RNA干扰沉默mdrl基因联合阿霉素对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM增殖的抑制作用

目的:观察RNA干扰沉默mdrl基因后化疗药物对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM增殖的影响.方法:RT-PCR检测靶向于mdrl基因的小发夹状RNA(pshRNA-mdrl)对SKOV3/ADM细胞内mdr1mRNA表达的影响;采用MTT法及软琼脂克隆形成实验测定pshRNA-mdrl联合化疗药物阿霉素对SKOV3/ADM的增殖抑制作用.结果:pshRNA-mdrl能抑制SKOV3/ADM细胞mdr1mRNA的表达,pshRNA-mdr1联合阿霉素明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖.结论:靶向于mdr1的pshRNA联合阿霉素能显著抑制SKOV3/ADM的增殖,增敏化疗.     

外源性p53基因抑制卵巢癌细胞的增殖并增加其对放疗的敏感性

目的　探讨外源性p5 3基因转染对人卵巢癌细胞系SKOV - 3的生物学行为及放疗敏感性的影响。方法　用脂质体介导的方法 ,将p5 3基因的真核细胞表达载体 (PcDNA -p5 3)导入不表达p5 3的人卵巢癌SKOV - 3细胞中 ,经G4 1 8筛选 ,Northernblot及Westernblot鉴定后 ,观察细胞生长速度、集落形成能力和增殖周期的变化 ;观察p5 3基因转染与放疗联合作用对细胞集落形成的影响。结果　外源性p5 3基因的表达明显抑制了卵巢癌细胞的生长及集落形成能力 ,使细胞阻滞于G1 期。p5 3基因与放疗联合作用明显抑制了卵巢癌细胞的集落形成。结论　外源性p5 3基因能抑制卵巢癌细胞的生长 ,并增加卵巢癌细胞对放疗的敏感性     

Survivin反义核酸对SKOV3细胞生长及Survivin基因表达的影响

目的 :观察Survivin反义核酸对人卵巢癌细胞系SKOV3的生长及Survivin基因表达的影响。方法 :应用基因重组技术 ,将在真核细胞中能稳定表达反义Survivin的pcDNA3 SVVas经脂质体LipofectamineTM2 0 0 0 介导转染人卵巢癌细胞株SKOV3,经G4 1 8筛选得到抗性克隆 (SKOV3/SVVas) ,同时以空载体pcDNA3转染SKOV3作为对照(SKOV3/neo) ;绘制细胞生长曲线 ;采用免疫组化、RT PCR和流式细胞仪检测SKOV3、SKOV3/neo及SKOV3/SVVas细胞的内源性SurvivinmRNA及蛋白的表达和凋亡细胞。结果 :与SKOV3及SKOV3/neo细胞比较 ,SKOV3/SVVas细胞增殖和代谢能力均明显降低 ,Survivin蛋白阳性表达率及mRNA相对表达量明显降低 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡率显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 :稳定表达的反义Survivin能够有效抑制SKOV3细胞内源性Survivin蛋白的表达 ,诱导SKOV3细胞凋亡。     

ARLTS1基因重组质粒对卵巢癌细胞株SKOV3生长和凋亡的影响

目的 探讨Ras超家族成员ARLTS1基因对卵巢癌细胞株SKOV3生长及凋亡的影响.方法 构建真核表达质粒pCMV-Tag 3B-ARLTSI,并转染卵巢癌SKOV3细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测ARLTS1基因转染组、空载体pCMV-Tag 3B转染组和未转染组中ARLTS1 mRNA及蛋白表达水平,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等生物学行为的变化,Western blot检测细胞easpase-3和bcl-2蛋白表达水平的变化.结果 真核表达质粒pCMV-Tag 3B-ARLTSI转染SKOV3细胞后,经PCR和Western blot证实转染成功.ARLTSI转染SKOV3细胞后,细胞生长明显受抑(P<0.05).流式细胞术检测发现ARLTS1基因转染组与空载体转染组及未转染组细胞相比,S期细胞比例明显增多(P=0.035和0.011,细胞凋亡率(36.7%)显著高于另两组细胞(P均<0.001).ARLTS1基因转染组细胞中caspase-3和bel-2蛋白表达水平分别下降34.9%和47.7%,与未转染组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 ARLTS1基因转染后能抑制人卵巢癌细胞SKOV3的生长,调控SKOV3细胞周期,可能通过caspase途径促进肿瘤细胞凋亡·     

卵巢癌细胞侵袭转移过程中KAI1基因的表达及意义

目的:探讨卵巢癌细胞SKOV3侵袭转移过程中KAI1基因的表达及意义。方法:采用MTT法观察丁酸钠对细胞的抑制作用,形态学观察SKOV3药物作用后细胞超微结构的变化,及转移抑制基因KAI1的表达情况。结果:药物对卵巢癌SKOV3细胞的抑制率呈剂量依赖性,丁酸钠作用下细胞微绒毛减少变短、消失,KAI1基因免疫组化染色较对照组明显增强。结论:转移抑制基因KAI1在卵巢肿瘤侵袭转移中起着重要作用。     

洛铂对SKOV3细胞凋亡及bax、bcl-2基因表达的影响

目的研究洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用及探讨其对凋亡基因bcl-2和bax表达的影响。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率,流式细胞仪检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2的表达。结果体外培养卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡,同时,随着洛铂浓度的增加,bax基因的表达增加,而bcl-2表达减少。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊具有药物敏感性,洛泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡,bax蛋白的表达增加和bcl-2蛋白表达的减少可能是洛泊诱导卵巢癌细胞的凋亡机制之一。     

顺铂作用于耐顺铂卵巢上皮癌细胞后其细胞生物学特性的改变

目的:探讨耐顺铂卵巢癌SKOV3/DDPⅡ细胞对于顺铂作用后其细胞周期、凋亡、增殖及铂类耐药相关基因ARHGDIB和CCND1表达量的变化。方法:采用流式细胞术检测不同浓度和时间顺铂作用后SKOV3/DDPⅡ细胞周期和凋亡率的变化,并与标记GFP的上皮性卵巢癌细胞株SKOV3-GFP(敏感株)相比较;通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度和时间顺铂作用后细胞增殖的变化;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测裸鼠体内瘤块耐药基因CC-ND1和ARHGDIB基因的表达情况。结果:半抑制浓度的顺铂作用48h后,SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞分布于G0/G1期的比例相对于无顺铂处理组明显下降(P<0.01,P<0.05),SKOV3/DDPⅡ细胞分布于G2/M期的比例则相对于无顺铂处理组明显升高(P<0.01);而顺铂作用48h内SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞凋亡率随时间和浓度的增大而增大;以9.9,19.8,29.7μmol/L浓度的顺铂处理6d以后,SKOV3/DDPⅡ的增殖抑制得到解除,并继续生长,而SK-OV3-GFP细胞则随顺铂作用时间延长增殖持续受到抑制。顺铂作用体内移植瘤5次后,CCND1在SKOV3/DDPⅡ-5的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高92.98倍,作用第8次后,ARHGDIB在SKOV3/DDPⅡ-8的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高2.51倍。结论:具有耐药表型的卵巢上皮癌细胞在顺铂作用下降低分布于G0/G1期细胞数使细胞生长受到一定程度的抑制,但在顺铂刺激后肿瘤细胞过度表达CCND1基因使细胞顺利通过G1/S检查点促进肿瘤细胞增殖,同时上调表达ARHG-DIB基因抵抗顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。     

罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人卵巢癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响.方法 在SKOV3细胞培养液中加入不同浓度RSG(0.1、1.0、10和100 μmol/L),采用MTT法测定RSG对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学方法 检测干预前后细胞中PPARγ、c-myc的mRNA和蛋白水平变化.结果 MTT法结果 显示,RSG可抑制SKOV3细胞生长,并呈明显的浓度和时间依赖方式.流式细胞术结果 显示,RSG能明显诱导SKOV3细胞凋亡,在10、100 μmol/L RSG作用于SKOV3细胞24 h后,凋亡率分别为45.75%和51.97%,均明显高于对照组(6.82%,P<0.05);并使细胞周期阻止于G1期,呈浓度依赖方式.Hoechst33258荧光染色显示RSG处理后的SKOV3细胞中出现凋亡小体.免疫细胞化学和荧光定量RT-PCR结果 显示,人卵巢癌SKOV3细胞表达PPARγ,RSG作用于SKOV3细胞24 h后PPARγ的mRNA和蛋白表达水平上调,而c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调.结论 RSG具有抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长和诱导凋亡作用,使细胞周期阻滞于G1期;并通过活化PPARγ,下调c-myc的mRNA和蛋白表达水平.     

新型生物素接枝改性聚乳酸-多烯紫杉醇纳米粒体外抗肿瘤研究

目的 以人卵巢癌细胞SKOV3为模型,研究负载多烯紫杉醇(TXT)的新型生物素接枝改性聚乳酸纳米粒(TXT-BPLA NPs)的体外抗肿瘤作用.方法 以不同剂量TXT-BPLA NPs(1、10、100、1 000、10000nmol/L)处理SKOV3细胞不同时间(12、24、48、72、96、120 h)后用CCK-8检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3表达.结果 在10 ～ 10 000 nmol/L浓度范围内,相同时间点下,TXT和TXT-BPLA NPs对SKOV3细胞生长的抑制率均呈现出剂量依赖性.在相同浓度下,TXT组在24 h和48 h对SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率及caspase-3的表达均明显高于TXT-BPLA NPs组(P ＜0.05);72 h后,TXT-BPLA NPs组对SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率及caspase-3的表达均明显高于TXT组(P＜0.05).结论 与TXT相比,TXT-BPLA NPs能够更加持续地抑制SKOV3细胞的增殖,并促进caspase-3介导的细胞凋亡,具有更强的持续性抗肿瘤作用.     

转染IL-12基因的人脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞的体外增殖和对裸鼠体内移植瘤的抑制作用

摘要：目的探讨人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）负载白细胞介素12（IL-12）重组腺病毒载体抗卵巢癌SKOV3作用的研
究。方法腺病毒介导IL-12 基因转染体外培养的UC-MSCs（AdIL-12-MSCs）,Western blotting 和RT-PCR 检测
AdIL-12-MSCs中IL-12基因蛋白及mRNA表达,ELISA法检测AdIL-12-MSCs上清液中IL-12的表达。光镜下观察外源
性IL-12对SKOV3细胞形态的影响,MTT法检测AdIL-12-MSCs分泌的IL-12对SKOV3细胞增殖活性的影响,流式细胞
仪检测AdIL-12-MSCs 上清液对SKOV3 细胞凋亡的影响。建立裸鼠卵巢癌SKOV3 皮下移植瘤模型,观察移植
AdIL-12-MSCs 后对移植瘤的影响。结果腺病毒介导IL-12 基因成功转染UC-MSCs形成AdIL-12-MSCs,转染后细胞
IL-12基因在蛋白及mRNA水平均有明显表达。AdIL-12-MSCs分泌的外源性IL-12显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖
并诱导其凋亡,并抑制卵巢癌SKOV3移植瘤在裸鼠体内的生长（P<0.05）。结论转染IL-12基因的UC-MSCs能够在蛋白
及mRNA水平表达IL-12基因,显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖并诱导其凋亡,抑制卵巢癌SKOV3移植瘤在裸鼠体
内的生长。