细胞活力、增加蛋白合成,20、40、60、80 μg/L TNF-α组细胞活力较对照组分别增加1.21（P<0.05)、1.42、1.51和1.73倍（均P<0.01),蛋白合成分别增加27.8%（P<0.05）、38.9%、46%和66.7%（均P<0.01）,而LDH含量差异无显著性。100 μg/L TNF-α组与对照组比较,心肌细胞活力降低18.5%（P<0.01）、蛋白合成降低18.3%（P<0.01）及心肌LDH生成增加1.48倍（P<0.01)。TNF-α浓度依赖性地增加乳鼠心肌细胞AngⅡ分泌,与对照组比较分别增加0.5、1.1、1.6、3和3.6倍（均P<0.01）。TNF-α还具有诱导AT1受体的表达的作用。结论: TNF-α可促进心肌细胞内源性AngⅡ产生,引起心肌细胞活力、蛋白合成改变,AT1受体表达上调,可能介导了心肌肥大、心肌受损等心肌改建的病理生理过程。     

溶血磷脂酰胆碱对心肌细胞动作电位的影响及其机制研究

目的:探讨溶血磷脂酰胆碱(LPC)对心肌细胞动作电位的影响及内在机制。方法:以胶原酶消化法获取1~3d新生Wistar大鼠心室肌细胞(共5批,每批8只),以及特异性人类心脏T型钙通道α1亚基在HEK293细胞上稳定表达的细胞株(HEK293-Cav3.1和HEK293-Cav3.2),孵育传代培养进行全细胞膜片钳记录。结果:LPC(10μmol/L)或佛波酯(PMA,1μmol/L))显著增快了新生大鼠心室肌细胞自发跳动。LPC显著增大了新生大鼠心室肌T型Ca2+通道电流(ICa,T),且这种增大作用能被特异的心肌T型钙离子通道α1亚基Cav3.2阻断剂Ni 2+显著抑制。Ni 2+显著抑制了心室肌细胞自发动作电位的频率,特别是对LPC作用下的自律性提高,但是Ni 2+没有完全抑制PMA的促进作用。结论:LPC主要通过调控Cav3.2亚基而增大ICa,T,促进心肌自律性增高,从而致心律失常发生。     

Ca^2＋／CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ对神经肽Y诱导心肌细胞内钙重分布的作用

背景神经肽Y(NPY)是中枢神经及末梢神经重要的调节剂,作用广泛,包括调节心脏及血管正常的生理活动,并参与许多心血管疾病的发生发展.研究表明,急性的NPY 刺激可促进心肌细胞钙活动,对心肌产生正性肌力作用.而持续NPY刺激对心肌钙活动的影响及其机制,目前还未见报道.目的 观察NPY刺激对大鼠心肌细胞胞浆钙和肌浆网(SR)内钙分布的影响,以及Ca2 /CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在其中的作用.方法 用100 nmol/L NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24 h,CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93干预.应用荧光染料Fluo-4 AM负载胞浆钙;Fluo-5N AM负载肌浆网内游离钙离子,所有钙影像均由激光共聚焦显微镜记录.应用Western-blot法和免疫荧光法检测Ca2 -ATP酶(SERCA2a)和ryanodine受体(RyR2)两种蛋白的分布及蛋白量的变化.结果 经100 nmol/L NPY刺激24 h后,与对照组相比,心肌细胞胞浆游离钙浓度明显升高(65.3±6.2 VS50.7±4.1,P<0.05),心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组(67.6±8.3 VS 85.5±6.0,P<0.05),而KN-93可抑制上述效应;NPY可增加SERCA2a和RyR2的蛋白表达(SERCA2a:2.4±0.7 VS对照组:1.4±0.3;RyRz:2.3±0.4 vs对照组:1.2士0.4),KN-93可抑制上述作用.结论 CaMK Ⅱ通过影响SERCA2a和RyR2,调控SR的钙转运,进而介导NPY刺激下的细胞内钙重分布效应.