外周血和骨髓微量神经母细胞瘤细胞检测的临床意义

目的 探讨CD45/CD56/GD2单克隆抗体(单抗)流式细胞仪分析法检测周围血和骨髓微量神经母细胞瘤(NB)细胞的临床意义。方法 11例腹部神经母细胞瘤(NB组)和23例其他肿瘤(对照组)患儿,年龄6个月至12岁,用单抗CD45/CD56/GD2流式细胞术检测外周血和骨髓穿刺标本微量NB细胞。结果 NB组入院时血和骨髓微量NB细胞阳性率分别为90.9％(10/11)和72.7％(8/11),对照组血和骨髓均为阴性(P<0.001)。NB组骨髓微量NB细胞检测与涂片细胞学检查阳性率有较好的相关性(P<0.05),但前者阳性率更高,不受骨髓稀释影响。骨髓NB细胞阳性率与临床分期有关,Ⅱ～Ⅳ期明显高于Ⅰ期(P<0.01)。化疗后血和骨髓NB细胞数均明显减少(P<0.05)。术后转移者血NB细胞重新出现阳性。结论 CD45/CD56/GD2单抗流式细胞术检测周围血和骨髓微量NB细胞具有高度敏感性和特异性,有助诊断、鉴别诊断、疗效观察和复发转移监测。     

神经母细胞瘤患者骨髓和外周血微量病灶监测方法的评估

神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)是儿童最常见的颅外实体瘤。NB患者诊断时骨髓(bone marrow，BM)有否转移是一个重要的预后因素。对于接受化疗后自身外周血干细胞移植(peripheral blood stem cell transplant，PBSCT)的患者，其移植物污染可能导致远期复发。     

免疫组织化学染色法检测神经母细胞瘤骨髓转移的临床意义

目的研究免疫组织化学染色检测神经母细胞瘤骨髓转移的临床意义。方法建立免疫组化检测体系,选择Ⅳ期神经母细胞瘤患儿28例,诊断及诱导结束后分别采集骨髓进行免疫组织化学检测,临床随访生存情况。结果免疫组化检测方法的灵敏度为10-5,诊断时19例患儿骨髓有形态学转移,免疫组化检测所有病例骨髓神经母细胞瘤细胞阳性;诱导治疗后13例骨髓肿瘤细胞在免疫组化水平消失,11例未消失,4例病情进展死亡。随访(3.5±0.7)年,完全缓解组中位无病生存时间(4.1±0.7)年,部分缓解组中位无复发时间(2.8±0.5)年,两组比较差异显著(t=3.9,P=0.001);部分缓解组100%复发,完全缓解组46.1%复发,两组复发率差异有显著性(P=0.006)。两组4年无病生存率29.2%。结论免疫组织化学法检测骨髓神经母细胞瘤较形态学灵敏,具有预后判断作用;诱导治疗清除骨髓转移之神经母细胞瘤者较不清除者预后好。     

神经母细胞瘤细胞系血细胞分化抗原的表达

神经母细胞瘤(NB)是儿童最常见的颅外实体瘤，预后相对较差。NB细胞系是由形态和生化特性多样的细胞群组成。NB细胞系从形态可分为三种类型的细胞：神经母细胞型(N型)、许旺细胞型(S型)和中间型(I型)。     

用流式细胞仪对小儿神经母细胞瘤的诊断与监测

目的　建立一种快速而特异的流式细胞仪 (flowcytometer,FCM)分析方法用于神经母细胞瘤 (NB)患儿的诊断与监测。方法　采用多色FCM和抗人神经节苷脂D2 (gangliosideD2 ,GD2 )单抗12 6 4、CD56、CD45组合对 13例 36份NB标本和 2 4例非NB标本进行检测、比较和分析。结果　NB患儿的阳性检出率 (12 / 13例或 92 % )明显高于非NB患儿的阳性检出率 (0 / 2 4 ,P =7 0 2× 10 -9)。外周血标本的阳性检出率 (17/ 2 1份或 81% )与骨髓标本的阳性检出率 (7/ 9份或 78% )差异无显著意义(χ2 =1 0 35 ,P >0 7) ,初诊病例与病理检查的诊断结果符合率达 92 %。2例随访结果表明 ,1例GD2阳性细胞随治疗及病情进展而变化 ,另 1例则确诊后 38d内外周血标本中始终含有NB细胞。结论　多色FCM分析GD2 阳性细胞能简便、快速、特异地检测NB细胞 ,对NB患儿的诊断与微小残留病(minimalresidualdisease ,MRD)的监测具有重要意义     

神经母细胞瘤,肾母细胞瘤的细胞培养在临床的应用

对我院手术切除的神经母细胞瘤6例、肾母细胞瘤14例的新鲜肿瘤标本及区域淋巴结（所取标本与病理标本等分）进行原代细胞培养。结果本组20例瘤体的细胞培养涂片检查与病理切片诊断一致。淋巴结细胞培养与病理切片诊断对照结果为：神经母细胞瘤病理切片阳性率33．3％，细胞培养阳性率50％；肾母细胞瘤病理切片诊断阳性率33．3％，细胞培养阳性率66．6％。可见常规的病理切片的局限性对于微小的转移灶，不一定被包含在片中而受到假阴性的影响，细胞培养可以弥补这一不足。     

结节型节细胞神经母细胞瘤病理学分型与预后的关系

目的 探讨结节型节细胞神经母细胞瘤(GNBn)病理学分型与预后的关系.方法 收集本院1984年至2006年间20例GNBn标本和临床资料,应用光镜和免疫组织化学方法对GNBn标本进行观察分析,并进行随访.根据2003年国际神经母细胞瘤病理分类标准进行病理学分型,分析其病理学分型与GNBn患儿生存时间的关系.结果 ①GNBn中含有神经母细胞瘤结节、神经节细胞及成熟的神经鞘细胞间质;②20例GNBn中神经母细胞瘤结节神经元特异性烯醇化酶(NSE)、突触素(SYN)阳性,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阴性;③病理学分型结果显示20例GNBn中病理学A型7例,病理学B型13例;④20例GNBn中病理学A型生存时间明显长于病理学B型(P＜0.05),生存时间与病理分型显著相关(P＜0.05).结论 GNBn预后存在差异,病理学分型对其预后评价有一定参考价值.     

应用流式细胞术检测微量残留白血病

应用流式细胞术（ＦＣＭ），结合免疫双标记技术，对１１３例次急性淋巴细胞白血病患儿进行了微量残留白血病（ＭＲＤ）检测。结果表明，ＦＣＭ结合免疫双标记技术检测ＭＲＤ敏感度可达到０．０１％，是一种简便实用、快速敏感的方法。ＭＲＤ检测对于判断预后以及制定个体化的化疗方案有重要意义。     

单中心116例婴幼儿神经母细胞瘤临床特征及预后分析

目的分析≤18个月龄神经母细胞瘤(NB)婴幼儿的临床特征及影响预后因素。方法回顾性分析2007年1月-2017年6月在北京儿童医院血液肿瘤中心诊断并治疗的年龄≤18个月龄婴幼儿NB患儿的临床资料,总结临床特征、评估预后。应用SPSS 19.0软件进行数据分析。结果2007年1月-2017年6月共治疗116例≤18个月龄NB婴幼儿,男64例,女52例,中位年龄10(1～18)个月,随访中位时间19. 5(1～88)个月。单因素分析显示,INSS分期4期、高危、伴有骨骼或骨髓转移、MYCN基因扩增、初诊时血清乳酸脱氢酶(LDH)>500 IU/L的患儿预后不良(P <0. 05)。存在MYCN基因扩增10例,INSS分期均为3期或4期,LDH、神经元特异性烯醇化酶(NSE)明显高于无MYCN扩增病例,差异均有显著性(P=0. 028,P=0. 002,P=0. 001)。死亡病例13例,其中9例因肿瘤复发或进展死亡。116例NB婴幼儿3年无事件生存率(EFS) 83.6%,总生存率(OS) 86. 7%;5年EFS 76. 7%,OS 86. 7%。年龄≤12个月与年龄12～18个月患儿3年OS分别为90%、80. 7%,差异无显著性(P=0. 101)。INSS分期4期患儿3年OS 74. 4%、高危患儿3年OS 57. 1%、伴有MYCN基因扩增患儿NB 3年OS 26.7%,明显低于中早期、低中危、无MYCN基因扩增患儿(P=0.013,P=0.000,P=0.000)。结论≤18个月NB患儿预后良好,MYCN基因扩增、晚期病例预后差,主要死亡原因是疾病复发或进展。     

小儿肾母细胞瘤、神经母细胞瘤肿瘤组织培养的临床应用

目的：对比组织法与病理切片在肿瘤淋巴结转移的阳性率。方法：对14例肾母细胞瘤、6例神经母细胞瘤进行肿瘤组织、淋巴组织瘤旁培养，涂片进行病理诊断、并与传统的病理切片对比，结果：肿瘤组织培养与病理切片结果完全一致。对区域淋巴结转移的诊断，淋巴结组织培养优于病理切片，两者淋巴结转移的阳性率，肾母细胞瘤为66．6％（6／9）和33．3％（3／9）；神经母细胞瘤为50％（3／6）和33．3％（2／6），结论：淋巴结组织培养对肿瘤淋巴结转移的诊断率高于病理切片，对临床分期、治疗及预后判断具有重要的指导意义。     

流式细胞术检测微小残留病对儿童急性B淋巴细胞白血病预后判断的临床价值

目的 探讨4色荧光标记B淋巴细胞抗体组合模板用于流式细胞术检测微小残留病(MRD)对儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)预后判断的临床价值.方法 回顾性分析2010年10月至2012年3月间采用流式细胞技术检测MRD的初发B-ALL患儿的相关临床资料.根据MRD检测的时间及检测的结果,将183例患儿分为诱导缓解期MRD阴性组(n=37),诱导缓解期MRD阳性组(n=18),维持治疗期MRD阴性组(n=113)和维持治疗期MRD阳性组(n=15).结果 诱导缓解期和维持治疗期MRD阳性患儿,其初诊危险分级为中、高危的患者比例较阴性者高(PRR=1.005,95%CI:0.864~1.170,P=0.032)、第15天骨髓象未达M1(RR=6.454,95%CI:2.191~19.01,P=0.002)和缓解后MRD≥0.01%(RR=1.923,95%CI:0.750~4.933,P=0.043)是儿童B-ALL发生复发的高危因素.结论 4色荧光标记B淋巴细胞抗体组合模板用于流式细胞术能区分化疗后MRD阳性和阴性的B-ALL患儿.MRD水平与强的松反应性、第15天骨髓象等指标一样,是儿童B-ALL重要的预后判断因素,对儿童B-ALL具有较好的临床预后判断意义.     

Flow cytometry and fluorescence in situ hybridization to detect residual neuroblastoma cells in bone marrow

BACKGROUND: In patients with neuroblastoma morphological assessment of BM for residual NB cells is not precise, particularly when the number of tumor cells is small. PROCEDURE: To develop a sensitive and rapid method of detecting NB cells in BM, we assessed the efficiency of flow cytometry (FCM) using markers CD9, CD56, and CD45. The percent of CD9+/CD56+/CD45- (NB phenotype) cells was determined by FCM in 41 samples (16 patients) at various time points. For confirmation fluorescence in situ hybridization (FISH) for 17q gain was performed. RESULTS: Nineteen of the 22 (86%) samples that were negative by morphology were positive by FCM (>0.006% CD9+/CD56+/CD45- cells). The longest time to complete the FCM study was 3 hr. In six FISH experiments the sorted CD9+/CD56+/CD45- population had a higher percentage of cells with 17q gain (11.5-95%) compared to a CD56-/CD45+ internal control population (2-8%). CONCLUSIONS: Our preliminary results suggest that FCM determination of the percent of CD9+/CD56+/CD45- cells is an effective method of rapidly detecting NB cells in BM.     

骨髓转移的高危神经母细胞瘤治疗后骨髓缓解速度与预后关系

目的探讨伴骨髓转移的高危神经母细胞瘤(NB)患者治疗后骨髓缓解速度对预后的影响。方法收集中山大学肿瘤防治中心从2000年1月至2014年12月收治的初诊时已有骨髓转移的Ⅳ期高危NB患者的临床资料。将≤2个疗程化疗后骨髓获得完全缓解(CR)定义为快速骨髓缓解组,2个程化疗后骨髓获得CR定义为缓慢骨髓缓解组。并对综合治疗后获得CR或非常好的部分缓解(VGPR)的73例患者的预后进行单因素和多因素分析。结果纳入分析的73例患者,中位年龄4.0(1.6~9.8)岁,男52例、女2l例。快速骨髓缓解组19例,缓慢骨髓缓解组54例。全组4年无事件生存率(EFS)和总生存率(OS)分别为(15.6±4.9)%和(28.9±6.4)%。快速骨髓缓解组与缓慢骨髓缓解组4年EFS分别为(25.9±12.3)%和(12.4±5.0)%(P=0.033),4年0S分别为(51.6±15.2)%和(22.6±6.6)%(P=0.057)。单因素分析结果显示,骨髓缓慢缓解是影响骨髓转移的高危NB患儿EFS的不良因素(P0.05);无维持药物治疗、N-myc基因扩增是影响0S的不良因素(P0.05)。多因素分析结果示,N-MYC扩增、骨髓缓慢缓解为患者0S的独立不良预后因素(P0.05);仅骨髓缓慢缓解是EFS的独立不良预后因素(P0.05)。年龄≤2岁NB患者骨髓快速缓解的比例高于年龄2岁患者(x~2=5.608,spearman相关系数=0.277,P=0.018)。结论本研究显示骨髓转移的高危NB患者治疗后骨髓快速缓解者预后好于缓慢骨髓缓解者,有可能作为骨髓转移的高危NB患者的预后观察指标之一。     

急性B淋巴细胞白血病患儿微小残留病流式细胞术检测的临床意义

目的研究使用流式细胞术检测小儿急性B淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL)微小残留病(minimalresidualdisease,MRD)的临床预后价值。方法能将残留白血病细胞与正常骨髓细胞区分开来的抗体组合称为有效抗体组合。我们使用流式细胞术对36例具有有效抗体组合的BALL患儿缓解后的骨髓标本进行MRD的定期检测。对6例无有效抗体组合的患儿,我们使用CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22两个抗体组合定期检测骨髓标本。结果(1)在42例患儿中有36例(86%)具有有效抗体组合;(2)在治疗6个月时间点时,MRD水平≥10-4的患儿(13例)无病生存率(diseasefreesurvival,DFS)与MRD水平<10-4的患儿(12例)相比无统计学意义(P=0.62);在治疗9个月时,MRD水平≥10-4的患儿(10例)要比MRD水平<10-4的患儿(13例)生存率低(P=0.025);在治疗12个月时,MRD水平≥10-4的患儿(8例)要比MRD水平<10-4的患儿(9例)生存率低(P=0.042);(3)共有7例患儿复发,其中6例复发患儿在复发前的4～10个月均检测到≥10-3水平的MRD。在随访过程中至少有1次MRD水平≥10-3患儿的无病生存率较MRD水平在10-3以下的患儿为低(P=0.003);(4)5例复发患儿的免疫表型基本未发生变化,只有1例丢失了CD13抗原;(5)在6例无有效抗体组合患儿中未发现有意义的MRD。结论(1)MRD水平在10-3或以上的患儿预后较差;(2)治疗9个月与12个月时间点的MRD水平有预后价值;(3)对于无有效抗体组合的患儿,CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22抗体组合的效果应进一步评估。     

Prognostic influence of minimal residual disease detected by flow cytometry and peripheral blood stem cell transplantation by CD34+ selection in childhood advanced neuroblastoma

OBJECTIVE: To determine whether neuroblastoma (NB) minimal residual disease (MRD) in bone marrow (BM) detected by flow cytometry could predict prognosis and whether tumor cell purging by CD34(+) cell selection prior to transplantation will impact on disease-free survival. METHODS: NB MRD in BM was evaluated by flow cytometry with CD45-FITC-/CD81-PE+/CD56-PECy5+ monoclonal antibodies cocktail. Peripheral blood stem cell (PBSC) was enriched via positive CD34(+) cell selection by magnetic-activated cell separation system (MACS). RESULTS: Eleven of 31 patients with CD45(-)/CD81+/CD56+ cells by flow cytometry at diagnosis became negative after an average of four courses of chemotherapy. All 11 patients remained alive without evidence of disease. Thirteen of the 20 patients with positive MRD relapsed and 1 patient died from disease (mean 25.8 months). There was a significant difference between these two groups. MRD in BM was tested before PBSC transplantation (PBSCT) for 19 NB patients. Fourteen was negative, 4 of them relapsed and 10 patients remained alive without evidence of disease. Another 5 patients with positive MRD, all of them relapsed (mean 17 months after PBSCT) with a significant difference between these two groups. Fourteen of 19 PBSC were purged with CD34(+) selection procedure. Six of 14 relapsed (mean 18.43 months after PBSCT). Five patients did not purge for CD34(+) selection, and 3 of them relapsed with no significant difference between these two groups. CONCLUSIONS: Positive MRD in BM after an average of four courses of chemotherapy and before PBSCT is an unfavorable factor for stage IV NB. CD34(+) selection purging for PBSCT may not improve the prognosis for children with neuroblastoma in advanced stage.     

微小残留病变检测在儿童急性白血病中的应用

近年来,儿童急性白血病（AL）治疗效果随化疗方案的改进和危险分层治疗的引入取得很大进展。但微小残留病变（MRD）仍然是影响AL预后的一大难题。MRD水平影响化疗方案的选择、复发风险的分级,同时还可用于判断预后。目前检测MRD的方法主要有流式细胞术（FCM）和PCR。随着二代测序技术（NGS）的不断成熟与发展,其在MRD检测尤其在干细胞移植（SCT）后MRD检测方面扮演着重要角色。本文对微小残留病变检测在儿童急性白血病中的应用进行综述。     

儿童急性淋巴细胞性白血病微小残留病监测的预后意义

目的 研究儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)化疗过程中,不同时间点监测的不同微小残留病(MRD)水平的预后意义.方法 对102例ALL患儿进行MRD监测研究,分别在患儿诱导化疗开始后第15天、第29天、第3个月、第6个月、第12个月进行MRD监测.根据患儿初诊时免疫表型特征,采用流式细胞术检测不同的四色单克隆抗体组合.常用的抗体组合包括CD45CD19CD34CD10和CD45CD19CD34CD20等.结果 102例ALL患儿的5年总体生存(OS)率和无事件生存(EFS)率分别为(86.9±3.4)%和(79.9±4.0)%,共12例患儿复发.在第15天、29天、3个月、6个月和12个月,分别有14.3%、43.9%、39.1%、39.7%和45.6%的患儿处于MRD阴性(MRD<10~(-4)).其中MRD水平能在1年内达到阴性的患儿的长期存活率明显高于MRD持续阳性的患儿[5年EFS:(92.5±3.2)% vs. (58.3±8.6)%,P<0.001].各时间点上,化疗后第15天时MRD≥10~(-2)[(79.8±10.3)% vs.(28.6±17.1)%,P<0.001]、第29天时MRD≥10~(-3)[(88.3±4.9)% vs.(51.3±14.4)%,P<0.003]、第3个月[(92.4±5.1)% vs.(65.5±7.5)%,P<0.015]、6个月[5-year EFS rates(96.3±3.6)% vs.(65.4±7.5)%,P<0.003]及第12个月[(100.0±0.0)% vs.(67.7±8.4)%,P<0.002]时MRD≥10~(-4)的患儿的5年EFS率明显较差.而第15天时MRD≥10~(-2)是独立的不良预后因素.结论 采用流式细胞术动态监测MRD水平能有效地评估ALL患儿的预后,而不同时间点上具有预后意义的MRD水平并不相同.